本發(fā)明涉及生物化學(xué)領(lǐng)域，更具體的說(shuō)是涉及一種化合物及其制備方法和應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：艾滋病，即獲得性免疫缺陷綜合癥，是人體感染了人類免疫缺陷病毒(HIV)而導(dǎo)致的傳染病。HIV是一種能攻擊人體免疫系統(tǒng)的病毒。它把人體免疫系統(tǒng)中最重要的T4淋巴組織作為攻擊目標(biāo)，大量破壞T4淋巴組織，產(chǎn)生高致命性的內(nèi)衰竭。這種病毒在地域內(nèi)終生傳染，破壞人的免疫平衡，使人體成為各種疾病的載體。HIV本身并不會(huì)引發(fā)任何疾病，而是當(dāng)免疫系統(tǒng)被HIV破壞后，人體由于抵抗能力過(guò)低，喪失復(fù)制免疫細(xì)胞的機(jī)會(huì)，并感染其它的疾病導(dǎo)致各種復(fù)合感染而死亡。到目前為止，全世界范圍內(nèi)還沒(méi)有能有效治療艾滋病的藥物和療法，只能用藥物適當(dāng)控制HIV在人體內(nèi)的增殖。針對(duì)HIV的生命周期，目前已經(jīng)做了大量相關(guān)的研究，藥物靶點(diǎn)主要是病毒和細(xì)胞的識(shí)別融合靶點(diǎn)、反轉(zhuǎn)錄酶及相關(guān)蛋白靶點(diǎn)、整合酶靶點(diǎn)、蛋白水解酶靶點(diǎn)等。但是，由于HIV的高度變異性，目前迫切需要各種不同作用途徑，且有效控制艾滋病病毒在人體內(nèi)增殖的藥物，以此來(lái)延緩HIV的增殖速度，為患者爭(zhēng)取更長(zhǎng)的生存時(shí)間。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種化合物，使得該化合物能夠抑制HIV病毒的增殖，同時(shí)具有潛在解決HIV病毒高度變異所帶來(lái)的抗藥性問(wèn)題。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供一種化合物，該化合物屬于巰基類衍生 物，具有式I所示結(jié)構(gòu)：其中，R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于-H,-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH2Cl,-(CH2)0-4-CH2Br,-CF3,-(CH2)0-4-OH,-(CH2)0-4-O-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-O-,CH(O)-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH-(CH3)2,-(CH2)0-4-Ar,-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-O-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-NH2,-C(O)-OH,-C(O)-O(CH2)0-4-CH3,-C(O)-O(CH2)0-4-Ar,-C(O)-NH-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-N-[(CH2)0-4-CH3]2,-OH,-SH,-O-(CH2)0-4-CH3,-O-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-O-(CH2)0-4-CH-(CH3)2,-O-(CH2)0-4-Ar,-NH2,-NH-(CH2)0-4-CH3,-NH-(CH2)0-4-Ar,-NH-(CH2)0-4-NH2,-N(CH3)2,-NH-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-NH-C(O)-(CH2)0-4-S-Ar,-NH-Ts,-F,-Cl,-Br,-I,-CN,-CH＝CH-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH＝CH2,-CH＝CH-Ar,-CH＝CH-CH＝CH-(CH2)0-4-CH3,-(CH＝CH)0-4-CH＝C(CH3)2,-C≡C-(CH2)0-4-CH3,-C≡C-Ar,-NO2；X獨(dú)立選自于-O-,-S-,-NH-,-N-(CH2)0-3-CH3,-N-(CH2)0-4-CH(CH3)2,-N-(CH2)0-4-C(CH3)3,-COO-,-C(O)S-；Y獨(dú)立選自于-OH,-SH,-NH2；n為1-4的整數(shù)；Ar是含十個(gè)碳原子的芳基。作為優(yōu)選，R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于-H,-CH3,-(CH2)0-4-CH3,-(CH＝CH)0-4-CH＝C-(CH3)2,-(CH2)0-4-Ar,-(CH2)0-4-CH＝CH2,-NO2；X獨(dú)立選自于-O-,-NH-,-S-,-N-(CH2)n-CH3,-COO-,-C(O)S-；Y獨(dú)立選自于-OH,-SH,-NH2；n為1-3的整數(shù)；Ar是含十個(gè)碳原子的芳基。進(jìn)一步優(yōu)選，R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于-H,-CH3,-(CH2)3-CH3, -CH＝CH-CH＝C-(CH3)2,-NO2；X獨(dú)立選自于-O-,-S-,-COO-,-C(O)S-；Y獨(dú)立選自于-OH,-SH,-NH2；N為1-2的整數(shù)。進(jìn)一步優(yōu)選，所述化合物具有選自如下各項(xiàng)的結(jié)構(gòu)。HIV病毒在體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄過(guò)程需要賴氨酸乙?；牟《痉词郊せ钜蜃?HIV-Tat)和人體反式轉(zhuǎn)錄共激活因子PCAFBRD以及和SWI/SNF染色質(zhì)改造絡(luò)合物PBAF相互作用來(lái)維系HIV的活性，這意味著在HIV病毒人體轉(zhuǎn)錄過(guò)程中，HIV-Tat(反式轉(zhuǎn)錄激活因子)起著非常關(guān)鍵的作用，而HIV-Tat的活性需要和一些細(xì)胞蛋白絡(luò)合物共同作用才能實(shí)現(xiàn)，如上述的PCAFBRD等。因此，只要能抑制HIV-Tat和PCAFBRD之間結(jié)合的活性，就可以達(dá)到抑制HIV轉(zhuǎn)錄的目的，最終抑制HIV的增殖。PCAFBRD是宿主細(xì)胞蛋白而非病毒蛋白，因此PCAFBRD蛋白結(jié)構(gòu)域基因相對(duì)保守，變異性較低，PCAFBRD作為藥物靶點(diǎn)能夠很好的解決HIV病毒本身變異帶來(lái)的抗藥性問(wèn)題。通過(guò)體外Elisa試驗(yàn)(Elisa實(shí)驗(yàn)步驟參考文獻(xiàn)J.Am.Chem.Soc.2005,127,2376-2377.)證明本發(fā)明所述式I所示化合物具有較好的抑制PCAFBRD和Tat結(jié)合的活性，其中，試驗(yàn)結(jié)果顯示部分抑制性較好的化合物IC50值在10μM左右。本發(fā)明根據(jù)SFDA(抗HIV藥物非臨床藥效學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則)采用國(guó)際通用試驗(yàn)方法對(duì)本發(fā)明所述式I所示化合物的抗HIV活性進(jìn)行檢測(cè)，獲得其細(xì)胞毒性CC50以及抗HIV活性EC50，結(jié)果顯示，式I所示化合物具有較好的抑制HIV病毒的增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低。因此，本發(fā)明還提供了式I所示化合物在制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的應(yīng)用。其中，所述抑制HIV病毒增殖的藥物包含有效量的式I所示化合物或其藥用鹽，以及藥用載體。按照藥學(xué)常識(shí)，式I所示化合物具有抑制HIV病毒的增殖的活性，那么其藥用鹽也相應(yīng)具有這方面的活性。另外，所述藥用載體可根據(jù)具體制備的劑型來(lái)進(jìn)行確定，屬本領(lǐng)域人員公知，不做具體限定。此外，本發(fā)明還提供了式I所示化合物的制備方法，所述方法包括如下步驟：步驟1、式II所示化合物和1,3-二溴丙烷或1,2-二溴已烷以及叔丁醇鉀在DMF中室溫反應(yīng)，生成式III所示化合物；步驟2、式III所示化合物與硫化鈉在DMSO中反應(yīng)，或式III所示化合物與氨水在四氫呋喃(THF)中反應(yīng)，生成式I所示化合物；其中，X獨(dú)立選自-O-,-S-,-NH-,-N-(CH2)0-3-CH3,-N-(CH2)0-4-CH(CH3)2,-N-(CH2)0-4-C(CH3)3,-COO-,-C(O)S-；n是1或2；R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于–H,-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH2Cl,-(CH2)0-4-CH2Br,-CF3,-(CH2)0-4-OH,-(CH2)0-4-O-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-O-,CH(O)-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH-(CH3)2,-(CH2)0-4-Ar,-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-O-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-NH2,-C(O)-OH,-C(O)-O(CH2)0-4-CH3,-C(O)-O(CH2)0-4-Ar,-C(O)-NH-(CH2)0-4-CH3,-C(O)-N-[(CH2)0-4-CH3]2,-OH,-SH,-O-(CH2)0-4-CH3,-O-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-O-(CH2)0-4-CH-(CH3)2,-O-(CH2)0-4-Ar,-NH2,-NH-(CH2)0-4-CH3,-NH-(CH2)0-4-Ar,-NH-(CH2)0-4-NH2, -N(CH3)2,-NH-C(O)-(CH2)0-4-CH3,-NH-C(O)-(CH2)0-4-S-Ar,-NH-Ts,-F,-Cl,-Br,-I,-CN,-CH＝CH-(CH2)0-4-CH3,-(CH2)0-4-CH＝CH2,-CH＝CH-Ar,-CH＝CH-CH＝CH-(CH2)0-4-CH3,-(CH＝CH)0-4-CH＝C(CH3)2,-C≡C-(CH2)0-4-CH3,-C≡C-Ar；Y獨(dú)立選自于-OH、-SH、-NH2；Ar是含十個(gè)碳原子的芳基。作為優(yōu)選，R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于-H,-(CH2)0-4-CH3,-(CH＝CH)0-4-CH＝C-(CH3)2,-(CH2)0-4-Ar,-(CH2)0-4-CH＝CH2,-NO2；X獨(dú)立選自于-O-,-NH-,-S-,-N-(CH2)n-CH3,-COO-,-C(O)S-；Y獨(dú)立選自于–OH,-SH,-NH2；n為1-3的整數(shù)；Ar是含十個(gè)碳原子的芳基。進(jìn)一步優(yōu)選，R1、R2、R3、R4、R5獨(dú)立選自于–H,-CH3,-(CH2)3-CH3,-CH＝CH-CH＝C-(CH3)2,-NO2；X獨(dú)立選自于-O-,-S-,-COO-,-C(O)S-；Y獨(dú)立選自于-OH,-SH,-NH2；N為1-2的整數(shù)。反應(yīng)式如下：其中步驟1所述反應(yīng)需室溫?cái)嚢?-48小時(shí)；步驟2所述反應(yīng)需室溫?cái)嚢?-12小時(shí)。作為優(yōu)選，所述式II所示化合物和1,3-二溴丙烷或1,2-二溴乙烷以及叔丁醇鉀的物質(zhì)的量之比為1:3:1.5，所述式III所示化合物和硫化鈉的物質(zhì)的量之比為1:2。由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明所述式I所示化合物以宿主自身保守細(xì)胞蛋白PCAFBRD為作用靶點(diǎn)，有效地解決了HIV病毒高度變異性問(wèn)題，具有較好的抑制HIV病毒的增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較 低，能夠應(yīng)用于抑制HIV病毒增殖的藥物的制備中。注：本申請(qǐng)書(shū)中縮寫(xiě)對(duì)照：Ar是含十個(gè)碳原子的芳基，DMF是N,N-二甲基甲酰胺，DMSO是二甲基亞砜,THF是四氫呋喃，TBDPSCl是叔丁基二苯基氯硅烷。附圖說(shuō)明圖1所示為2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙硫醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2，R4為-H，R5為-H，X為-S-，Y為-SH,n為1。圖2所示為3-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯氧基]丙烷-1-硫醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH,n為2。圖3所示為3-(對(duì)甲苯基硫代)-1-丙胺化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-CH3，R4為-H，R5為-H，X為-S-,Y為-NH2，n為2。圖4所示為3-巰丙基-2-硝酸苯甲酸硫酯化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2,X為-C(O)S-，Y為-SH,n為2。圖5所示為3-(2-硝基苯硫基)丙烷-1-硫醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2，X為-S-，Y為-SH,n為2。圖6所示為3-羥基-2-硝酸苯甲酸丙酯化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2,X為-C(O)O-，Y為-OH,n為2。圖7所示為3-(鄰硝基苯基硫代)-1-丙胺化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2，X為-S-,Y為-NH2，n為2。圖8所示為2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2， R4為-H，R5為-H，X為-S-，Y為-OH，n為1。圖9所示為3-[4-乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH2，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH，n為2。圖10所示為(E)-3-[4-苯乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇化合物的1H核磁共振(400MHz)譜圖，其中，R1為-H，R2為-H，R3為–(E)-CH＝CH-Ph，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH，n為2。具體實(shí)施方式本發(fā)明公開(kāi)了一種化合物，還公開(kāi)了該化合物的制備方法和應(yīng)用，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明所述化合物、方法及應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
發(fā)明內(nèi)容、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明，實(shí)驗(yàn)所用試劑清單見(jiàn)表1。表1主要試劑清單名稱CAS號(hào)廠家2-氯乙醇107-07-3國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司TBDPSCl58479-61-1西亞試劑咪唑288-32-4九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司勞森試劑19172-47-5阿拉丁對(duì)羥基苯甲醛123-08-0九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司1,3-二溴丙烷109-64-8九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司碘化鉀7681-11-0國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司氫化鈉7646-69-7阿拉丁硫化鈉1313-82-2國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司對(duì)甲基苯硫酚106-45-6九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司水合肼10217-52-4國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司4-硝基苯甲酸62-23-7九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司1,3-二巰基丙烷109-80-8九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司鄰氯硝基苯88-73-3九鼎化學(xué)(上海)科技有限公司1,3-丙二醇504-63-2國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司實(shí)施例11、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2，R4為-H，R5為-H，X為-S-，Y為-SH,n為1)名稱為2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙硫醇。10mmol2-氯乙醇、10mmolTBDPSCl和12mmol咪唑在20mLDMF中室溫反應(yīng)2-5h,然后萃取、柱層析分離投下一步。先將10mmol4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫酚、20mmol碳酸氫鈉在25mLDMF中攪拌半小時(shí)后，把上述所得產(chǎn)物慢慢滴加進(jìn)去后反應(yīng)5-10小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后萃取、柱層析得淡黃色固體。將上述固體溶于DCM后，加入兩當(dāng)量乙酰氯及若干滴甲醇，室溫反應(yīng)2-8小時(shí),柱層析分離得產(chǎn)物2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙醇。最后將2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙醇溶于甲苯并加入0.6當(dāng)量的勞森試劑，在80℃下反應(yīng)5-10小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻旋干柱層析即可得最終產(chǎn)物2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙硫醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CD3OD，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)材料將人體T淋巴細(xì)胞系C8166和HIV-1實(shí)驗(yàn)株HIV-1IIIB[1-2]均以含10％胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)；病毒貯存液分裝后， 置-70℃保存；細(xì)胞系和病毒按常規(guī)方法凍存和復(fù)蘇。3、HIV-1感染性滴定將HIV-1IIIB貯存液在96孔板上作4倍稀釋，10個(gè)梯度，每梯度6個(gè)重復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置對(duì)照孔6孔。每孔加入C8166細(xì)胞50μL(4×105/mL)，每孔終體積為200μL。37℃，5％CO2培養(yǎng)。第三天補(bǔ)加新鮮RPMI-1640完全培養(yǎng)基100μL，第七天在倒置顯微鏡下觀察每孔中HIV-1IIIB誘導(dǎo)的細(xì)胞病變效應(yīng)(Cytopathiceffect,CPE)，以每孔是否有合胞體(SyncytiμM)的形成確定，按Reed&Muench方法計(jì)算病毒的TCID50(半數(shù)組織培養(yǎng)感染劑量)。4、C8166細(xì)胞的毒性試驗(yàn)將本實(shí)施例制備的化合物在96孔微量培養(yǎng)板上用RPMI-1640完全培養(yǎng)基(含10％FBS)進(jìn)行5倍倍比稀釋(起始終濃度為100μg/mL，共6個(gè)稀釋度)，每個(gè)稀釋度設(shè)3孔，每孔100μL。同時(shí)設(shè)置不含藥物的對(duì)照孔。每孔加入4×105/mL的C8166細(xì)胞100μL。37℃，5％CO2培養(yǎng)3天，采用MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞毒性。ELx800酶標(biāo)儀測(cè)定OD值，測(cè)定波長(zhǎng)為595nm，參考波長(zhǎng)為630nm。計(jì)算得到CC50值(50％Cytotoxicconcentration，即對(duì)50％的正常T淋巴細(xì)胞系C8166產(chǎn)生毒性時(shí)的化合物濃度)為大于200μM。5、HIV-1IIIB致細(xì)胞病變(CPE)的抑制實(shí)驗(yàn)將本實(shí)施例制備的化合物在96孔微量培養(yǎng)板上用RPMI-1640完全培養(yǎng)基(含10％FBS)進(jìn)行5倍倍比稀釋(起始終濃度為100μg/mL，共6個(gè)稀釋度)，每個(gè)稀釋度設(shè)3個(gè)重復(fù)孔，每孔100μL。同時(shí)設(shè)置不含藥物的對(duì)照孔。每孔加入8×105/mL的C8166細(xì)胞50μL，然后加入50μL的HIV-1IIIB稀釋上清，1300TCID50/孔。AZT(購(gòu)自于葛蘭素威康制藥公司)為陽(yáng)性藥物對(duì)照。37℃，5％CO2培養(yǎng)3天，倒置顯微鏡下(100×)計(jì)數(shù)合胞體的形成并得出EC50(50％Effectiveconcentration，即抑制合胞體形成50％時(shí)的化合物濃度)為86.80μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例21、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH,n為2)名稱為3-[4-(4-甲基戊基-1,3-二烯)苯氧基]丙烷-1-硫醇。10mmol對(duì)羥基苯甲醛、11mmol1，3-二溴丙烷、12mmol碳酸鉀和催化量的碘化鉀在DMF中回流過(guò)夜，柱色譜分離得到1-(4-甲?；交?-3-溴-丙醇；再將6mmol氫化鈉和5mmol的(2-甲基烯丙基)三苯基溴化膦溶解在THF中，冰浴冷卻至0℃，往上述溶液中滴加10mmol1-(4-甲?；交?-3-溴-丙醇的THF溶液,滴加完畢轉(zhuǎn)移至室溫反應(yīng)10-15小時(shí)。然后柱色譜分離得1-(3-溴丙氧基)-4-(4-甲基戊基-1,3-二烯基)苯。最后將上述得到的產(chǎn)物與兩當(dāng)量的硫化鈉在DMSO中室溫反應(yīng)過(guò)夜，萃取、干燥、柱色譜分離即可得產(chǎn)物3-[4-(4-甲基戊基-1,3-二烯)苯氧基]丙烷-1-硫醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于200μM，EC50為62.90μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例31、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-CH3，R4為-H，R5為-H，X為-S-,Y為-NH2，n為2)名稱為3-(對(duì)甲苯基硫代)-1-丙胺。10mmol對(duì)甲苯硫酚、30mmol2-(3-溴丙基)異吲哚林-1,3-二酮和 11mmol叔丁醇鉀在20mLDMF中室溫反應(yīng)8小時(shí)，柱色譜分離得到2-[3-(對(duì)甲苯基硫代)丙基]異吲哚林-1,3-二酮；將5mmol2-[3-(對(duì)甲苯基硫代)丙基]異吲哚林-1,3-二酮和20mmol的水合肼在20mL乙醇中回流過(guò)夜，抽濾、旋干、然后柱色譜分離得3-(對(duì)甲苯基硫代)-1-丙胺。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50為43.38μM，EC50為8.97μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性不高，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例41、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2,X為-C(O)S-，Y為-SH,n為2)名稱為3-巰丙基-2-硝酸苯甲酸硫酯。5mmol鄰硝基苯甲酸溶于10mL二氯甲烷中，冰浴條件下慢慢滴加10mmol二氯亞砜的二氯甲烷溶液，滴加完后加熱回流3-6小時(shí)。旋除溶劑后，再加入15mL氯仿和10mmol1,3-二巰基丙烷加熱回流過(guò)夜，后柱色譜分離得到3-巰丙基-2-硝酸苯甲酸硫酯。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于200μM，EC50為110.78μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例51、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2，X為-S-，Y為-SH,n為2)名稱為3-(2-硝基苯硫基)丙烷-1-硫醇。2mmol鄰硝基氯苯、4mmol1,3-二巰基丙烷和2mmol碳酸氫鈉在5mLDMF中加熱反應(yīng)5-8小時(shí)，點(diǎn)板檢測(cè)反應(yīng)完后萃取、干燥、旋干，再柱色譜分離得到3-(2-硝基苯硫基)丙烷-1-硫醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖5，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于800μM，EC50為63.06μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，4-硝基苯磺酸2-(N-(4-丁基苯基)-4-硝基苯基磺酰胺基)乙酯具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例61、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2,X為-C(O)O-，Y為-OH,n為2)名稱為3-羥基-2-硝酸苯甲酸丙酯。5mmol鄰硝基苯甲酸溶于10mL二氯甲烷中，冰浴條件下慢慢滴加10mmol二氯亞砜的二氯甲烷溶液，滴加完后加熱回流3-6小時(shí)。旋除溶劑后，再加入15mL氯仿和10mmol丙二醇加熱回流過(guò)夜，后柱色譜分離得到3-羥基-2-硝酸苯甲酸丙酯。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖6，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于200μM，EC50為小于200μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有一定的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例71、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-H，R4為-H，R5為-NO2，X為-S-，Y為-NH2，n為2)名稱為3-(鄰硝基苯基硫代)-1-丙胺。10mmol鄰硝基苯硫酚、30mmol2-(3-溴丙基)異吲哚林-1,3-二酮和11mmol叔丁醇鉀在20mLDMF中室溫反應(yīng)8小時(shí)，柱色譜分離得到2-[3-(鄰硝基苯基硫代)丙基]異吲哚林-1,3-二酮；將5mmol2-[3-(鄰硝基苯基硫代)丙基]異吲哚林-1,3-二酮和20mmol的水合肼在20mL乙醇中回流過(guò)夜，抽濾、旋干、然后柱色譜分離得3-(鄰硝基苯基硫代)-1-丙胺。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為D2O，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖7，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50為14.52μM，EC50為8.49μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，但對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的有毒性，不過(guò)仍然符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例81、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH-CH＝C(CH3)2，R4為-H，R5為-H，X為-S-，Y為-OH，n為1)名稱為2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙醇。10mmol2-氯乙醇、10mmolTBDPSCl和12mmol咪唑在20mLDMF中室溫反應(yīng)2-5h,然后萃取、柱層析分離投下一步。先將10mmol4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫酚、20mmol碳酸氫鈉在25mLDMF中攪拌半小時(shí)后，把上述所得產(chǎn)物慢慢滴加進(jìn)去后反應(yīng)5-10小時(shí)，反應(yīng)結(jié)束后萃取、柱層析得淡黃色固體。將上述固體溶于DCM后，加入兩當(dāng)量乙酰氯及若干滴甲醇，室溫反應(yīng)2-8h,柱層析分離即可得產(chǎn)物2-[4-(4-甲基-1,3-戊二烯)苯硫基]乙醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖8，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50為121.33μM，EC50為41.91μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例91、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為-CH＝CH2，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH，n為2)名稱為3-[4-乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇。10mmol對(duì)羥基苯甲醛、11mmol1，3-二溴丙烷、12mmol碳酸鉀和催化量的碘化鉀在DMF中回流過(guò)夜，柱色譜分離得到1-(4-甲?；交?-3-溴-丙醇；再將6mmol氫化鈉和5mmol的甲基三苯基溴化膦溶解在THF中，冰浴冷卻至0℃，往上述溶液中滴加10mmol1-(4-甲酰基苯基)-3-溴-丙醇的THF溶液,滴加完畢轉(zhuǎn)移至室溫反應(yīng)10-15小時(shí)。然后柱色譜分離得1-(3-溴丙氧基)-4-乙烯基苯。最后將上述得到的產(chǎn)物與兩當(dāng)量的硫脲在乙醇中反應(yīng)回流過(guò)夜，旋干得到的產(chǎn)物加入五當(dāng)量氫氧化鈉在水中回流反應(yīng)，反應(yīng)完全后，萃取，旋干，柱色譜分離即可得產(chǎn)物3-[4-乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖9，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于200μM，EC50為32.90μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。實(shí)施例101、制備本發(fā)明所述式I所示化合物(R1為-H，R2為-H，R3為–(E)-CH＝CH-Ph，R4為-H，R5為-H，X為-O-，Y為-SH，n為2)名稱為(E)-3-[4-苯乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇。10mmol對(duì)羥基苯甲醛、11mmol1，3-二溴丙烷、12mmol碳酸鉀和催化量的碘化鉀在DMF中回流過(guò)夜，柱色譜分離得到1-(4-甲?；交?-3-溴-丙醇；再將6mmol氫化鈉和5mmol的芐基三苯基溴化膦溶解在THF中，冰浴冷卻至0℃，往上述溶液中滴加10mmol1-(4-甲?；交?-3-溴-丙醇的THF溶液,滴加完畢轉(zhuǎn)移至室溫反應(yīng)10-15小時(shí)。然后柱色譜分離得E-1-(3-溴丙氧基)-4-苯乙烯基苯。最后將上述得到的產(chǎn)物與兩當(dāng)量的硫脲在乙醇中反應(yīng)回流過(guò)夜，旋干得到的產(chǎn)物加入五當(dāng)量氫氧化鈉在水中回流反應(yīng)，反應(yīng)完全后，萃取，旋干，柱色譜分離即可得產(chǎn)物(E)-3-[4-苯乙烯基苯氧基]-丙烷-1-硫醇。反應(yīng)式如下：將所制備的化合物進(jìn)行1H核磁共振(400MHz)檢測(cè)，溶劑為CDCl3，檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖10，結(jié)果顯示所制備的化合物與式I所示結(jié)構(gòu)一致。2、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及HIV抑制試驗(yàn)按照實(shí)施例1中方法得到本實(shí)施例制備的化合物CC50大于200μM，EC50為20.90μM。結(jié)合CC50以及EC50的結(jié)果可以看出，本發(fā)明所述式I所示化合物具有顯著的抑制HIV病毒增殖的活性，且對(duì)人正常淋巴細(xì)胞的毒性較低，符合藥物學(xué)的規(guī)定，具有應(yīng)用到制備抑制HIV病毒增殖的藥物中的前景。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。參考文獻(xiàn)[1]QiangWang,RuiruiWang,BaiqunZhang,etal.SmallorganicmoleculestargetingPCAFbromodomainaspotentinhibitorsofHIV-1replication[J].Med.Chem.Commun.,2013,4,737-740.[2]PingHu,XinghuiWang,BaiqunZhang,etal.FluorescencePolarizationfortheEvaluationofSmall-MoleculeInhibitorsofPCAFBRD/Tat-AcK50Association[J].ChemMedChem,2014,9,928-931.當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3