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一種重組副豬嗜血桿菌免疫保護(hù)性抗原HbpA2及其制備方法與流程

文檔序號(hào):11693866閱讀:來(lái)源:國(guó)知局
一種重組副豬嗜血桿菌免疫保護(hù)性抗原HbpA2及其制備方法與流程

技術(shù)特征:
1.一種如SEQIDNO:1所示的核苷酸序列。2.一種重組載體,其特征在于:包含SEQIDNO:1所示的核苷酸序列;其中,所述的重組載體是重組pET-39b質(zhì)粒。3.一種重組菌,其特征在于:它包含權(quán)利要求2所述的重組載體。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的重組菌,其特征在于:所述的重組菌為重組大腸桿菌。5.一種重組HbpA2蛋白,其特征在于:它由SEQIDNO:1所示的核苷酸序列編碼。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的重組HbpA2蛋白,其特征在于:它的氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。7.一種制備權(quán)利要求6所述重組HbpA2蛋白的方法,其特征在于:包含如下步驟:ⅰ、取權(quán)利要求4所述的重組大腸桿菌,接種到添加有終濃度為50μg/ml的卡拉霉素的LB培養(yǎng)基上,37℃、280r/min搖床培養(yǎng),至OD600值達(dá)到0.5~0.6時(shí),加入IPTG至終濃度為0.2~1.5mmol/L,25~42℃誘導(dǎo)表達(dá)1~7h;ⅱ、離心,得菌體,裂解,取上清,分離純化,即得。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于:步驟ⅰ中,IPTG的終濃度為1.5mmol/L,誘導(dǎo)表達(dá)的溫度為30℃;誘導(dǎo)表達(dá)的時(shí)間為5h。9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法,其特征在于:步驟ⅱ中,所述分離純化的方法如下:(1)將上清液用1mmol/LNaOH調(diào)pH至8.0,使用0.45μm的濾膜過(guò)濾樣品;(2)用上樣緩沖液平衡鎳離子螯合親和層析填料層析柱,上樣,按順序用含有30mmol/L、50mmol/L、80mmol/L、100mmol/L咪唑的洗脫緩沖液洗頭,收集用含有100mmol/L咪唑的洗脫緩沖液洗脫得到的溶液,即可;其中,上樣緩沖液包含如下濃度的成分:50mmol/LNaH2PO4,300mmol/LNaCl,5mmol/L咪唑;洗脫緩沖液包含如下濃度的成分:50mmol/LNaH2PO4,300mmol/LNaCl。
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