本發(fā)明屬于食品發(fā)酵領域中葡萄酒制備技術,具體地,本發(fā)明涉及一種通過生物濃縮技術制備高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的方法。技術背景白藜蘆醇(Resveratrol)屬于是非黃酮類的多酚化合物,化學名稱為3,5,4′-三羥基-1,2-二苯乙烯,分子式C14H12O3,相對分子量228.25Da。廣泛存在于葡萄、虎杖等植物。白藜蘆醇作為一種天然的抗氧化劑具有多種生物學活性,在食品、保健食品等領域應用十分廣泛。白藜蘆醇具有抗氧化性、降低血壓粘度以及抑制微生物等作用,在抗氧化活性方面,白藜蘆醇可清除或抑制自由基生成,抑制脂質的過氧化并可調節(jié)抗氧化相關酶活性,對于防止動脈粥樣硬化、胃潰瘍、炎癥與過敏反應等具有重要作用。白藜蘆醇對許多微生物具有抑制作用,如金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、綠膿桿菌等微生物具有顯著的抑制作用,白藜蘆醇對許多病毒具有抑制效果。白藜蘆醇可減少血小板直接引起的聚集或粘附,顯著改變血液的流變學性能,降低血液粘稠度;因此白藜蘆醇對保護心血管、抑制血栓形成等具有良好的效果。基于以上的生物學活性,白藜蘆醇具有延緩衰老和預防疾病的功效。隨著研究的不斷深入,近年來人們對白藜蘆醇的作用機理有了更為全面的認識,如白藜蘆醇可抑制6-磷酸果糖-1-激酶的活性,對于抑制乳腺癌細胞的繁殖具有重要作用(Biochimie,2013,95(6):1336-1343);白藜蘆醇可與許多基因具有特異性結合作用(SpectrochimicaActaPartA:MolBiomolSpectr,2011,82(1):213-216),在此基礎上實現(xiàn)對雄激素受體表達轉錄活性的抑制(JSteroidBiochemMolBiol,2011,123(1-2):65-70),并對預防前列腺癌具有重要意義,白藜蘆醇通過調整Utrophin表達量以降低發(fā)生炎癥的幾率(ClinicalNutrition,2013,32(1):104-111)。此外,白藜蘆醇可與膠原蛋白地特異性結合并修復膠原蛋白的結構等(FoodChemistry,2012,131(3):879-884)。由于其生物學活性多樣性,人們對服用含白藜蘆醇食品和飲品研究也日益增多,并引起廣泛關注(BiochemPharm,2009,77(6):1053-1063;IntJPharm,2013,440(2):179-187)。葡萄中含有一定量的白藜蘆醇,不同品種及不同種植區(qū)域的葡萄白藜蘆醇含量也存在一定的差異,葡萄皮、籽粒和果肉中白藜蘆醇的含量也存在較大差異,通常情況下籽粒和葡萄皮中白藜蘆醇含量高于果肉,可達50~100mg/kg(J.Agric.FoodChem.1996,44,2124-2128)。冰葡萄酒是在低溫條件下采摘自然結冰和風干的葡萄,葡萄中的糖分得到高度濃縮,在結冰狀態(tài)下壓榨、低溫保糖發(fā)酵釀制而成的甜型葡萄酒。冰葡萄酒香氣芬芳,口感甜潤,被譽為葡萄酒中的“極品”,已成為高端消費群體喜愛的一種時尚飲品,普通葡萄酒以及冰葡萄酒中白藜蘆醇的含量約0.2mg/L~4mg/L(天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2002,14(2):40-41);許多研究表明,白藜蘆醇的有效劑量一般為20mg,即成年人每天服用20mg的白藜蘆醇才能表現(xiàn)出有效的生物活性,且成年人每日服用大劑量(如500mg)的白藜蘆醇也不會出現(xiàn)毒副作用。因此,若葡萄酒中白藜蘆醇的平均含量按照2mg/L計酸,通過飲用葡萄酒攝入有效劑量(20mg)的白藜蘆醇,則需要飲用大約10L的葡萄酒,遠超過了正常服用量。冰葡萄酒中白藜蘆醇含量與普通葡萄酒接近,達到有效劑量仍需要服用超過正常的冰葡萄酒飲用量。因此,采用適當?shù)募夹g提高冰葡萄酒中白藜蘆醇含量,不僅有利于消費者身體健康,而且有利于提高冰葡萄酒的附加值。通過改良菌種、改進發(fā)酵工藝或優(yōu)化發(fā)酵反應器以提高葡萄酒中白藜蘆醇含量的專利已有申請或公開,如高含量白藜蘆醇干紅葡萄酒的制備工藝(申請公開號CN101177659A)公開了一種通過紫外線誘導白藜蘆醇合成并采用特定工藝促進白藜蘆醇溶出的方法,使得干紅葡萄酒中白藜蘆醇含量超過5mg/L;一種富含白藜蘆醇干紅葡萄酒的制備方法(專利號CN102634429B)發(fā)明了一種通過改良的菌種和改進的發(fā)酵工藝提高白藜蘆醇含量的方法,紅葡萄酒中的白藜蘆醇含量提高到125-169mg/L;一種復合酶制備干紅葡萄酒的生產(chǎn)工藝(申請?zhí)?01110444433.2)公開了一種將葡萄進行預處理并結合生物酶法制備白藜蘆醇含量為70-110mg/L干紅葡萄酒的工藝。一種顯著增加白藜蘆醇含量的干紅葡萄酒的制備方法(專利號CN102199502B)發(fā)明了一種通過反應器優(yōu)化可將干紅葡萄酒中的白藜蘆醇含量提高到270mg/L;白藜蘆醇增加的葡萄酒(申請?zhí)?00880122683.0)公開了一種直接向桶裝葡萄酒中添加白藜蘆醇濃縮物,以提高白藜蘆醇含量,可添加至200mg/L。提高葡萄酒中白藜蘆醇含量以增加白藜蘆醇攝入量的方法已在國內(nèi)外引起廣泛關注,但冰葡萄酒與普通葡萄酒在原料和發(fā)酵工藝等許多方面存在顯著差異,采用適當方式提高冰葡萄酒中白藜蘆醇含量具有重要實用價值。
技術實現(xiàn)要素:
本發(fā)明旨在提供一種高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的制備方法。白藜蘆醇作為多酚類化合物易溶于乙醇等有機溶劑,其分子中苯環(huán)上的酚基具有弱酸性,三個酚基的解離常數(shù)分別為pKa1=8.8,pKa2=9.8,pKa3=11.4,因此可通過離子交換的方法實現(xiàn)白藜蘆醇的分離,電滲析是基于離子交換的分離方法;本發(fā)明的目的在于提供一種高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的制備方法,首先在低溫下將冰葡萄進行壓榨,獲得的葡萄汁進行發(fā)酵制備冰葡萄酒,采用電滲析的方法分離壓榨后殘渣中的白藜蘆醇,獲得白藜蘆醇提取液,將該提取液與冰葡萄酒按照一定比例混合,制備出高白藜蘆醇含量冰葡萄酒。本發(fā)明的一種高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的制備方法,其特征在于該方法包括以下制備步驟:(1)在-8℃以下采摘自然冷凍的冰葡萄,在-8~0℃進行壓榨,分別收集壓榨后的冰葡萄汁和葡萄殘渣。(2)將步驟(1)獲得的冰葡萄汁經(jīng)澄清和凈化、發(fā)酵、冷藏和過濾過程制備白藜蘆醇含量為0.2~3.5mg/L的冰葡萄酒。(3)向步驟(1)獲得的葡萄殘渣中加入0.5~5%的表面活性劑,采用膠體磨在0~5℃范圍磨成葡萄殘渣勻漿物,控制勻漿中顆粒物粒徑30~300微米。(4)將步驟(3)獲得的葡萄殘渣勻漿在5~35℃范圍內(nèi)進行壓濾,濾布孔徑范圍為1.5~23微米,收集濾液。(5)使用氫氧化鈉或氫氧化鉀將壓濾后的濾液pH值調至7.0~11.0,靜置3~8h后在5~35℃范圍內(nèi)采用油水分離器處理,收集水相。(6)將步驟(5)分離出的水相循環(huán)導入三槽式電滲析器的陰極室,陽極室導入檸檬酸,將電流控制在4~10安培范圍內(nèi)進行電滲析分離,濃縮室流出的是富含白藜蘆醇的濃縮液,通過調節(jié)水相的循環(huán)流量控制濃縮液中白藜蘆醇含量在1~15g/L,連續(xù)將濃縮室中濃縮液導出,獲得白藜蘆醇的提取液。(7)將步驟(6)獲得的白藜蘆醇提取液與步驟(2)的冰葡萄酒按照一定比例混合,獲得高白藜蘆醇含量的冰葡萄酒,控制混合后冰葡萄酒中白藜蘆醇含量為100~200mg/L。優(yōu)選地,所述步驟(3)中向葡萄殘渣中加入的表面活性劑可以是吐溫20、吐溫40、吐溫60或吐溫80,也可以是司盤20,司盤40,司盤60或司盤80。優(yōu)選地,所述步驟(5)中使用氫氧化鈉或氫氧化鉀將步驟(4)獲得的濾液pH值調至7.0~11.0,更為優(yōu)選地將pH調至8.5~10.5。優(yōu)選地,所述步驟(6)中的電滲析過程,電流控制在4~10安培,更為優(yōu)選地電流控制在6~8安培。優(yōu)選地,所述步驟(6)中的電滲析過程,濃縮室中白藜蘆醇含量控制在1~15g/L,更為優(yōu)選地,將濃縮室中白藜蘆醇含量控制在2~10g/L。優(yōu)選地,所述步驟(7)中,步驟(6)獲得的白藜蘆醇的提取液與步驟(2)制備的冰葡萄酒的混合比例控制在0.6:100~11:100。葡萄籽和葡萄皮中白藜蘆醇含量遠高于果肉,本發(fā)明旨在通過將葡萄籽和葡萄皮中的白藜蘆醇采用適當?shù)姆椒ǚ蛛x后與冰葡萄酒混合,制備高白藜蘆醇含量冰葡萄酒,其優(yōu)點在于制備的冰葡萄酒不添加任何非葡萄來源的白藜蘆醇;冰葡萄酒中白藜蘆醇的含量可通過白藜蘆醇提取物的濃度以及添加量進行控制;白藜蘆醇提取物的加入量較低,對高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的口味沒有顯著影響。附圖說明圖1是本發(fā)明的一種高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的制備方法的流程圖。具體實施方式下面通過實施例對本發(fā)明進行具體的描述,值得提出的是,實施例只是對本發(fā)明一種高白藜蘆醇含量冰葡萄酒的制備方法的說明,并不能代表本發(fā)明專利的全部,更不能理解為對本發(fā)明保護范圍的限制,在不脫離本發(fā)明實質的構思的前提條件下,還可以做出若干調整或改進,均屬于本發(fā)明的保護范圍。實施例1原料:白玉霓冰葡萄(1)在-8℃以下采摘自然冷凍的冰葡萄1000kg,在-8℃進行壓榨,獲得冰葡萄汁220L和葡萄殘渣780kg。(2)將步驟(1)獲得的冰葡萄汁經(jīng)澄清和凈化、發(fā)酵、冷藏和過濾過程制備出白藜蘆醇含量為2mg/L的冰葡萄酒200L。(3)向步驟(1)獲得的葡萄殘渣中加入7.8kg吐溫80,采用膠體磨將其在5℃磨成葡萄殘渣勻漿,獲得勻漿物788kg,勻漿中顆粒物粒徑為50微米。(4)將步驟(3)獲得的葡萄殘渣勻漿在30℃范圍內(nèi)進行壓濾,濾布孔徑13微米,獲得濾液600L。(5)使用氫氧化鈉將步驟(4)獲得的濾液pH值調至10.5,靜置6h后在30℃范圍內(nèi)采用油水分離器處理,收集水相共計524L。(6)將步驟(5)分離出的水相導入三槽式電滲析器的陰極室,陽極室導入檸檬酸,將電流控制在8安培進行電滲析分離,濃縮室流出富含白藜蘆醇的濃縮液,調節(jié)水相的循環(huán)流量,控制濃縮液中白藜蘆醇含量在5.3g/L,連續(xù)將濃縮室中濃縮液導出,獲得白藜蘆醇提取液6.1L。(7)將步驟(6)獲得的白藜蘆醇含量為5.6g/L的6.1L提取液與步驟(2)獲得的206L冰葡萄酒全部混合,獲得白藜蘆醇含量為156mg/L的冰葡萄酒。