專利名稱：結(jié)合膜聯(lián)蛋白的苯并二氮雜類和苯并硫雜吖庚因衍生物和hbsag肽,其組合物和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)衍生有肽鏈的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類抑制HbsAg對膜聯(lián)蛋白V的結(jié)合。因此本發(fā)明涉及這樣的分子及其治療乙型肝炎病毒和丁型肝炎病毒感染或者其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何其它疾病的用途。
背景技術(shù)：
乙型肝炎病毒(HBV)屬于嗜肝DNA病毒，其特征在于顯著的趨肝性和物種特異性。丁型肝炎病毒(HDV)代表HBV的天然存在的亞病毒隨伴體(Rizetto等，1986)。HBV引起主要的醫(yī)學(xué)問題，例如慢性肝病和肝細胞癌癥(Schroder和Zentgraf,1990)。與單獨的HBV感染相比HDV超感染通常更加嚴重。估計全球有300百萬人攜帶該病毒，同時在美國就有7萬攜帶者共同感染HDV。
在HBV基因組中，更具體地說在S基因中(也參見下面自然段)，存在天然序列變異。以該序列差異百分率為基礎(chǔ)設(shè)計了HBV的A至F基因型(有關(guān)綜述參見Magnius和Norder,1995)。
被膜HBV由三種相關(guān)的糖蛋白組成，將它們稱作乙型肝炎表面抗原(HBsAg)，其是S基因的產(chǎn)物1)“小”跨膜蛋白，也稱之為主要蛋白或小S-蛋白，由226個氨基酸(aa)組成，2)“中”蛋白質(zhì)，其包括小S-蛋白和在N-末端的相應(yīng)于S基因的前-S2區(qū)的55個另外的氨基酸，和3)“大”蛋白質(zhì)由相應(yīng)于下面區(qū)的389或400個氨基酸組成S+前-S2+前-S1(108-119N-末端aa)(Heerman等，1984；Robinson等，1987)。HDV的被膜也完全由HBV衍生并且主要由小HBsAg,5-10％中HBsAg組成，沒有大HBsAg或者大HBsAg少于1％(Bonino等，1986)。
流感病毒引起復(fù)發(fā)性流行病，甚至是全球性傳染病。這些傳染病爆發(fā)期間的缺勤導(dǎo)致巨大經(jīng)濟損失并且伴隨住院率增加，甚至導(dǎo)致源于呼吸病的死亡(有關(guān)綜述參見Cox和Fukuda,1998)。
巨細胞病毒(cytomegalovirus)是皰疹病毒家族的一個成員并且是無免疫應(yīng)答個體例如艾滋病患者的重要的病原體。在皰疹病毒的包膜內(nèi)存在稱之為糖蛋白B的蛋白質(zhì)。證明該蛋白質(zhì)對于感染是必需的，所述感染包括進入宿主細胞和細胞至細胞的傳播(Cai等，1988)。
膜聯(lián)蛋白Ⅴ(也稱之為內(nèi)聯(lián)蛋白Ⅱ，胎盤抗凝蛋白，PP4或脂皮質(zhì)蛋白Ⅴ)是結(jié)構(gòu)上相關(guān)的Ca2+-依賴性磷脂-結(jié)合蛋白家族的一個成員，已知為分子量在32-67kDa之間的膜聯(lián)蛋白(Klee,1988；Zaks和Creutz,1990)。在各種組織中發(fā)現(xiàn)膜聯(lián)蛋白Ⅴ，例如肝，脾，肺，腸和胎盤(Walker等，1990)。曾經(jīng)描述過該蛋白質(zhì)以Ca2+-依賴性方式結(jié)合胎盤膜(Haigler等，1987)并且體外抑制血液凝固(Grundmann等，1988)和磷脂酶A2活性(Pepinsky等，1988)。其它研究人員證明膜聯(lián)蛋白Ⅴ行為象整合膜蛋白并且形成鈣-選擇性陽離子通道(Rojas等，1990；Bianchi等，1992)。
最近證明1,4-苯并二氮雜類(Hofmann等，1998)和1,4-苯并硫雜吖庚因類(Kaneko等，1997a,b)能結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ。膜聯(lián)蛋白Ⅱ與膜聯(lián)蛋白Ⅴ相關(guān)并且也結(jié)合1,4-苯并二氮雜類(Hofmann等，1998)。膜聯(lián)蛋白也起著大量的與非病毒蛋白質(zhì)結(jié)合的作用，所述非病毒蛋白質(zhì)例如膠原蛋白，腱生蛋白，肌動蛋白，突觸蛋白，鈣影蛋白，胰島素受體，纖溶酶原等等(有關(guān)綜述參見Sheldon和Chen,1996)。
我們最近證明人肝質(zhì)膜上存在的膜聯(lián)蛋白Ⅴ，以Ca2+-依賴性方式特異性結(jié)合“小”HBsAg(Hertogs等，1993；WO94/01554)。用天然人肝膜聯(lián)蛋白Ⅴ或重組膜聯(lián)蛋白Ⅴ免疫的兔，或者用兔抗膜聯(lián)蛋白VIgG的F(ab’)2-片段免疫的雞自發(fā)性產(chǎn)生特異性識別HBsAg的抗-特應(yīng)抗體(Ab2)的發(fā)現(xiàn)進一步支持HBsAg和膜聯(lián)蛋白Ⅴ之間的受體-配體關(guān)系(Hertogs等，1994)。我們還證明HDV顆粒通過包含HBV包膜的HBsAg結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ(de Bruin等，1994)。WO97/07268中描述了膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合中涉及的HBsAg上的位點位置。該區(qū)域中這些位點由“小”HBsAg的100-160個氨基酸組成，估計其位于該病毒的外表面(有關(guān)綜述參見Berting等，1995)。
也證明了流感病毒與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合(Huang等，1996)和巨細胞病毒與膜聯(lián)蛋白Ⅱ的結(jié)合(Pietropaolo和Compton,1997)。
從上述文獻清楚得知HBV和/或HDV感染以及其它病毒感染例如流感和巨細胞病毒感染依然是一個主要的健康問題。因此開發(fā)出干擾HBV和/或HDV或這些其它病毒的生活周期的新的藥物依然是一個主要的需求。以HBV和/或HDV或這些其它病毒與膜聯(lián)蛋白的結(jié)合被抑制這樣一種方式結(jié)合膜聯(lián)蛋白的化合物可能是干擾這些病毒的生活周期的好的候選者，因此可能是用作治療病毒感染的藥物的好的候選者。因此，迫切需要提供與膜聯(lián)蛋白特異性作用，同時抑制HBV和/或HDV或這些其它病毒與膜聯(lián)蛋白的相互作用的分子。
本發(fā)明的目的本發(fā)明的目的是抑制膜聯(lián)蛋白與膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的相互作用。
本發(fā)明更具體的目的是抑制膜聯(lián)蛋白與能結(jié)合膜聯(lián)蛋白的病毒蛋白的相互作用。
本發(fā)明另一個更具體的目的是抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBV的表面抗原的相互作用。
本發(fā)明另一個更具體的目的是抑制膜聯(lián)蛋白Ⅱ與巨細胞病毒的糖蛋白B的相互作用。
本發(fā)明另一個更具體的目的是抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ與衍生自結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ的任何流感病毒株的蛋白質(zhì)的相互作用。
本發(fā)明另一個目的是預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員與膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用的任何疾病。
本發(fā)明更具體的目的是預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員與病毒蛋白之間的相互作用的任何病毒疾病。
本發(fā)明另一個更具體的目的是預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染。
本發(fā)明另一個更具體的目的是預(yù)防或治療巨細胞病毒感染。
本發(fā)明另一個更具體的目的是預(yù)防或治療流感病毒感染。
認為通過下面的實施方案實現(xiàn)本發(fā)明的所有這些目的。
本發(fā)明的詳細描述本文描述的本發(fā)明引用先前公開的工作和未結(jié)案專利申請。舉例來說，這樣的工作由科技文獻，專利或未結(jié)案專利申請組成。上文或下文中引用的所有這些公開物和申請在這里引作參考。
本發(fā)明涉及衍生有一個或多個肽的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類。
具體地說，本發(fā)明涉及衍生有一個或多個肽使得該衍生物抑制膜聯(lián)蛋白和一些膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類。
結(jié)合HBV病毒進入中涉及的分子--膜聯(lián)蛋白Ⅴ的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類不抑制HBV對膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合。本申請以這些化合物衍生肽配體時膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBV的HBsAg之間的相互作用可以被抑制的驚人發(fā)現(xiàn)為基礎(chǔ)。這些新的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類的衍生物因此是干擾HBV和/或HDV和結(jié)合一般來說膜聯(lián)蛋白或者更具體地說膜聯(lián)蛋白Ⅴ的其它病毒的生活周期的藥物發(fā)現(xiàn)中的新的前導(dǎo)。這些分子一般可以干擾膜聯(lián)蛋白與另一種蛋白質(zhì)的任何相互作用。通過將1,4-苯并二氮雜類或1,4-苯并硫雜吖庚因類選擇性衍生化，可以以特定途徑導(dǎo)向這些相互作用的任一種。
術(shù)語“膜聯(lián)蛋白”(也稱之為內(nèi)聯(lián)蛋白Ⅱ、胎盤抗凝蛋白、PP4或脂皮質(zhì)蛋白Ⅴ)指結(jié)構(gòu)上相關(guān)的Ca2+-依賴性磷脂-結(jié)合蛋白家族的任何成員，已知為分子量在32-67kDa之間的膜聯(lián)蛋白(Klee,1988；Zaks和Creutz,1990)。更具體地說，所述膜聯(lián)蛋白可以是表現(xiàn)出結(jié)合HBV的HBsAg和結(jié)合流感病毒的膜聯(lián)蛋白Ⅴ，或者已知結(jié)合巨細胞病毒的糖蛋白B的膜聯(lián)蛋白Ⅱ。但是本發(fā)明中指定的膜聯(lián)蛋白不局限于這些膜聯(lián)蛋白，而且也可以是與膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白結(jié)合的所有其它膜聯(lián)蛋白。
所述1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因可以帶有本領(lǐng)域公知的任何修飾，例如W094/11360和W092/12148中提到的那些。優(yōu)選地，1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因具有式Ⅰ(

圖1)所示結(jié)構(gòu)，其中*在1位-苯并硫雜吖庚因類具有一個硫原子(X代表S)；X也可以是SOn，其中n=0,1,2；-苯并二氮雜類具有一個氮原子(X代表N)，其在1位另外修飾有羧甲基(-CH2COOH)之后，允許通過肽的C-末端連接的或者通過肽的N-末端連接的另外修飾有一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分。在N不修飾有一個肽的情況下，修飾可以是H，烷基，苯基，-COZ，其中Z代表H，烷基，苯基或取代的苯基；*1,2,3,4,5位可以以鄰接位置形成雙鍵；如果是這種情況，則側(cè)鏈R2,R4,R5或R7不存在；*2和/或2’位上的R1和/或R2可以代表H，胺，烷基或者2位可以被氧化(=O)。在R1和/或R2是胺的情況下，其可以進一步地或者直接通過肽的C-末端連接或者通過象戊二醛或琥珀酐這樣的連接基團連接于肽的N-末端而被一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分取代；*3和/或3’位上的R3和/或R4可以代表H，胺或烷基。在R3和/或R4是胺的情況下，其可以進一步地或者直接通過肽的C-末端連接或者通過象戊二醛或琥珀酐這樣的連接基團連接于肽的N-末端而被一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分取代；*4位上的R5可以代表4位另外修飾有羧甲基(-CH2COOH)后或者直接通過肽的C-末端連接的或者通過肽的N-末端連接的權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分的支鏈。在R5不是權(quán)利要求書中定義的肽的情況下，R5可以代表H，烷基，-CO-R12或者3-(1-(4-芐基)哌啶基)丙酰基)；*R6和/或R7代表H或烷基或苯基，可能進一步取代有烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷?；然?，烷?；檠趸被柞；?；*R8,R9,R10和/或R11代表H，烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷?；?，羧基，烷酰基烷氧基，氨基甲?；?；*R12代表H或烷基或可能進一步取代有烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷?；然?，烷酰基烷氧基，氨基甲?；谋交?br> 用于制備本發(fā)明的分子的1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因還可以是該結(jié)構(gòu)式的任何藥學(xué)可接受鹽。用于制備本發(fā)明的分子的1,4-苯并二氮雜可以是所有本領(lǐng)域公知的衍生物，例如但不限于阿普唑侖，溴西泮，chloordiazepoxide，氯巴占，氯硝西泮，氯氮卓，地西泮，氟地西泮，氟硝西泮，氟西泮，勞拉西泮，硝西泮，奧沙西泮，替馬西泮，三唑侖，BDA250,BDA452,BDA753(也參見圖6和Hoffman等，1998)。但是，本發(fā)明的化合物不是BDA753，一種根據(jù)式Ⅱ的化合物(FR2479818；圖2)或者一種根據(jù)式Ⅲ的化合物(Nachman等，1998；圖3)。1,4-苯并硫雜吖庚因也可以是本領(lǐng)域任何公知的衍生物，例如但不限于K-201(Kaneko等，1997a)。
根據(jù)本發(fā)明，這些1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因在2,2’,3和/或3’位(在式Ⅰ中)修飾有胺后衍生有一種多肽，其可以在2,2’,3和/或3’位(在式Ⅰ中)連接(兩個肽可以在相同的位置連接)。該肽可以或者直接通過該肽的C-末端連接胺，或者該肽可以通過使用一個連接基團通過該肽的N-末端連接。
所述連接基團可以是使兩個胺殘基連接的任何連接基團。優(yōu)選所述連接基團是二醛，例如戊二醛或者酸酐，例如琥珀酐。其它可能的連接基團也可以由Pierce(Rockford,IL,USA)提供。圖9和圖10給出了通過利用一個連接基團使肽與1,4-苯并二氮雜連接的基礎(chǔ)反應(yīng)的實施例。
所述多肽也可以連接到1和/或4位(在式Ⅰ中)。在這種情況下，所述肽或者通過肽的C-末端連接或者在1和/或4位分別另外修飾有羧甲基(-CH2COOH)之后該肽通過N-末端連接。
在一個優(yōu)選的實施方案中，肽與在5位處被苯基取代的1,4-苯并二氮雜的1和/或3位連接。一個肽，R，可以通過其C-末端與所述的3位修飾有胺之后的1,4-苯并二氮雜的3位連接，或者，一個肽，R’，可以通過其N-末端與所述1位修飾有羧甲基之后的1,4-苯并二氮雜的1位連接，或者，兩個肽，R和R’，分別與所述的1,4-苯并二氮雜的3和1位連接。因此，本發(fā)明涉及所述衍生有一個或兩個肽，R和/或R’，的1,4-苯并二氮雜，R,R’和/或R+R’代表包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分。所述1,4-苯并二氮雜然后具有式Ⅳ所示的結(jié)構(gòu)(圖4)，其中*R,R’和/或R+R’構(gòu)成包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分。在只有R是一個肽的情況下，1位是甲基化的或羧甲基化的。在只有R’是一個肽的情況下，3位含有胺；*X代表可以被-COCH3修飾的肽的N-末端；*Y代表可以被-NH2或-賴氨酸-生物素修飾的肽的C-末端。
用于通過Fmoc為基礎(chǔ)的肽合成的所述1,4-苯并二氮雜衍生物的合成的結(jié)構(gòu)單元可以從Neosystem(Strasbourg，法國)獲得。
在本發(fā)明另一個實施方案中，通過使用如上所述的連接基團，肽，R，通過其N-末端與所述1,4-苯并二氮雜(在5位被苯基取代)的3位連接。在這種情況下，1位的氮原子(式Ⅰ)被甲基化或羧甲基化。因此本發(fā)明涉及衍生有包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽，R，或者其部分的根據(jù)式Ⅴ的化合物。
與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接的多肽可以是所有的包括從已知結(jié)合膜聯(lián)蛋白的蛋白質(zhì)衍生的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的多肽。
術(shù)語“膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白”指能與膜聯(lián)蛋白形成復(fù)合物的所有蛋白質(zhì)。
術(shù)語“膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位”指與膜聯(lián)蛋白特異性相互作用形成膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白-膜聯(lián)蛋白復(fù)合物的膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的區(qū)?！澳ぢ?lián)蛋白結(jié)合表位”包括至少2，優(yōu)選3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,20,25,30,35或更多個氨基酸的膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白。通過本領(lǐng)域公知的任何技術(shù)可以確定表位或者通過本領(lǐng)域公知的各種計算機屬性模型預(yù)示。
術(shù)語“多肽”或“肽”可以互換使用，指與其從中衍生的蛋白質(zhì)的部分相同或相近的氨基酸的聚合物。所述多肽可以由多種氨基酸組成，優(yōu)選地，多肽由少于13個氨基酸，優(yōu)選12,11,10,9,8,7,6,5,4,3或2個氨基酸組成，這樣一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位包含在該多肽中。在本發(fā)明化合物具有根據(jù)式Ⅳ的結(jié)構(gòu)的情況下，肽R或R’只由1個氨基酸組成和/或膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位包含在代表R+R’的多肽中也是可能的。應(yīng)該注意從膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白衍生的并且形成與膜聯(lián)蛋白的結(jié)合區(qū)的多肽可能是構(gòu)象結(jié)合區(qū)的一部分，因此不能由膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的接近的氨基酸序列組成。
通過任何本領(lǐng)域公知的方法，例如，如Houbenweyl(1974)和Atherton和Shepard(1989)描述的經(jīng)典化學(xué)合成，或者利用如Maniatis等(1982)描述的重組DNA技術(shù)，可以制備多肽。術(shù)語“多肽”不指也不排除多肽的翻譯后修飾，例如糖基化，?；?，磷酸化，用脂肪酸修飾等等。該定義中包括例如含有一個或多個氨基酸類似物(包括非天然氨基酸或D-異構(gòu)形式)的多肽，具有被取代的鍵的多肽，該多肽的突變版本或天然序列變體(例如，如上所述相應(yīng)于HBV的A至F基因型的HBV的HBsAg蛋白質(zhì)的肽變體)，半胱氨酸殘基中間有二硫鍵的多肽，反向-反轉(zhuǎn)(reverso-inverso)多肽(例如Guichard等所述的，1994)，以及本領(lǐng)域公知的其他修飾。
在一個具體實施方案中，從已知結(jié)合膜聯(lián)蛋白的病毒蛋白衍生與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接的多肽。術(shù)語“從病毒蛋白衍生的多肽”指氨基酸的聚合物，其與從中衍生的病毒蛋白的部分相同或相近并且包含該病毒蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位。
在另一個具體的實施方案中，從已知抗原(Heerman等，1984；Robinson等，1987)HBV的HBsAg蛋白質(zhì)衍生與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接的多肽。這里所使用的術(shù)語“從HBV的HBsAg蛋白質(zhì)衍生的多肽”指一種具有氨基酸序列的多肽，其與“小”HBsAg的氨基酸序列的部分相同或相近并且包含HBsAg的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位。應(yīng)該清楚“從HBV的HBsAg蛋白質(zhì)衍生的多肽”可以從HBV的任何基因型衍生(基因型A至F,Magnius和Norder1995)。
在本發(fā)明另一個具體的實施方案中，從巨細胞病毒的糖蛋白B衍生與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接的多肽。術(shù)語“從糖蛋白B衍生的多肽”指一種氨基酸的聚合物，其與巨細胞病毒的糖蛋白B的部分相同或相近并且包含糖蛋白B的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位。
在本發(fā)明另一個具體的實施方案中，從來自任何流感病毒株的蛋白質(zhì)衍生與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接的多肽，條件是該流感蛋白質(zhì)結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ。術(shù)語“從來自流感病毒株的蛋白質(zhì)衍生的多肽”指一種氨基酸的聚合物，其與來自流感病毒株的蛋白質(zhì)的部分相同或相近并且包含流感蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位。
此外，本發(fā)明目的在于提供具有肽衍生化作用的1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因，所述肽衍生化包括如上定義的或從HBV和/或HDV、巨細胞病毒或流感病毒的所有突變株產(chǎn)生的肽的任何組合。
在一個具體的實施方案中，本發(fā)明提供了衍生有一個肽的1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因分子，其中所述肽包括包含下面HBV表面抗原的區(qū)域之一的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的少于13個氨基酸
KTCTTPAQGN(SEQ ID NO1)FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)曾經(jīng)描述過這在HBsAg與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用中涉及過(W097/07268和本發(fā)明)。
更具體地說，本發(fā)明的與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因衍生物連接的多肽涉及包括從HBV的HBsAg的122-131位氨基酸序列衍生的2-10個氨基酸的多肽，如SEQ ID NO1所示。更具體地說，涉及包括或者由下面氨基酸(aa)序列組成的肽aa122-123,aa123-124,aa124-125,aa125-126,aa126-127,aa127-128,aa128-129,aa129-130,aa130-131,aa122-124,aa123-125,aa124-126,aa125-127,aa126-128,aa127-129,aa128-130,aa129-131,aa122-125,aa123-126,aa124-127,aa125-128,aa126-129,aa127-130,aa128-131,aa122-126,aa123-127,aa124-128,aa125-129,aa126-130,aa127-131,aa122-127,aa123-128,aa124-129,aa125-130,aa126-131,aa122-128,aa123-129,aa124-130,aa125-131,aa122-129,aa123-130,aa124-131,aa122-130,aa123-131,aa122-131.類似地，本發(fā)明的與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因衍生物連接的多肽特別涉及包括從HBV的HBsAg的158-169位氨基酸序列衍生的2-12個氨基酸的多肽，如上SEQ ID NO2所示。更具體地說，涉及包括或者由下面氨基酸(aa)序列組成的肽aa158-159,aa159-160,aa160-161,aa161-162,aa162-163,aa163-164,aa164-165,aa165-166,aa166-167,aa167-168,aa168-169,aa158-160,aa159-161,aa160-162,aa161-163,aa162-164,aa163-165,aa164-166,aa165-167,aa166-168,aa167-169,aa158-161,aa159-162,aa160-163,aa161-164,aa162-165,aa163-166,aa164-167,aa165-168,aa166-169,aa158-162,aa159-163,aa160-164,aa161-165,aa162-166,aa163-167,aa164-168,aa165-169,aa158-163,aa159-164,aa160-165,aa161-166,aa162-167,aa163-168,aa164-169,aa158-164,aa159-165,aa160-166,aa161-167,aa162-168,aa163-169,aa158-165,aa159-166,aa160-167,aa161-168,aa162-169,aa158-166,aa159-167,aa160-168,aa161-169,aa158-167,aa159-168,aa160-169,aa158-168,aa159-169,aa158-169.更具體地說，本發(fā)明涉及衍生有下面肽或者其部分之一的1,4-苯并二氮雜(FAKYLWEWASVR)2-KKGK(bio)GA(SEQ ID NO4)FAKYLW-K(bio)(SEQ ID NO5)FAKYLWEW-K(bio)(SEQ ID NO6)FAKYLWEWAS-K(bio)(SEQ ID NO7)FAKYLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO8)FAKYLW(SEQ ID NO9)FAKYLWEW(SEQ ID NO10)FAKYLWEWAS(SEQ ID NO11)FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)IGP1362或者其部分與BDA250或BDA452或者其任何衍生物連接得到具有在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用中的提高的特異性的化合物。應(yīng)該注意并不是所有的序列得到相同的結(jié)果。例如，也從HBsAg(aa115-125)衍生的IGP1363肽代表的序列就不抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的結(jié)合。
在本發(fā)明另一個具體的實施方案中，1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因衍生有由下面氨基酸序列組成的多肽或者其部分
FARFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO12)FGKFLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO13)LGKYLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO14)FAKFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO15)KYGW-K(bio)(SEQ ID NO16)KFGW-K(bio)(SEQ ID NO17)RFGW-K(bio)(SEQ ID NO18)AYLW-K(bio)(SEQ ID NO19)AFLW-K(bio)(SEQ ID NO20)KYLW-K(bio)(SEQ ID NO21)RFLW-K(bio)(SEQ ID NO22)KFLW-K(bio)(SEQ ID NO23)FARFLWEWASVR(SEQ ID NO24)FGKFLWEWASAR(SEQ ID NO25)LGKYLWEWASAR(SEQ ID NO26)FAKFLWEWASVR(SEQ ID NO27)KYGW(SEQ ID NO28)KFGW(SEQ ID NO29)RFGW(SEQ ID NO30)AYLW(SEQ ID NO31)AFLW(SEQ ID NO32)KYLW(SEQ ID NO33)RFLW(SEQ ID NO34)KFLW(SEQ ID NO35)上述肽或者其部分可以例如如上所述在1,2,2’,3,3’和/或4位與1,4-苯并二氮雜或1,4-苯并硫雜吖庚因連接。
在一個優(yōu)選的實施方案中，在根據(jù)式Ⅳ的1,4-苯并二氮雜的1(R′)和/或3(R)位連接所述的肽。然后兩個肽的加和(R+R’)代表如上所述的肽或者其部分。因此，1,4-苯并二氮雜可以在上述肽的任何位置。例如，當(dāng)R+R’=FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)時，R和/或R’可以以各種方式連接1,4-苯并二氮雜(Bdz)
Bdz-FAKYLWEWASVR: R’=FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)；或F-Bdz-AKYLWEWASVR:R=F,R’=AKYLWEWASVR(SEQ ID NO36)；或FA-Bdz-KYLWEWASVR:R=FA(SEQ ID NO37),R’=KYLWEWASVR(SEQ ID NO38)；或FAK-Bdz-YLWEWASVR:R=FAK(SEQ ID NO39),R’=YLWEWASVR(SEQ ID NO40)；或FAKY-Bdz-LWEWASVR:R=FAKY(SEQ ID NO41),R’=LWEWASVR(SEQ ID NO42)；或FAKYL-Bdz-WEWASVR:R=FAKYL(SEQ ID NO43)；R’=WEWASVR(SEQ ID NO44)；或FAKYLW-Bdz-EWASVR:R=FAKYLW(SEQ ID NO9),R’=EWASVR(SEQ ID NO45)；或FAKYLWE-Bdz-WASVR:R=FAKYLWE(SEQ ID NO46),R’=WASVR(SEQ ID NO47)；或FAKYLWEW-Bdz-ASVR:R=FAKYLWEW(SEQ ID NO10),R’=ASVR(SEQ ID NO48)；或FAKYLWEWA-Bdz-SVR:R=FAKYLWEWA(SEQ ID NO49),R’=SVR(SEQ ID NO50)；或FAKYLWEWAS-Bdz-VR:R=FAKYLWEWAS(SEQ ID NO11),R’=VR(SEQ ID NO51)；或FAKYLWEWASV-Bdz-R:R=FAKYLWEWASV(SEQ ID NO52),R’=R；或FAKYLWEWASVR-Bdz:R=FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)；其中通過3位修飾有胺之后的肽的C-末端在3位連接R和/或通過1位修飾有羧甲基之后的肽的N-末端在1位連接R’。在只有R是一個肽的情況下，1位被甲基化或羧甲基化。在只有R’是一個肽的情況下，3位包含胺。圖8給出了這些化合物的實施例。
1,4-苯并二氮雜也可以連接上述肽的僅僅一部分。例如，可以在缺失一個或多個氨基酸的上述肽中的任何位置連接1,4-苯并二氮雜。
當(dāng)R+R’=FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)時，其部分可以以任何方式與1,4-苯并二氮雜(Bdz)連接，例如Bdz-AKYLWEWASVR；或 Bdz-KYLWEWASVR；或F-Bdz-KYLWEWASVR；或F-Bdz-YLWEWASVR；或FA-Bdz-YLWEWASVR；或FA-Bdz-LWEWASVR；或FAK-Bdz-LWEWASVR；或FAK-Bdz-WEWASVR；或FAKY-Bdz-WEWASVR；或FAKY-Bdz-EWASVR；或FAKYL-Bdz-EWASVR；或FAKYL-Bdz-WASVR；或
FAKYLW-Bdz-WASVR或；FAKYLW-Bdz-ASVR；或FAKYLWE-Bdz-ASVR；或FAKYLWE-Bdz-SVR；或FAKYLWEW-Bdz-SVR；或FAKYLWEW-Bdz-VR；或FAKYLWEWA-Bdz-VR；或FAKYLWEWA-Bdz-R；或FAKYLWEWAS-Bdz-R；或FAKYLWEWAS-Bdz；或FAKYLWEWASV-Bdz；其中如上所述，肽通過其C-末端和/或N-末端連接。
如上所述的肽或者其部分也可以利用如上所述的連接基團通過它們的N-末端與3位連接。圖11給出了這樣的化合物的實施例。
本發(fā)明進一步涉及由下面氨基酸序列或者其部分之一組成的多肽FAKYLW-K(bio)(SEQ ID NO5)FAKYLWEW-K(bio)(SEQ ID NO6)FAKYLWEWAS-K(bio)(SEQ ID NO7)FAKYLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO8)FARFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO12)FGKFLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO13)LGKYLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO14)FAKFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO15)KYGW-K(bio)(SEQ ID NO16)KFGW-K(bio)(SEQ ID NO17)RFGW-K(bio)(SEQ ID NO18)AYLW-K(bio)(SEQ ID NO19)AFLW-K(bio)(SEQ ID NO20)KYLW-K(bio)(SEQ ID NO21)RFLW-K(bio)(SEQ ID NO22)KFLW-K(bio)(SEQ ID NO23)FAKYLW(SEQ ID NO9)
FAKYLWEW(SEQ ID NO10)FAKYLWEWAS(SEQ ID NO11)FARFLWEWASVR(SEQ ID NO24)FGKFLWEWASAR(SEQ ID NO25)LGKYLWEWASAR(SEQ ID NO26)FAKFLWEWASVR(SEQ ID NO27)KYGW(SEQ ID NO28)KFGW(SEQ ID NO29)RFGW(SEQ ID NO30)AYLW(SEQ ID NO31)AFLW(SEQ ID NO32)KYLW(SEQ ID NO33)RFLW(SEQ ID NO34)KFLW(SEQ ID NO35)這些肽是天然的或者是HBV基因型A/B的HBsAg的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的同源變體。還出人意料地發(fā)現(xiàn)它們抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBV的HBsAg之間的相互作用。
在根據(jù)本發(fā)明的化合物中使用的多肽可以由L形式或D形式或者其混合形式的氨基酸組成。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物特征在于所有的氨基酸都是L形式。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物特征在于所有的氨基酸都是D形式。
本發(fā)明還包括包含或者由如上所述多肽的反向-反轉(zhuǎn)多肽(例如Guichard等，1994描述的)組成的化合物。
應(yīng)該注意提到的所有的化合物可能是前導(dǎo)化合物，其上可以進一步改善1,4-苯并二氮雜/1,4-苯并硫雜吖庚因核心或肽配體的另外的衍生化作用。
本發(fā)明還涉及如上定義的多肽與帶負電荷的磷脂例如磷脂酰絲氨酸的組合物。WO97/07268中已經(jīng)證實了磷脂酰絲氨酸和膜聯(lián)蛋白之間的相互作用。所述多肽與帶負電荷的磷脂成分的組合物可以是本領(lǐng)域公知的任何可能的方式，例如共價或非共價偶聯(lián)分子的形式或脂質(zhì)體形式等。
本發(fā)明進一步涉及制備上述1,4-苯并二氮雜類或1,4-苯并硫雜吖庚因類衍生物的方法。用于制備1,4-苯并二氮雜類或1,4-苯并硫雜吖庚因的方法是本領(lǐng)域公知的。這些方法包括但不限于Sternbach等(1963),US3109843,US3116203,US3121114,US3123529和US3203990描述的方法。1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類也可以以商業(yè)途徑從Sigma(Dreisenhofen，德國)或Neosystem(Strasbourg，法國)購得。從膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白衍生的多肽，更具體地說，從結(jié)合膜聯(lián)蛋白的病毒蛋白衍生的多肽，更具體地說從HBV和/或HDV的HBsAg衍生的多肽，從巨細胞病毒的糖蛋白B或者從任何流感病毒的膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白衍生的多肽通過本領(lǐng)域公知的任何方法與1,4-苯并二氮雜類或1,4-苯并硫雜吖庚因類連接。例如，通過使用(R,S)-Fmoc-3-氨基-N-1-羧甲基-2-氧代-5-環(huán)己基-1,4-苯并二氮雜(FB03601；N eosystem,Strasbourg，法國，圖7)作為結(jié)構(gòu)單元通過以Fmoc為基礎(chǔ)的肽合成可以連接肽。圖8給出了得到的分子的例子。通過利用Pierce產(chǎn)品目錄(Pierce,Rockford,IL,USA)中描述的同型雙功能連接基團通過肽的N-末端使肽與1,4-苯并二氮雜的3位連接可以合成其它的1,4-苯并二氮雜類衍生物。圖9或10給出了這樣的反應(yīng)。圖11給出了得到的分子的例子。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物制備預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員和膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用的任何疾病的藥物的用途。
更特別地，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物制備預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病的藥物的用途。
更特別地，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物制備通過抑制HBV和/或HDV與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用來干擾HBV和/或HDV的生活周期從而預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染的藥物的用途。關(guān)于這一點，術(shù)語“HBV和/或HDV”的應(yīng)用指HBV感染可以單獨發(fā)生或者伴隨HDV超感染這一點是清楚的。另一方面，HDV感染不單獨發(fā)生。換句話說，本發(fā)明的分子可以用于制備預(yù)防或治療單獨的HBV感染或混合的HBV/HDV感染的藥物。
本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明的化合物制備通過抑制巨細胞病毒與膜聯(lián)蛋白Ⅱ的相互作用來干擾巨細胞病毒的生活周期從而預(yù)防或治療巨細胞病毒感染的藥物的用途。
本發(fā)明進一步涉及本發(fā)明的化合物制備通過抑制流感病毒與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用來干擾流感病毒的生活周期從而預(yù)防或治療流感病毒感染的藥物的用途。
因此，本發(fā)明涉及本發(fā)明的化合物制備預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員與蛋白質(zhì)相互作用的任何疾病，更特別地涉及預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地涉及預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
本發(fā)明進一步涉及DBA753、根據(jù)式Ⅱ的化合物或者根據(jù)式Ⅲ的化合物制備預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員與蛋白質(zhì)相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
在本發(fā)明中，BDA753特別用來抑制HBV與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用。盡管證實了膜聯(lián)蛋白Ⅴ與衍生有AYGW的1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因的結(jié)合(Hoffman等，1998)，但是沒有肽衍生化作用或者在3位只衍生有一個氨基酸的1,4-苯并二氮雜類不能抑制HBV的HBsAg與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用。出我們意料的是用肽AYGW將1,4-苯并二氮雜衍生化得到能抑制HBV的HBsAg與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用的化合物。
因此，本發(fā)明還涉及包含下面氨基酸序列或者其部分的肽的用途AYGW(SEQ ID NO3)用于制備預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
本發(fā)明進一步涉及一種預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染或者它們的任何突變病毒株感染的藥物組合物或藥物(兩個術(shù)語可以互換使用)，它們包括至少一種本發(fā)明的化合物、至少BDA753，至少一種根據(jù)式Ⅱ的化合物、至少一種根據(jù)式Ⅲ的化合物或者至少肽AYGW(SEQ ID N03)和可能地，一種藥學(xué)可接受載體或賦形劑(兩個術(shù)語可以互換使用)。任選地，所述組合物可以含有用于抗上述感染的其它治療劑。這些治療劑包括但不限于用于HBV的adefovir,BMS200475,famciclovir，膦甲酸，fiacitabine,fialuridine,(-)-FTC，更昔洛韋，GEM132，干擾素，lamivuding,L-FMAU,lobucavir，正-二十二烷醇，利巴韋林，索利夫定，阿糖腺苷或者WO98/18818中提到的化合物；用于巨細胞病毒的阿昔洛韋，adefovir,cidofovir，環(huán)HPMPC,fiacitabine,fomivirsen，更昔洛韋，I263W94,lobucavir，利巴韋林，valaciclovir或阿糖腺苷；用于流感的金剛烷胺，GG167,GS4104，利巴韋林或金剛乙胺?！八幬铩笨梢酝ㄟ^技術(shù)人員知識內(nèi)任何合適的方法施用。優(yōu)選地，施用方式可以是經(jīng)腸或非經(jīng)腸給藥。本發(fā)明的組合物可以是適合這樣的給藥方法的任何已知的藥物組合物形式。所述組合物可以以本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法配制，使得活性化合物控制釋放的，例如快速釋放或緩釋。這些藥物組合物的活性物質(zhì)也可以單獨給藥，沒有載體賦形劑。但是，它們也可以與藥學(xué)可接受無毒載體或稀釋劑一起施用，其中比例由具體載體的適配性和化學(xué)性質(zhì)確定。技術(shù)人員公知的合適的載體或賦形劑是鹽水，Ringer’s溶液，葡萄糖溶液，Hank’s溶液，固定油，油酸乙酯，5％葡萄糖鹽水溶液，提高等滲性和化學(xué)穩(wěn)定性的物質(zhì)，緩沖液和防腐劑。
在非經(jīng)腸給藥中，本發(fā)明的藥物以與如上定義的藥學(xué)可接受的賦形劑結(jié)合的溶液，懸浮液或乳狀液的單位劑量可注射形式配制。但是給藥的劑量和方法將取決于個體。一般情況下，施用藥物，使得以1微克/千克至100毫克/千克，更優(yōu)選地以10微克/千克至20毫克/千克，最優(yōu)選地以0.1至2毫克/千克給與本發(fā)明的化合物。優(yōu)選地，以大丸劑劑量給藥。也可以使用連續(xù)灌注。如果使用連續(xù)灌注，可以以1至100微克/千克/分鐘，更優(yōu)選地5至20微克/千克/分鐘的劑量灌注藥物。
適合口服的劑量形式包括但不限于片劑，丸劑，膠囊劑，caplets，顆粒劑，粉末劑，酏劑，糖漿，溶液和含水或油懸浮液。用于對人給藥的合適的活性化合物的日劑量一般是大約1毫克至大約5000毫克，更通常大約5毫克至大約1000毫克，單獨一次劑量給藥或者每天一次或多次分劑量給藥。
本發(fā)明最后涉及如上所述的化合物在篩選阻斷膜聯(lián)蛋白和與膜聯(lián)蛋白相互作用的任何蛋白質(zhì)，更特別地，與膜聯(lián)蛋白相互作用的任何病毒蛋白，更特別地，HBV的HBsAg蛋白質(zhì)、巨細胞病毒的糖蛋白B或任何流感病毒的膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合的分子的方法中的用途。如這里所使用的，術(shù)語“篩選分子的方法”指適合分子篩選的本領(lǐng)域公知的任何方法。特別地，該術(shù)語指本發(fā)明的實施例1描述的方法。
本發(fā)明現(xiàn)在通過參考給出的特別有利的實施方案的實施例詳細說明。但是應(yīng)該注意這些實施例是說明性的不以任何方式限制本發(fā)明。說明書和權(quán)利要求書中除非另有說明，術(shù)語“包含”，及其變化表示例如“包含”和“含有”理解為指包括所述的整體部分或所述的整體部分或步驟的步驟或組，但是不排除任何其它整體部分或整體部分或步驟的步驟或組。
表和附圖的簡要說明表1提供了涉及確定HBsAg的6個基因型(A,B,C,D,E,F)的“小”HBsAg的99-169位氨基酸的區(qū)和認定檢查的多肽結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ的序列信息。
圖1給出了1,4-苯并二氮雜類和1,4-苯并硫雜吖庚因類的基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)式(式Ⅰ)，其中*在1位-苯并硫雜吖庚因類具有一個硫原子(X代表S)；X也可以是SOn，其中n=0,1,2；-苯并二氮雜類具有一個氮原子(X代表N)，其在1位另外修飾有羧甲基(-CH2COOH)之后，允許通過肽的C-末端連接的或者通過肽的N-末端連接的另外修飾有一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分。在N不修飾有一個肽的情況下，修飾可以是H，烷基，苯基，-COZ，其中Z代表H，烷基，苯基或取代的苯基；*1,2,3,4,5位可以以鄰接位置形成雙鍵；如果是這種情況，則支鏈R2,R4,R5或R7不存在；*2和/或2’位上的R1和/或R2可以代表H，胺，烷基或者位置2可以被氧化(=O)。在R1和/或R2是胺的情況下，其可以進一步地或者直接通過肽的C-末端連接或者通過象戊二醛或琥珀酐這樣的連接基團連接于肽的N-末端而被一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分取代；*3和/或3’位上的R3和/或R4可以代表H，胺或烷基。在R3和/或R4是胺的情況下，其可以進一步地或者直接通過肽的C-末端連接或者通過象戊二醛或琥珀酐這樣的連接基團連接于肽的N-末端而被一個權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分取代；*4位上的R5可以代表4位另外修飾有羧甲基(-CH2COOH)后或者直接通過肽的C-末端連接的或者通過肽的N-末端連接的權(quán)利要求書中定義為“含有一個膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽”的肽或者其部分的支鏈。在R5不是權(quán)利要求書中定義的肽的情況下，R5可以代表H，烷基，-CO-R12或者3-(1-(4-芐基)哌啶基)丙酰基)；*R6和/或R7代表H或烷基或苯基，可能進一步取代有烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷酰基，羧基，烷酰基烷氧基，氨基甲酰基；*R8,R9,R10和/或R11代表H，烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷酰基，羧基，烷?；檠趸?，氨基甲酰基；*R12代表H或烷基或可能進一步取代有烷基，氰基，鹵素，硝基，烷基烷氧基，烷?；然?，烷?；檠趸?，氨基甲?；谋交?。
圖2給出了式Ⅱ的結(jié)構(gòu)(FR2479818)，其中*在2位，R代表一個氨基酸或者由兩個或三個氨基酸組成的肽；*X代表氯或氟。
圖3給出了式Ⅲ的結(jié)構(gòu)，其中1,4-苯并二氮雜的3位被肽ARPYN取代并且1位被L殘基取代(Nachman等，1998)。
圖4給出了式Ⅳ的結(jié)構(gòu)，其中
*R,R’和/或R+R’構(gòu)成包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分。在只有R是一個肽的情況下，位置1是甲基化的。在只有R’是一個肽的情況下，位置3含有胺；*X代表可以被-COCH3修飾的肽的N-末端；*Y代表可以被-NH2或-賴氨酸-生物素修飾的肽的C-末端。
圖5給出了式Ⅴ的結(jié)構(gòu)，其中肽R通過其N-末端通過連接基團(SPC)連接。
圖6給出了實施例1中描述的1,4-苯并二氮雜類衍生物的結(jié)構(gòu)BDA250:1,3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1,4-苯并二氮雜-2-酮；BDA452:3-(R,S)-(L-色氨?；?-1,3-氫-1-甲基-5-苯基-2H-1,4-苯并二氮雜-2-酮；BDA753:3-(R,S)-全-L-(NH-Trp-G1y-Tyr-Ala-H)-1,3-二氫-1-甲基-5-苯基-2H-1,4-苯并二氮雜-2-酮。
圖7給出了用于1,4-苯并二氮雜類衍生物合成的Fmoc保護的(R,S)-Fmoc-3-氨基-N-1-羧甲基-2-氧代-5-環(huán)己基-1,4-苯并二氮雜(FB03601；Neosystem,Strasbourg，法國)。
圖8給出了一些根據(jù)式Ⅳ的1,4-苯并二氮雜類衍生物的例子。
圖9給出了通過使用戊二醛作為連接基團合成根據(jù)式Ⅴ的1,4-苯并二氮雜衍生物的基礎(chǔ)反應(yīng)。
圖10給出了通過使用琥珀酸酐作為連接基團合成根據(jù)式Ⅴ的1,4-苯并二氮雜衍生物的基礎(chǔ)反應(yīng)。
圖11給出了一些根據(jù)式Ⅴ的1,4-苯并二氮雜類衍生物的例子。
圖12證明不同的化合物對膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBsAg之間的相互作用的不同抑制在圖6中描述了BDA250,BDA452和BDA753；IGP1362和IGP1363是分別從HBV的HBsAg的158-169位氨基酸和115-125位氨基酸衍生的肽并且在表1中給出。BDA753能抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBsAg之間的相互作用，而只包含該分子(BDA250)的苯并二氮雜部分的化合物則不能。
圖13證明代表HBsAg的158-169位氨基酸的天然變體或代表C-末端沒有另外修飾生物素化賴氨酸的肽(IGP1632)的不同肽對膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBsAg之間的相互作用的不同抑制(表1)。這些結(jié)果歸一化為IGP1481的抑制效力。
圖14證明代表IGP1481的C-末端截短的變體的不同肽對膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBsAg之間的相互作用的不同抑制(表1)。這些結(jié)果歸一化為IGP1481的抑制效力。
圖15證明代表IGP1481的非天然突變體的不同肽對膜聯(lián)蛋白Ⅴ和HBsAg之間的相互作用的不同抑制(表1)。這些結(jié)果歸一化為IGP1481的抑制效力。帶星號的肽在試驗的最高濃度表現(xiàn)出沒有抑制作用，在這些情況下條匡代表試驗的最高相對濃度。
實施例實施例1:1,4-苯并二氮雜和衍生物對膜聯(lián)蛋白Ⅴ對HBsAg的結(jié)合的影響為了證明膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合分子對HBsAg與膜聯(lián)蛋白Ⅴ的相互作用的影響進行了競爭試驗。使膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合化合物(圖6和表1)在結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ中與HBsAg競爭。最后測定與HBsAg結(jié)合的標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白Ⅴ。簡要地說，將重組HBsAg包被在微量滴定板(2微克/毫升，4℃下在補充有1mM氯化鈣和1mM氯化鎂的TBS中過夜)上。用3％冷的魚明膠封閉平板后(室溫下在補充有1mM氯化鈣和1mM氯化鎂的TBS中培養(yǎng)2小時)，在過量肽或化合物存在下加入125I-標(biāo)記的膜聯(lián)蛋白Ⅴ(50ng)，并且使相互作用(37℃下在補充有1mM氯化鈣和1mM氯化鎂和0.3％冷的魚明膠的TBS中培養(yǎng)2小時)。溫育之后用補充有1mM氯化鈣和1mM氯化鎂和0.05％Tween-20的TBS沖洗平板三次。該項試驗重復(fù)進行6次，表達的結(jié)果是平均值(平均值頂點上的線代表標(biāo)準偏差)。使用的各種化合物或肽對HBsAg的摩爾過量如下BDA25025000BDA45213750BDA7531600IGP1362 400IGP1363 560從圖12可以判斷，BDA753和IGP1362分子破壞膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的結(jié)合。BDA753由衍生有4個氨基酸的肽鏈的1,4-苯并二氮雜組成。其苯并二氮雜部分與BDA250相同，其結(jié)合膜聯(lián)蛋白但是不能抑制HBsAg對膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合。相反，BDA250卻增強了結(jié)合。具有和BDA250類似核心結(jié)構(gòu)但是帶有胺化的色氨酸的分子BDA452根本不影響HBsAg對膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合，而分子BDA753確實抑制HBsAg對膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合。從這些結(jié)果可以得出結(jié)論，BDA753上存在的而BDA452上不存在的三個另外的氨基酸是觀察到的競爭作用的原因。最可能的是這些氨基酸和HBsAg一樣對膜聯(lián)蛋白Ⅴ在相同位點結(jié)合。已經(jīng)存在于BDA452中的胺化的色氨酸殘基也可能部分干擾HBsAg結(jié)合，因為該附加的色氨酸殘基確實破壞BDA250引起的結(jié)合增強。這表明也可以進一步修飾BDA452獲得更好的抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ對HBsAg結(jié)合的特異性。包含HBsAg的aa158-169的肽IGP1362也能抑制HBsAg對膜聯(lián)蛋白Ⅴ的結(jié)合(圖12)并且最可能結(jié)合和BDA753結(jié)合時的相同位點。應(yīng)該注意并不是所有的肽序列都得到和肽IGP1363代表的序列相同的結(jié)果，所述IGP1363也由HBsAg(氨基酸115-125)衍生，但是不抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ對HBsAg的結(jié)合?？梢缘贸鼋Y(jié)論該肽中存在的序列不結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ的HBsAg結(jié)合區(qū)。
因此，IGP1362或者其部分連接1,4-苯并二氮雜類，BDA250或BDA452或者其任何衍生物。這樣的分子可以使用(R,S)-Fmoc-3-氨基-N-1-羧甲基-2-氧代-5-環(huán)己基-1,4-苯并二氮雜(FB03601；Neosystem,Strasbourg，法國，圖7)作為結(jié)構(gòu)單元通過以Fmoc為基礎(chǔ)的肽合成來制備。圖8給出了得到的分子的實施例。通過在如圖9和10所示的反應(yīng)中利用連接基團分子通過肽的N-末端使肽與3胺-1,4-苯并二氮雜連接來合成其它1,4-苯并二氮雜類衍生物。圖11給出了得到的分子的實施例。在競爭實驗中測試得到的1,4-苯并二氮雜類衍生物來證明在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用中的提高的特異性。
實施例2與膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合的HBsAg序列的進一步鑒定為了更詳細地研究肽序列對HBsAg-膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合的抑制作用，進一步優(yōu)化了結(jié)合測定。這導(dǎo)致下面的測定設(shè)置·將微量滴定板包被HBsAg:500ng/100微升，1小時，37℃；·封閉TBS3％(v/v)冷魚明膠，1小時，室溫；
·結(jié)合50ng放射標(biāo)記膜聯(lián)蛋白Ⅴ/100微升(在TBS,10mM氯化鈣，0.3％(v/v)冷魚明膠中在37℃下與競爭化合物預(yù)培養(yǎng)1小時)，1小時，37℃；·沖洗用200微升TBS,10mM氯化鈣，0.05％(v/v)Tween-20，室溫下沖洗三次；·用SDS(60微升，1小時，37℃)洗脫結(jié)合的標(biāo)記物，接著在γ計數(shù)器中計數(shù)。
肽IGP1362是有支鏈的肽，在生物素化的賴氨酸核心上存在小HBsAg的氨基酸158-169兩個支鏈(表1)。該序列也從帶有在ε胺官能團上帶有生物素的C-末端賴氨酸或者帶有酰胺化的C-末端的單體形式(IGP1481和1623，見表1)來合成。另外，制備代表HBsAg的相同區(qū)(氨基酸158-169)但是從HBV的其它基因型衍生的肽代表C基因型中發(fā)現(xiàn)的主要序列的IGP1624和1625，代表D/E基因型中發(fā)現(xiàn)的主要序列的IGP1618和代表基因型F中發(fā)現(xiàn)的主要序列的IGP1619，而IGP1481代表A/B基因型中發(fā)現(xiàn)的主要序列(表1)。肽IGP1481,1624,1625,1618和1619的總序列代表1998年10月公共序列數(shù)據(jù)庫中可獲得的460條HBsAg序列的90％。所有的肽都經(jīng)反相色譜純化并且為了證實期望的肽的存在對含有肽的級分用質(zhì)譜進行分析。在膜聯(lián)蛋白Ⅴ/HBsAg結(jié)合測定中測定純化的肽并且以對包被的重組HBsAg的摩爾過量計算導(dǎo)致50％競爭作用的濃度。對達到50％競爭水平的摩爾過量對于IGP1481是17.5,IGP1481是與包被的HBsAg同源的序列。其它肽的結(jié)果在圖13中給出并且歸一化為用IGP1481獲得的值(將達到50％競爭水平的IGP1481的摩爾過量設(shè)定為1)。從該圖可以判斷從其它基因型衍生的所有的肽表現(xiàn)出相同等級大小的競爭水平(最大差異是對于IGP1625低5倍)。從該結(jié)果可以預(yù)言存在的HBsAg的所有天然變體表現(xiàn)出相同的效力。出人意料的是除了生物素化賴氨酸外與1481相同的肽1623活性小7倍。因此對肽加上一個生物素化賴氨酸以這樣一種方式改變其性質(zhì)使得效力被提高。IGP1481,1618,1619,1624或1625或者其部分連接1,4-苯并二氮雜，BDA250,BDA452或者其任何衍生物。在競爭實驗中測定得到的1,4-苯并二氮雜類衍生物來證明它們在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用中提高的特異性。
實施例3與膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合的HBsAg序列的進一步描述為了測定序列158-169的哪一部分對于觀察到的競爭作用重要，合成了C-末端截短的肽，通過反相色譜純化并且通過質(zhì)譜證實其結(jié)構(gòu)。制備與IGP1481相比分別缺失2,4和6個氨基酸的三個這樣的肽，IGP1556,1557和1558(見表1)并且測定競爭作用。只缺失2個C-末端氨基酸的肽IGP1556效力只小10倍，缺失4個氨基酸的IGP1557也是如此，而缺失6個氨基酸的IGP1558活性小100倍(圖14)。
IGP1556,1557或1558或者其部分連接1,4-苯并二氮雜類，BDA250,BDA452或者其任何衍生物。在競爭實驗中測定得到的1,4-苯并二氮雜類衍生物來證明它們在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用中提高的特異性。
實施例4在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用具有提高的特異性的化合物的鑒定兩種肽IGP1623和BDA753確實抑制膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg的相互作用。而且這些化合物表現(xiàn)出一定程度的序列同源性FAKYLWEWASVRAYGW-Bdz通過提高BDA753和IGP1623或者其天然變體例如IGP1618,1619,1624和1625之間的同源性，產(chǎn)生具有提高的阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg之間的相互作用中的特異性的新的化合物。這樣的化合物是KYGW-BdzKFGW-BdzRFGW-BdzAYLW-BdzAFLW-BdzKYLW-BdzRFLW-BdzKFLW-BdzBdz代表其中3位修飾有肽通過其C-末端與其連接的胺并且1位可以修飾為羧甲基的化合物BDA250(圖6)。
實施例5對于在阻斷膜聯(lián)蛋白Ⅴ與HBsAg之間的相互作用中的高特異性重要的HBV的HBsAg的158-169區(qū)中的氨基酸的鑒定為了鑒定對于肽IGP1481抑制HBsAg和膜聯(lián)蛋白Ⅴ之間的相互作用的效力重要的HBV的HBsAg的氨基酸序列158-169中的殘基，幾個氨基酸突變?yōu)楸彼峄蚬劝滨０?IGP1482,1483,1484,1485,1486,1487,1488,1489,1493和1622，見表1)。所有的肽再次通過反相色譜純化并且通過質(zhì)譜證實存在期望的結(jié)構(gòu)。圖15說明這些肽對于IGP1481的相對競爭。這些結(jié)果證明，160位的氨基酸是重要的并且該賴氨酸突變?yōu)楸彼?IGP1484)誘導(dǎo)至少20倍的活性(最高試驗濃度仍然不導(dǎo)致競爭)。如實施例4具體說明的，該些實驗支持化合物BDA753中氨基酸丙氨酸至賴氨酸(或精氨酸)的突變的影響。對于通常是亮氨酸的162位氨基酸發(fā)現(xiàn)了相同的結(jié)果。該亮氨酸突變?yōu)楣劝滨０?IGP1486)幾乎破壞了活性，而該亮氨酸突變?yōu)楸彼?IGP1622)導(dǎo)致活性降低至少25倍(最高試驗濃度仍然不導(dǎo)致競爭)。如實施例4具體說明的，該些實驗支持化合物BDA753中氨基酸甘氨酸至亮氨酸的突變的影響。表1:HBV基因型和檢測了與膜聯(lián)蛋白Ⅴ結(jié)合的多肽的最常見的序列100 110 120 130 140 150 160170geno * * * * * * * *HBsAg A DYQGMLPVCPLIPGSTTTSTGPCKTCTTPAQGNSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVR (SEQ ID NO53)HBsAg B DYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCKTCTTPAQGTSMFPSCCCTKPTDGNCTCIPIPSSWAFAKYLWEWASVR (SEQ ID NO54)HBsAg C DYQGMLPVCPLLPGTSTTSTGPCKTCTIPAQGTSMFPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFARFLWEWASVR (SEQ ID NO55)HBsAg CK (SEQ ID NO56)HBsAg D DYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTPAQGTSMYPSCCCTKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASAR (SEQ ID NO57)HBsAg E DYQGMLPVCPLIPGSSTTSTGPCRTCTTLAQGTSMYPSCCCSKPSDGNCTCIPIPSSWAFGKFLWEWASAR (SEQ ID NO58)HBsAg F DYQGMLPVCPLIPGSTTTSTGPCKTCTTLAQGTSMYPSCCCSFPSDGNCTCIPIPSSWALGKYLWEWASAR (SEQ ID NO59)IGP1363 (TTSTGPCKTCT)2-KKGK(bio)GA (SEQ ID NO60)IGP1362(FAKYLWEWASVR)2-KKGK(bio)GA (SEQ ID NO4)IGP1481 FAKYLWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO8)IGP1623 FAKYLWEWASVR (SEQ ID NO2)IGP1624 FARFLWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO12)IGP1618 FGKFLWEWASAR-K(bio) (SEQ ID NO13)IGP1619 LGKYLWEWASAR-K(bio) (SEQ ID NO14)IGP1625 FAKFLWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO15)IGP1556 FAKYLWEWAS-K(bio) (SEQ ID NO7)IGP1557 FAKYLWEW-K(bio) (SEQ ID NO6)IGP1558 FAKYLW-K(bio) (SEQ ID NO5)IGP1482 AAKYLWEWASVR-K(bio) (SEO ID NO61)IGP1483 FNKYLWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO62)IGP1484 FAAYLWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO63)IGP1485 FAKALWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO64)IGP1486 FAKYNWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO65)IGP1487 FAKYLAEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO66)IGP1488 FAKYLWAWASVR-K(bio) (SEQ ID NO67)IGP1489 FAKYLWEAASVR-K(bio) (SEQ ID NO68)IGP1493 FAKYLWEWASVA-K(bio) (SEQ ID NO69)IGP1622 FAKYAWEWASVR-K(bio) (SEQ ID NO70)
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權(quán)利要求
1．根據(jù)式Ⅰ的衍生有一個或多個包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分的化合物，前提是所述化合物不是BDA753，根據(jù)式Ⅱ的化合物或根據(jù)式Ⅲ的化合物。
2．根據(jù)式Ⅳ的衍生有一個或兩個肽R和/或R’的化合物，使得R,R’和/或R+R’代表包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分，前提是所述化合物不是BDA753或根據(jù)式Ⅲ的化合物。
3．根據(jù)式Ⅴ的衍生有包含膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白的膜聯(lián)蛋白結(jié)合表位的肽或者其部分，R，的化合物。
4．根據(jù)權(quán)利要求1-3任一項的化合物，其中所述膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白是病毒蛋白。
5．根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述病毒蛋白是HBV的表面抗原。
6．根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述病毒蛋白是巨細胞病毒的糖蛋白B。
7．根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中所述病毒蛋白是從任何流感病毒株衍生的蛋白，條件是該流感蛋白結(jié)合膜聯(lián)蛋白Ⅴ。
8．根據(jù)權(quán)利要求4的衍生有一個或多個下面的肽或者其部分的化合物KTCTTPAQGN(SEQ ID NO1)(FAKYLWEWASVR)2-KKGK(bio)GA(SEQ ID NO4)FAKYLW-K(bio)(SEQ ID NO5)FAKYLWEW-K(bio)(SEQ ID NO6)FAKYLWEWAS-K(bio)(SEQ ID NO7)FAKYLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO8)FAKYLW(SEQ ID NO9)FAKYLWEW(SEQ ID NO10)FAKYLWEWAS(SEQ ID NO11)FAKYLWEWASVR(SEQ ID NO2)FARFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO12)FGKFLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO13)LGKYLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO14)FAKFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO15)KYGW-K(bio)(SEQ ID NO16)KFGW-K(bio)(SEQ ID NO17)RFGW-K(bio)(SEQ ID NO18)AYLW-K(bio)(SEQ ID NO19)AFLW-K(bio)(SEQ ID NO20)KYLW-K(bio)(SEQ ID NO21)RFLW-K(bio)(SEQ ID NO22)KFLW-K(bio)(SEQ ID NO23)FARFLWEWASVR(SEQ ID NO24)FGKFLWEWASAR(SEQ ID NO25)LGKYLWEWASAR(SEQ ID NO26)FAKFLWEWASVR(SEQ ID NO27)KYGW(SEQ ID NO28)KFGW(SEQ ID NO29)RFGW(SEQ ID NO30)AYLW(SEQ ID NO31)AFLW(SEQ ID NO32)KYLW(SEQ ID NO33)RFLW(SEQ ID NO34)KFLW(SEQ ID NO35)
9．具有下面氨基酸序列之一的多肽或者其部分FAKYLW-K(bio)(SEQ ID NO5)FAKYLWEW-K(bio)(SEQ ID NO6)FAKYLWEWAS-K(bio)(SEQ ID NO7)FAKYLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO8)FARFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO12)FGKFLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO13)LGKYLWEWASAR-K(bio)(SEQ ID NO14)FAKFLWEWASVR-K(bio)(SEQ ID NO15)KYGW-K(bio)(SEQ ID NO16)KFGW-K(bio)(SEQ ID NO17)RFGW-K(bio)(SEQ ID NO18)AYLW-K(bio)(SEQ ID NO19)AFLW-K(bio)(SEQ ID NO20)KYLW-K(bio)(SEQ ID NO21)RFLW-K(bio)(SEQ ID NO22)KFLW-K(bio)(SEQ ID NO23)FAKYLW(SEQ ID NO9)FAKYLWEW(SEQ ID NO10)FAKYLWEWAS(SEQ ID NO11)FARFLWEWASVR(SEQ ID NO24)FGKFLWEWASAR(SEQ ID NO25)LGKYLWEWASAR(SEQ ID NO26)FAKFLWEWASVR(SEQ ID NO27)KYGW(SEQ ID NO28)KFGW(SEQ ID NO29)RFGW(SEQ ID NO30)AYLW(SEQ ID NO31)AFLW(SEQ ID NO32)KYLW(SEQ ID NO33)RFLW(SEQ ID NO34)KFLW(SEQ ID NO35)
10．根據(jù)權(quán)利要求1-9任一項的化合物，它包含或者由其中所有氨基酸是L形式或者其中所有氨基酸是D形式的多肽組成。
11．根據(jù)權(quán)利要求1-10任一項的化合物，它包括或者由反向-反轉(zhuǎn)多肽組成。
12．制備根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的具體分子的方法。
13．根據(jù)權(quán)利要求1-11任一項的分子制備預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更具體地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染，巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
14．根據(jù)BDA753、式Ⅱ的化合物或者根據(jù)式Ⅲ的化合物制備預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
15．包含下面氨基酸序列的肽或者其部分AYGW(SEQ ID NO3)用于制備預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染的藥物的用途。
16．一種藥物組合物，它含有至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-11或13-15的分子，用于預(yù)防或治療其中涉及蛋白質(zhì)與膜聯(lián)蛋白家族成員相互作用的任何疾病，更特別地預(yù)防或治療其中涉及病毒蛋白和宿主膜聯(lián)蛋白家族成員之間的相互作用的任何病毒疾病，更特別地預(yù)防或治療HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染。
17．根據(jù)權(quán)利要求1-11或13-15的化合物在篩選阻斷膜聯(lián)蛋白和與膜聯(lián)蛋白相互作用的蛋白質(zhì)，更特別地，與膜聯(lián)蛋白相互作用的病毒蛋白，更特別地，HBV的HBsAg蛋白、巨細胞病毒的糖蛋白B或任何流感病毒的膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的結(jié)合的分子的方法中的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及可以抑制膜聯(lián)蛋白和膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用的衍生有肽的1,4－苯并二氮雜類或1,4－苯并硫雜吖庚因類。具體地說,本發(fā)明涉及能抑制膜聯(lián)蛋白和結(jié)合膜聯(lián)蛋白的病毒蛋白質(zhì)之間的相互作用的1,4－苯并二氮雜類或1,4－苯并硫雜吖庚因類衍生物,所述病毒蛋白質(zhì)是例如HBV的HbsAg蛋白、巨細胞病毒的糖蛋白B或者來自流感病毒的任何膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白。這些1,4－苯并二氮雜類或1,4－苯并硫雜吖庚因衍生物可以用來預(yù)防或治療其中涉及膜聯(lián)蛋白家族成員和膜聯(lián)蛋白結(jié)合蛋白之間的相互作用的疾病,例如HBV和/或HDV感染、巨細胞病毒感染或流感病毒感染。
文檔編號C07K14/045GK1315963SQ99810388
公開日2001年10月3日 申請日期1999年8月25日 優(yōu)先權(quán)日1998年9月1日
發(fā)明者E·德普拉, H·梅雷爾斯, G·梅爾滕斯 申請人:基因創(chuàng)新有限公司