專利名稱：N－甲基－d－苯丙氨?；璶－[1－[3－[(氨基亞氨基甲基)－氨基]丙基]－3,3－二氟 ...的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及制備N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺及其可藥用鹽的新方法。
背景技術(shù)：
N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物(也稱為“MDL75579DA”)記載于美國專利5391705中，它同時(shí)是凝血酶和類胰蛋白酶的抑制劑。該化合物可作為抗凝劑用于治療血栓性靜脈炎、冠狀動(dòng)脈血栓形成，并可用于治療哮喘。N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物的生物化學(xué)和藥理學(xué)作用記載于R.J.Broersma等，血栓形成和止血(Thrombosis and Haemostasis)69,666(1993)和B.Neises等，生物有機(jī)醫(yī)學(xué)化學(xué)(Bioorg.Med.Chem.)3,1049-1061(1995)中。
美國專利5391705公開了從硝基中間體會(huì)聚制備N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物的方法。例如，將4-氨基-1-硝基丁烷鹽酸鹽直接用二-Boc-S-甲基異硫脲脒化。然后將所述脒化的產(chǎn)物與2,2-二氟戊烯-1-醛乙基半縮醛偶聯(lián)，形成5-羥基-6-硝基中間體，將其通過催化氫化還原得到5-羥基-6-氨基中間體。然后將5-羥基-6-氨基中間體與N-Boc-N-甲基-D-Phe-L-Pro二肽中間體偶聯(lián)并將偶聯(lián)后的肽用一般的氧化方法如Swern氧化法氧化，形成N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物。
另外，B.Neises等在Bioorg.Med.Chem.3,1049-1061(1995)中公開了、并且美國專利5391705也建議了使用改進(jìn)的Dakin-West反應(yīng)，從2-苯基-[4-(3-芐氧羰基氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮和2,2-二氟-4-戊烯酸的酸酐或酰鹵反應(yīng)制得9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽。然后將該二鹽酸鹽用三步脒化法脒化，所述三步脒化法包括，用三氟乙酸酐(“TFAA”)保護(hù)內(nèi)胺，將末端胺脒化和脫除TFA保護(hù)基。然后將得到的5-羥基-6-氨基中間體與N-Boc-N-甲基-D-Phe-L-Pro二肽中間體偶聯(lián)，并將偶聯(lián)后的肽用一般的氧化方法如Swern氧化法氧化，形成N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物。
但這些方法有一些缺點(diǎn)。就使用適宜硝基中間體的方法而言，4-脒基-1-硝基丁烷中間體的制備存在困難。例如，當(dāng)將亞硝酸鈉加入到原料溴丁基鄰苯二甲酰亞胺中時(shí)，由于亞硝酸酯的形成，很難以高產(chǎn)率得到所需的硝基丁基鄰苯二甲酰亞胺中間體。另外，還必需將亞硝酸酯水解并與所需的硝基丁基鄰苯二甲酰亞胺分離。此外，還需使用過量的肼以除去鄰苯二甲酰亞氨基。為了除去有毒的肼，必需向粗產(chǎn)物混合物中加入過量昂貴的試劑Boc2O，而相應(yīng)的氨基甲酸酯必需通過色譜法除去。除了難以制備適宜的4-脒基-1-硝基丁烷中間體外，還難以達(dá)到可接受的產(chǎn)品純度(＞97％)，在合成時(shí)需要大量進(jìn)行色譜純化。
就Dakin-West路線而言，三步脒化法的終產(chǎn)物MD L75579DA的收率很低，從N-9-[1-[3-[二[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]亞甲基]氨基-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷中間體開始，收率僅為約15％。此外，使用Dakin-West三步脒化路線時(shí)，僅能達(dá)到約92％的產(chǎn)品純度。此外，由于擔(dān)心會(huì)脒化未保護(hù)的內(nèi)胺(即6-氨基)，現(xiàn)有技術(shù)中教導(dǎo)并建議在選擇性脒化9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽時(shí)需要將內(nèi)胺保護(hù)；K.Hofmann等，美國化學(xué)學(xué)會(huì)會(huì)志(J.Am.Chem.Soc.)82,3727-3732(1960)；K.Marayanan和O.Griffith，醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.)37,885-887(1994)；F.Weygard and R.Geiger，德國化學(xué)學(xué)會(huì)會(huì)志(Berichte de Deutschen Chemishen Gellellschaft),89,647(1956)。
本發(fā)明的目的之一是提供制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽的新方法，該方法可選擇性地一步脒化所需的Dakin-West中間體，克服了制備4-脒基-1-硝基丁烷中間體的困難。
本發(fā)明的另一目的是提供經(jīng)濟(jì)地制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽的新方法，與所公開的現(xiàn)有技術(shù)相比，該方法的步驟和純化次數(shù)更少。
本發(fā)明的又一目的是提供了制備N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷的新方法，其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基，該物質(zhì)是用于制備N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽的所需中間體。
通過下述發(fā)明實(shí)現(xiàn)了上述以及其它的目的。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽的新方法，該方法包括如下步驟(a)將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜的脒化試劑反應(yīng)，得到N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷，其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基；(b)將N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷與N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?L-脯氨酰胺偶聯(lián)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺，其中K2是N-保護(hù)基；(c)將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺與適宜的氧化劑反應(yīng)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺；和(d)用適宜的脫保護(hù)試劑將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺脫保護(hù)，得到N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽。
本發(fā)明還提供制備N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷的方法，包括將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜的脒化試劑反應(yīng)，得到N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷，其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基。
發(fā)明詳述本申請(qǐng)中a)符號(hào)“
”指未指定立體化學(xué)的鍵。b)符號(hào)“
”指伸向紙平面外的鍵。c)符號(hào)“
”指伸向紙平面內(nèi)的鍵。d)術(shù)語“可藥用鹽”指酸加成鹽。
“可藥用酸加成鹽”用來表示N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其中間體的所有無毒的有機(jī)或無機(jī)酸加成鹽?？尚纬蛇m宜鹽的無機(jī)酸的例子包括鹽酸、氫溴酸、硫酸和磷酸，以及酸性金屬鹽如磷酸一氫鈉和硫酸氫鉀?？尚纬蛇m宜鹽的有機(jī)酸的例子包括一元、二元和三元羧酸。這些酸的例子是，例如乙酸、三氟乙酸、乙醇酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富馬酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯甲酸、羥基苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸、水楊酸、2-苯氧基苯甲酸和磺酸如甲磺酸和2-羥基乙磺酸．這些鹽可以以水合物或基本無水的形式存在。
立體異構(gòu)體是僅在原子的空間取向上不同的異構(gòu)體。它包括具有一個(gè)以上手性中心的化合物的彼此不成鏡像的異構(gòu)體(非對(duì)映體或非對(duì)映異構(gòu)體)。術(shù)語“對(duì)映體”是指兩個(gè)互為鏡像的不能重疊的立體異構(gòu)體。術(shù)語“手性中心”是指連接了四個(gè)不同基團(tuán)的碳原子。所采用的L/D或R/S命名法如IUPAC-IUB的生化命名聯(lián)合委員會(huì)(Joint Commission onBiochemical Nomenculature)，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.)138,9-37(1984)中所記載。手性物質(zhì)可含有等量的R和S異構(gòu)體(或L和D異構(gòu)體)，這種情況被稱為“外消旋的”或“外消旋體”，也可含有不等量的R和S異構(gòu)體(或L和D異構(gòu)體)，這種情況被稱為“光學(xué)活性的”或“非外消旋的”。
術(shù)語“適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基”包括叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等。
術(shù)語“N-保護(hù)基”包括適用于多肽合成的所有N-保護(hù)基，參見Greene,“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基(Protective Groups in OrganicChemistry)”，第7章，John Wiley&Sons,New York(1981)。說明性的例子包括但不僅限于叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等。
本文所用的術(shù)語“氨基酸”包括天然氨基酸，它們是從基因編碼轉(zhuǎn)譯的并且構(gòu)成了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)單元。除非特別說明，術(shù)語氨基酸包括(L)-和(D)-氨基酸、化學(xué)修飾的氨基酸如氨基酸類似物、以及通常不摻入蛋白質(zhì)中的天然氨基酸。包括在本說明書范圍內(nèi)的氨基酸類似物以及氨基和羧基保護(hù)基的縮寫如表1所列。
表1氨基酸或保護(hù)基 符號(hào)精氨酸 Arg苯丙氨酸 Phe鳥氨酸 Orn脯氨酸 Pro叔丁氧羰基 Boc芐氧羰基 Cbz
乙酰基Ac琥珀?；? Suc苯乙酰氨基甲基PAM反應(yīng)方案A列出了制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺的一般合成方法。在反應(yīng)方案A中，除非另有說明，原料和試劑均是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的。
反應(yīng)方案A
在反應(yīng)方案A步驟a中，將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽1與適宜的脒化試劑反應(yīng)，得到N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2。
例如，將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽1與適宜的脒化試劑接觸。適宜的脒化試劑是本領(lǐng)域熟知的，可用如下結(jié)構(gòu)式1a表示
其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基，包括叔丁氧羰基(Boc)、芐氧羰基(Cbz)、叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)、叔丁基二苯基甲硅烷基(TBDPS)等，優(yōu)選叔丁氧羰基。取代基LG指適宜的離去基團(tuán)，包括-S-CH3、1-吡唑等。適宜的脒化試劑包括但不限于，二-Boc-脒基吡唑、二-Boc-S-甲基異硫脲、二-Cbz-脒基吡唑等，優(yōu)選二-Boc-脒基吡唑。反應(yīng)在適宜堿的存在下進(jìn)行。適宜的堿可用來中和9,6-二氨基-5-羥基4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽1中內(nèi)胺的鹽，或用來中和適宜的脒化試劑如二-Boc-脒基吡唑在反應(yīng)過程中產(chǎn)生并釋放出來的酸。適宜的堿包括但不限于，三乙胺、異丙基二乙胺、N-甲基-嗎啉、吡啶、碳酸氫鈉和碳酸鈉。反應(yīng)在適宜溶劑如二氯甲烷、二甲基甲酰胺、四氫呋喃或四氫呋喃/水混合物中進(jìn)行。為了使9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽1中的內(nèi)胺脒化的機(jī)會(huì)最小，對(duì)于每1.0摩爾當(dāng)量的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽1，脒化試劑的加入比例為約0.9-約1.2摩爾當(dāng)量，優(yōu)選約0.95-1.05摩爾當(dāng)量。反應(yīng)在約-30℃至約20℃的溫度下進(jìn)行，優(yōu)選-15℃至5℃，首選-5℃至0℃。如本領(lǐng)域所熟知的，可通過萃取和蒸發(fā)將N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2從反應(yīng)區(qū)分離出來。隨需要，可將N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)如色譜和重結(jié)晶進(jìn)行純化。
在反應(yīng)方案A步驟b中，N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2與N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨酰基-L-脯氨酰胺(K2-N-甲基-D-Phe-L-Pro)偶聯(lián)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3。
例如，用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的標(biāo)準(zhǔn)液相肽合成技術(shù)，將N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2與K2-N-甲基-D-Phe-L-Pro偶聯(lián)，其中K2是N-保護(hù)基，優(yōu)選叔丁氧羰基(Boc)。標(biāo)準(zhǔn)液相肽合成技術(shù)包括疊氮化物法、碳酸-羧酸混合酐(氯甲酸異丁酯)法、碳化二亞胺(二環(huán)己基碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或水溶性碳化二亞胺)法、活潑酯(對(duì)硝基苯酯、N-羥基-琥珀酰亞胺酯)法、Woodward試劑K法、羰基二咪唑法、磷試劑如BOP-Cl或氧化還原法。優(yōu)選用碳化二亞胺法偶聯(lián)?？赏ㄟ^加入1-羥基苯并三唑使其中的一些方法(特別是碳化二亞胺法)得到改進(jìn)。例如，將N-Boc-N-甲基-D-Phe-L-Pro(美國專利5391705,1995年2月21日授權(quán))在惰性氣氛如氮?dú)庀氯苡谶m宜的有機(jī)溶劑如二氯甲烷中，隨需要可加入約1當(dāng)量的1-羥基苯并三唑(HOBt)。向該溶液中加入約1當(dāng)量溶于適宜有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的N,N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)。將反應(yīng)混合物攪拌約1-15小時(shí)。向該混合物中加入1-4當(dāng)量適宜的堿如N-甲基嗎啉或三乙胺和至少1摩爾當(dāng)量溶于適宜有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2。然后將反應(yīng)混合物攪拌約1-15小時(shí)。然后可通過本領(lǐng)域熟知的技術(shù)如萃取、沉淀、結(jié)晶和色譜法將偶聯(lián)產(chǎn)物N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3分離和純化。
在反應(yīng)方案A步驟c中，將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3與適宜的氧化劑反應(yīng)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4。
例如，用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)氧化技術(shù)，將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3與適宜的氧化劑如高碘化物(periodinane)、鉻酐吡啶復(fù)合物、重鉻酸吡啶鎓或二甲亞砜復(fù)合物如DMSO-(COCl)2(Swern條件)反應(yīng)，生成N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4。常規(guī)氧化技術(shù)例如包括Swern氧化法，合成(Synthesis),165(1981)；Dess Martin periodinane反應(yīng)，DessMartin，有機(jī)化學(xué)雜志(J.Org.Chem.)48,4155(1983)和Jones氧化法(參見美國專利5391705)；優(yōu)選Swern氧化法。例如，將約1.5當(dāng)量的草酰氯溶于適宜的無水有機(jī)溶劑如二氯甲烷中，然后冷卻至約-55℃至約-78℃。向該溶液中滴加約3至約8當(dāng)量二甲亞砜，將溫度保持在約-55℃或更低。將等當(dāng)量N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3溶于適量無水有機(jī)溶劑如二氯甲烷中，然后在攪拌下緩慢加入反應(yīng)液中。加料結(jié)束后，將反應(yīng)液于約-55℃至約-78℃的溫度下攪拌約30分鐘，加入過量適宜的有機(jī)堿如三乙胺或N-甲基嗎啉并將反應(yīng)液升溫至室溫。然后可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)如萃取、沉淀、結(jié)晶和色譜法將氧化產(chǎn)物N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4分離和純化。
在反應(yīng)方案A步驟d中，將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4與適宜的脫保護(hù)試劑反應(yīng)，得到N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺5。
例如，將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4與適宜的脫保護(hù)試劑如鹽酸的二氧六環(huán)或乙酸乙酯溶液、三氟乙酸或其二氯甲烷溶液反應(yīng)。氨基保護(hù)基的裂解條件記載于Greene，“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基(Protective Groups in Organic Chemistry)”，第7章，John Wiley&Sons,New York(1981)。例如，將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4溶于鹽酸/乙酸乙酯中，攪拌一至數(shù)小時(shí)。然后向反應(yīng)混合物中通入無水氯化氫氣體約10-15分鐘，將反應(yīng)混合物攪拌約20-40分鐘，然后濃縮。將殘余物溶于水并隨需要用碳酸氫鈉中和。然后可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的技術(shù)如萃取、沉淀、結(jié)晶和色譜法將脫保護(hù)的產(chǎn)物N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺5分離和純化。本領(lǐng)域技術(shù)人員可用本領(lǐng)域熟知的技術(shù)和方法制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺5的可藥用鹽。
制備終產(chǎn)物5所需的中間體9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽1可用改進(jìn)的Dakin-West反應(yīng)制得，在美國專利5391705和如下反應(yīng)方案B中說明了該反應(yīng)。該方法所用的試劑、原料和技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員易得的。
反應(yīng)方案B
在反應(yīng)方案B步驟a中，將δ-K-L-鳥氨酸6根據(jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)N-保護(hù)技術(shù)進(jìn)行Nα-保護(hù)，得到Nα-K-Nδ-芐氧羰基-鳥氨酸7，其中的K指如反應(yīng)方案A步驟a中所述的適宜保護(hù)基，優(yōu)選Cbz。
例如，將δ-Cbz-L-鳥氨酸6用苯甲酰氯和常規(guī)的Schotten-Baumann條件進(jìn)行Nα-保護(hù)。具體地講，將苯甲酰氯在醚類溶劑如乙醚中的溶液與氫氧化鈉一起，在約0.5-1小時(shí)內(nèi)加入到δ-Cbz-L-鳥氨酸6的氫氧化鈉溶液中，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在0℃至約5℃。然后將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢杓s4小時(shí)，用醚類溶劑如乙醚萃取并用濃鹽酸溶液酸化至約pH1。加入水并將該混合物放置約48小時(shí)。通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)收集和純化固體，得到Nα-K-Nδ-芐氧羰基-鳥氨酸7。
在反應(yīng)方案B步驟b中，將Nα-K-Nδ-芐氧羰基-鳥氨酸7環(huán)化得到2-苯基-[4-(3-K-氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮8。
例如，將Nα-K-Nδ-芐氧羰基-鳥氨酸7在適宜有機(jī)溶劑如二氯甲烷中的漿液與約0.1-1.0摩爾當(dāng)量的二環(huán)己基碳化二亞胺接觸。然后將反應(yīng)混合物攪拌約2-5小時(shí)，濾除形成的二環(huán)己基脲副產(chǎn)物沉淀并用適宜的有機(jī)溶劑如二氯甲烷洗滌。然后將濾液濃縮并用適宜的醚類溶劑如乙醚稀釋，如需要，可重復(fù)該過程。然后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)如沉淀和結(jié)晶將環(huán)化產(chǎn)物2-苯基-[4-(3-K-氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮8分離和純化。
在反應(yīng)方案B步驟c中，將2-苯基-[4-(3-K-氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮8根據(jù)常規(guī)的?；夹g(shù)?；玫较鄳?yīng)的結(jié)構(gòu)式9的O-酰基化合物。
例如，在約-10℃至約10℃及惰性氣氛、優(yōu)選氮?dú)庀?，將適宜的叔胺如三乙胺加入到2-苯基-[4-(3-K-氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮8在適宜有機(jī)溶劑如四氫呋喃或四氫呋喃/庚烷混合物的溶液中。向反應(yīng)混合物中緩慢加入α,α-二氟戊烯酰氯或相應(yīng)酸酐在適宜有機(jī)溶劑如庚烷中的溶液，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在約-10℃和10℃之間。約30至60分鐘后，將反應(yīng)混合物升溫至室溫并繼續(xù)攪拌約30分鐘。通過本領(lǐng)域公知的提取技術(shù)如過濾除去三乙胺鹽酸鹽，將濾液濃縮得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式9的O-?；衔?。
在反應(yīng)方案B步驟d中，將相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式9的O-?；衔锶我獾嘏c酰化催化劑反應(yīng)得到相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式10的C-?；衔?。
例如，將相應(yīng)的結(jié)構(gòu)式9的O-?；衔锶苡谶m宜的有機(jī)溶劑如四氫呋喃中并與酰化催化劑如二烷基氨基吡啶、優(yōu)選4-二甲氨基吡啶(DMAP)接觸。然后將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢杓s2-4小時(shí)得到結(jié)構(gòu)式10的C-?；衔?，該產(chǎn)物不經(jīng)分離或純化直接使用。
在反應(yīng)方案B步驟e中，將結(jié)構(gòu)式10的C-?；衔镉妹擊葎┟擊鹊玫絅δ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-氧代-4,4-二氟-1-壬烯11，所述脫羧劑例如是草酸、琥珀酸等，優(yōu)選草酸。
例如，將含有1-5摩爾當(dāng)量無水草酸在適宜有機(jī)溶劑如四氫呋喃中的溶液加入到含有結(jié)構(gòu)式10的C-?；衔锏姆磻?yīng)方案B步驟d的反應(yīng)混合物中，攪拌16-32小時(shí)。然后將反應(yīng)混合物濃縮并用適宜的酸如鹽酸處理，然后用乙酸乙酯萃取。分層，將有機(jī)層用適宜的堿如碳酸鈉、碳酸氫鈉或氫氧化鈉洗滌，隨需要，用鹽水洗滌，用適宜干燥劑如硫酸鎂干燥并濃縮。然后通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的技術(shù)如沉淀和結(jié)晶將脫羧產(chǎn)物Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-氧代-4,4-二氟-1-壬烯11分離和純化。
在反應(yīng)方案B步驟f中，將Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-氧代-4,4-二氟-1-壬烯11與適宜的還原劑接觸得到Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟-1-壬烯12。
正如本領(lǐng)域所熟知的，該還原反應(yīng)生成的5-羥基衍生物是在5-位是立體異構(gòu)體的混合物。
適宜的還原劑是本領(lǐng)域公知的，它包括但不限于三叔丁氧基氫化鋰鋁、硼氫化鉀、三仲丁基硼氫化鋰、硼氫化鋰、硼氫化鈉和三乙基硼氫化鋰，優(yōu)選硼氫化鈉。
例如，將Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-氧代-4,4-二氟-1-壬烯11與摩爾過量的適宜還原劑接觸。該反應(yīng)在適宜溶劑中進(jìn)行。適于氫化物還原的適宜溶劑是本領(lǐng)域公知的，例如甲苯、乙醚、甲基叔丁基醚、四氫呋喃(THF)和四氫呋喃/乙醇混合物。反應(yīng)在-78℃至約10℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行?？赏ㄟ^萃取將還原產(chǎn)物Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟-1-壬烯12從反應(yīng)區(qū)分離出來，然后通過本領(lǐng)域公知的方法如色譜和重結(jié)晶進(jìn)行純化。
在反應(yīng)方案B步驟g中，將Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟-1-壬烯12與適宜的烯烴還原劑和適宜的脫保護(hù)劑接觸得到9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷1。
適宜的烯烴還原劑包括二硼烷、二異烷基硼烷、硼烷/叔胺復(fù)合物和存在氫化催化劑下的氫。最優(yōu)選的烯烴還原劑是存在氫化催化劑下的氫。氫化催化劑的例子包括鉑、鈀、銠、釕和鎳。金屬本身以及這些金屬的某些可溶性配合物均具有催化活性，所述金屬可以是細(xì)微分散的固體或是吸附在惰性載體如碳或氧化鋁上。
適宜的脫保護(hù)劑包括反應(yīng)方案A步驟d中所述的那些。其它脫保護(hù)劑以及裂解保護(hù)基的條件是本領(lǐng)域公知的，并記載于Greene著的“有機(jī)化學(xué)中的保護(hù)基”，第7章，John Wiley&Sons,New York (1981)。
例如，將Nδ-9-K-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟-1-壬烯12溶于適宜的醇如異丙醇和適宜的酸如鹽酸中。然后將該溶液用烯烴還原劑如吸附在惰性碳載體上的氫氧化鈀處理并在氫氣(40-60磅/平方英寸)下振搖約20-30小時(shí)。將反應(yīng)混合物過濾并濃縮，得到Nα-苯甲?；?二氟醇鹽酸鹽。然后將Nα-苯甲?；?二氟醇鹽酸鹽與適宜的脫保護(hù)劑如鹽酸接觸并加熱回流。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，過濾，將濾液用乙醚萃取并分層。將水層用活性炭處理，加熱，過濾并濃縮，得到9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷1。本領(lǐng)域技術(shù)人員可用本領(lǐng)域公知的技術(shù)和方法制備的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷1的可藥用鹽。
制備結(jié)構(gòu)式9的O-?；衔锼璧闹虚g體α,α-二氟戊烯酰氯8a可按照美國專利5391705和反應(yīng)方案C中的描述制得。該方法所用的試劑、原料和技術(shù)是本領(lǐng)域技術(shù)人員易得的。
反應(yīng)方案C
在反應(yīng)方案C步驟a中，通過用本領(lǐng)域公知的技術(shù)和方法如堿水解將α,α-二氟戊烯酸乙酯8b(美國專利5391705,1995年2月21日授權(quán))水解制得2,2-二氟-4-戊烯酸8c。
例如，將約1.0-1.5摩爾當(dāng)量的適宜堿如氫氧化鋰于-10℃至約10℃下加入到α,α-二氟戊烯酸乙酯8b(也稱為2,2-二氟-4-戊烯酸乙酯，美國專利4848401,1989年7月11日授權(quán))的水溶液中。將反應(yīng)混合物升溫至室溫約2-4小時(shí)，然后在約40℃-約55℃繼續(xù)加熱2-4小時(shí)。從反應(yīng)混合物中除去乙醇和水，可通過萃取將2,2-二氟-4-戊烯酸8c從反應(yīng)區(qū)分離出來，并可通過本領(lǐng)域公知的方法純化。
在反應(yīng)方案C步驟b中，將2,2-二氟-4-戊烯酸8c與適宜的氯化劑接觸得到2,2-二氟-4-戊烯酰氯8a。
適宜的氯化劑是可將羥基轉(zhuǎn)變成氯而不會(huì)造成原料或產(chǎn)物降解的試劑。適宜的氯化劑包括三氯化磷、亞硫酰氯、草酰氯等。
例如，將2,2-二氟-4-戊烯酸8c與約1.0-1.5摩爾當(dāng)量的適宜氯化劑接觸。反應(yīng)在適宜溶劑如二氯甲烷、甲苯或二甲基甲酰胺中進(jìn)行。反應(yīng)在約20℃-約35℃下進(jìn)行，通常需要約4-24小時(shí)?？赏ㄟ^分餾將產(chǎn)物2,2-二氟-4-戊烯酰氯8a分離出來，并可通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)如色譜法進(jìn)行純化。
N-甲基化的α-氨基酸可按照反應(yīng)方案D和B.S.Pitzele等在醫(yī)學(xué)化學(xué)雜志(J.Med.Chem.),37,888-896(1994)(該文獻(xiàn)全文引入本文作為參考)中的描述制備。若無另有說明，所用取代基均如前所定義。試劑和原料是本領(lǐng)域技術(shù)人員易得的。
反應(yīng)方案D
在反應(yīng)方案D步驟a中，將結(jié)構(gòu)式13的α-氨基酸與適宜的保護(hù)基“K”按照與反應(yīng)方案A步驟b中所述方法相似的方式偶聯(lián)得到偶聯(lián)產(chǎn)物，式13中的X是適宜的α-羧基保護(hù)基如甲酯或固相樹脂，保護(hù)基“K”如反應(yīng)方案A步驟a中所定義。
在反應(yīng)方案D步驟b中，將偶聯(lián)產(chǎn)物在本領(lǐng)域公知的條件下脫保護(hù)或從固相上裂解下來得到結(jié)構(gòu)式14的酸。例如，當(dāng)結(jié)構(gòu)式13中的X是甲基或乙基時(shí)，將化合物溶于適宜的有機(jī)溶劑如乙醇中并用約等體積的水處理。攪拌下，向該溶液中加入1-2當(dāng)量的氫氧化鋰并將反應(yīng)液攪拌1-6小時(shí)。然后通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)將形成的酸分離和純化。例如，減壓蒸除有機(jī)溶劑并將剩余的含水溶液用稀鹽酸酸化。然后將水相用適宜的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯萃取，將合并的有機(jī)萃取液用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。殘余物可用適宜的洗脫劑如甲醇/氯仿通過閃式硅膠色譜純化，得到結(jié)構(gòu)式14的酸。
在反應(yīng)方案D步驟c中，將酸14 N-甲基化得到結(jié)構(gòu)式15的N-保護(hù)N-甲基化的化合物。例如，將酸14溶于適宜的有機(jī)溶劑如四氫呋喃中，冷卻至約0℃并用過量碘甲烷處理。然后向溶液中加入1-3當(dāng)量氫化鈉，并將該溶液于0℃攪拌約10分鐘，然后升溫至室溫?cái)嚢?4-48小時(shí)。然后通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)如萃取的方法將產(chǎn)物分離。例如，加入稀鹽酸水溶液并將反應(yīng)液用適宜的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯萃取。合并有機(jī)萃取液，用5％硫代硫酸鈉、鹽水洗滌，用無水硫酸鎂干燥，通過硅膠墊過濾并減壓濃縮得到結(jié)構(gòu)式15的N-保護(hù)N-甲基化的化合物。
或者，結(jié)構(gòu)式15的N-保護(hù)N-甲基化的化合物可以按照反應(yīng)方案D步驟d和e中描述的方法從結(jié)構(gòu)式14的酸制備。
在反應(yīng)方案D步驟d中，將酸14環(huán)化得到結(jié)構(gòu)式14a的噁唑烷。例如，將酸14溶于適宜的有機(jī)溶劑如苯中，并用過量的多聚甲醛處理。向其中加入約0.2-0.4當(dāng)量對(duì)甲苯磺酸并將反應(yīng)液加熱回流約23小時(shí)，用Dean-Stark分水器連續(xù)除水。然后將反應(yīng)液冷卻至室溫并通過本領(lǐng)域公知的技術(shù)將產(chǎn)物分離和純化。例如，將冷卻的反應(yīng)液減壓濃縮，將殘余物加入適宜的有機(jī)溶劑如乙酸乙酯中，用飽和碳酸氫鈉洗滌，將有機(jī)相用無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓濃縮。然后將殘余物用適宜的洗脫劑如乙酸乙酯/己烷通過閃式硅膠色譜純化得到噁唑烷14a。
在反應(yīng)方案D步驟e中，將噁唑烷14a在本領(lǐng)域公知的條件下還原得到結(jié)構(gòu)式15的N-保護(hù)N-甲基化的化合物。例如，將噁唑烷14a溶于適宜的有機(jī)溶劑如氯仿中并用過量三氟乙酸處理。室溫?cái)嚢柘孪蛟撊芤褐屑尤脒^量的三乙基甲硅烷。將反應(yīng)液攪拌1-7天，然后減壓濃縮得到結(jié)構(gòu)式15的N-保護(hù)N-甲基化的化合物。
以下實(shí)施例代表反應(yīng)方案A-D所述的一般合成方法。應(yīng)當(dāng)理解，這些實(shí)施例僅僅是說明性的，并非想以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
本文所用的下列術(shù)語的含義如下“g”指克；“mmol”指毫摩爾；“mL”指毫升；“bp”指沸點(diǎn)；“mp”指熔點(diǎn)；“℃”指攝氏度；“mm Hg”指毫米汞柱；“μL”指微升；“μg”指微克；“μM”指微摩爾’“eq”指摩爾當(dāng)量；“conc”指濃的；“sat”指飽和的。實(shí)施例12,2-二氟-4-戊烯酸8c的制備反應(yīng)方案C步驟a0-5℃下，于5分鐘內(nèi)向α,α-二氟戊烯酸乙酯8b(80g,0.49mmol，美國專利4847401,1989年7月11日授權(quán))的水(80mL)溶液中加入氫氧化鋰(20.9g,0.5mmol)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫3小時(shí)，然后于45-50℃加熱約3小時(shí)。從反應(yīng)混合物中除去乙醇和水(60托，45℃)。將得到的橙色油狀物干燥(1托，室溫)2小時(shí)得到油狀固體。將該油狀固體用水(75mL)稀釋并用濃鹽酸酸化至pH為1。將反應(yīng)混合物用乙醚萃取(3×150mL)。向水層加入濃鹽酸至pH為1，將水層再次用乙醚萃取(3×100mL)。將合并的有機(jī)層干燥(硫酸鎂)，濃縮成油并蒸餾得到58.8g,432mmol油狀標(biāo)題化合物8c，收率88％。
19F NMR(CDCl3)δ-106.8(t)(CFCl3作對(duì)比)；13C NMR(CDCl3)δ168.3(t,CO2H),126.4(s,C=C),122.3(s,C=C),115.0(t,CF2),38.9(t,CH2)；1H NMR(CDCl3)δ 2.88(m,CH2,2H),5.28(m,1H),5.32(s,1H),5.76(m,1H),8.74(s,1H).
實(shí)施例22,2-二氟-4-戊烯酰氯8a的制備反應(yīng)方案C步驟b:室溫下向化合物8c(25g,183.7mmol)和二甲基甲酰胺(3滴)中加入草酰氯(17.6mL,201.8mmol)。觀察到氣體溢出約2小時(shí)。5小時(shí)后，向反應(yīng)混合物中再次加入0.08當(dāng)量(1.2mL)草酰氯并攪拌18小時(shí)。分餾(88-91℃)得到24.4g,158mmol油狀標(biāo)題化合物8a，收率85％。19F NMR(CDCl3)δ-101.9(t)；13C NMR(CDCl3)δ167.3(t,CO2H),125.5(s,C=C),123.1(s,C=C),115.6(t,CF2),38.3(t,CH2)；1H NMR(CDCl3)δ2.90(m,2H),5.33(d,1H),5.36(s,1H),5.74(m,2H).
實(shí)施例3Nα-苯甲?；?Nδ-芐氧羰基-鳥氨酸7(K=Cbz)的制備反應(yīng)方案B步驟a:向δ-Cbz-L-鳥氨酸6(50g,187.8mmol,Advanced Chemtech,Louisville,KY 40228-1075)在1N氫氧化鈉(250mL,0.25mol)中的溶液中于45分鐘內(nèi)同時(shí)加入苯甲酰氯(22mL,189.5mmol)的乙醚(200mL)溶液和1N氫氧化鈉(313mL,0.31mol)，同時(shí)保持反應(yīng)液溫度在0-5℃之間。將反應(yīng)混合物室溫?cái)嚢?小時(shí)，用乙醚萃取(3×100mL)并分出有機(jī)相。將水相用乙醚洗滌(3×100mL)并用濃鹽酸酸化pH為1，得到白色固體。再次加入水(450mL)并將該混合物放置48小時(shí)。收集白色固體，用水(200mL)和乙醚(200mL)洗滌并于109℃(100托)干燥過夜，得到64.04g、173.9mmol白色固體狀標(biāo)題化合物7，收率92％。MS-FAB m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)371(M++1,25％),393(M++Na,100％)；1H NMR(CDCl3)δ7.9(m,2H,芳?；?,7.7(d,J=8 Hz,1H,NH),7.5-7.2(m,8H,芳酰基,芳基),6.3(m,1H,NH),5.1(s,2H,芐基),4.7(m,1H,CH),3.20(q,2H,NCH2),2.1-1.8,1.8-1.6(2m,4H,CH2-CH2).
實(shí)施例42-苯基-[4-(3-芐氧羰基氨基丙基)]-5-(4H)-噁唑啉酮8(K=Cbz)的制備反應(yīng)方案B步驟b向Nα-苯甲酰胺7(25g,676.5mmol)的二氯甲烷(250mL)漿液中分四次加入N,N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(14.63g,70.9mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌3小時(shí)，觀察到放熱(5-10℃)。濾出二環(huán)己基脲沉淀并用二氯甲烷(100mL)洗滌。濃縮濾液得到黃色油，將其用乙醚(200mL)稀釋，過濾并濃縮濾液得到淡黃色油。將該油用乙醚(150mL)稀釋并濾除剩余的二環(huán)己基脲。將濾液在氬氣下結(jié)晶過夜。收集并干燥(1托)結(jié)晶出的產(chǎn)物得到20.86g,59.2mmol白色固體狀標(biāo)題化合物8，收率88％。MS(CI,CH4)m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)353(M++1,100％)。C20H20N2O4(352.30)元素分析，計(jì)算值C,68.17；H,5.72；N,7.95；實(shí)測(cè)值C,68.02；H,5.77；N,7.93。
1H NMR(CDCl3)δ8.0(d,J=8 Hz,2H,aroyl),7.65-7.2(m,8H,芳?；?芳基),5.1(s(帶有肩峰),3H,芐基,NH),4.4(m,1H,CH),3.3(m,2H,NCH2),2.2-2.0(m,1H),1.95-1.6(m,3H,CH2-CH2).
實(shí)施例5N8-9-芐氧羰基氨基-6-苯甲酰氨基-5-氧代-4,4-二氟-1-壬烯11(K=Cbz)的制備反應(yīng)方案B步驟c、d和e0℃及氮?dú)庀拢虻s內(nèi)酯8(33.6g,95.2mmol)在四氫呋喃(80mL)和庚烷(70mL)的溶液中加入三乙胺(16mL,115mmol)。向反應(yīng)混合物中緩慢加入2,2-二氟-4-戊烯酰氯8a(19.2g,124.2mmol)的庚烷(40mL)溶液，同時(shí)保持反應(yīng)溫度在0-3℃之間。45分鐘后，將反應(yīng)混合物升溫至室溫并繼續(xù)攪拌30分鐘。取出少量樣品，干燥10分鐘(5托，室溫)并通過HPLC、1H NMR、19F NMR分析檢測(cè)氮雜內(nèi)酯的O-?；?。過濾除去三乙胺·HCl，濃縮濾液得到淡橙色-黃色油。將油的樣品進(jìn)行HPLC、1H NMR、19F NMR分析以證實(shí)O-?；虚g體9的生成。將所述油溶于四氫呋喃(60mL)，用4-二甲氨基吡啶(1.74g,14.2mmol)處理并室溫?cái)嚢?小時(shí)。取出少量樣品，干燥15分鐘(5托，室溫)并進(jìn)行HPLC、1H NMR、19F NMR分析，以證實(shí)O-?；虚g體9向C-?；虚g體10的轉(zhuǎn)變。向反應(yīng)混合物中加入無水草酸(25.76g,286.1mmol)的四氫呋喃(60mL)溶液并攪拌24小時(shí)。取出少量樣品，過濾并干燥(1托，室溫)，進(jìn)行1H NMR和19F NMR分析。將反應(yīng)混合物濃縮至1/4體積并用10％鹽酸水溶液(200mL)處理，用乙酸乙酯(150mL)萃取并分液。將有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液(250mL)、鹽水(250mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)并濃縮得到橙色油。將得到的油用4∶1己烷/乙酸乙酯稀釋并放置過夜，得到白色固體。收集并干燥(1托，室溫)產(chǎn)物，得到21.7g、48.8mmol淡黃色固體狀標(biāo)題化合物11，收率51％。濃縮濾液得到油。將該油粗品預(yù)吸附在硅膠上(2g SiO2/1g油)并用含有6英寸高二氧化硅的10cm O.D.柱通過閃式色譜進(jìn)行純化，用3∶2己烷/乙酸乙酯洗脫，得到15.4g、34.65mmol淡黃色固體狀標(biāo)題化合物11，收率36％。標(biāo)題化合物11的總產(chǎn)量為37.1g(87％)。MS(CI,CH4)m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)445(M++1,100％)。C24H26N2O4F2(444.49)元素分析計(jì)算值C,64.85；H,5.90；N,6.30；實(shí)測(cè)值C,64.74；H,5.86；N,6.20；19F NMR(CDCl3)δ-109.3(dt,J=17,270Hz),-103.6(dt,J=17,270Hz),1H NMR(CDCl3)δ7.8(m,2H,芳酰基),7.6-7.4(m,3H,芳?；?,7.3(s,5H,芳基),7.1(m,1H,NH),5.9-5.1(m,1H,CH=C),5.35-5.15(m,2H,C=CH2),5.1(s,2H,芐基),4.95(m,1H,CH),3.3(m,2H,NCH2),2.9(m,2H,CF2CH2),2.1,1.7(2m,4H,CH2-CH2).
實(shí)施例6N-9-芐氧羰基氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟-1-壬烯12(K=Cbz)的制備反應(yīng)方案B步驟f0℃下，向二氟代酮11(38.0g,85.5mmol)的乙醇(500mL)和四氫呋喃(20mL)溶液中加入NaBH4(1.66g,43.88mmol)。升溫至室溫1小時(shí)后析出沉淀。將該非均相的反應(yīng)混合物用四氫呋喃(55mL)稀釋，得到基本均相的溶液并將其攪拌0.5小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮至固體，用10％鹽酸溶液(800mL)處理并用乙酸乙酯(400mL)萃取。分出有機(jī)相，干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮，以定量收率得到38.4g、86mmol灰白色固體狀標(biāo)題化合物12(4/1非對(duì)映異構(gòu)體混合物)。MS(CI,CH4)m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)447(M++1,50％)。C24H28N2O4F2(446.51)元素分析計(jì)算值C,64.56；H,6.32；N,6.27；實(shí)測(cè)值C,64.75；H,6.25；N,6.17。19F NMR(CDCl3)δ(主要的非對(duì)映體)-106.9(ddt),-110.5(ddt),(次要的非對(duì)映體)-109.1(m)；1H NMR(CDCl3)δ7.8(m,2H,芳酰基),7.6-7.4(m,8H,芳?；?芳基),6.9(m,1H,NH),5.9-5.7(m,1H,CH=C),5.3(m,2H,CH2=C),5.1(s,2H,芐基),4.4(m,1H,CHN),4.0,3.9(2m,1H,CHCF2),3.2(m,2H,NCH2),2.9-2.6(m,2H,CHF2CH2),1.8(m,2H),1.6(m,2H,CH2).
實(shí)施例79-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷鹽酸鹽的制備反應(yīng)方案B步驟g(還原和脫保護(hù))將二氟代醇12(38g,85.1mmol)溶于異丙醇(800mL)和1N HCl(200mL)。將該溶液用10％Pd(OH)2/C(3.81g)處理，并在氫氣(45磅/平方英寸)下振搖約28小時(shí)。將反應(yīng)混合物用硅藻土過濾并濃縮(1托，室溫)，以定量收率得到29.9g、85.4mmol灰白色固體狀標(biāo)題化合物。MS(CI,CH4)m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)315(M++1,100％)。C16H24N2O2F2(350.84)元素分析計(jì)算值C,54.78；H,7.18；N,7.98；實(shí)測(cè)值C,54.47；H,7.28；N,7.83；19F NMR(CD3OD)δ(主要的非對(duì)映體)-105.7(ddt)and-107.9(m),(次要的非對(duì)映體)-107.7(m)and-110.0(m)；1H NMR(CD3OD)δ7.9(m,2H,芳酰基),7.5(m,3H,芳?；?，4.4(m,1H,CHN),3.9(dt,J=17Hz,5Hz,1H,CHCF2),3.0(m,2H,NCH2),2.2-1.4(2m,8H,4CH2),0.95(t,J=7Hz,3H).
實(shí)施例89,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽1的制備反應(yīng)方案B步驟g(脫保護(hù))將9-氨基-6-苯甲酰氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷鹽酸鹽(26.85g,76.5mmol)在濃鹽酸(250mL)中的溶液加熱回流19小時(shí)(110℃)。反應(yīng)混合物冷卻至室溫的過程中有苯甲酸晶體形成。濾除該晶體。將濾液用乙醚(250mL)萃取并分液。將水層用活性炭處理，加熱(80℃)，用硅藻土過濾，濃縮并干燥，以定量收率得到21.5g、75.9mmol褐色固體狀標(biāo)題化合物1。MS(CI,CH4)m/z(％相對(duì)強(qiáng)度)211(M++143％)；19F NMR(CD3OD)δ(主要的非對(duì)映體)-106.4(dt)and-110.6(m),(次要的非對(duì)映體)107.6(m)and-112.6(m),1H NMR(D2O)δ4.0,3.9(2t,J=4Hz,1H,CHCF2),3.5(m,1H,CHN),2.9(m,2H,NCH2),2.0-1.5(m,6H,3 CH2),1.3(m,2H,CH2),0.8(t,J=7 Hz,3H).
實(shí)施例9N-9-[1-[3-[二[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷2(K1=Boc)的制備反應(yīng)方案A步驟a0℃下，將三乙胺(33mL,2當(dāng)量)加入到二胺二鹽酸鹽1(34.4g,0.122mmol)的二甲基甲酰胺(250mL)溶液中。5分鐘后，于0℃下向反應(yīng)混合物中同時(shí)加入二-Boc脒基吡唑(36.93g,0.119mmol)的二甲基甲酰胺(90mL)溶液和三乙胺(17mL,1當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物升溫至室溫并攪拌過夜。向反應(yīng)混合物中加入檸檬酸水溶液(200mL)，將混合物用二氯甲烷萃取(2×400mL)。將合并的有機(jī)層用鹽水(500mL)和水(200mL)洗滌，干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮得到油。經(jīng)閃式色譜純化(硅膠；7∶1氯仿甲醇)得到45.5g白色泡沫狀標(biāo)題化合物2，收率83％。
19F NMR(CDCl3)δ(主要的非對(duì)映體)-105.7(m)and-111.2(m)；1H NMR(CDCl3)δ11.4(m,1H,NHBoc),8.3(m,1H,NH),3.6(t,J=5 Hz,0.5H,CHCF2),3.4(m,2.5H,CHCF2,NCH2),2.9(m,1H,NCH),2.0-1.0(m,26H,2Boc,4CH2),0.9,0.8(2t,J=7Hz,3H(4∶1比))實(shí)施例10N-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺3(K1=Boc,K2=Boc,)的制備反應(yīng)方案A步驟b:0℃下，將N,N’-二環(huán)己基碳化二亞胺(20.76g,100.6mmol)加入到N-Boc-N-甲基-D-Phe-Pro-OH(37.89g,100.6mmol)和羥基苯并三唑(13.59g,100.6mmol)的二氯甲烷(800mL)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)。向反應(yīng)混合物中加入氨基醇2(45.5g,100.6mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液和N-甲基嗎啉(11.1mL,100.6mmol)并攪拌過夜。濾除二環(huán)己基脲沉淀并將濾液濃縮得到黃色油。將該油溶于乙酸乙酯(2×250mL)，用10％檸檬酸水溶液(2×250mL)、鹽水(250mL)和水(150mL)洗滌。分出有機(jī)層，干燥(硫酸鈉)，過濾并濃縮，得到88g淡黃色泡沫狀標(biāo)題產(chǎn)物3的粗品，收率超過100％。該標(biāo)題產(chǎn)物3的粗品可不經(jīng)純化直接用于下一步反應(yīng)。19F NMR(CDCl3)δ(主要的非對(duì)映體)-107.9(m)and-111.0(m)；1H NMR(CD3OD)δ7.3(m,5H,C6H5),5.1(m,1H,CH-phe),4.5-4.0(m,2H,CH-pro, CH-OH),3.9-3.3,3.2(2m,10H,芐基,CH2-pro,CH2-N-gua,CH3N,CH-N),2.2-1.5(m,12H,6CH2),1.5-1.2(3br s,27H,3 Boc),0.9(dt,3H,J=2,7Hz,CH3).
實(shí)施例11N-[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]-N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[[二[[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺4(K1=Boc,K2=Boc,)的制備反應(yīng)方案A步驟c:-55℃下，將二甲亞砜(42.5mL,0.598mol)的二氯甲烷(700mL)溶液加入草酰氯(26.1mL,0.299mol)的二氯甲烷(350mL)溶液中。將反應(yīng)混合物攪拌45分鐘，然后在30分鐘內(nèi)加入醇3(80.84g,0.100mol)的二氯甲烷(350mL)溶液。將反應(yīng)混合物繼續(xù)攪拌15分鐘，保持溫度在-50℃和-60℃之間，然后于-55℃下在30分鐘內(nèi)加入二苯基乙胺(157mL,0.898mmol)。繼續(xù)在-55℃攪拌1小時(shí)，反應(yīng)混合物呈均勻的紅色。將10％檸檬酸水溶液(250mL)于0℃緩慢加入反應(yīng)混合物中。將有機(jī)層萃取，用鹽水(200mL)洗滌，干燥(硫酸鎂)，過濾并濃縮得到約80g油狀泡沫。將該泡沫溶于最少量的洗脫劑中，并通過閃式色譜純化(2×40g)(5″× 5″Si2O柱；3∶3∶2庚烷/二氯甲烷/乙酸乙酯)，得到42.9g標(biāo)題化合物4，收率53％。
19F NMR(CDCl3)δ(主要的非對(duì)映體)-104.5(m)and-109.7(m)；1H NMR(CDCl3)δ11.50(d,J=5Hz,1H,NH-Boc),9.40(d,J=6Hz,1H,NH),7.6,7.2(2d,J=5Hz,NH-CHCO(2異構(gòu)體)),5.0,4.5(2m,3H,CH(3)),3.6-2.7(m,9H,2 CH2N,芐基,CH3N),2.3-1.7(m,8H,4 CH2),1.7-1.1(m,31H,3Boc,2 CH2),0.95(t,J=7Hz,CH3).
實(shí)施例12N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺二鹽酸鹽一水合物5(MDL 75579DA)的制備反應(yīng)方案A步驟d將酮4(21.6g,0.267mmol)溶于2N HCl/乙酸乙酯(470mL)，塞好燒瓶并在室溫下攪拌60小時(shí)。反應(yīng)混合物為淡黃色并且當(dāng)打開燒瓶時(shí)有壓力。向反應(yīng)混合物中通入無水氯化氫10分鐘，塞好燒瓶并將混合物攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物濃縮得到黃色泡沫，將其用水(100mL)和二氯甲烷(75mL)稀釋并劇烈攪拌20分鐘。除去二氯甲烷層并再次用二氯甲烷(75mL)洗滌。將水相用硅藻土過濾并冷凍干燥，得到15.2g白色固體狀標(biāo)題化合物5(MDL 75579DA)，收率98％。通過使用δ填充柱(Delta Pack Column(2.1mm×150mm)的LC/MS,80℃。
19F NMR(D2O)δ(主要的非對(duì)映體)-112.4(m),(次要的非對(duì)映體)-106.2(m)；1H NMR(D2O)δ7.4,7.3(2m,5H,C6H5),4.9(m,0.2H,CHCOCF2),4.1(dd,J=13Hz,3Hz,0.8H,CHC(OH)2-CF2),4.55(dd,J=9Hz,5Hz,1H,CH-phe),4.35(m,1H,CH-pro),3.5,2.6(2m,2H,CH2-N-pro),3.25(m,2H,CH2-N),2.70(s,3H,CH3N),2.2-1.4(m,12H,6CH2),0.95(2t,3H,J=7Hz,CH3).
實(shí)施例13用電子噴霧解離通過LC/MS測(cè)定MDL 75579DA樣品的純度使用電子噴霧解離(ESI)通過液相色譜/質(zhì)譜(LC/MS)對(duì)按照本發(fā)明方法制備的MDL 75579DA進(jìn)行分析。A．HPLC將MDL 75579DA樣品以大約1mg/mL的濃度溶于初始流動(dòng)相。為了減少因與水接觸而形成的水合物的量，在即將進(jìn)行分析之前制備樣品。將該溶液的50μL等分試樣用WISP 715自動(dòng)進(jìn)樣器(WatersChromatography)注射到加熱至表觀溫度為80℃的Waters Delta Pak窄孔經(jīng)C18(2.1mm×15cm)柱中進(jìn)行分析。
制備流動(dòng)相，流動(dòng)相A為乙腈/水(5/95)，其中含有約0.05％的三氟乙酸(TFA)，流動(dòng)相B由乙腈/水(95/5)組成，其中含有約0.05％的TFA。用Waters 625 HPLC系統(tǒng)以0.2mL/分鐘的流速建立梯度洗脫。以12-57％B的線性梯度洗脫45分鐘。用裝有低死體積微流量池的Waters 486可調(diào)波長(zhǎng)檢測(cè)器(0.5 AUFS)在214nm聯(lián)機(jī)監(jiān)測(cè)LV吸收。B．電子噴霧質(zhì)譜將來自HPLC柱的整個(gè)流出液(0.2mL/分鐘)引入到Finnigan MATTSQ 700三倍四極質(zhì)譜儀的ESI探針中。將保持在5.5kV的ESI注射針頭牢牢固定在距離質(zhì)譜儀的不銹鋼毛細(xì)管小孔2cm處。該裝置(其內(nèi)徑為0.5mm)將大氣壓下的ESI噴霧和高真空條件下的質(zhì)譜儀分離開。為了促進(jìn)去溶劑化過程，在分析過程中將毛細(xì)管保持在200℃。通過通入與ESI針頭同軸的氮?dú)獗Ｗo(hù)氣(70磅/平方英寸)進(jìn)一步完成去溶劑化。同時(shí)，使用流量為10mL/分鐘的輔助氣體(N2)。用Q3作為掃描四極，在2秒鐘內(nèi)覆蓋200-1500的m/z范圍，由此得到質(zhì)譜。轉(zhuǎn)換倍增電極和電子倍增器的電壓分別為-15kV和1.4kV。用環(huán)形注射器以0.2mL/分鐘的流速用合成肽的混合物完成調(diào)諧和校準(zhǔn)。C．純度的評(píng)估將MDL 75579DA的兩種主要非對(duì)映異構(gòu)體的峰面積相加并除以在整個(gè)分析過程中積分的總面積，其中不包括不保留的物質(zhì)(無效峰)。以該比例(以百分比計(jì))表示純度。所有的純度測(cè)定均用在UV吸收曲線中觀察到的峰面積進(jìn)行。用CALS數(shù)據(jù)系統(tǒng)(Beckman Intruments,Inc.)提供的Peak Pro積分軟件對(duì)峰進(jìn)行積分。
表2列出了用本發(fā)明的直接脒化方法制備的三個(gè)樣品的純度測(cè)定結(jié)果。
表2用本發(fā)明的方法制備的三批MDL 75579DA的純度
通過使用包括將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽一步脒化的本發(fā)明的方法，使現(xiàn)有技術(shù)中已知的Dakin-West路線(美國專利5391705)減少了兩步化學(xué)步驟和一步色譜步驟。更令人驚奇的是，從N-9-[1-[3-[二[(1,1-二甲基乙氧基)羰基]氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷中間體開始的總收率從使用現(xiàn)有技術(shù)中已知的Dakin-West方法的約15％增加到使用本發(fā)明方法的約43％，并同時(shí)得到了純度約為98％的高純度的終產(chǎn)物。
權(quán)利要求
1．制備N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽的方法，該方法包括如下步驟(a)將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜的脒化試劑反應(yīng)，得到N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷，其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基；(b)將N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷與N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?L-脯氨酰胺偶聯(lián)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二[(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺，其中K2是N-保護(hù)基；(c)將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二[(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-羥基己基]-L-脯氨酰胺與適宜的氧化劑反應(yīng)，得到N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨酰基-N-[1-[3-[[二[(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺；和(d)用適宜的脫保護(hù)試劑將N-K2-保護(hù)的-N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[[二[(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺脫保護(hù)，得到N-甲基-D-苯丙氨?；?N-[1-[3-[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]-3,3-二氟-2-氧代己基]-L-脯氨酰胺或其可藥用鹽。
2．權(quán)利要求1的方法，其中，對(duì)于每1.0摩爾當(dāng)量的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽，脒化試劑的加入比例為約0.9-約1.2摩爾當(dāng)量。
3．權(quán)利要求1的方法，其中，對(duì)于每1.0摩爾當(dāng)量的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽，脒化試劑的加入比例為約0.95-約1.05摩爾當(dāng)量。
4．權(quán)利要求1的方法，其中的K1是叔丁氧羰基。
5．權(quán)利要求4的方法，其中的K2是叔丁氧羰基。
6．權(quán)利要求1的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-30℃至約20℃的溫度下進(jìn)行。
7．權(quán)利要求1的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-15℃至約5℃的溫度下進(jìn)行。
8．權(quán)利要求2的方法，其中適宜的脒化試劑是二-Boc-脒基吡唑或二-Boc-S-甲基異硫脲。
9．權(quán)利要求3的方法，其中適宜的脒化試劑是二-Boc-脒基吡唑或二-Boc-S-甲基異硫脲。
10．權(quán)利要求8的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-15℃至約5℃的溫度下進(jìn)行。
11．權(quán)利要求10的方法，其中適宜的氧化劑是Swern條件下的二甲亞砜復(fù)合物。
12．制備N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷的方法，包括將9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜的脒化試劑反應(yīng)，得到N-9-[1-[3-[二(K1-保護(hù)的)氨基]亞甲基]氨基]-6-氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷，其中K1是適于保護(hù)脒基上氮的N-保護(hù)基。
13．權(quán)利要求12的方法，其中，對(duì)于每1.0摩爾當(dāng)量的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽，脒化試劑的加入比例為約0.9-約1.2摩爾當(dāng)量。
14．權(quán)利要求12的方法，其中，對(duì)于每1.0摩爾當(dāng)量的9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽，脒化試劑的加入比例為約0.95-約1.05摩爾當(dāng)量。
15．權(quán)利要求12的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-30℃至約20℃的溫度下進(jìn)行。
16．權(quán)利要求12的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷或其可藥用鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-15℃至約5℃的溫度下進(jìn)行。
17．權(quán)利要求13的方法，其中適宜的脒化試劑是二-Boc-脒基吡唑或二-Boc-S-甲基異硫脲。
18．權(quán)利要求14的方法，其中適宜的脒化試劑是二-Boc-脒基吡唑或二-Boc-S-甲基異硫脲。
19．權(quán)利要求17的方法，其中9,6-二氨基-5-羥基-4,4-二氟壬烷二鹽酸鹽與適宜脒化試劑的反應(yīng)在約-15℃至約5℃的溫度下進(jìn)行。
20．權(quán)利要求12的方法，其中的K1是叔丁氧羰基。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過直接脒化Dakin－West中間體來制備N－甲基－D－苯丙氨?；璑－[1－[3－[(氨基亞氨基甲基)氨基]丙基]－3,3－二氟－2－氧代己基]－L－脯氨酰胺或其可藥用鹽以及關(guān)鍵中間體的新方法。
文檔編號(hào)C07C277/00GK1214691SQ97193317
公開日1999年4月21日 申請(qǐng)日期1997年2月25日 優(yōu)先權(quán)日1996年3月26日
發(fā)明者D·E·魯?shù)纤範(fàn)?申請(qǐng)人:赫徹斯特馬里恩魯斯公司