專利名稱：喹唑啉酮衍生物及其制備和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一類喹唑啉酮衍生物及其制備和應用，應用是指作為蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(簡稱PTP1B)抑制劑，屬于醫(yī)藥及其制備和應用的技術領域。

背景技術：
糖尿病是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床綜合癥，是一種慢性疾病，當胰腺產生不了足夠的胰島素或者人體無法有效的利用所產生的胰島素時發(fā)生。糖尿病及其并發(fā)癥已成為嚴重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問題。
目前一般將糖尿病分為兩類，I型糖尿病(胰島素依賴型糖尿病，IDDM)與II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病，NIDDM)。世界各地的糖尿病患者中90％屬II型糖尿病，II型糖尿病，過去稱為非胰島素依賴型糖尿病或成人發(fā)病，是人體無法有效利用胰島素的結果。世界衛(wèi)生組織(WHO)估計，全世界目前約有1.8億人患有糖尿病，這一數(shù)字很可能到2030年將翻番一倍以上。
肥胖癥是指體內脂肪堆積過多和(或)分布異常，是一種多因素的慢性代謝性疾病，與許多慢性病如高血壓、脂質異常、糖尿病、高脂血癥、呼吸睡眠暫停等密切相關。肥胖癥的病因和發(fā)病機制雖然還不是十分清楚，但胰島素抵抗是其最主要的發(fā)病機制已得到廣泛認同。
糖尿病和肥胖癥均是嚴重危害人們身體健康的內分泌紊亂性代謝類疾病，常伴隨著胰島素敏感組織中的胰島素敏感性降低即胰島素抵抗，原因是胰島素信號在傳導中信號減弱或紊亂，從而引起肌肉、肝臟、脂肪組織中的糖脂代謝平衡失調。
胰島素信號通路中一個重要的調控機制是對胰島素受體(insulinreceptor，IR)、胰島素受體底物(insulin receptor substrate，IRS)以及其它下游分子的蛋白質酪氨酸磷酸化進行可逆調節(jié)(White MF，KahnCR.J Biol Chem 1996，269，1)。蛋白酪氨酸磷酸化是一種重要的調節(jié)信號轉導的翻譯后修飾方式。在體內酪氨酸的磷酸化是可逆的動態(tài)過程，其磷酸化和去磷酸化分別由蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosinekinases，PTKs)和蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatases，PTPs)來調節(jié)。II型糖尿病的特征是胰島素敏感組織如骨骼肌、肝、脂肪組織對胰島素作用的抵抗，胰島素信號在其傳導通路中減弱或阻斷是其直接因素。胰島素通過與其IR胞外亞單位結合而激活受體胞內亞單位內在的PTKs活性，導致調節(jié)結構域中關鍵的酪氨酸殘基自磷酸化，從而激活I亞基的PTKs活性，然后含有SH2結構域的接頭蛋白如IRS被招募到IR的SH2結合位點，隨后PI3K被激活，接著下游糖代謝通路中的PKB、GLUT4進一步被激活，體內的糖脂代謝被啟動。PTPs作用與該通路的多個環(huán)節(jié)，如將自身磷酸化活化的IR去磷酸化，從而降低受體激酶的活性，或將胰島素受體底物IRS-1、IRS-2、Shc等中的蛋白酪氨酸殘基去磷酸化，從而負調控胰島素信號通路。特定PTPs和胰島素信號通路中PTKs間酶活性的不平衡可能是引起II型糖尿病胰島素抵抗的原因。因此，通過尋找選擇性作用于該通路中PTPs的抑制劑抑制其活性，加強和延長胰島素信號，成為越來越受重視的治療II型糖尿病的新途徑。
蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B)是最早被純化和確定生物學特性的蛋白酪氨酸磷酸酯酶，全長約50kDa，在C術端有一段可被切割的35個氨基酸的疏水片段，該片段負責將PTP1B定位在內質網上，然后與受體型激酶IR、EGFR(epidermal growth factor receptor)和PDGFR(platelet-derived growthfactor receptor)相互作用，使其去磷酸化(Boute N，et al.Science 2002，295(5560)，1708)。PTP1B在多種組織中均有表達，特別是在胰島素的靶組織如肝臟、肌肉、脂肪等。最近人們發(fā)現(xiàn)PTP1B可以通過對IR、IRS的脫磷酸化作用而下調胰島素信號(Kenner KA，et al.J BiolChem 1996，271，19810)，通過抑制PTP1B的活性，有助于提高外周組織對胰島素的敏感性；此外，PTP1B還可使瘦素受體相關激酶JAK2去磷酸化失活，不能對瘦素產生應答，從而引起瘦素抵抗(ZabolotnyJM，et al.Dev Cell 2002，2，489)，因此PTP1B抑制劑在糖尿病和肥胖癥的治療中有著廣闊的前景。
動物試驗表明，PTP1B缺失的老鼠由于增加或延長了在肌肉與肝臟組織中IR的磷酸化水平，而使其對胰島素的敏感性增強，明顯降低體內甘油三酯的水平(Elchebly M，et al.Science 1999，283，1544；Klaman LD，et al.Mol Cell Biol 2000，20，5479)；同時相關的研究表明PTP1B缺失的老鼠由于對瘦素敏感性的增強，能量消耗增加，所以對高脂食物引起的肥胖有著良好的抵抗作用(Zabolotny LD，et al.Dev Cell 2002，2，489；Cheng A，et al.Dev Cell 2002，2，497)。隨著人類基因組計劃的進展，在遺傳學方面越來越多的證據表明PTP1B和II型糖尿病及肥胖有關(Echwald SM，et al.Diabetes 2002，51(1)，1；Di Paoia R，et al.Am J Hum Genet 2002，70(3)，806)，因此PTP1B抑制劑是治療糖尿病和肥胖癥潛在的藥物。
PTP1B選擇性抑制劑的研究取得了一定的進展，但大多局限于一些肽類或類肽化合物，例如基于PTP1B去磷酸化的底物序列設計的抑制劑EEDE(F2PMP)M(Ki＝7.2nM)、Glu-F2PMP-F2PMP(IC50＝40nM)，雖然這些肽類抑制劑具有較強的抑制活性及較高的選擇性，但它們是肽類磷酸化合物的事實使其很難成為藥物候選化合物。最近，一系列非肽類非磷酸化合物類PTP1B抑制劑被報道，它們具有一定的選擇性，更重要的是，其中一些化合物對降低ob/ob小鼠血漿中葡萄糖和胰島素水平有顯著作用。
喹唑啉酮化合物是一類具有良好生物活性的含氮雜環(huán)化合物，其在抗腫瘤(Melin C，et al.J Med Chem 2000，43，1910)、抗炎(Chao Q，et al.J Med Chem 1999，42，860)、抗高血壓(Allen EE，et al.Bioorg MedChem Lett 1993，3，293)和抗菌(Kung PP，et al.J Med Chem 1999，42，705)等方面都顯示出優(yōu)良的活性，此外還有文獻報道喹唑啉酮衍生物還可做為生長激素釋放肽受體(Ghrelin receptor)的拮抗劑(RudolphJ，et al.J Med Chem 2007，50，5202)，具有潛在的治療糖尿病與肥胖癥的作用。喹唑啉酮化合物一直是藥物化學研究的熱點，商品化的例子有治療結腸直腸癌新藥雷替曲塞(Raltitrexed)、農用殺菌劑氟喹唑(Fluquinconazole)等。因此以喹唑啉酮化合物為先導物，開發(fā)的針對不同作用機制的活性化合物很可能具備良好的藥代動力學性質和成藥性。


發(fā)明內容
通過對PTP1B抑制活性篩選，發(fā)現(xiàn)一種喹唑啉酮化合物具有較好的PTP1B抑制活性。
本發(fā)明的目的在于推出一類喹唑啉酮衍生物，其特征在于，具有以下的結構通式所示的結構；

式中，R1是H或I， 當R1是H時，R2分別為


或

所述衍生物的名稱分別為WLH-409、WLH-424、WLH-417、WLH-495、WLH-496、WLH-402、WLH-451、WLH-479、WLH-322、WLH-324或WLH-396，當R1是I時，R2分別為


或

所述衍生物的名稱分別為WLH-535、WLH-550、WLH-558、WLH-621、WLH-622、WLH-528、WLH-577、WLH-605、WLH-448、WLH-450或WLH-522。
本發(fā)明的另一目的在于提供該類衍生物的制備方法。為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術方案。以2-氨基-5-碘苯甲酸或鄰氨基苯甲酸作為原料與2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯發(fā)生成環(huán)反應，然后與各種鹵代試劑發(fā)生取代反應得到一類喹唑啉酮衍生物，該類衍生物具有顯著PTP1B抑制活性。
現(xiàn)詳細說明本發(fā)明的技術方案，一種制備一類喹唑啉酮衍生物的方法，其特征在于，具體操作步驟 第一步通過縮合反應制備喹唑啉酮中間體 8.6g～16.6g鄰氨基苯甲酸或2-氨基-5-碘苯甲酸，10.4g 2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯，溶于50mL無水乙醇，回流10小時，冷卻至室溫，過濾，濾餅用10mL石油醚淋洗、10mL飽碳酸氫鈉溶液淋洗、10mL無水EtOH淋洗，干燥，得到喹唑啉酮中間體粗品，200-300目硅膠柱層析純化，得4.7g～7.0g喹唑啉酮中間體，產率26％～30％。
第二步通過取代反應制備喹唑啉酮衍生物 0.23g～0.32g的喹唑啉酮中間體，0.06g～0.2g鹵代烴，0.24g NaI，0.22g K2CO3，溶于70mL丙酮，氮氣保護下回流7h，減壓蒸除溶劑，加入20ml飽和食鹽水，100ml二氯甲烷萃取，50mL水洗滌，有機層用無水硫酸鈉干燥，200-300目硅膠柱層析純化，得0.1g～0.35g喹唑啉酮衍生物，產率40％～70％。
以下是與該制備方法相關的反應簡式
本發(fā)明的另一目的是提供所述衍生物作抗糖尿病藥物的潛在應用。
本發(fā)明的優(yōu)點在于以2-氨基-5-碘苯甲酸或鄰氨基苯甲酸作為原料與2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯發(fā)生成環(huán)反應，然后與各種鹵代試劑發(fā)生取代反應，制備了一類具有顯著PTP1B抑制活性的喹唑啉酮衍生物，可望作為開發(fā)具有良好的藥代動力學性質和成藥性的抗糖尿病藥物先導物。

具體實施例方式 現(xiàn)結合實施例詳細說明本發(fā)明的技術方案。所有的實施例都嚴格按照上述的制備方法的操作步驟進行操作。
實施例一WB-409的制備
第一步中，8.6g2-氨基-5-碘苯甲酸，10.4g 2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯，溶于50mL無水乙醇，回流10小時，冷卻至室溫，過濾，濾餅用10mL石油醚淋洗、10mL飽和碳酸氫鈉溶液淋洗、10mL無水EtOH淋洗，干燥，得到喹唑啉酮中間體粗品，200-300目硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷與甲醇的混合溶劑，混合溶劑比例為二氯甲烷∶甲醇＝100∶1，得5.4g喹唑啉酮中間體，產率30％，該化合物的1H NMR(DMSO，500MHz)δ＝13.11(brs，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，8.05(dd，J＝2.0，4.2Hz，1H)，7.39-7.42(m，1H)，7.23(m，J＝9.0Hz，1H)，7.21(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，7.02(t，J＝8.0Hz，1H)，3.71(s，3H)； 第二步中，0.23g的喹唑啉酮中間體，0.13g鹵代試劑，鹵代試劑為

0.24g NaI，0.22g K2CO3，溶于70mL丙酮，氮氣保護下回流7h，減壓蒸除溶劑，加入20ml飽和食鹽水，100ml二氯甲烷萃取，50mL水洗滌，有機層用無水硫酸鈉干燥，200-300目硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷與甲醇的混合溶劑，混合溶劑比例為二氯甲烷∶甲醇＝100∶1，得0.16g喹唑啉酮衍生物WLH-409，產率50％，該化合物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.23(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(m，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.48(m，1H)，7.31(m，1H)，7.26(d，J＝7.0Hz，1H)，7.05(s，2H)，4.21(d，J＝14.5Hz，1H)，4.07(d，J＝15.0Hz，1H)，3.79(s，3H)，3.55(m，4H)，1.60(m，4H)，1.50(m，2H)。
實施例二WLH-535的制備
第一步中，16.6g鄰氨基苯甲酸，10.4g 2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯，溶于50mL無水乙醇，回流10小時，冷卻至室溫，過濾，濾餅用10mL石油醚淋洗、10mL飽和碳酸氫鈉溶液淋洗、10mL無水EtOH淋洗，干燥，得到喹唑啉酮中間體粗品，200-300目硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷與甲醇的混合溶劑，混合溶劑比例為二氯甲烷∶甲醇＝100∶1，得6.7g喹唑啉酮中間體，產率26％，該化合物的1H NMR(DMSO，500MHz)δ＝13.11(brs，1H)，8.18(d，J＝2.0Hz，1H)，8.05(dd，J＝2.0，4.2Hz，1H)，7.39-7.42(m，1H)，7.23(d，J＝9.0，1H)，7.21(dd，J＝1.5，7.5Hz，1H)，7.14(d，J＝8.0Hz，1H)，7.02(t，J＝7.5Hz，1H)，3.71(s，3H)； 第二步中，0.33g的喹唑啉酮中間體，0.13g鹵代試劑，鹵代試劑為

0.24g NaI，0.22g K2CO3，溶于70mL丙酮，氮氣保護下回流7h，減壓蒸除溶劑，加入20ml飽和食鹽水，100ml二氯甲烷萃取，50mL水洗滌，有機層用無水硫酸鈉干燥，200-300目硅膠柱層析純化，洗脫劑為二氯甲烷與甲醇的混合溶劑，混合溶劑比例為二氯甲烷∶甲醇＝100∶1，得0.27g喹唑啉酮衍生物WLH-535，產率63％，該化合物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.56(d，J＝2.2Hz，1H)，7.81(dd，J＝2.2，8.7Hz，1H)，7.35(d，J＝8.0Hz，2H)，7.30(d，J＝8.7Hz，1H)，7.18(d，J＝10.0Hz，2H)，4.02(s，2H)，3.56-2.58(m，4H)，1.68(m，4H)，1.57(m，2H)。
除了以下不同以外，實施例三至實施例十二均與實施例一完全相同。
實施例三WLH-424的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.14g，產率為65％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝11.52(brs，1H)，8.27(d，J＝5.0Hz，1H)，7.82(d，J＝5.0Hz，2H)，7.54(t，J＝10.0Hz，1H)，7.47(t，J＝15.0Hz，1H)，7.43(m，1H)，7.25(s，1H)，7.09(t，J＝10.0Hz，1H)，6.98-6.97(s，1H)，4.02(d，J＝15Hz，1H)，3.89(d，J＝15.0Hz，1H)，3.82(s，3H)。
實施例四WLH-417的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.14g，產率為69％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.80(brs，1H)，8.29(d，J＝6.0Hz，1H)，7.80(d，J＝6.0Hz，1H)，7.70(d，J＝6.0Hz，1H)，7.44-7.52(m，1H)，7.25(t，J＝6.0Hz，3H)，7.07-7.12(m，3H)，3.93(d，J＝12.0Hz，1H)，3.77(d，J＝12.0Hz，1H)，3.77(s，1H)。
實施例五WLH-495的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.20g，產率為40％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝10.05(brs，1H)，8.31(d，J＝5.0Hz，1H)，7.82(t，1H)，7.68(d，J＝8.0Hz，1H)，7.49(m，2H)，7.34(m，4H)，7.25(d，J＝4.0Hz，1H)，7.07(m，2H)，3.94(d，J＝14.5Hz，1H)，3.73(d，J＝14.5Hz，1H)，3.78(s，3H)。
實施例六WLH-496的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.20g，產率為52％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.90(brs，1H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H)，7.81(m，，1H)，7.76(d，J＝3.5Hz，2H)，7.61(dd，J＝0.75，4.0Hz，1H)，7.53-7.56(m，1H)，7.44-7.47(m，1H)，7.27-7.30(m，2H)，7.09-7.14(m，2H)，3.99(d，J＝14.5Hz，1H)，3.92(d，J＝14.5，1H)，3.80(s，3H)。
實施例七WLH-402的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.12g，產率為62％，該衍生物的1H NMR(CDC13，500MHz)δ＝8.22(d，J＝8.0Hz，1H)，8.10(d，J＝7.5Hz，1H)，7.61(m，2H)，7.52(m，3H)，7.32(m，2H)，7.09(m，2H)，4.70(d，J＝16.0Hz，1H)，4.47(d，J＝16.5Hz，1H)，3.82(s，3H)。
實施例八WLH-451的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.16g，產率為65％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.31(brs，1H)，8.27(t，2H)，7.75(t，J＝5.6Hz，1H)，7.70(d，J＝7.4Hz，1H)，7.52(t，J＝Hz，3H)，7.43(t，J＝Hz，2H)，7.24-7.29(m，3H)，7.08-7.13(m，2H)，7.00(t，J＝Hz，1H)，4.05(d，J＝14.8Hz，1H)，3.97(d，J＝14.5Hz，1H)，3.77(s，3H)。
實施例九WLH-479的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.19g，產率為60％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.28(d，J＝7.5Hz，1H)，7.80(brs，1H)，7.72(t，J＝7.7Hz，1H)，7.53(t，J＝8.5Hz，1H)，7.44(t，J＝7.5，1H)，7.29(m，1H)，7.10-7.14(m，2H)，5.78(s，1H)，3.90(s，6H)，3.82(s，3H)。
實施例十WLH-322的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.095g，產率為59％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝8.24(d，J＝3.0Hz，1H)，7.73(m，1H)，7.64(d，J＝6.0Hz，1H)，7.52(m，1H)，7.40(m，1H)，7.07-7.12(m，2H)，6.69(t，J＝6.0Hz，1H)，5.03-5.04(m，2H)，3.80(s，3H)。
實施例十一WLH-324的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.097g，產率為50％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝8.23(t，J＝4.7Hz，1H)，7.70-7.74(m，1H)，7.60(d，J＝6.0Hz，1H)，7.48-7.52(m，1H)，7.36(t，J＝5.5Hz，1H)，7.23-7.25(m，1H)，7.06-7.23(m，2H)，5.88-5.98(m，1H)，5.26-5.31(m，1H)，5.10-5.13(m，1H)，3.79-3.88(s，5H)。
實施例十二WLH-396的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.15g，產率為41％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝8.26(t，J＝6.0Hz，1H)，7.71(t，J＝6.0Hz，1H)，7.62(d，J＝6.0Hz，1H)，7.50(t，J＝6.0Hz，1H)，7.37(t，J＝6.0Hz，1H)，7.26(d，J＝3.0Hz，1H)，7.08-7.14(m，2H)，3.81(s，3H)，3.16(t，J＝6.0Hz，2H)，1.70(t，J＝4.5Hz，2H)，1.30-1.47(m，10H)，0.89(m，3H)。
除了以下不同以外實施例十三至實施例二十二均與實施例二完全相同。
實施例十三WLH-550的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.14g，產率為56％，該衍生物的1HNMR(CDCl3，500MHz)δ＝11.34(brs，1H)，8.61(s，1H)，8.09(d，J＝8.5Hz，1H)，7.55-7.59(m，2H)，7.45(d，J＝3.5Hz，1H)，7.26-7.28(m，1H)，7.11-7.15(m，2H)，6.99(d，J＝3.5Hz，1H)，4.03(d，J＝15.0Hz，1H)，3.90(d，J＝15.0Hz，1H)，3.85(s，3H)。
實施例十四WLH-558的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.14g，產率為54％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝10.33(brs，1H)，8.33(s，1H)，8.10(d，J＝6.0Hz，1H)，7.57(s，3H)，7.42(d，J＝5.4Hz，1H)，7.30-7.36(m，4H)，7.14(s，1H)，7.05(s，1H)，4.07(s，2H)，3.76(s，3H)。
實施例十五WLH-621的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.20g，產率為64％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.74(brs，1H)，8.61(d，J＝2.0Hz，1H)，8.07-8.09(m，1H)，7.52-7.53(m，1H)，7.37-7.42(m，3H)，7.37-7.32(m，1H)，7.30-7.22(m，1H)，7.10-7.07(m，2H)，3.93(d，J＝14.5Hz，1H)，3.74(d，J＝14.5Hz，1H)，3.76(s，3H)。
實施例十六WLH-622的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.20g，產率為40％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.74(brs，1H)，8.58(d，J＝2.0Hz，1H)，8.01(dd，J＝10.0，8.0Hz，1H)，7.81(dd，J＝1.0，8.5Hz，1H)，7.62(dd，J＝10.0，8.0Hz，1H)，7.54-7.57(m，2H)，7.49(d，J＝8.5Hz，1H)，7.25-7.31(m，2H)，7.09-7.14(m，2H)，3.96(d，J＝14.5Hz，1H)，3.91(d，J＝14.5Hz，1H)，3.80(s，3H)。
實施例十七WLH-528的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.12g，產率為50％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.54(d，J＝2.0Hz，1H)，8.08-8.09(m，2H)，7.87(dd，J＝2.0，9.0Hz，1H)，7.64(t，J＝7.5Hz，1H)，7.53-7.56(m，3H)，7.31(dd，J＝1.5，8.0Hz，1H)，7.10-7.15(m，2H)，6.97(d，J＝9.0Hz，1H)，4.68(d，J＝16.0Hz，1H)，4.45(d，J＝16.0Hz，1H)，3.82(s，3H)。
實施例十八WLH-577的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.16g，產率為59％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝9.17(brs，1H)，8.58(s，1H)，8.27(d，J＝8.1Hz，1H)，8.00(d，J＝8.4Hz，1H)，7.53(t，J＝Hz，1H)，7.43(d，J＝8.7Hz，1H)，7.24-7.30(m，2H)，7.08-7.13(m，3H)，7.01-7.04(t，J＝Hz，1H)，4.02(d，J＝14.7Hz，1H)，3.94(d，J＝14.8Hz，1H)，3.77(s，3H)。
實施例十九WLH-605的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.19g，產率為70％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.57(d，J＝1.9Hz，1H)，7.96(dd，J＝2.0，10.3Hz，1H)，7.53(m，1H)，7.45(brs，1H)，7.26-7.25(m，1H)，7.08-7.12(m，2H)，5.78(s，1H)，3.90(s，6H)，3.80(s，3H)。
實施例二十WLH-448的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.095g，產率為44％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)，δ＝8.55(brs，1H)，7.98(d，J＝8.0Hz，1H)，7.51(t，J＝8.0Hz，1H)，7.38(d，J＝9.0Hz，1H)，7.23(m，1H)，7.07-7.11(m，1H)，6.63(t，J＝6.5Hz，1H)，5.04(d，J＝6.5Hz，2H)，3.80(s，3H)。
實施例二十一WLH-450的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.097g，產率為50％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，300MHz)δ＝8.54(s，1H)，7.95(d，J＝6.2Hz，1H)，7.48(d，J＝5.6Hz，1H)，7.33(d，J＝6.0Hz，1H)，7.21(t，J＝6.1Hz，1H)，7.05(t，J＝7.3Hz，1H)，5.90-5.91(m，1H)，5.25(d，J＝7.5Hz，1H)，5.10(d，J＝7.5Hz，1H)，3.78(s，3H)。
實施例二十二WLH-522的制備 第二步中，鹵代試劑為

加入量為0.15g，產率為61％，該衍生物的1H NMR(CDCl3，500MHz)δ＝8.55(s，1H)，7.96(d，J＝8.5Hz，1H)，7.5(t，1H)，7.33(d，J＝8.5Hz，1H)，7.22(d，J＝7.5Hz，1H)，7.07(m，2H)，3.79(s，3H)，3.10(m，2H)，1.63(m，2H)，1.37(m，2H)，1.26(m，8H)，0.86(m，3H)。
實施例二十三喹唑啉酮衍生物的PTP1B抑制活性測試 1.測試原理利用分子生物學手段在大腸桿菌系統(tǒng)表達hPTP1B催化結構域，經純化后的hPTP1B重組蛋白能水解底物pNPP的磷脂鍵，得到的產物在410nm處有很強的光吸收，因此可以通過直接檢測410nm處光吸收的變化以觀察酶的活性變化以及化合物對酶活性的抑制情況。標準的測活體系如下50mM Mops，PH 7.0，1mM EDTA，2mM DTT，2mM PNPP，2％ DMSO，40nM hPTP1B。

2.觀察指標動態(tài)測定波長為410nm處的光吸收，時間為3min，其動力學曲線一級反應的斜率作為酶的活性指標。
3.樣品測試1、將1mg樣品溶于200μL DMSO中。取20μL加入到96孔聚丙烯板的A2-H11樣品孔中，然后加80μL DMSO，作為母板。2、用Biomek 2000自動加樣系統(tǒng)取2μL樣品加入到96孔聚苯乙烯板的對應樣品孔中，作為篩選用的子板。3、A1-D1、E12-H12中加入2μL DMSO作為百分之百酶活性對照。4、A12-D12、E1-H1中加入2μL不同濃度的陽性對照物(由10μL/mL兩倍稀釋的四個濃度)。5、A1-H12分別加入88μL Assay mix。6、A1-H12分別加入10μL hPTP1B。7、在SpectraMAX 340上測量410nm處光吸收，時間為3min。8、將數(shù)據輸出為文本文件，然后以Excel方式打開，以A1-D1、E12-H12的Vmax值平均作為100％酶活力?；衔飳TP1B的抑制率通過以下公式求得 抑制率(％)＝(1-各篩選孔Vmax值/空白對照Vmax平均值)×100％ 4.測試結果篩選結果是當化合物的濃度為20μg/mL時對酶活性的百分抑制率，抑制活性高于50％時，按常規(guī)篩選得出IC50，陽性對照4-[4-(4-草?；?苯氧甲基)-苯甲氧基]-苯乙酮酸(4-[4-(4-oxalyl-phenoxymethyl)-benzyloxy]-phenyl-oxo-acetic acid)的IC50為5.4μM[Christopher T.Seto，et al.J.Med.Chem.2002，45，3946.]。

4-[4-(4-草?；?苯氧甲基)-苯甲氧基]-苯乙酮酸 各測試化合物抑制PTP1B的IC50值見下表 喹唑啉酮衍生物抑制PTP1B的活性數(shù)據
本發(fā)明所述衍生物是一種蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(簡稱PTP1B)抑制劑，特別適宜作潛在的抗糖尿病藥物。
權利要求
1.一類喹唑啉酮衍生物，其特征在于，具有以下的結構通式所示的結構
式中，R1是H或I，當R1是H時，R2分別為
所述衍生物的名稱分別為WLH-409、WLH-424、WLH-417、WLH-495、WLH-496、WLH-402、WLH-451、WLH-479、WLH-322、WLH-324或WLH-396，當R1是I時，R2分別為
所述衍生物的名稱分別為WLH-535、WLH-550、WLH-558、WLH-621、WLH-622、WLH-528、WLH-577、WLH-605、WLH-448、WLH-450或WLH-522。
2.一種制備權利要求1所述的衍生物的方法，其特征在于，具體操作步驟
第一步通過縮合反應制備喹唑啉酮中間體
8.6g～16.6g鄰氨基苯甲酸或2-氨基-5-碘苯甲酸，10.4g 2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯，溶于50mL無水乙醇，回流10小時，冷卻至室溫，過濾，濾餅用10mL石油醚淋洗、10mL飽碳酸氫鈉溶液淋洗、10mL無水EtOH淋洗，干燥，得到喹唑啉酮中間體粗品，200-300目硅膠柱層析純化，得4.7g～7.0g喹唑啉酮中間體，產率26％～30％。
第二步通過取代反應制備喹唑啉酮衍生物
0.23g～0.32g的喹唑啉酮中間體，0.06g～0.2g鹵代烴，0.24g NaI，0.22g K2CO3，溶于70mL丙酮，氮氣保護下回流7h，減壓蒸除溶劑，加入20ml飽和食鹽水，100ml二氯甲烷萃取，50mL水洗滌，有機層用無水硫酸鈉干燥，200-300目硅膠柱層析純化，得0.1g～0.35g喹唑啉酮衍生物，產率40％～70％。
3.權利要求1所述衍生物作抗糖尿病藥物的潛在應用。
全文摘要
一類喹唑啉酮衍生物及其制備和應用，應用是指作為蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(簡稱PTP1B)抑制劑，屬于醫(yī)藥及其制備和應用的技術領域，以2-氨基-5-碘苯甲酸或鄰氨基苯甲酸作為原料與2-甲氧基苯基硫代異氰酸酯發(fā)生成環(huán)反應，然后與各種鹵代試劑發(fā)生取代反應得到一類喹唑啉酮衍生物，該類衍生物具有顯著PTP1B抑制活性，特別適宜作潛在的抗糖尿病藥物。
文檔編號C07D403/12GK101792440SQ20101012694
公開日2010年8月4日 申請日期2010年3月18日 優(yōu)先權日2010年3月18日
發(fā)明者楊帆, 湯杰, 仇文衛(wèi), 王利華, 趙麗華, 穆秋超 申請人:華東師范大學