體(GL2)的合成 [0134]方案 1.
[0136] 將5g( 10.67mmol)起始化合物溶解在150mL無水DMF中。向該溶液中加入締丙基漠 (6.3mL，72mmol)和K2C03( 1.47g，10.67mmol)。將反應(yīng)物攬拌化，除去溶劑，將粗制物質(zhì)溶解 在AcOEt中，并用此0洗涂至抑中性。將有機(jī)相用MgS化(無水)干燥并蒸發(fā)得到5.15g(95%)物 質(zhì)。（在C出Cl2:Me0H 20:1中的化(：冊(cè)=0.9，開始化合物1?' = 0.1，用巧；酬和紫外線顯影）。
[0137] 方案 2.
[0139]向所述化合物（5.15g, 10.13mmol)在 OfeCN(SOmL)中的溶液中，加入 Et2NH(20mL, 0.19mol)。將反應(yīng)物在室溫?cái)埌?0min。除去溶劑，并通過柱色譜法（己燒:AcCffit 3: 2)純化 化合物，得到2.6g(90 % )。（在C出Cl2: MeOH 10:1中的Iix，Rf = 0.4，用巧S酬顯影(所述化合 物具有紫色）。1護(hù)醒R(CDCl3,300MHz)扣.95-5.85(m，lH，-CH2CHC此），5.36-5.24(m，2H，-C此CHCH2)，4.62-4.60(m，3H，-CH2CHC此，N皿oc)，3.46(t，lH，CH(Lys))，3.11-3.07(m，2H， C 出 NHBoc)，1.79(bs,2H，NH2),1.79-1.43(m，6H,3CH2(Lys))，l.43(s，9H,Boc)。
[0140]方案 3.
[014引在-78°C 向谷氨酸二締丙醋（3.96g，15mmol)和 S 光氣（1.47g，4.95mmol)在 C也 Cb (143mU中的攬拌溶液中加入化3N( 6.4mL 46mmo 1)在C也Cl 2 (28血）中的溶液。將反應(yīng)混合物 溫?zé)嶂潦覝夭埌?.化。然后在-78°C加入賴氨酸衍生物(2.6g，9.09mmol)在C也Cb (36mL) 中的溶液，并將反應(yīng)物在室溫?cái)埌?2h。將溶液用C也Cl 2稀釋，用也0洗涂2次，經(jīng)MgS化(無水） 干燥，并通過柱色譜法(己燒:AcO化3:1一2:1一AcOEt)純化，得到4g(82%)(在C也Ch = MeOH 20:1中的l'LC，Rf = 0.3，用巧ミ酬顯影）。lH-NMR(CDCl3,300MHz)S5.97-5.84(m，3H，3-C也C肥也），5.50(bt，2H，2NH脈），5.36-5.20(m，6H，3-C也C肥H2)，4.81(bs，lH，N皿oc)，4.68-4.40(m，8H，3-CH2CHCH2，OKLys)，CH(glu))，3.09-3.05(m，2H，C也NHBoc)，2.52-2.39(m，2H， Ol2(glu.))，2.25-2.1^P2.02-1.92(2m，2H，CH2(glu.))，1.87-1.64(m，4H，2aMLys))， 1.51-1.35(m,2H,CH2(Lys)),1.44(s,9H,Boc)。
[0143]方案 4.
[014引在0°C向所述化合物（4g，7.42mmol)在無水畑2Cl2(40mL)中的溶液中加入TFA (9mL)。將反應(yīng)物在室溫?cái)埌杌?。在真空下除去溶劑直到完全干燥，得?. Ig(定量）。（在 C也Cb = MeOH 20:1中的化(：，1?' = 0.1，用巧^酬顯影）。1護(hù)醒1?(〔0(：13,3001化）56.27-6.16 (2d，2H，2畑脈），5.96-5.82 (m，3H，3-C也CHCH2)，5.35-5.20 (m，6H，3-CH2C肥也），4.61-4.55 (m,細(xì)，3-C 也 CHCH2)，4.46-4.41(m，2H，CH(Lys)，CH(glu))，2.99(m，2H，CH2WBoc)，2.46(m, 2H,CH2(glu. )),2.23-2.11 和2.01-1.88(2m，2H,CH2(glu.))，1.88-1.67(m，4H，2C也化ys))， 1.45(m,2H,CH2(Lys))0 [0146]方案 5.
[0148] 在氣氣下在0°C向所述化合物(2g，3.6mmol)在DMF(無水）（62mL)中的溶液中加入 Pd(PPh3)4(0.7g，0.6mmo 1)和嗎嘟(5.4mL，60.7mmo 1)。將反應(yīng)物在室溫?cái)埌璞?。除去溶劑。?粗產(chǎn)物用C出Cl2洗涂2次，然后溶解在出0中。向該溶液中加入稀化0田容液(0.01N)，直到抑是 高堿性。在減壓下除去溶劑。將固體再次用C此Cl2、Ac0Et和MeOH-C出Cl2(l:l)的混合物洗 涂，溶解在出0中，并用Amberlite IR-120H+樹脂中和。將溶劑蒸發(fā)，并將所述化合物用MeOH 沉淀，得到 lg(87%)GL2DiH-NMR(D2〇,300MHz)M.07(m，2H，〇KLys)，CH(glu))，2.98(m，2H， CH2NH2),2.36(m,2H,CH2(glu. )),2.08-2.00(m,lH,CH2(glu)),1.93-1.60(m,5H,CH2(glu.), 2C出化ys))，1.41 (m，2H，邸2(Lys)) oMass ESI: 320.47[M+H+]，342.42[M+Na+]。
[0149] 實(shí)施例2: PLA-PEG的制備
[0150] 所述合成通過d，I-丙交醋與作為大引發(fā)劑(macro-initiator)的a-徑基-O -甲氧 基聚乙二醇的開環(huán)聚合來完成，并使用2-乙基己酸錫（II)作為催化劑在高溫進(jìn)行，如下所 示（PEG Mn-5,OOODa;PLAMn-16,OOODa;PEG-PLA Mn-21 ,OOODa)。
[0151] 方案 6.
[0153]如下純化聚合物:將所述聚合物溶解在二氯甲燒中，并使它在己燒和乙酸的混合 物中沉淀。將從該步驟回收的聚合物在烘箱中干燥。 巧154] 實(shí)施例3: PLA-PEG-配體制備
[01巧]在圖1A-1C中顯示的合成開始于FM0C、B0C賴氨酸如下向FM0C、B0C、締丙基賴氨酸 的轉(zhuǎn)化:使FMOC、BOC賴氨酸與締丙基漠和碳酸鐘在二甲基甲酯胺中反應(yīng)，隨后用二乙胺在 乙臘中的溶液處理。然后使B0C、締丙基賴氨酸與S光氣和谷氨酸二締丙醋反應(yīng)，隨后用S 氣乙酸在二氯甲燒中的溶液處理，W形成化合物"GL2P"。
[0156] 然后通過加入徑基-陽G-甲酸W及抓C和NHS，將化2P中的賴氨酸的側(cè)鏈胺聚乙二 醇化。GL2P與陽G的綴合是通過酷胺鍵。該得到的化合物的結(jié)構(gòu)被標(biāo)記為"HO-陽G-GL2P"。在 聚乙二醇化W后，使用d 丙交醋與作為引發(fā)劑的冊(cè)-PEG-GL2P中的徑基的開環(huán)聚合(ROP) 將聚丙交醋嵌段共聚物經(jīng)由醋鍵連接至冊(cè)-PEG-GL2P，從而產(chǎn)生叩LA-PEG-GL2P"。使用2-乙 基己酸錫（II)作為開環(huán)聚合的催化劑。
[0157]最后，使用嗎嘟和四（S苯基麟)鈕(作為催化劑)在二氯甲燒中除去PLA-PEG-GL2P 上的締丙基，得到終產(chǎn)物PLA-PEG-配體。通過在30/70 % (v/v)乙酸/己燒中沉淀，純化最終 的化合物。 巧15引實(shí)施例4:納米顆粒制備-乳狀液方法
[0159] 形成由多西他賽(DTXL)和聚合物（同聚物、共聚物和與配體的共聚物）的混合物組 成的有機(jī)相。將有機(jī)相與水相W大約1: 5比例（油相:水相)混合，其中所述水相由表面活性 劑和一些溶解的溶劑組成。為了達(dá)到高藥物負(fù)載，使用在有機(jī)相中的約30%固體。圖2、3A和 3B圖示了 W下方法。
[0160] 通過在簡(jiǎn)單混合下組合兩個(gè)相或通過使用轉(zhuǎn)子定子勻漿器，形成初步的粗制乳狀 液。轉(zhuǎn)子/定子產(chǎn)生均勻的乳狀溶液，而攬拌棒產(chǎn)生可見的較大粗制乳狀液。觀察到，攬拌棒 方法產(chǎn)生附著于進(jìn)料容器側(cè)壁的顯著油相微滴，從而提示，盡管粗制乳狀液大小不是對(duì)于 質(zhì)量而言至關(guān)重要的過程參數(shù)，應(yīng)當(dāng)使它適當(dāng)?shù)匚⑿?，W便避免收率損失或相分離。因此， 使用轉(zhuǎn)子定子作為粗制乳狀液形成的標(biāo)準(zhǔn)方法，盡管高速混合器可W在較大規(guī)模上是合適 的。
[0161] 然后通過使用高壓勻漿器使初步乳狀液形成細(xì)乳狀液。粗制乳狀液的大小不會(huì)顯 著地影響連續(xù)穿過(103)勻漿器M-IlO-EHW后的顆粒尺寸。
[0162] 發(fā)現(xiàn)勻漿器進(jìn)料壓力對(duì)得到的顆粒尺寸具有顯著影響。在氣動(dòng)和電動(dòng)M-IlOEH勻 漿器上，發(fā)現(xiàn)降低進(jìn)料壓力也會(huì)降低顆粒尺寸。因此，為M-IlOEH使用的標(biāo)準(zhǔn)操作壓力是每 個(gè)相互作用腔室4000-500化si,運(yùn)是在所述單元上的最小加工壓力。M-IlOEH也具有一個(gè)或 兩個(gè)相互作用腔室的選擇。與更少限制性的200WI1 Z-腔室串聯(lián)的限制性Y-腔室成為標(biāo)準(zhǔn)。 發(fā)現(xiàn)當(dāng)除去Y-腔室并用空腔室替換時(shí)會(huì)實(shí)際上減小顆粒尺寸。此外，除去Y-腔室會(huì)在加工 過程中顯著地增加乳狀液的流速。
[0163] 2-3次穿過W后，顆粒尺寸沒有顯著減小，并且連續(xù)穿過甚至可W造成顆粒尺寸增 加。安慰劑有機(jī)相由50:5016.5/5PLA/陽G: 8.2PLA的25.5 %聚合物原液組成。將有機(jī)相用標(biāo) 準(zhǔn)水相W5:10:W乳化，并進(jìn)行多個(gè)謹(jǐn)慎穿過，在每次穿過W后澤滅乳狀液的小部分。指示的 規(guī)模代表制劑的總固體。
[0164] 規(guī)模對(duì)顆粒尺寸的影響表現(xiàn)出驚人的規(guī)模依賴性。趨勢(shì)表明，在2-lOg批大小范圍 內(nèi)，較大的批產(chǎn)生較小的顆粒。已經(jīng)證實(shí)，當(dāng)考慮大于IOg規(guī)模批次時(shí)，會(huì)消除該規(guī)模依賴 性。在油相中使用的固體的量是約30%。對(duì)于安慰劑批次，％固體的值代表該％固體的藥物 存在于20 % w/w標(biāo)準(zhǔn)品中。
[016引表A總結(jié)了乳化過程參數(shù)。
[0166] 表 A.
[0167]
[0168] 然后通過在混合下在給定的溫度加入去離子水中來澤滅細(xì)乳狀液。在澤滅單元操 作中，在攬拌下將乳狀液加入冷的水性澤滅液(quench)中。運(yùn)用于萃取油相溶劑的大部分， 為下游過濾有效地硬化納米顆粒。冷卻澤滅液會(huì)顯著地改善藥物封裝。澤滅液:乳狀液比例 是大約5:1。
[0169] 將35 % (重量％ )吐溫80的溶液加入澤滅液中W達(dá)到總計(jì)大約2 %吐溫80。將乳狀 液澤滅W后，加入充當(dāng)藥物增溶劑的吐溫-80的溶液，從而允許在過濾過程中有效地除去未 封裝的藥物。表B指示了每個(gè)澤滅過程參數(shù)。
[0170] 表B:總結(jié)性澤滅過程參數(shù).
[0173] 溫度必須用足夠稀的懸浮液(足夠低的溶劑濃度)保持足夠冷W保持低于顆粒的 Tg。如果Q:化k例不夠高，那么較高濃度的溶劑會(huì)塑化顆粒和允許藥物滲漏。相反，較冷的溫 度允許在低Q:化k例(至~3:1)的高藥物封裝，從而使得更有效地運(yùn)行該過程成為可能。
[0174] 然后將納米顆粒通過切向流過濾過程分離W濃縮納米顆粒懸浮液并將溶劑、游離 藥物和藥物增溶劑從澤滅溶液緩沖液交換進(jìn)水中。使用具有300的分子量截止值(MWCO)的 再生纖維素膜。
[0175] 執(zhí)行恒定體積滲濾(DF) W除去澤滅溶劑、游離藥物和吐溫-80。為了執(zhí)行恒定體積 DF，將緩沖液W與濾液除去相同的速率加入滲余物容器中。TFF操作的過程參數(shù)總結(jié)在表C 中。錯(cuò)流速度表示溶液穿過進(jìn)料通道和經(jīng)過膜的流動(dòng)速度。運(yùn)種流動(dòng)會(huì)提供掃除可W污染 膜和限制濾液流動(dòng)的分子的力。跨膜壓力是驅(qū)動(dòng)可滲透的分子穿過膜的力。
[0176] 表C: TFF 參數(shù)
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