眼眶取血， 靜置30min后3000rpm離心10min，取血清，在沈陽(yáng)疾控中心用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)血清中的 CHO、TG、LDL-C和HDL-C ;模型組小鼠血清的CHO、和LDL-C含量與空白對(duì)照組含量比較顯著 升高（P〈0. 01，P〈0. 01)，血清HDL-C含量較空白對(duì)照組含量也有降低，表明造模成功。陽(yáng)性 對(duì)照組血清中的CHO含量較模型組含量顯著降低（P〈0. 01)，HDL-C含量與模型組含量比較 升高較顯著（P〈〇. 05)，LDL-C含量降低較顯著（P〈0. 01)。核桃柏提取物組血清中的CHO含 量與模型組含量比較顯著降低（P〈〇. 05)，HDL-C的含量顯著高于模型組（P〈0. 01)，LDL-C含 量較模型組含量有顯著下降（P〈〇. 05)。結(jié)果見(jiàn)表4。
[0048] 表 4 各組血漿中 CHO、TG、HDL-C、LDH-C 的含量(jfcts,(mmoL/L)
[0049]
[0050] 與空白組比較，"#"表示P〈0. 05, "##"表示P〈0. 01 ;與模型組比較，表示 Ρ〈0· 05，"**" 表示 Ρ〈0· 01。
[0051] 結(jié)論：核桃柏提取物能夠明顯降低小鼠血漿中CHO、LDL-C水平，升高HDL-C水平。 從而可以確定核桃柏提取物具有一定抗膽結(jié)石作用。
[0052] 實(shí)施例9
[0053] 核桃柏提取物對(duì)小鼠膽汁成分的影響
[0054] 健康雄性C57BL/6J小鼠32只（20±2g)，隨機(jī)分組：空白對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng) 性對(duì)照組和給藥組。模型對(duì)照、陽(yáng)性對(duì)照組和給藥組小鼠給予致石飼料，飲水不限，空白對(duì) 照組予正常飼料。給藥組和陽(yáng)性對(duì)照組小鼠每日上午固定時(shí)間稱重灌胃，灌給核桃柏提取 物（實(shí)施例1)和熊去氧膽酸片（UDCA)，劑量分別為0· 01mg/g和0· 02mg/g，每日1次；模 型對(duì)照組和空白對(duì)照組給予等體積的蒸餾水。喂養(yǎng)8周。實(shí)驗(yàn)最后ld，禁食24h，迅速打 開(kāi)腹腔，分離膽囊，注射器吸出全部膽汁，在沈陽(yáng)疾控中心用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)膽汁中膽固 醇（CH0)、總膽紅素（TBIL)。模型組與空白組比較，模型組小鼠膽汁中CHO含量顯著升高 (P〈0. 05);熊去氧膽酸組與模型組含量比較可顯著降低膽汁中的CHO含量（P〈0. 05);核桃 柏提取物組與模型組比較，核桃柏提取物組小鼠膽汁中CHO含量有顯著降低（P〈0. 05)。各 組膽汁中TBIL含量以核桃柏提取物組降低的較多，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果見(jiàn)表5。
[0055] 結(jié)論：核桃柏粗提取物能顯著降低膽汁中膽固醇的含量，對(duì)膽結(jié)石的形成有一定 的預(yù)防作用。
[0056] 表5各組小鼠膽汁成分(1?., （mmoL/L)
[0057]
[0058] 注：與空白組比較，"#"表示P〈0.05 ;與模型組比較，表示P〈0.05。
[0059] 實(shí)施例10
[0060] 核桃柏提取物對(duì)大鼠膽汁流量的影響
[0061] 取大鼠32只（體重220 ± IOg)，隨機(jī)分為3組，即空白對(duì)照組、陽(yáng)性藥組和 核桃柏提取物組，分別稱重、編號(hào)，灌胃給藥7天，空白組給予蒸餾水，核桃柏提取物組 21111710(^(實(shí)施例2)。最后一天給藥111后以3.5%水合氯醛11111710(^(體重）腹腔注射 麻醉，仰位固定于小動(dòng)物手術(shù)板，腹部剪毛后沿腹白線（腹正中）用粗剪刀（或手術(shù)刀切 口）剖開(kāi)腹腔2~3cm，可見(jiàn)胃幽門部，沿十二指腸降部腸系膜看到白色透明具有韌性的膽 總管，在接近十二指腸開(kāi)口處，向肝臟方向剪"V"形，將膽汁引流管插入膽總管，引出腹壁， 結(jié)扎固定可見(jiàn)淡黃色液體順管流出即是膽汁，穩(wěn)定IOmin后，先收集30min膽汁，然后給藥 組經(jīng)十二指腸分別注射核桃柏提取物，陽(yáng)性藥，空白組注射生理鹽水，以30min為一時(shí)限， 用小試管收集大鼠1.5h內(nèi)的膽汁（mL)，記錄各時(shí)間段膽汁流量，并將收集的膽汁在沈陽(yáng)疾 控中心用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)膽固醇（CHO)、膽紅素（TBIL)。與空白對(duì)照組比較，十二指腸給 藥后，核桃柏提取物組和陽(yáng)性藥能顯著提高大鼠膽汁分泌物量（P〈〇. 05)。結(jié)果見(jiàn)表6。 [0062] 結(jié)論：核桃柏粗提取物能有效提高大鼠膽汁分泌量，有利于膽結(jié)石的排除。
[0063] 表6各組大鼠膽汁流量(feS,
[0064]
[0065] 注：與空白組比較，表示卩〈0.05，"**"表示卩〈0.01。
[0066] 實(shí)施例11
[0067] 核桃柏提取物對(duì)大鼠膽汁成分的影響
[0068] 對(duì)實(shí)施例7中接的膽汁進(jìn)行成分分析，結(jié)果表明與空白組比較，給藥組對(duì)膽汁中 CHO含量的影響不明顯；陽(yáng)性藥與空白組比較，膽汁中CHO含量有升高趨勢(shì)。各組膽汁中 TBIL含量均無(wú)明顯差異（P > 0. 05)。結(jié)果見(jiàn)表7。
[0069] 結(jié)論：核桃柏粗提取物不影響正常大鼠膽固醇和膽紅素的分泌，不破壞正常大鼠 膽固醇和膽紅素的分泌的平衡。
[0070] 表7各組大鼠膽汁成分.(??, (mmoL/L)
[0071]
[0072] 實(shí)施例12含核桃柏提取物的顆粒劑及其制備
[0073] 處方：成分％ (重量）
[0074] 核桃柏提取物15
[0075] 蔗糖 65
[0076] 糊精 20
[0077] 制法：將核桃柏提取物（實(shí)施例4)、鹿糖和糊精混合均勻，加入適量75 %乙醇制成 軟材，18目篩制濕顆粒，50°C烘箱干燥30min，取出后過(guò)18目篩整粒，分裝，即得核桃柏提取 物顆粒劑。
[0078] 實(shí)施例13含核桃柏提取物的片劑及其制備
[0079] 處方：成分％ (重量）
[0080] 核桃柏提取物15
[0081] 微晶纖維素 77
[0082] 羧甲基淀粉鈉 7
[0083] 甜菊糖苷 0· 5
[0084] 硬脂酸鎂 0· 5
[0085] 制法：將核桃柏提取物（實(shí)施例2)、微晶纖維素、羧甲基淀粉鈉混合均勻，加入適 量75%乙醇制成軟材，軟材過(guò)18目篩制濕粒，濕粒于50°C烘箱中干燥30min，取出后過(guò)18 目篩整粒，加入硬脂酸鎂和甜菊糖苷，混勻，壓片，即得核桃柏提取物片劑。
[0086] 實(shí)施例14含核桃柏提取物的膠囊劑及其制備
[0087] 處方：成分％ (重量）
[0088] 核桃柏提取物15
[0089] 糊精 45
[0090] 淀粉 40
[0091] 制法：取處方量的核桃柏取物（實(shí)施例2)粉碎過(guò)80目篩，加入淀粉、糊精、混合均 勻，
[0092] 裝入膠囊，即得核桃柏提取物膠囊。
[0093] 實(shí)施例15含核桃柏提取物的軟膠囊劑及其制備
[0094] 處方：成分％ (重量）
[0095] 核桃柏提取物15
[0096] 明膠 30
[0097] 甘油 20
[0098] 水 35
[0099] 制法：取處方量的甘油和水加熱至70-80°C，加入明膠，攪拌，保溫l_2h，除去上浮 的泡沫過(guò)濾后制成膠板，再將處方量的核桃柏提取物（實(shí)施例4)粉碎過(guò)80目篩，置于二塊 膠板之間，用鋼模壓制成膠囊。
[0100] 實(shí)施例16核桃柏提取物的口服液及其制備
[0101] 處方：成分％ (重量）
[0102] 核桃柏提取物15
[0103]蔗糖 25
[0104] 水 60
[0105] 制法：去處方量的核桃柏提取物加入適量的水，調(diào)節(jié)pH值至7. 0,攪勻，冷藏72小 時(shí),過(guò)濾,濾液加入蔗糖,攪拌使溶解,加入適量香精并調(diào)節(jié)pH值至7. 0,加入適量的水，攪 拌，靜置12小時(shí)，過(guò)濾，灌裝，滅菌，即得核桃柏提取物口服液。
[0106] 以上所述僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的原則之 內(nèi)所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種核桃柏提取物，其特征在于，通過(guò)如下步驟制備： (1) 將核桃柏粉碎，核桃柏粉末用石油醚提取或超臨界萃取，石油醚提取液棄去石油醚 液，過(guò)濾得濾渣或超臨界提取后得濾渣； (2) 將（1)中的濾渣用水或體積濃度為30%-80%醇溶液提取，減壓蒸干，得到核桃柏提 取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的核桃柏提取物，其特征在于：步驟（1)中的石油醚沸程為 60-90°C，提取方法為回流、冷浸或閃式提取，優(yōu)選冷浸。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的核桃柏提取物，其特征在于：步驟（2)中的醇溶液體積濃 度為 40%-70%。4. 根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的核桃柏提取物，其特征在于：步驟（2)中的所述 的醇溶液為甲醇、乙醇或正丁醇的含水溶液，所述的水或醇溶液的用量為核桃柏的8-20倍 量。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的核桃柏提取物，其特征在于：總有機(jī)酸含量在30% 以上。6. -種藥物組合物，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的核桃柏提取物。7. -種藥物制劑，其特征在于，包含權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的核桃柏提取物或權(quán) 利要求6所述的藥物組合物與藥學(xué)上可接受的載體。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物制劑，其特征在于，所述的藥物制劑包括固體制劑和液 體制劑，所述的固體制劑為片劑、膠囊或顆粒劑；所述的液體制劑為口服液。9. 權(quán)利要求1-5任何一項(xiàng)所述的核桃柏提取物或權(quán)利要求6所述的組合物或權(quán)利要求 7或8所述的藥物制劑在制備防治消化系統(tǒng)疾病藥物或保健品中的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的消化系統(tǒng)疾病藥物或保健品為抗 膽結(jié)石、利膽的藥物或保健品。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及核桃粕提取物及其制備方法和用途，具體涉及核桃粕提取物在制備治療膽結(jié)石藥物和抗膽結(jié)石保健品中的應(yīng)用。其制備方法為核桃粕經(jīng)石油醚或超臨界提取后過(guò)濾得濾渣，濾渣再用水或醇溶液提取，減壓濃縮得浸膏，浸膏總有機(jī)酸含量在30%以上，總有機(jī)酸藥理實(shí)驗(yàn)證明核桃粕提取物具有抗膽結(jié)石、利膽的作用。本發(fā)明的制備方法使用了人們常棄掉的核桃粕為原料，工藝簡(jiǎn)單，有機(jī)酸含量高。
【IPC分類】A61K36/52, A61P1/16
【公開(kāi)號(hào)】CN105012382
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410169677
【發(fā)明人】劉曉秋, 潘英妮, 程松, 張雪, 徐佳佳
【申請(qǐng)人】沈陽(yáng)藥科大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年11月4日
【申請(qǐng)日】2014年4月24日