一種沙苑子提取物及其制備方法與用圖
【專利說明】
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技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體的說，本發(fā)明涉及一種沙苑子提取物及其制備方法與用途，該提取物對無義突變具有顯著的抑制作用。
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【背景技術(shù)】
[0002]遺傳性疾病是指遺傳因素占主要發(fā)病原因的某些疾病。依據(jù)造成遺傳性疾病的原因又可以將其分為單一基因缺陷的遺傳疾病、染色體變異所引起的遺傳疾病、由多重基因共同影向所造成的遺傳疾病及粒線體基因的變異所引起的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì)，人群中大約1/3的人受遺傳病所累，且有逐年增加的趨勢。因此，遺傳病是威脅人類健康的一類重要疾病，要引起足夠重視。
[0003]基因內(nèi)一個(gè)氨基酸特定的密碼子由于堿基取代或移碼突變轉(zhuǎn)換為多肽鏈合成的終止密碼子，使多肽鏈合成中斷；或相反地，基因內(nèi)的終止密碼子轉(zhuǎn)換成一個(gè)氨基酸特定的密碼子，使多肽鏈的合成不能在原定位點(diǎn)結(jié)束，而是繼續(xù)延伸至下一個(gè)終止密碼子為止，這種突變稱為無義突變。無義突變導(dǎo)致正常的蛋白質(zhì)合成不完整。從現(xiàn)有的研究資料來看，在大多數(shù)遺傳性疾病中，都有相當(dāng)大部分的病例是由無義突變引起的，如杜興型肌營養(yǎng)不良癥，囊性纖維變性疾病以及血友病等。因此篩選抗無義突變的藥物對治療相關(guān)遺傳性疾病具有重要的意義。
[0004]我們擁有龐大的由中藥單體化合物和提取物組成的可溯源的天然產(chǎn)物庫，并已經(jīng)建立起抗無義突變的體外篩選系統(tǒng)，將天然產(chǎn)物庫的化合物和提取物在體外篩選系統(tǒng)上進(jìn)行初篩，挑選出有效的化合物和提取物。針對有效的提取物，將進(jìn)一步分離純化直到找到有效化合物。初步篩選的有效化合物將在無義突變的細(xì)胞株或小鼠上做進(jìn)一步的試驗(yàn)鑒定，并對其作用方式及機(jī)理進(jìn)行同步研究。
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]旨在提供一種對無義突變具有顯著抑制作用的沙苑子提取物及其制備方法。該提取物在體外顯示較強(qiáng)的抗無義突變作用，提示其可能對杜興型肌營養(yǎng)不良癥，囊性纖維變性疾病以及血友病有一定的預(yù)防或治療作用。
[0006]本發(fā)明涉及一種沙苑子提取物及其制備方法與用途，所述沙苑子指豆科一年生草本植物扁莖黃芪的成熟種子。
[0007]本發(fā)明制備沙苑子提取物的方法和步驟如下:沙苑子粉碎，然后用石油醚脫脂2-3次。脫脂后的沙苑子粗粉，用70% -90%的乙醇在60-70°C提取2_3次，合并提取液并減壓濃縮至無醇，用蒸餾水混懸，用石油醚萃取2-3次，取水層減壓濃縮后加蒸餾水稀釋2-3倍，AB-8大孔樹脂純化。上樣后靜置2h，用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液用聚酰胺純化，30%甲醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液過LH-20色譜柱，乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液,合并后濃縮,過LH-20色譜柱，石油醚洗脫，收集石油醚洗脫液，合并后減壓濃縮，冷凍干燥，即得。4
【具體實(shí)施方式】
[0008]以下結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件。
[0009]實(shí)施例1沙苑子提取物的制備
[0010]取一定量沙苑子藥材，粉碎，然后用10倍量石油醚脫脂3次。脫脂后的沙苑子粗粉，用80%的乙醇在70°C提取3次，合并提取液并減壓濃縮至無醇。用少量蒸餾水混懸，用石油醚萃取3次，水層減壓濃縮后加蒸餾水稀釋3倍，AB-8大孔樹脂純化。上樣后靜置2h，用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液聚酰胺純化，30%甲醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液過LH-20色譜柱，乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，合并后濃縮，過LH-20色譜柱，石油醚洗脫，收集石油醚洗脫液，合并后減壓濃縮，冷凍干燥，即得。
[0011 ] 實(shí)施例2沙苑子提取物對無義突變的抑制作用
[0012]在熒光素酶基因中制造點(diǎn)突變，形成一個(gè)終止密碼，轉(zhuǎn)入細(xì)胞的DNA中。在正常不干預(yù)條件下，熒光素酶基因表達(dá)后的翻譯過程由于終止密碼的插入而提前終止，不能翻譯形成正常的熒光素酶，加入熒光索酶底物，無熒光出現(xiàn)。藥物干預(yù)細(xì)胞，如果藥物可抑制無義突變則細(xì)胞可產(chǎn)生正常的熒光索酶，加入熒光素酶底物后，發(fā)出可檢測的熒光信號，我們進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)沙苑子提取物能夠抑制無義突變，使細(xì)胞產(chǎn)生熒光信號。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種沙苑子提取物及其制備方法與用途。2.權(quán)利要求1中沙苑子指豆科一年生草本植物扁莖黃芪的成熟種子。3.權(quán)利要求1中的沙苑子提取物為沙苑子有效部位，非單體成分。4.權(quán)利要求1中的制備方法如下:沙苑子粉碎，然后用石油醚脫脂2-3次。脫脂后的沙苑子粗粉，用70% -90%的乙醇在60-70°C提取2-3次，合并提取液并減壓濃縮至無醇，用蒸餾水混懸，用石油醚萃取2-3次，水層減壓濃縮后加蒸餾水稀釋2-3倍，AB-8大孔樹脂純化。上樣后靜置2h，用50%乙醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液聚酰胺純化，30%甲醇洗脫，收集洗脫液，合并后減壓濃縮。濃縮液過LH-20色譜柱，乙酸乙酯洗脫，收集洗脫液，合并后濃縮，過LH-20色譜柱，石油醚洗脫，收集石油醚洗脫液，合并后減壓濃縮，冷凍干燥，即得。5.權(quán)利要求1中的用途指對無義突變有抑制作用，用于開發(fā)治療杜興型肌營養(yǎng)不良癥，囊性纖維變性疾病以及血友病的藥物。
【專利摘要】本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域。具體的說，本發(fā)明涉及一種沙苑子提取物的制備方法及用途。制備方法如下：沙苑子藥材，粉碎，然后用石油醚脫脂。脫脂后的沙苑子粗粉，用80％的乙醇在70℃提取，合并提取液并減壓濃縮至無醇后用石油醚萃取，水層減壓濃縮后加蒸餾水稀釋，AB-8大孔樹脂純化，聚酰胺純化，30％甲醇洗脫。濃縮液過LH-20色譜柱，乙酸乙酯洗脫，洗脫液再過LH-20色譜柱，石油醚洗脫，收集石油醚洗脫液，合并后減壓濃縮，干燥，即得。該提取物對無義突變有顯著的抑制作用，可用于開發(fā)治療杜興型肌營養(yǎng)不良癥，囊性纖維變性疾病以及血友病的藥物。
【IPC分類】A61K9/19, A61K36/481, A61P7/04, A61P21/00, A61P11/00
【公開號】CN105012375
【申請?zhí)枴緾N201410165911
【發(fā)明人】何曉義, 馮寶軍, 辛振強(qiáng), 錢勇, 謝天培
【申請人】上海泉程生物技術(shù)有限公司
【公開日】2015年11月4日
【申請日】2014年4月23日