一種臭山羊提取物及其制備方法和用途
【專利摘要】本發(fā)明臭山羊提取物及其制備方法和用途，涉及中草藥提取物及其應用，是以臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干、粉碎，用乙醇浸提，回收溶劑乙醇，得乙醇浸膏，乙醇浸膏經pH1-3的鹽酸或酒石酸酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯酸萃取物，水相調pH9-11，再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯堿萃取物;臭山羊乙醇浸膏、乙酸乙酯酸萃取物和乙酸乙酯堿萃取物皆為棕色膏狀物，經紫外-可見分光光度掃描在波長630-710nm之間有共同的吸收峰，三者都具有良好的抑制結核分枝桿菌活性。
【專利說明】一種臭山羊提取物及其制備方法和用途
【技術領域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及中草藥提取物及其應用，具體地說是臭山羊提取物及其制備方法和用途。
【背景技術】
[0002]臭山羊(Orixa japonicaThunb.),又名臭苗、臭常山、大山羊,為蕓香科植物,具有疏風清熱，行氣活血，解毒除濕，截瘧，鎮(zhèn)痛的功效，主要化學成分為生物堿和揮發(fā)性物質，現今關于臭山羊的藥用價值研究報道較少。而在結核病防治方面的應用更是從未見過報道。結核病作為人類史上一項難以攻克的慢性傳染病，直到近幾年仍保持流行趨勢，其致病源為結核分枝桿菌。本發(fā)明的發(fā)明人，為進一步發(fā)掘臭山羊的藥用價值，用臭山羊提取物對結核分枝桿菌標準強毒株H37RV (ATCC27294)進行體外藥敏實驗，結果發(fā)現臭山羊提取物具有良好的抑制結核分枝桿菌活性。

【發(fā)明內容】

[0003]本發(fā)明的目的在于提供一種臭山羊提取物，公開制備方法以及臭山羊提取物在制備、防治結核病藥物方面的應用。
[0004]為實現上述目的，本發(fā)明一種臭山羊提取物及其制備方法和用途，所指提取物是以臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干、粉碎，用乙醇浸提，回收溶劑乙醇，得乙醇浸膏，乙醇浸膏經PH1-3的鹽酸或酒石酸酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯酸萃取物，水相調PH9-11，再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯堿萃取物；臭山羊乙醇浸膏、臭山羊乙酸乙酯酸萃取物和臭山羊乙酸乙酯堿萃取物皆為棕色膏狀物，經紫外-可見分光光度掃描在波長630-710nm之間有共同吸收峰，三者都具有良好的抑制結核分枝桿菌活性。
[0005]本發(fā)明一種臭山羊提取物`的`制備方法，按下列步驟進行:
(1)將臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干，粉碎，得臭山羊細粉；
(2)將臭山羊細粉，加90%-99%V/V乙醇，在超聲波作用下浸提，超聲波頻率為40KHz，浸提溫度為30-40°C，浸提時間為20-40min，臭山羊細粉與乙醇重量比為1:2_1: 5，浸提三次，合并三次浸提液；
(3)過濾浸提液，合并濾液，經減壓回收乙醇，得乙醇浸膏；
(4)乙醇浸膏用pHl-3的鹽酸或酒石酸酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，乙醇浸膏酸水溶液與乙酸乙酯體積比1:5，萃取3-5次，合并萃取液；經減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯酸萃取物；
(5 )步驟(4)萃取后的水相用氨水調pH9-l I，再用乙酸乙酯萃取，水相與乙酸乙酯體積比1: 5，萃取3-5次，合并萃取液，經減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯堿萃取物。
[0006]本發(fā)明臭山羊提取物的用途，在于臭山羊乙醇浸膏、臭山羊乙酸乙酯酸萃取物和臭山羊乙酸乙酯堿萃取物在制備、防治結核病藥物方面的應用。[0007]本發(fā)明三種臭山羊提取物體外抗結核分枝桿菌活性測試，包括以下步驟:
(1)改良羅氏培養(yǎng)基:依據國標GB15987-1995配制改良羅氏培養(yǎng)，作為空白對照；
(2)含異煙肼羅氏培養(yǎng)基:改良羅氏培養(yǎng)基中加入異煙肼，最終異煙肼在培養(yǎng)基中的終濃度為0.2 ii g/ml，作為陰性對照；
(3)含提取物羅氏培養(yǎng)基:依據國標GB15987-1995配制改良羅氏培養(yǎng)基基礎后，分三組分別加入三種提取物，利用二倍稀釋法對培養(yǎng)基中提取物量進行稀釋，每種提取物稀釋10個濃度梯度，蒸汽滅菌后，冰箱保存待用；
(4)接菌量:研磨結核標準強毒菌株H37RV,添加9%無菌生理鹽水以I個麥斯單位比濁管調整菌液濃度，稀釋10倍和稀釋1000倍，配得C1和C2兩個濃度菌懸液，接菌量為剛好鋪滿培養(yǎng)基斜面；
(5)接菌后的培養(yǎng)基置37°C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6個星期，對比空白培養(yǎng)基、陰性培養(yǎng)基、含提取物培養(yǎng)基，得出藥敏結果。
[0008]三種提取物用二甲亞砜(DMSO)或吐溫-80進行溶解，DMSO和吐溫-80的量控制在合理范圍內。
[0009]空白培養(yǎng)基、陰性培養(yǎng)基、提取物培養(yǎng)基斜面對照圖見說明書附圖1。經過4-6周培養(yǎng)后，空白培養(yǎng)基斜面肉眼觀察長滿黃色的結核分枝桿菌，為陽性對照；陰性培養(yǎng)基斜面經肉眼觀察無結核分枝桿菌生長，為陰性對照。提取物培養(yǎng)基斜面肉眼觀察到結核分枝桿菌，與空白對照斜面的結核分枝桿菌一致，結果判定為陽性；提取物培養(yǎng)基斜面肉眼觀察無結核分枝桿菌，與陰性 培養(yǎng)基斜面結果一致，判定為陰性。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為實施例2中空白培養(yǎng)基、陰性培養(yǎng)基、提取物培養(yǎng)基斜面對照圖，從圖可知，乙酸乙酯堿萃取物、乙酸乙酯酸萃取物對H37RV有顯著的抑制作用，相比較乙醇浸膏而言，效果更為突出，對抗結核分枝桿菌意義更大，其中1-1為空白對照；1_2陰性對照；1_3提取物培養(yǎng)基(陽性結果);1-4提取物培養(yǎng)基(陰性結果)。
[0011]圖2為三種提取物用紫外-可見分光光度光譜掃描圖，從圖可知，三種提取物在波長630-710nm之間有吸收峰，有共同物質，圖中I是臭山羊乙酸乙酯酸萃取物，2為臭山羊乙醇提取物，3為臭山羊乙酸乙酯堿萃取物。
【具體實施方式】
[0012]以下通過【具體實施方式】對本發(fā)明進行進一步說明。
[0013]實施例1:臭山羊提取物的制備方法:
(1)以臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干，粉碎過30目篩，得臭山羊細粉；
(2)取臭山羊細粉426.24g，加860ml 90%-99%V/V乙醇，在超聲波作用下浸提，超聲波頻率為40KHz，浸提溫度為40°C，浸提時間為40min，更換等體積乙醇，反復浸提三次，合并三次浸提液；
(3)過濾浸提液，濾液經減壓回收乙醇，得乙醇浸膏16.65g ；
(4)取乙醇浸膏4.24g,加pHl-3的鹽酸或酒石酸酸水溶夜5ml，加25ml乙酸乙酯萃取，萃取5次，合并乙酸乙酯萃取液；減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯酸萃取物1.45g ；(5)步驟(4)萃取后的水相用氨水調pH9-ll,再用25ml乙酸乙酯萃取,萃取3次,合并乙酸乙酯萃取液，減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯堿萃取物2.79g。
[0014]實例2:臭山羊乙醇浸膏乙酸乙酯酸萃取物、乙酸乙酯堿萃取物的藥敏實驗，包括以下步驟:
(1)改良羅氏培養(yǎng)基:依據國標GB15987-1995配制改良羅氏培養(yǎng)，作為空白對照；
(2)含異煙肼羅氏培養(yǎng)基:改良羅氏培養(yǎng)基中加入異煙肼，最終異煙肼在培養(yǎng)基中的終濃度為0.2 ii g/ml，作為陰性對照；
(3)含提取物羅氏培養(yǎng)基:依據國標GB15987-1995配制改良羅氏培養(yǎng)基基礎后，分別加入乙醇提取物制備提取物培養(yǎng)基、乙酸乙酯酸萃取物制備的培養(yǎng)基、乙酸乙酯堿提取物制備的培養(yǎng)基，對培養(yǎng)基提取物的量進行稀釋，乙醇提取物的濃度梯度為Y1-Y9，共9個濃度梯度，每個濃度做10支平行，蒸汽滅菌后-4°C冰箱保存待用；乙酸乙酯堿萃取物濃度梯度為S1-S10，共10個濃度梯度，每個濃度做10支平行，蒸汽滅菌后-4°C冰箱保存待用；乙酸乙酯酸萃取物，濃度梯度為F1-F10，共10個濃度梯度，每個濃度做10支平行，蒸汽滅菌后-4°C冰箱保存待用；
(4)接菌量:研磨結核標準強毒菌株H37RV，添加9%無菌生理鹽水以I個麥斯單位比濁管調整菌液濃度，稀釋10倍(C1)和稀釋1000倍(C1)兩個濃度菌懸液，接菌量為剛好鋪滿培養(yǎng)基斜面；
(5 )接菌后的培養(yǎng)基置37 °C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4-6個星期，觀察對比空白培養(yǎng)基、陰性培養(yǎng)基、含提取物培養(yǎng)基中結核分枝桿菌的生長情況，如下表:.
【權利要求】
1.一種臭山羊提取物，其特征是以臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干、粉碎，用乙醇浸提，回收溶劑乙醇，得乙醇浸膏，乙醇浸膏經PH1-3的鹽酸或酒石酸酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯酸萃取物，水相調pH9-ll，再用乙酸乙酯萃取，回收乙酸乙酯得乙酸乙酯堿萃取物；臭山羊乙醇浸膏、臭山羊乙酸乙酯酸萃取物和臭山羊乙酸乙酯堿萃取物皆為棕色膏狀物，經紫外-可見分光光度掃描在波長630-710nm之間有共同吸收峰，三者都具有良好的抑制結核分枝桿菌活性。
2.按照權利要求1所述的一種臭山羊提取物的制備方法，其特征在于按下列步驟進行: (1)將臭山羊植物的根、莖和葉為原料，自然風干，粉碎，得臭山羊細粉； (2)將臭山羊細粉，加90%-99%V/V乙醇，在超聲波作用下浸提，超聲波頻率為40KHz，浸提溫度為30-40°C，浸提時間為20-40min，臭山羊細粉與乙醇重量比為1:2_1: 5，浸提三次，合并三次浸提液； (3)過濾浸提液，濾液經減壓回收乙醇，得乙醇浸膏； (4)乙醇浸膏用pHl-3的鹽酸或酒石酸酸水溶解，用乙酸乙酯萃取，乙醇浸膏酸水溶液與乙酸乙酯體積比1:5，萃取3-5次，合并萃取液；經減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯酸萃取物； (5)步驟(4)萃取后的水相用氨水調pH9-ll，再用乙酸乙酯萃取，水相與乙酸乙酯體積比1: 5，萃取3-5次，合并萃取液，經減壓濃縮回收乙酸乙酯，得乙酸乙酯堿萃取物。
3.按照權利要求1或2所述的臭山羊提取物的用途，其特征在于臭山羊乙醇浸膏、臭山羊乙酸乙酯酸萃取物和臭山羊乙酸乙酯堿萃取物在制備、防治結核病藥物方面的應用。
【文檔編號】A61P31/06GK103623097SQ201310673761
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年12月12日 優(yōu)先權日:2013年12月12日
【發(fā)明者】張振, 李岑, 駱科文, 趙偉, 歐維正, 閆巖, 王燕 申請人:貴州理工學院