核桃粕提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及核桃柏提取物及其制備方法和應(yīng)用，具體涉 及核桃柏提取物、其制備方法以及該提取物在制備治療膽結(jié)石、利膽藥物及保健品方面的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 膽結(jié)石是一種嚴(yán)重威脅人類健康的常見病、多發(fā)病，受多種因素影響而反復(fù)發(fā)作， 近年來由于我國人民生活水平提高，飲食習(xí)慣的改變，環(huán)境因素變化，膽結(jié)石的發(fā)病率呈現(xiàn) 逐年上升，在西方國家其發(fā)病率為10% -20%，在我國為2. 4% -7%，部分地區(qū)高達16. 8%。 臨床上患者常出現(xiàn)中上腹或右上腹悶脹不舒服，噯氣和厭食油膩食物等消化不良癥狀，易 被當(dāng)作"肝炎"、"胃炎"而拖延治療。每年大約20%的"無癥狀"膽囊結(jié)石患者出現(xiàn)膽絞痛。 當(dāng)夜餐后或在夜間，膽囊結(jié)石易卡在膽囊頸部或膽管內(nèi)，使用膽囊內(nèi)壓力升高，膽囊膨脹產(chǎn) 生劇烈的絞痛。這種絞痛常常是持續(xù)性陣發(fā)性加重，嚴(yán)重者出現(xiàn)休克甚至生命危險。除此 之外，一些小的結(jié)石落入膽總管、排入十二指腸，不僅損傷總膽管末端肝胰壺腹括約肌，反 復(fù)如此，還會造成膽總管末端狹窄，繼發(fā)總膽管結(jié)石及膽源性胰腺炎。近年來，膽管癌的發(fā) 生率顯著提高，有資料表明約〇. 5% -1 %的膽囊結(jié)石并發(fā)膽囊癌。這種情況時常誤診，有統(tǒng) 計誤診率可達79. 5%。往往在膽結(jié)石手術(shù)時才發(fā)現(xiàn)膽囊癌，多為晚期，療效極差，絕大多數(shù) 患者在一年內(nèi)死亡。
[0003] 目前，治療仍以手術(shù)為主，但術(shù)后殘石率及復(fù)發(fā)率高（可達30 % -50 % )，再次手術(shù) 難度和風(fēng)險將成培加大。西藥治療膽結(jié)石的療程較長，通常要服用半年至兩年才能達到效 果，且副作用，價格也相對較貴。因此，尋找治療膽結(jié)石的高效低毒的藥物刻不容緩。
[0004] 胡桃仁（juglans regia L )是胡桃科植物的成熟種子，其性溫味苦，歸腎、肺、大 腸經(jīng)，具有補腎，溫肺，潤腸的功效，多用于腎陽不足，腰膝酸軟，陽痿遺精，虛寒咳嗽，腸燥 便秘。主要含有脂肪、蛋白質(zhì)、酚酸類成分，現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，核桃仁具有抗氧化、抗癌、抗衰 老、提高免疫力、改善記憶力和治療急性肝損傷等藥理作用。核桃柏為核桃仁榨油后的剩余 物，保留了核桃仁中的主要化學(xué)成分，但長期以來，經(jīng)過榨油后的核桃柏除部分用來提取蛋 白質(zhì)品外，常常成為工業(yè)生產(chǎn)的副產(chǎn)品，被當(dāng)做飼料低價處理或廢棄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了充分利用資源，本發(fā)明提供了核桃柏提取物的制備方法，以及在制備治療膽 結(jié)石等消化系統(tǒng)藥物、保健品等方面的應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的目的是通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0007] 1.核桃柏提取物的制備：
[0008] (1)將核桃柏粉碎，核桃柏粉末用石油醚提取或超臨界萃取，石油醚提取后棄去石 油醚液，過濾得濾渣，或超臨界萃取后得濾渣。
[0009] (2)濾渣用水或體積濃度為30% -80%醇溶液提取，減壓蒸干，得到核桃柏提取 物。
[0010] 步驟⑴中藥材粉碎目數(shù)為10-40目，優(yōu)選20目。
[0011] 所述的石油醚為沸程在60_90°C的石油醚，石油醚用量為核桃柏的質(zhì)量的3-5倍， 優(yōu)選5倍。
[0012] 所述步驟（1)的超臨界萃取壓力為25-35MPa，優(yōu)選30MPa，萃取溫度為30-60°C，優(yōu) 選45°C，萃取時間l_5h，優(yōu)選3h。
[0013] 所述步驟（1)中的石油醚提取的提取方法為回流、冷浸或閃式提取，每次Imin~ 4小時，提取次數(shù)1-3次，優(yōu)選冷浸提取。
[0014] 步驟（2)中所述的醇溶液為甲醇、乙醇或正丁醇的含水溶液，體積濃度為 30 % -80 %，優(yōu)選40 % -70 %，更優(yōu)選70 %。所述醇溶液優(yōu)選乙醇溶液。
[0015] 所述的水或醇溶液的用量為核桃柏質(zhì)量的的8-20倍量，優(yōu)選10倍。
[0016] 步驟（2)中所述的提取所用方法為回流、冷浸或閃式提取，每次Imin~3h，優(yōu)選回 流提取。
[0017] 所述的回流提取中，提取時間為1~3小時，回流溫度為70~90°C，優(yōu)選0. 5小 時。
[0018] 冷浸時間為1~3小時，優(yōu)選3小時。
[0019] 閃式提取時間為20秒-3分鐘，優(yōu)選1分鐘。
[0020] 核桃柏提取物以總有機酸含量為指標(biāo)，以核桃仁中特有的成分glansreginins A 為對照品，分光光度法測得總有機酸含量大于30%，為30. 8% -37. 1 %。此提取方法總有機 酸收率高，方法簡單重現(xiàn)性好。
[0021] 2.核桃柏提取物的預(yù)防膽結(jié)石的研究
[0022] 采用健康雄性C57BL/6J小鼠，給予高脂飼料制膽結(jié)石模型，給一定濃度提取物， 檢測血液高密度脂蛋白（HDL-C)、低密度脂蛋白（LDL-C)、膽固醇（CHO)、甘油三酯（TG)Ji 汁流量和膽汁膽固醇（CHO)、總膽紅素（TBIL)。實驗數(shù)據(jù)采用SPSS16. 0軟件進行統(tǒng)計學(xué)分 析，組間比較采用單因素方差分析（One-Way AN0VA)，方差齊性時用LSDt-test分析方法進 行組間比較，方差不齊時用Dunnett ' sT3分析，實驗結(jié)果以平均值土標(biāo)準(zhǔn)誤差（MeaniSEM) 表示。核桃柏提取物組血清中的CHO含量與模型組含量比較顯著降低，HDL-C的含量顯著 高于模型組，LDL-C含量較模型組含量有顯著下降，核桃柏提取物組與模型組比較，核桃柏 提取物組小鼠膽汁中CHO含量有顯著降低。各組膽汁中TBIL含量以核桃柏提取物組降低 的較多，但無統(tǒng)計學(xué)意義。
[0023] 為使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實施例進行進一步闡述。應(yīng)理解為這些 實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方 法，通常按照常規(guī)實驗方法進行。
【具體實施方式】：
[0024] 提取工藝優(yōu)化
[0025] 選用提取時間、溶劑倍量、提取次數(shù)、乙醇濃度4個因素，每個因素3個水平，以核 桃柏粉末中g(shù)lansreginins A的含量（mg/g)為考察指標(biāo)，按照（L934)正交表（見表1)設(shè) 計方案進行實驗，優(yōu)化提取工藝。
[0026] 精密稱取核桃柏粉末20. 0g，9份，按正交試驗設(shè)計表進行提取，過濾，濃縮，稀釋 至適當(dāng)濃度后，作為待測液，用于總有機酸的含量測定，正交實驗設(shè)計結(jié)果見表2,方差分析 見表3。
[0027] 表.IL9 (34)提取工藝正交設(shè)計
[0028]
[0029]
[0030]
[0031] 實驗結(jié)果表明，以glansreginins A含量為指標(biāo)進行直觀分析時，各因素對結(jié)果的 影響大小依次為C>D>B>A，以浸膏為指標(biāo)得到的結(jié)果與以glansreginins A為指標(biāo)的結(jié)果 一致，最佳工藝條件為A1B2C3D2,進一步方差分析結(jié)果表明提取次數(shù)和醇濃度對指標(biāo)成分 提取的影響較顯著。提取次數(shù)優(yōu)選3次，提取溶劑優(yōu)選乙醇，濃度優(yōu)選70%，提取時間對提 取率影響不大。
[0032] 實施例1
[0033] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以3倍量的石油醚（60-90)冷浸2次，每次4h，棄 去石油醚液，得濾渣，將濾渣以10倍量濃度為70 %的乙醇溶液回流提取2次，每次lh，減壓 回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法測得 總有機酸含量為35. 1%。
[0034] 實施例2
[0035] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉用超臨界萃取壓力30MPa，萃取溫度為40°C，萃取 時間3h，得濾渣，將濾渣以12倍量濃度為40%的甲醇溶液超聲提取2次，每次0. 5h，減壓回 收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法測得總 有機酸含量為31. 1%。
[0036] 實施例3
[0037] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)冷浸3次，每次4h，棄 去石油醚液，得濾渣，將濾渣以20倍量濃度為60 %的正丁醇溶液冷浸提取3次，每次4h，減 壓回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法測 得總有機酸含量為32. 1%。
[0038] 實施例4
[0039] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 棄去石油醚液，得濾渣，將濾渣以10倍量濃度為60 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 減壓回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法 測得總有機酸含量為33. 8%。
[0040] 實施例5
[0041] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 棄去石油醚液，得濾渣，將濾渣以10倍量濃度為70%的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 減壓回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法 測得總有機酸含量為37. 1%。
[0042] 實施例6
[0043] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 棄去石油醚液，得濾渣，將濾渣以10倍量濃度為50 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 減壓回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法 測得總有機酸含量為26. 1%。
[0044] 實施例7
[0045] 將核桃柏粉碎，取50g核桃柏粉以5倍量的石油醚（60-90)回流提取3次，每次lh， 棄去石油醚液，得濾渣，將濾渣以10倍量濃度為80 %的乙醇溶液回流提取3次，每次I. 5h， 減壓回收溶劑，減壓濃縮至干，得核桃柏提取物，以glansreginins A為對照品，分光光度法 測得總有機酸含量為36. 3%。
[0046] 實施例8
[0047] 健康雄性C57BL/6J小鼠32只（20±2g)，隨機分組：空白對照組、模型對照組、陽 性對照組和給藥組。模型對照、陽性對照組和給藥組小鼠給予致石飼料，飲水不限，空白對 照組予正常飼料。給藥組和陽性對照組小鼠每日上午固定時間稱重灌胃，灌給核桃柏提取 物（實施例1)和熊去氧膽酸片（UDCA)，劑量分別為0· Olmg/g和0· 02mg/g，每日1次；模型 對照組和空白對照組給予等體積的蒸餾水。喂養(yǎng)8周。實驗最后ld，禁食24h，