一種抗氧化核桃多肽保健品的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗氧化核桃多肽的制備方法，包括核桃粕的預處理-核桃粕的均質(zhì)-核桃蛋白的提取-酶解前處理-酶解反應-分離-脫鹽-濃縮干燥得到核桃多肽產(chǎn)品，其中在酶解反應環(huán)節(jié)采用堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、菠蘿蛋白酶四種酶按序、分時段加入，根據(jù)這四種酶對蛋白質(zhì)分解為多肽、氨基酸作用的強弱、功能、協(xié)同等綜合考慮，并使四種酶在各自最優(yōu)的酶解條件下進行酶解。本發(fā)明所制備的核桃多肽還原能力表現(xiàn)為吸光度在0.4上下浮動，對羥自由基清除率可高達95%，對超氧陰離子自由基清除率可以達到39.5%，蛋白提取率可達到98.71%，核桃多肽的水解度可達到26.37%，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有較大的提高和改善。
【專利說明】一種抗氧化核桃多肽保健品的制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于核桃加工領(lǐng)域，尤其是一種抗氧化核桃多肽的制備方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 核桃是作為一種可食用堅果，其桃仁中富含油脂、蛋白質(zhì)、糖類及維生素等營養(yǎng)成 分，其中蛋白質(zhì)含量約為16%。目前，我國的核桃加工主要以提取核桃油為主，榨油后的核桃 珀中蛋白質(zhì)含量可高達50%，具有很大的開發(fā)潛力，但就目前的應用來看，核桃柏多作為動 物飼料，經(jīng)濟效益極低。
[0003] 科學研究發(fā)現(xiàn)，人體攝取蛋白質(zhì)經(jīng)消化作用后，并非以氨基酸形式吸收，而是以肽 的形式吸收，因多肽具有參與激素調(diào)節(jié)，抗衰老，抗氧化，降血壓，降血脂，抑菌，美容養(yǎng)顏等 諸多活性功能，被廣泛的應用于食品、保健品、醫(yī)療、化妝品等行業(yè)。目前主要的多肽產(chǎn)品包 括動物類的金錢白花蛇多肽、地龍多肽、蛤蚧多肽、海馬多肽，植物類的天花粉多肽、松花粉 多肽、杏仁多肽、大豆多肽、云芝多肽、靈芝多肽等，但對核桃肽的研究較少。
[0004] 眾所周知，氧是維持人類生命活動不可缺少的元素，但氧在人體內(nèi)進行氧化反應 的同時，部分氧會產(chǎn)生過氧化氫、超氧化陰離子和自由基羥基等物質(zhì)，這些物質(zhì)會間接的 引發(fā)一系列疾病，如何提高抗氧化能力呢？或許獲得抗氧化肽或類似抗氧化肽豐富的保健 品是提高抗氧化能力的一個途徑，因核桃多肽與抗氧化肽的結(jié)構(gòu)類似，且具有一定的抗氧 化能力，而受到關(guān)注，如公布號CN103125735A中是利用AlcaLase酶與木瓜蛋白酶的混合 酶液，對核桃餅進行酶解得到核桃多肽，得到的核桃多肽含量不高，且核桃多肽中營養(yǎng)結(jié) 構(gòu)比較單一，抗氧化性不高。傳統(tǒng)工藝的核桃蛋白提取率不超過85%，核桃多肽的水解度不 超過15%，核桃多肽對羥基自由基的清除率在32. 7%左右，對超氧陰離子自由基的清除率在 24. 6%左右，與VC作對比，其還原能力是VC的37. 9%，蛋白質(zhì)提取率、水解度、對羥基自由 基、超氧陰離子自由基的清除率均不高。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了一種抗氧化核桃多肽的制備方法，旨在提供一種具有顯著抗氧化性 且肽含量高的核桃多肽的生產(chǎn)工藝。
[0006] 為達到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是： (1) 核桃柏的預處理：將核桃脫皮、脫油，得到脫脂核桃柏，經(jīng)粉碎至74 μ m -150μπι; (2) 核桃柏的均質(zhì)：將粉碎后的核桃柏與水按重量比1:10-20混合，在35MPa-45MPa 條件下均質(zhì)，重復2-4次，使核桃柏充分均質(zhì)，得到核桃混懸液，核桃柏經(jīng)多次均質(zhì)比單次 均質(zhì)的效果好，更有利于后續(xù)的酶解工藝； (3) 核桃蛋白的提取：先將上述核桃混懸液稀釋5-10倍，在85°C -KKTC條件下變性 10 min-15min，再用lmol/L的NaOH溶液將其pH值調(diào)整為9-11，在50°C-55°C條件下堿溶 lh-2h，經(jīng)離心取上清液，用0. 5 mol/L的HCl溶液將上清液的pH值調(diào)至5-6,經(jīng)離心，將收 集的沉淀用NaHCO3溶液調(diào)至中性后，可以采用噴霧干燥器進行噴霧干燥，得到核桃蛋白； (4) 酶解前處理：將核桃蛋白與水按重量比1:8-15制備成核桃蛋白混懸液，在 8511C -95 °C條件下保溫10min-20min，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)進行適當處理破壞，有利于下一步的 酶解、水解； (5) 酶解反應：將上述核桃蛋白混懸液冷卻至45°C -55°C，先將pH值調(diào)節(jié)至9-11加入 3000-4000u/g的堿性蛋白酶，酶解30min，然后將pH值調(diào)至8-10加入5000-6000u/g木瓜 蛋白酶，繼續(xù)酶解30min，再將pH值調(diào)至7-8. 5加入6000-7000u/g中性蛋白酶，繼續(xù)酶解 30min，最后將pH值調(diào)至6-7. 5加入2000-3000u/g菠蘿蛋白酶進行酶解，3h-5h后酶解反應 的水解度基本不變時，迅速將核桃蛋白混懸液的溫度調(diào)至90°C -KKTC，恒溫15min-20min 后，停止酶解反應，酶解反應中上述四種酶的分時段加入，首先利用具有較強分解蛋白質(zhì)能 力的堿性蛋白酶（內(nèi)切蛋白酶）對核桃蛋白混懸液初步分解為多肽，再利用其底物特異性， 對蛋白質(zhì)進行極強的加水分解，分解其中的L-精氨酸、L-賴氨酸、甘氨酸和L-瓜木瓜蛋白 酶氨酸殘基羧基參與形成的肽鍵；再加入具有食品添加劑性質(zhì)的中性蛋白酶對蛋白質(zhì)進一 步酶解的同時改善多肽的風味，最后加入菠蘿蛋白酶來增加其中的的PDI值和NSI值； (6) 分離：將步驟（5)得到的酶解液pH值調(diào)至5-6經(jīng)離心取上清液，再將上清液經(jīng)超濾 膜超濾，得到含小分子多肽的核桃多肽溶液； (7) 脫鹽：選用強酸性陽離子樹脂和強堿性陰離子樹脂分別處理核桃多肽溶液； (8) 濃縮干燥：將步驟（7)得到的核桃多肽溶液濃縮至原溶液的1/4-1/3后，進行噴霧 干燥得到核桃多肽粉。
[0007] 作為一種優(yōu)選實施方式，步驟（1)中的核桃脫油是通過CO2超臨界萃取提油或壓榨 脫油實現(xiàn)的。
[0008] 作為一種優(yōu)選實施方式，步驟（2)中的核桃柏的均質(zhì)，重復3次。
[0009] 作為一種優(yōu)選實施方式，步驟（6)中的上清液經(jīng)分子量為5000的超濾膜，得到分 子量不超過5000的核桃多肽溶液。
[0010] 作為一種優(yōu)選實施方式，步驟（6)中的上清液經(jīng)分子量為8000的超濾膜，得到分 子量不超過8000的核桃多肽溶液。
[0011] 作為一種優(yōu)選實施方式，步驟（8)是在-0. 07 MPa- -0. 09MPa，50°C-60°c的條件 下通過旋蒸濃縮至原溶液的1/4-1/3后，用噴霧干燥器在進口溫度70°C -85°C，出口溫度 170°C _190°C，流量800mL/h-1200mL/h的條件下進行噴霧干燥，得到核桃多肽粉。
[0012] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點： (1) 本發(fā)明使用CO2超臨界萃取提油的核桃柏，核桃柏中脂肪酸含量極少，蛋白質(zhì)含量 相對較高； (2) 采用的多次均質(zhì)的技術(shù)手段，使蛋白提取率更高，為核桃多肽的高蛋白含量提供 了保證； (3) 四種酶分時段加入，分別控制各時段酶解的pH值，使四種酶都能發(fā)揮最大的酶解 作用，綜合考慮四種酶的特性，確定四種酶的添加順序依次為堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、中 性蛋白酶、菠蘿蛋白酶； (4) 采用超濾膜截流的方法，得到小分子量的核桃多肽； (5) 采用離子交換樹脂脫鹽的方法，脫除核桃多肽中的無機鹽成分，去除核桃多肽中 的咸味。
[0013] 本發(fā)明制備的核桃多肽制備過程中，核桃蛋白提取率高，經(jīng)四種酶分時段酶解得 到分子結(jié)構(gòu)不同的多肽，并對核桃多肽進行了抗氧化試驗，對核桃多肽的抗氧化性進行驗 證。
[0014] 1.核桃蛋白含量的測定。
[0015] 本發(fā)明所得的核桃多肽中核桃蛋白含量的測定采用凱氏定氮法，具體如下：精密 稱取0. 5g核桃蛋白，移入定氮瓶中，加入0. 2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20mL硫酸，稍搖勻后于 瓶口放一小漏斗，將瓶放于有小孔的石棉網(wǎng)上，小火加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫完全停 止后，加強火力，并保持瓶內(nèi)液體微沸，至液體呈藍綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5小時。 取下放冷,小心加 20mL水，放冷后，移入IOOmL容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容 量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法 做試劑空白試驗。通過凱氏定氣裝置皮應，2%的硎酸溶液捽收，0. 025mol/L的H2SO4滴定。
[0016] 根據(jù)公式蛋白含量

【權(quán)利要求】
1. 一種抗氧化核桃多肽的制備方法，其特征在于包括： 核桃柏的預處理：將核桃脫皮、脫油，得到脫脂核桃柏，經(jīng)粉碎至74 μ m -150 μ m ; 核桃柏的均質(zhì)：將粉碎后的核桃柏與水按重量比1:10-20混合，在35MPa-45MPa條件 下均質(zhì)，重復2-4次，使核桃柏充分均質(zhì)，得到核桃混懸液； 核桃蛋白的提?。合葘⑸鲜龊颂一鞈乙合♂?-10倍，在85 °C -KKTC下變性10 min-15min，再用lmol/L的NaOH溶液將其pH值調(diào)整為9-11，在50°C-55°C條件下堿溶 lh-2h，經(jīng)離心取上清液，用0. 5 mol/L的HC1溶液將上清液的pH值調(diào)至5-6,經(jīng)離心，將收 集的沉淀用NaHC03溶液調(diào)至中性后，經(jīng)噴霧干燥得核桃蛋白； 酶解前處理：將核桃蛋白與水按重量比1:8-15制備成核桃蛋白混懸液，在85°C -95°C 條件下保溫l〇min-20min，破壞蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)利于其水解； 酶解反應：將上述核桃蛋白混懸液冷卻至45 °C -55°C，先將pH值調(diào)節(jié)至9-11加入 3000-4000u/g的堿性蛋白酶，酶解30min，然后將pH值調(diào)至8-10加入5000-6000u/g木瓜 蛋白酶，繼續(xù)酶解30min，再將pH值調(diào)至7-8. 5加入6000-7000u/g中性蛋白酶，繼續(xù)酶解 30min，最后將pH值調(diào)至6-7. 5加入2000-3000u/g菠蘿蛋白酶進行酶解，3h-5h后酶解反應 的水解度基本不變時，迅速將核桃蛋白混懸液的溫度調(diào)至90°C -KKTC，恒溫15min-20min 后，停止酶解反應； 分離：將步驟（5)得到的酶解液pH值調(diào)至5-6經(jīng)離心取上清液，再將上清液經(jīng)超濾膜 超濾，得到含小分子多肽的核桃多肽溶液； 脫鹽：選用強酸性陽離子樹脂和強堿性陰離子樹脂分別處理核桃多肽溶液； 濃縮干燥：將步驟（7)得到的核桃多肽溶液濃縮至原溶液的1/4-1/3后，進行噴霧干 燥。
2. 如權(quán)利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制備方法，其特征在于：步驟（1)中的核桃脫 油是通過C02超臨界萃取提油或壓榨脫油實現(xiàn)的。
3. 如權(quán)利要求1所述的抗氧化核桃多的制備方法，其特征在于：步驟（2)中的核桃柏的 均質(zhì)，重復3次。
4. 如權(quán)利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制備方法，其特征在于：步驟（6)中的上清液 經(jīng)分子量為5000的超濾膜，得到分子量不超過5000的核桃多肽溶液。
5. 如權(quán)利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制備方法，其特征在于：步驟（6)中的上清液 經(jīng)分子量為8000的超濾膜，得到分子量不超過8000的核桃多肽溶液。
6. 如權(quán)利要求1所述的抗氧化核桃多肽的制備方法，其特征在于：步驟（8)是在-0. 07 MPa- -0. 09MPa，50°C -60°C的條件下通過旋蒸濃縮至原溶液的1/4-1/3后，用噴霧干燥器 在進口溫度70°C -85°C，出口溫度170°C _190°C，流量800mL/h-1200mL/h的條件下進行噴 霧干燥，得到核桃多肽粉。
【文檔編號】C12P21/06GK104293870SQ201410495148
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年9月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月25日
【發(fā)明者】李鵬, 杜美麗, 趙良啟, 郝常艷 申請人:汾州裕源土特產(chǎn)品有限公司