本發(fā)明屬于制藥領(lǐng)域，具體涉及一種抗帕金森病藥物的長效緩釋制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
：雷沙吉蘭是第二代單胺氧化酶抑制劑，能阻滯神經(jīng)遞質(zhì)多巴胺的分解，與第一代單胺氧化酶抑制劑，包括司來吉蘭、思吉寧、咪哆吡、金思平等相比，抑制作用更強，對長期應(yīng)用多巴制劑藥效出現(xiàn)衰退的患者也有改善的作用。另外，雷沙吉蘭的代謝產(chǎn)物是一種無活性的非苯丙胺物質(zhì)，副作用小，更重要的是，該藥有一定的癥狀緩解的作用，并有較多證據(jù)證明這類藥物有一定的神經(jīng)保護的作用。雷沙吉蘭目前在臨床上僅有口服片劑?？诜瑒╇m然服用方便，但帕金森病人隨著病情的發(fā)展，往往伴有神經(jīng)損傷，出現(xiàn)記憶力減退，從而導(dǎo)致漏服藥物，無法規(guī)律服用藥物，導(dǎo)致病情進一步惡化。再者帕金森后期患者常常具有吞咽困難，不適合服用藥物。另外，口服給藥會有明顯的血藥濃度波動，加重副作用，出現(xiàn)劑末現(xiàn)象和開關(guān)現(xiàn)象。專利cn103494766公開了一種雷沙吉蘭經(jīng)口崩解組合物，雖然解決了藥品吞咽困難的問題，但是無法解決漏服藥物，以及頻繁用藥等問題。專利cn1762495公開了一種治療帕金森病的長效緩釋制劑的制備工藝，使用有機溶劑把藥物和生物可降解的藥用高分子輔料溶解，將有機溶劑相注入到用藥用水溶性高分子配制的連續(xù)水相中以形成微球，然后揮發(fā)掉有機溶劑，過濾得到緩釋微球即o/w工藝；或用有機溶劑溶解藥物和生物可降解的藥用高分子輔料，然后采用噴霧干燥法制得微球；或用有機溶解劑把藥物和生物可降解的藥用高分子輔料充分溶解配制成有機溶液，將其噴霧至一有機非溶劑或水中，經(jīng)萃取而制成微球即o/o工藝或o/w工藝。使用o/w工藝，由于藥物是水溶性活性的，未有任何保護措施、會直接暴露在外部水相而降低包封率，因此，難以獲取具有高含量和高包封率的微球。而使用o/o工藝，需要用到大量的有機溶劑，并且需要去除使用的全部有機溶劑，工藝復(fù)雜。使用噴霧干燥第一是需要有高溫使原輔料造成降解，且有機溶劑噴霧干燥，需要防爆，有一定的危險性。專利cn105769771公開了一種艾塞那肽緩釋微球組合物的制備方法，首先將原料藥使用強極性溶劑溶解，然后將聚合物用弱極性溶劑溶解，然后將強極性溶劑加入弱極性溶劑中形成懸濁液或均一溶液，后加入淬滅劑中，得到微粒。其中淬滅劑選自硅油、液體石蠟、礦物油，需要用到大量的有機溶劑，并且需要去除使用的全部有機溶劑，工藝復(fù)雜。m.fernández等人的文獻《controlledreleaseofrasagilinemesylatepromotesneuroprotectioninarotenone-inducedadvancedmodelofparkinson’sdisease》公開了一種使用50/50plga作為緩釋材料，采用o/w和w/o/w工藝制備雷沙吉蘭緩釋微球的方法。但該方法制備得到微球釋放周期較短，僅有兩周，且藥物的載藥量較低，相同劑量下，注射的藥物總量偏大，不利于患者的順應(yīng)性。專利cn103338752公開了一種利培酮緩釋微球組合物，其公開了使用兩種不同粘度的聚合物來制備微球，以此來達到調(diào)節(jié)釋放目的，消除延遲釋放期。但是使用兩種不用粘度的聚合物同時溶于有機溶劑中然后制備微球，一方面會增加處方復(fù)雜性，不同粘度聚合物有可能帶來處方相容性問題，另一方面該方法應(yīng)用在本發(fā)明還會造成產(chǎn)品突釋的問題。專利cn104010629公開了一種曲普瑞林微球藥物組合物，其通過在微球中添加葡萄糖或甘露醇來調(diào)節(jié)釋放，提高藥物的初始釋放量，從而使藥物盡快起效。但是使用添加釋放調(diào)節(jié)劑的方法一方面同樣增加處方復(fù)雜性，有可能帶來處方相容性問題，另一方面該方法應(yīng)用在本發(fā)明也還是會造成產(chǎn)品突釋的問題。技術(shù)實現(xiàn)要素：發(fā)明目的：為解決現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明提供一種雷沙吉蘭長效緩釋組合物及其制備方法。本發(fā)明改善了目前臨床上只有口服形式進行給藥的雷沙吉蘭藥物的依從性，并且改善了目前文獻公開的緩釋微球制劑藥物組合物釋放周期短，載藥量低的缺點，且無延遲釋放期。本發(fā)明人按照目前公開的技術(shù)資料，嘗試將雷沙吉蘭制備成釋放周期更長的緩釋微球，按照本領(lǐng)域技術(shù)人員常用技術(shù)手段，使用65/35-100/0的plga替換50/50的plga，發(fā)現(xiàn)確實可以將微球的釋放周期延長，但是發(fā)現(xiàn)，微球出現(xiàn)了延遲釋放期。在該領(lǐng)域，解決微球延遲釋放期的常用技術(shù)有利用不同粘度型號的聚合物混合使用，以及添加釋放調(diào)節(jié)劑等方法，但這些方法一個是均增加了處方復(fù)雜性，有可能帶來處方相容性間題，另一個是，應(yīng)用在本發(fā)明中會造成產(chǎn)品突釋的問題。另外本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在微球常規(guī)粒徑范圍內(nèi)，隨著微球粒徑的減小，微球釋放周期以及延遲釋放期確實會變短，但是變化均不是明顯的。但是本發(fā)明人卻創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)，將微球制備成納米至亞微米級別，微球釋放行為卻發(fā)生了明顯的改變，第一是無延遲釋放期且無突釋，第二是釋放周期明顯縮短。且本發(fā)明人奇跡的發(fā)現(xiàn)納米至亞微米級別微球的釋放期與普通粒徑微球的延遲釋放期接近，甚至在一些實施例中相同。因此本發(fā)明人想到將兩種不同粒徑的微球混合使用，不僅可以得到釋放周期較長的產(chǎn)品，且無延遲釋放期。另外本發(fā)明人實驗發(fā)現(xiàn)，使用目前公知技術(shù)，無法得到高載藥量和包封率的產(chǎn)品。但是按照本發(fā)明公開的技術(shù)，卻能得到高載藥量和高包封率的微球。具體地，為實現(xiàn)本發(fā)明的技術(shù)目的，本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種治療帕金森病藥物的長效緩釋制劑，所述長效緩釋制劑為微球，所述微球包含雷沙吉蘭或其藥物學(xué)可接受的鹽和生物可降解生物相容性高分子，所述微球包括平均粒徑為0.5-5μm的微球和平均粒徑為20-150μm的微球。所述平均粒徑為0.5-5μm的微球占長效緩釋制劑的10-50wt％，平均粒徑為20-150μm的微球占50-90wt％。進一步優(yōu)選地，所述平均粒徑為0.5-5μm的微球占長效緩釋制劑的20-40wt％，平均粒徑為20-150μm的微球占60-80wt％。優(yōu)選地，一種治療帕金森病藥物的長效緩釋制劑，所述長效緩釋制劑為微球，所述微球包含雷沙吉蘭或其藥物學(xué)可接受的鹽和生物可降解生物相容性高分子，所述微球優(yōu)選包括平均粒徑為0.5-3μm的微球和平均粒徑為40-100μm的微球。所述平均粒徑為0.5-3μm的微球占長效緩釋制劑的10-50wt％，平均粒徑為40-100μm的微球占50-90wt％。進一步優(yōu)選地，所述平均粒徑為0.5-3μm的微球占長效緩釋制劑的20-40wt％，平均粒徑為40-100μm的微球占60-80wt％。優(yōu)選地，雷沙吉蘭或其藥學(xué)上可接受的鹽占長效緩釋制劑的10-50wt％。低含量藥物會是使總給藥重量增加，高載藥量可能會包封率下降，進一步優(yōu)選地，雷沙吉蘭或其藥學(xué)上可接受的鹽占長效緩釋制劑的20-40wt％。在一種優(yōu)選地實施方案中，所述生物可降解生物相容性高分子為聚(丙交酯-乙交酯)。進一步優(yōu)選地，所述聚(丙交酯-乙交酯)中，丙交酯和乙交酯的摩爾比為65∶35～100∶0。在臨床應(yīng)用上，藥物釋放時間越長越好，但是更長時間可能會一次給藥過多，不利于患者順應(yīng)性，因此在某些情況下，所述聚(丙交酯-乙交酯)中，丙交酯和乙交酯的優(yōu)選摩爾比為70∶30～95∶5。在臨床應(yīng)用上，藥物釋放時間越長越好，但是更長時間可能會一次給藥過多，不利于患者順應(yīng)性，因此在某些情況下，所述聚(丙交酯-乙交酯)中，丙交酯和乙交酯的更優(yōu)選摩爾比為75∶25～85∶15。在一種優(yōu)選地實施方案中，所述聚(丙交酯-乙交酯)的粘度范圍為0.2-0.8dl/g。進一步優(yōu)選地，所述聚(丙交酯-乙交酯)的粘度范圍為0.3-0.6dl/g。在一種優(yōu)選地實施方案中，所述聚(丙交酯-乙交酯)的分子量范圍21kda-89kda。在一種優(yōu)選地實施方案中，所述聚(丙交酯-乙交酯)的末端基為酯基或羧基。進一步優(yōu)選地，所述聚(丙交酯-乙交酯)的末端基為羧基。本發(fā)明所述長效緩釋制劑的釋放周期在4～12周。本發(fā)明進一步提出了一種治療帕金森病藥物的長效緩釋制劑的制備方法，包括如下步驟：a)將生物可降解生物相容性高分子溶于第一類有機溶劑，得到均一溶液a；b)將雷沙吉蘭或其藥物學(xué)可接受的鹽溶于能與第一類有機溶劑互溶的第二類有機溶劑，得均一溶液b；c)將步驟b)得到的均一溶液b加入步驟a)得到的均一溶液a中得到均一乳液c；d)將步驟c)得到的均一乳液c加入用藥用水溶性高分子配制的連續(xù)水相中以形成微球；優(yōu)選地，所述藥用水溶性高分子為聚乙烯醇；所述聚乙烯醇溶液濃度為0.5-4％；所述連續(xù)水相溫度為2-15℃，優(yōu)選4℃。e)去除步驟d)微球中的有機溶劑，過濾，洗滌；f)將步驟e)所得微球冷凍干燥，得到緩釋微球。優(yōu)選地，第一類有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中的任意一種。第二類有機溶劑選自乙醇、乙酸、鹽酸、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中的任意一種。進一步優(yōu)選地，第一類有機溶劑選自二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃中的任意一種。第二類有機溶劑選自乙醇、乙酸、二甲基亞砜、二甲基甲酰胺或二甲基乙酰胺中的任意一種。更進一步優(yōu)選地，第一類有機溶劑選自二氯甲烷。第二類有機溶劑選自乙醇、乙酸的任意一種。將步驟b)得到的溶液在加入步驟a)時采用超聲、渦旋、均質(zhì)或攪拌方式。將步驟c)得到的均一乳液c加入用藥用水溶性高分子配制的連續(xù)水相中時采用超聲、渦旋、均質(zhì)、高壓均質(zhì)或攪拌的方式。其中超聲功率在200-400w，渦旋轉(zhuǎn)速在2000-4000rpm，均質(zhì)速度在4000-20000rpm，高壓均質(zhì)在600-1500bar；攪拌速度在1000-3000rpm。優(yōu)選的，第一類有機溶劑與第二類有機溶劑的比例為2∶1-20∶1。進一步優(yōu)選的，第一類有機溶劑與第二類有機溶劑的比例為2∶1-10∶1。有益效果：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明提出的微球形式存在的藥物組合物，具有藥物長期釋放的性質(zhì)，可在超過一個月的時間里釋放雷沙吉蘭。本發(fā)明的特征在于通過在本發(fā)明的藥物組合物中使用2種不同粒徑微球的適宜組合，可以顯著減少血漿中雷沙吉蘭濃度的波動，且無明顯的延遲釋放期。本發(fā)明的另一個特征是在載藥量高的情況下，無藥物突釋現(xiàn)象。附圖說明圖1為實施例1、實施例1-2、實施例1-4和實施例1-6所得緩釋微球的釋放特性，從圖中可以看出，在普通粒徑范圍內(nèi)，即20-150μm粒徑范圍內(nèi)，雖然不同粒徑范圍微球釋放行為有差異，但是并不明顯；圖2為實施例1緩釋微球(標注為實施例1)、實施例2緩釋微球(標注為實施例2)、兩份實施例1與一份實施例2混合物(標注為實施例1+2)的體外釋放曲線；圖3為實施例3緩釋微球(標注為實施例3)、實施例4緩釋微球(標注為實施例4)、三份實施例1與一份實施例4混合物(標注為實施例3+4)的體外釋放曲線；圖4為實施例5緩釋微球(標注為實施例5)、實施例6緩釋微球(標注為實施例6)、三份實施例5與一份實施例6混合物(標注為實施例5+6)的體外釋放曲線；圖5為實施例7緩釋微球(標注為實施例7)、實施例8緩釋微球(標注為實施例8)、兩份實施例7與一份實施例8混合物(標注為實施例7+8)的體外釋放曲線。圖6為實施例9緩釋微球(標注為實施例9)、實施例10緩釋微球(標注為實施例10)、五份實施例9與一份實施例10混合物(標注為實施例9+10)的體外釋放曲線。圖7為實施例11緩釋微球(標注為實施例11)、實施例12緩釋微球(標注為實施例12)、三份實施例11與兩份實施例12混合物(標注為實施例11+12)的體外釋放曲線。具體實施方式下面對本發(fā)明技術(shù)方案進行詳細說明，但是本發(fā)明的保護范圍不局限于所述實施例。實施例1.緩釋微球制備。將8.00gplga(丙交酯/乙交酯＝65/35，下文同，均為丙交酯/乙交酯，0.65dl/g，71kda，酯基端基)溶于80.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將2.00g雷沙吉蘭溶于10.00g乙醇，得均一溶液b；在3000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的1.0％的聚乙烯醇水溶液中，使用2000rpm的機械攪拌器攪拌制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例2.緩釋微球的制備。將8.00gplga(65/35，0.65dl/g，71kda，酯基端基)溶于80.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將2.00g雷沙吉蘭溶于10.00g乙醇，得均一溶液b；在超聲條件下，功率300w，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的1.0％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，在900bar的壓力下高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球除去連續(xù)水相，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例3.緩釋微球的制備。將7.00gplga(75/25，0.5dl/g，57kda，羧基端基)溶于70.00g乙酸乙酯，得均一溶液a；將3.00g雷沙吉蘭溶于15.00g乙酸，得均一溶液b；在3000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的0.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用4000rpm的均質(zhì)機均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例4.緩釋微球的制備。將7.00gplga(75/25，0.5dl/g，57kda，羧基端基)溶于70.00g乙酸乙酯，得均一溶液a；將3.00g雷沙吉蘭溶于15.00g乙酸，得均一溶液b；在4000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的0.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，在1000bar的壓力下高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例5.緩釋微球的制備。將6.00gplga(85/15，0.4dl/g，46kda，羧基端基)溶于60.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將4.00g雷沙吉蘭溶于20.00g乙醇，得均一溶液b；在超聲條件下，功率300w，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的0.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用1000rpm的機械攪拌制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例6.緩釋微球的制備。將600gplga(85/15，0.45dl/g，51kda，羧基端基)溶于60.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將4.00g雷沙吉蘭溶于20.00g乙醇，得均一溶液b；在4000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的1.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，在1000bar的壓力下高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例7.緩釋微球的制備。將5.00gplga(100/0，0.65dl/g，73kda，酯基端基)溶于50.00g四氫呋喃，得均一溶液a；將5.00g雷沙吉蘭溶于25.00g二甲基亞砜，得均一溶液b；在超聲條件下，功率400w，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的0.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用1000rpm的機械攪拌制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例8.緩釋微球的制備。將5.00gplga(100/0，0.45dl/g，53kda，羧基端基)溶于50.00g四氫呋喃，得均一溶液a；將5.00g雷沙吉蘭溶于25.00g二甲基亞砜，得均一溶液b；在4000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入4℃的1.5％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，在1000bar的壓力下高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例9.緩釋微球的制備。將6.00gplga(75/25，0.6dl/g，69kda，酯基端基)溶于100.00g二甲基亞砜，得均一溶液a；將4.00g雷沙吉蘭溶于10.00g二甲基甲酰胺，得均一溶液b；在2000rpm的機械攪拌條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入10℃的3.0％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用1500rpm的機械攪拌制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例10.緩釋微球的制備。將6.00gplga(65/35，0.5dl/g，58kda，羧基端基)溶于150.00g二甲基甲酰胺，得均一溶液a；將4.00g雷沙吉蘭溶于8.00g乙酸，得均一溶液b；在4000rpm的均質(zhì)條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入10℃的3.0％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，在10000rpm的高速均質(zhì)條件下制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例11.緩釋微球的制備。將6.50gplga(85/15，0.75dl/g，81kda，羧基端基)溶于150.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將3.50g雷沙吉蘭溶于10.00g乙酸，得均一溶液b；在2000rpm的渦旋條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入15℃的4.0％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用600bar的高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例12.緩釋微球的制備。將6.50gplga(100/0，0.3dl/g，27kda，酯基端基)溶于50.00g二氯甲烷，得均一溶液a；將3.50g雷沙吉蘭溶于10.00g乙酸，得均一溶液b；在2000rpm的機械攪拌條件下，將溶液a加入溶液b得均一乳液c。將均一溶液c加入15℃的4.0％的聚乙烯醇連續(xù)水相中，使用1500bar的高壓均質(zhì)制備微球。然后升溫至40℃使有機溶劑揮發(fā)，之后過濾微球，并且使用注射用水清洗微球7次，然后冷凍干燥，得到緩釋微球。實施例13.微球工藝回收率的測定。分別取實施例1-12中凍干后得到的緩釋微球，稱重，然后計算工藝回收率，結(jié)果如表1所示。其中，工藝回收率＝凍干后微球重量/投料量*100％表1項目工藝回收率/％實施例187.5實施例286.7實施例389.3實施例483.2實施例590.5實施例684.2實施例789.5實施例883.9實施例990.3實施例1087.6實施例1191.5實施例1287.7實施例14.緩釋微球粒徑分布測定。采用激光粒度測試儀測定釋微球粒徑分布。泵速度40％，測定時間90s，等待時間30s，pids設(shè)置為“開”，測定次數(shù)為1。測定時，取緩釋微球適量，加入5-10滴1％的表面活性劑溶液，然后再加入1ml水，混勻。打開儀器，向樣品池中加樣，直至遮光度為8-12％，記錄測定結(jié)果，平行測定3次，取平均值，結(jié)果如表2所示。其中d10表示小于該粒徑的微球數(shù)量占總量的10％，d50表示中間粒徑，即小于該粒徑的微球占總量的50％，d90表示小于該粒徑的微球數(shù)量占總量的90％。表2項目d10/μmd50/μmd90/μm實施例138.6470.21113.88實施例20.510.902.17實施例329.5374.07118.68實施例40.581.101.96實施例535.3481.05138.05實施例60.612.754.36實施例727.4660.57112.89實施例80.672.533.84實施例923.1740.3160.08實施例100.490.621.08實施例1165.89108.4145.79實施例123.584.154.87實施例15.雷沙吉蘭含量測定。取緩釋微球精密稱定，加入乙腈分散微球，然后加入ph值為6.5的三乙氨-冰醋酸緩沖溶液-乙腈(52∶48)流動相溶解并定量至約100μg/ml的供試品。同法操作，配制對照品。使用hplc測定，結(jié)果如表3所示。含量為藥物量占微球重的百分含量。含量＝藥物量/微球量*100表3實施例16.緩釋微球釋放特性。緩釋微球的篩分：取實施例1凍干后部分緩釋微球，分別用100、115、150、175、230、325、500目篩網(wǎng)篩分，得到不同目數(shù)微球，標記為實施例1-1至實施例1-6，如表4所示。用于考察在普通粒徑范圍內(nèi)，即20-150μm范圍內(nèi)，不同粒徑微球的釋放行為差異。下表含義：例如實施例1-1表示將部分實施例1篩分后得到的100-115目的微球。表4項目目數(shù)實施例1-1100-115實施例1-2115-150實施例1-3150-175實施例1-4175-230實施例1-5230-325實施例1-6325-500分別取實施例1至實施例12制備的緩釋微球以及由實施例1篩分成不同粒徑的微球即實施例1-2、實施例1-4、實施例1-6進行體外釋放。測試方法：精密稱定微球(30mg)，加入100ml的ph值為7.4的pbs作為釋放介質(zhì)，于37℃水浴搖床中進行釋放實驗。搖床轉(zhuǎn)速100rpm，在固定的時間，取出樣品靜置，然后取上清液并過0.45μm微孔濾膜，同時補充新鮮的釋放介質(zhì)，使用hplc測定含量。每批次微球平行三份進行。釋放數(shù)據(jù)如下表5、表6以及圖1至圖7所示。通過實施例1-1、實施例1-4、實施例1-6釋放結(jié)果可知，在普通粒徑范圍內(nèi)，即20-150μm粒徑范圍內(nèi)，雖然不同粒徑范圍微球釋放行為有差異，但是并不明顯。通過實施例1、實施例3、實施例5、實施例7、實施例9、實施例11釋放行為可知，在普通粒徑范圍內(nèi)，即20-150μm之間，微球釋放期較長，但出現(xiàn)了延遲釋放期；通過實施例2、實施例4、實施例6、實施例8、實施例10、實施例12釋放數(shù)據(jù)可知，在納米至亞微米粒徑范圍內(nèi)，即0.5-5微米之間，微球釋放期較短，但無延遲釋放期且無突釋。而通過將納米至亞微米粒徑微球與普通粒徑微球按照一定的比例混合，如實施例1釋放周期為30天，延遲釋放期為10天，而實施例2釋放周期為10天，無延遲釋放期。那么可以將實施例1與實施例2組合使用。剛好實施例2微球負責(zé)組合藥物的前期釋放，實施例1微球負責(zé)后期釋放。若整個釋放周期需要的藥物劑量為3份，則實施例1提供兩份，實施例2提供一份。具體的若整個釋放周期需要的藥物劑量為30mg，則實施例1需要提供20mg藥物，即72.73mg微球(微球重量＝所需藥物量/含量)；實施例2需要提供10mg藥物，即37.17mg微球；以此類推三份實施例3與一份實施例4混合(釋放周期5.7周左右)、三份實施例5與一份實施例6混合(釋放周期8.6周左右)、兩份實施例7與一份實施例8混合(釋放周期12周左右)、五份實施例9與一份實施例8混合(釋放周期6周左右)、三份實施例11與兩份實施例12混合(釋放周期7周左右)，然后進行體外釋放實驗，即可以得到釋放周期4-12周，且無突釋和延遲釋放期的藥物組合物。混合的前提是納米到亞微米微球的釋放期能與普通粒徑微球的延遲釋放期剛好重疊。實施例2/4/6/8/10/12分別對應(yīng)的是實施例1/3/5/7/9/11的納米到亞微米粒徑微球，兩者混合可以達到較長釋放期并無延遲釋放期的目的。表5表6綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)在微球常規(guī)粒徑范圍內(nèi)，隨著微球粒徑的減小，微球釋放周期以及延遲釋放期確實會變短，但是變化均不明顯。另外創(chuàng)造性的發(fā)現(xiàn)，將微球制備成亞微米級別，微球釋放行為卻發(fā)生了明顯的改變，第一是無延遲釋放期且無突釋，第二是釋放周期明顯縮短。同時意外地發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的亞微米級別微球的釋放期與普通粒徑微球的延遲釋放期相同。通過將兩種不同粒徑的微球混合使用，不僅得到釋放周期較長的產(chǎn)品，且無延遲釋放期。且利用本技術(shù)方案可以得到高載藥量和高包封率的微球，通過在本發(fā)明的藥物組合物中使用2種不同粒徑微球的適宜組合，可以顯著減少血漿中雷沙吉蘭濃度的波動，且無明顯的延遲釋放期。同時，本發(fā)明在載藥量高的情況下，藥物無突釋。當前第1頁12