專(zhuān)利名稱(chēng)：用于遞送治療劑和/或診斷劑的體內(nèi)無(wú)銅催化的點(diǎn)擊化學(xué)的制作方法
用于遞送治療劑和/或診斷劑的體內(nèi)無(wú)銅催化的點(diǎn)擊化學(xué)相關(guān)申請(qǐng)案本申請(qǐng)要求2010年12月2日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)N0.12/958，889和2010年12月2日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)N0.61/419，082的優(yōu)先權(quán)。每個(gè)優(yōu)先權(quán)申請(qǐng)通過(guò)引用整體并入本文。序列表本申請(qǐng)含有已經(jīng)通過(guò)EFS-Web以ASCII格式提交并據(jù)此通過(guò)引用整體并入的序列表。2011年11月17日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為I麗310W0.txt并且大小為24，970字節(jié)。領(lǐng)域本發(fā)明涉及用(例如)在PET或NMR體內(nèi)成像中有用的18F或19F標(biāo)記肽或其它分子的方法。優(yōu)選地，通過(guò)可與蛋白質(zhì)、肽或其它分子共價(jià)連接的螯合部分使18F或19F與鋁或另一種金屬連接成綴合物[絡(luò)合物]。使用本文描述的技術(shù)，可在30min或更少時(shí)間內(nèi)制備具高比活度的18F或19F標(biāo)記分子并且適合用于成像技術(shù)中，無(wú)需HPLC純化標(biāo)記分子。可在適合體內(nèi)直接使用的鹽介質(zhì)中進(jìn)行標(biāo)記。在替代性實(shí)施方案中，可添加有機(jī)溶劑以提高標(biāo)記效率。盡管出于某些目的例如試劑盒配制，可添加穩(wěn)定劑，例如抗壞血酸、海藻糖、山梨糖醇或甘露糖醇，但是標(biāo)記分子在體內(nèi)條件下穩(wěn)定。在優(yōu)選實(shí)施方案中，可在體內(nèi)，例如使用抗體、抗體片段或包含活化部分，例如環(huán)辛炔、硝酮或疊氮化物的其它靶向分子生成18F或19F標(biāo)記分子。向受試者施用抗體或其它靶向分子并留出足夠時(shí)間以定位于靶組織后，施用包含相應(yīng)活性基團(tuán)，例如疊氮化物、硝酮或環(huán)辛炔的18F或19F標(biāo)記的可靶向構(gòu)建體。可靶向構(gòu)建體與靶向分子在原位形成共價(jià)鍵并且可為共價(jià)絡(luò)合物成像。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，所述組合物和方法不限于和18F或19F標(biāo)記部分一起使用，但是可用于遞送可與適當(dāng)活性基團(tuán)連接，同時(shí)保持功能活性的任何診斷劑和/或治療劑。非限制性實(shí)例包括藥物、毒素、放射性同位素、激素、酶、免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、siRNA、抗血管生成劑、生長(zhǎng)因子、促凋亡劑、細(xì)胞毒素劑、光敏治療劑、化療劑、染料、造影劑、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、增強(qiáng)劑和順磁離子。點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)也不限于在體內(nèi)使用，但是也可在體外使用以生成非常穩(wěn)定的綴合物。
背景技術(shù)：
正電子發(fā)射斷層顯像(PET)已成為診斷醫(yī)學(xué)中最突出的功能成像方式之一，靈敏度非常高(fmol)、分辨率高(4-10mm)并且可充分量化組織增生(Volkow等，1988，Am.J.Physiol.1maging3:142)0 雖然在腫瘤學(xué)中[18F]2-脫氧-2-氟-D-葡萄糖([18FjFDG)是最廣泛使用的功能顯像劑(Fletcher等,2008，J.Nucl.Med.49:480),但是對(duì)研發(fā)用于功能成像以補(bǔ)充并增強(qiáng)解剖成像方法的其它標(biāo)記化合物有濃厚興趣(Torigian等，2007，CACancer J.Clin.57:206)，特別是用目前使用的混合PET/計(jì)算機(jī)斷層成像系統(tǒng)。因此，需要有使發(fā)射正電子的放射性核素與各種生物和醫(yī)學(xué)目標(biāo)分子綴合的簡(jiǎn)便方法?？捎谜娮影l(fā)射體18F、 64CU、nC、66Ga、68Ga、76Br、94mTc、86Y和124I標(biāo)記肽或其它小分子。PET同位素的低發(fā)射能滿足需要以在其產(chǎn)生通過(guò)PET相機(jī)成像的2個(gè)511keV Y射線之前將正電子離開(kāi)靶位點(diǎn)的距離減到最小。發(fā)射正電子的許多同位素在其衰變鏈中還具有其它發(fā)射物例如Y射線、α粒子或β粒子。還需要具有為純正電子發(fā)射體的PET同位素，以致將最小化所有劑量學(xué)問(wèn)題。同位素的半衰期也很重要，因?yàn)榘胨テ诒仨氉銐蜷L(zhǎng)以使同位素與靶向分子連接，將其注射至患者體內(nèi)，使產(chǎn)物定位，從非靶組織中清除，然后成像。如果半衰期太長(zhǎng)，比活度可能不夠高以獲得清晰成像的足夠光子，并且如果半衰期太短，生產(chǎn)、商業(yè)流通和生物分布的所需的時(shí)間可能不足。因?yàn)槠湔娮影l(fā)射能低，無(wú)側(cè)向發(fā)射并且有適合半衰期，所以18F(i3 +635keV97%，t1/2110min)是最廣泛使用的PET發(fā)射同位素之一。常規(guī)性地，通過(guò)使18F與碳原子結(jié)合使18F與化合物連接(Miller等，2008，AngewChem Int Ed47:8998-9033),但是也已經(jīng)報(bào)道了與娃(Shirrmacher 等，2007，Biocon jCheml8:2085-89 ;Hohne 等，2008，Bioconj Cheml9:1871-79)和硼(Ting等，2008，F(xiàn)luorineCheml29:349-58)的連接。與碳的結(jié)合通常牽涉多步合成，包括多個(gè)純化步驟，這對(duì)于半衰期為IlOmin的同位素而言存在問(wèn)題。18F標(biāo)記肽的當(dāng)前方法通常牽涉低比活度試劑的標(biāo)記，試劑的HPLC純化，然后與目標(biāo)肽綴合。在綴合后常常再純化綴合物以獲得標(biāo)記肽的所需比活度。實(shí)例為Poethko等的標(biāo)記方法(J.Nucl.Med.2004; 45:892-902)，其中首先合成并純化 4_[18F]氟苯甲醒(Wilson 等，J.Labeled Compounds and Radiopharm.1990; XXVI11:1189-1199)，然后與肽綴合。然后通過(guò)HPLC純化肽綴合物以去除用于驅(qū)動(dòng)綴合完成的過(guò)量肽。其它實(shí)例包括用琥珀酰[18F]氟苯甲酸酯(SFB)(例如，Vaidyanathan等，1992，Int.J.Rad.Appl.1nstrum.B19:275) > 其它酸基化合物(Tada 等，1989，Labeled Compd.Radiopharm.XXVI1: 1317 ；ffester 等，1996, Nucl.Med.Biol.23:365 ；GuhIke 等，1994, Nucl.Med.Biol21:819)或點(diǎn)擊化學(xué)加成物(Li 等，2007，Bioconjugate Chem.18:1987)標(biāo)記。這些方法的總合成和配制時(shí)間范圍介于l_3h之間，大部分時(shí)間專(zhuān)用于標(biāo)記肽的HPLC純化以獲得體內(nèi)靶向所需的比活度。半衰期為2h，使18F與肽連接所需的所有操作是很大的負(fù)擔(dān)。進(jìn)行這些方法也很乏味并且需要使用特別設(shè)計(jì)用于生成標(biāo)記產(chǎn)物的設(shè)備和/或?qū)I(yè)化學(xué)家的努力。它們也不利于臨床環(huán)境中可常規(guī)性使用的試劑盒制劑。需要快速簡(jiǎn)單的18F標(biāo)記靶向部分例如蛋白質(zhì)或肽的方法，所述方法產(chǎn)生具有適合比活度和體內(nèi)穩(wěn)定性以便檢測(cè)和/或成像的靶向構(gòu)建體，同時(shí)將對(duì)專(zhuān)用設(shè)備或高度培訓(xùn)人員的需求減到最少并且減少了操作人員對(duì)高水平輻射的暴露。更優(yōu)選地，需要制備用于預(yù)靶向技術(shù)中的18F標(biāo)記靶向肽的方法。進(jìn)一步需要可提供進(jìn)行此類(lèi)新方法所需的組合物的預(yù)包裝試劑盒。發(fā)明概述在各個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及與用于PET或NMR成像的18F或19F標(biāo)記分子相關(guān)的組合物和方法。如本文所討論，本申請(qǐng)?zhí)岬?8F時(shí)，技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到可利用18F、19F或另一種結(jié)合金屬的放射性核素。在示例性方法中，18F與金屬結(jié)合并且18F-金屬絡(luò)合物與肽或其它分子上的配體連接。如以下所述，雖然優(yōu)選鋁，但是IIIA族金屬(鋁、鎵、銦和鉈)適于18F結(jié)合。镥也可能有用。金屬結(jié)合配體優(yōu)選為螯合劑，例如ΝΟΤΑ、ΝΕΤΑ、DOTA, DTPA和以下更詳細(xì)討論的其它螯合類(lèi)?？蛇x地，人們可首先使金屬與分子連接，然后添加18F以與金屬結(jié)合。技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到， 為了成像的目的，實(shí)際上可使任何遞送分子與18F連接，只要其含有可修飾，而不影響遞送分子與細(xì)胞或組織靶受體之間的配體-受體結(jié)合相互作用的可衍生基團(tuán)。雖然以下實(shí)施例主要涉及18F標(biāo)記肽部分，但是可用18F標(biāo)記可用其它類(lèi)型的遞送分子，例如寡核苷酸、激素、生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、趨化因子、血管生成因子、抗血管生成因子、免疫調(diào)節(jié)劑、蛋白質(zhì)、核酸、抗體、抗體片段、藥物、白細(xì)胞介素、干擾素、寡糖、多糖、月旨質(zhì)等，并且可用于成像目的。以下實(shí)施例中描述的對(duì)18F或其它試劑的預(yù)靶向遞送有用的示例性可靶向構(gòu)建體肽包括但不限于包含螯合部分的 MP449、IMP460、IMP461、IMP467, IMP469、IMP470、IMP471、IMP479.1MP485和MP487，所述螯合部分包括但不限于DTPA、N0TA、芐基_Ν0ΤΑ、Ν0ΤΑ的烷基或芳基衍生物、NODA-GA, C-NETA、琥珀?；?C-NETA和二 -叔丁基-N0DA。在某些實(shí)施方案中，示例性18F標(biāo)記肽可在利用雙特異性或多特異性抗體或抗體片段的預(yù)靶向方法中用作可靶向構(gòu)建體。在這種情況下，抗體或片段將包含與疾病或病狀相關(guān)的靶標(biāo)，例如腫瘤相關(guān)或自身免疫性疾病相關(guān)抗原或由病原生物例如病毒、細(xì)菌、真菌或其它微生物生成或展示的抗原的一個(gè)或多個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。第二結(jié)合位點(diǎn)將與可靶向構(gòu)建體特異性結(jié)合。使用雙特異性或多特異性抗體的預(yù)靶向方法在本領(lǐng)域眾所周知(見(jiàn)，例如，美國(guó)專(zhuān)利N0.6，962，702，其實(shí)施例部分通過(guò)引用并入本文)。類(lèi)似地，與可靶向構(gòu)建體結(jié)合的抗體或其片段在本領(lǐng)域也眾所周知，例如與HSG (組氨酸琥珀酰甘氨酸)結(jié)合的679單克隆抗體或與In-DTPA結(jié)合的734抗體(見(jiàn)美國(guó)專(zhuān)利N0.7，429，381,7, 563，439,7, 666，415和7，534，431，各自的實(shí)施例部分通過(guò)引用并入本文)。通常，在預(yù)靶向方法中首先施用雙特異性或多特異性抗體并使其與細(xì)胞或組織靶抗原結(jié)合。在未結(jié)合抗體從循環(huán)中清除的適當(dāng)時(shí)間后，例如向患者施用18F標(biāo)記的可靶向構(gòu)建體并且與位于靶細(xì)胞或組織的抗體結(jié)合，然后(例如)通過(guò)PET掃描獲取圖像。在替代性實(shí)施方案中，可標(biāo)記與受體例如生長(zhǎng)激素抑制素、奧曲肽(octreotide)、鈴蟾肽(bombesin)、葉酸鹽或葉酸鹽類(lèi)似物、RGD肽或其它已知受體配體直接結(jié)合的分子并用于成像。受體靶向劑可包括(例如)TA138、整聯(lián)蛋白ανβ3受體的非肽拮抗劑(Liu等，2003, Bioconj.Chem.14:1052-56)。在本領(lǐng)域中已知使用金屬螯合物的其它受體靶向成像方法并且可用于要求保護(hù)的方法的實(shí)踐中(見(jiàn)，例如，Andre等，2002，J.1norg.Biochem.88:1-6 ；Pearson 等，1996, J.Med., Chem.39:1361-71)?？沙上竦募膊』虿铑?lèi)型僅受用于靶向與疾病或病狀相關(guān)的細(xì)胞或組織的適合遞送分子的可用性限制。已知許多此類(lèi)遞送分子。例如，可通過(guò)公開(kāi)的方法用18F標(biāo)記與疾病組織或靶標(biāo)(例如癌)結(jié)合的任何蛋白質(zhì)或肽并用于檢測(cè)和/或成像。在某些實(shí)施方案中，此類(lèi)蛋白質(zhì)或肽可包括但不限于與腫瘤相關(guān)抗原(TAA)結(jié)合的抗體或抗體片段。通過(guò)所述方法用18F標(biāo)記任何已知的TAA結(jié)合抗體或片段并且(例如)通過(guò)PET掃描或其它已知技術(shù)用于腫瘤的成像和/或檢測(cè)。某些替代性實(shí)施方案牽涉使用無(wú)銅催化的點(diǎn)擊法遞送治療劑和/或診斷劑，例如放射性核素(例如，18F)、藥物、細(xì)胞毒素劑、毒素、激素、酶、免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、siRNA、抗血管生成劑、生長(zhǎng)因子、促凋亡劑、細(xì)胞毒素劑、光敏治療劑、化療劑、染料、造影劑、熒光標(biāo)記、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記、增強(qiáng)劑或順磁離子。優(yōu)選地，點(diǎn)擊化學(xué)牽涉包含活化部分(例如環(huán)辛炔、硝酮或疊氮基團(tuán))的靶向分子例如抗體或結(jié)合抗原的抗體片段與包含相應(yīng)活性部分(例如疊氮化物、硝酮或環(huán)辛炔 )的可靶向構(gòu)建體的反應(yīng)。靶向分子包含環(huán)辛炔時(shí)，可靶向構(gòu)建體將包含疊氮化物或硝酮或類(lèi)似活性部分。靶向分子包含疊氮化物或硝酮時(shí)，可靶向構(gòu)建體將包含環(huán)辛炔、炔或類(lèi)似活性部分?？捎?8F標(biāo)記可靶向構(gòu)建體或可與任何替代性診斷劑和/或治療劑，例如化療藥物綴合。點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)使得在靶向分子和可靶向構(gòu)建體之間形成非常穩(wěn)定的共價(jià)鍵。點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)可在體外發(fā)生以形成然后施用給受試者的高度穩(wěn)定的標(biāo)記靶向分子。在優(yōu)選的替代性實(shí)施方案中，點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)可在體內(nèi)發(fā)生。最初，向受試者施用抗體或包含活化部分的其它靶向分子并使其定位于靶細(xì)胞、組織、病原生物或其它靶標(biāo)上。然后向受試者施用包含適當(dāng)活性部分的可靶向構(gòu)建體。活化部分與活性部分之間的反應(yīng)具有足夠特異性，以致可靶向構(gòu)建體不與受試者體內(nèi)的其它非活化分子結(jié)合?？砂邢驑?gòu)建體與位于靶組織中的靶向分子不可逆結(jié)合。附圖簡(jiǎn)述將下列附圖包括在內(nèi)以說(shuō)明本發(fā)明的特殊實(shí)施方案并不意味著限于要求保護(hù)的主題的范圍。

圖1.通過(guò)微PET成像的荷瘤裸鼠體內(nèi)18F標(biāo)記試劑的生物分布。在注射(A)[18F]FDG、(B)經(jīng)抗 CEAX 抗 HSG bsMAb 預(yù)靶向的 Al [18F] IMP449, (C)單獨(dú)的 Al [18F] IMP449 (未經(jīng)bsMAb預(yù)靶向)后每個(gè)左側(cè)上帶有小的皮下LS174T腫瘤的3只裸鼠的冠狀切片。給出了在成像期結(jié)束時(shí)從動(dòng)物體內(nèi)摘除的組織的生物分布數(shù)據(jù)，表示為每克的注射劑量百分比(%ID/g)?？s寫(xiě):B，骨髓;H，心臟；K，腎臟；Τ，腫瘤。圖2.對(duì)給予在上側(cè)帶有35mg LS174T人結(jié)直腸癌異種移植物的裸鼠的預(yù)革巴向Al [18F] IMP449的動(dòng)態(tài)成像研究。上面3個(gè)圖分別示出了在120min成像期間以6個(gè)不同的5min間隔，取自以腫瘤周邊位置為中心的軀體部位的冠狀、矢狀和橫切面。在每張截面圖中左側(cè)的第一個(gè)圖像示出了十字準(zhǔn)線交叉點(diǎn)處腫瘤的定位，其用箭頭標(biāo)示。成像期間動(dòng)物部分向其右側(cè)傾斜。下面2個(gè)圖示出了冠狀面中集中于更前面的平面的另外的冠狀和矢狀面以標(biāo)示出在肝臟和腸道中的分布，而矢狀面在體內(nèi)更集中地交叉。縮寫(xiě):Cor，冠狀；FA，前臂；H，心臟；K，腎臟；Lv，肝臟；Sag，矢狀；Tr，橫切面；UB，膀胱。圖3.18F標(biāo)記的MP468鈴蟾肽類(lèi)似物的體內(nèi)組織分布。圖4.帶AR42J腫瘤的小鼠(n=5)在注射后2h18F_MP466和68Ga-MP466的生物分布比較。作為對(duì)照，單獨(dú)組(n=5)中的小鼠接受了過(guò)量未標(biāo)記的奧曲肽以證明受體特異性。圖5.頸部具有皮下AR42J腫瘤的小鼠在注射后2h18F_MP466和68Ga-MP466的PET/CT掃描冠狀切片。清楚可見(jiàn)在腫瘤和腎臟中積聚。圖6.具有皮下LS174T和SK-RC52腫瘤的BALB/c裸鼠在68Ga_MP288靜脈內(nèi)注射后 lh，6.0nmol1251-TF2 (0.37MBq)和 0.25nmoI68Ga-MP288 (5MBq)的生物分布。值作為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差給出(n=5)。圖7.用6.0nmol TF2預(yù)靶向后靜脈內(nèi)注射后lh5MBq FDG和5MBq68Ga-1MP288 (0.25nmol)的生物分布。值作為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差給出(n=5)。圖8.在右后肢(白色箭頭)上具有皮下LS174T腫瘤(0.1g)并且在左大腿肌肉(黑色箭頭)中有炎癥，接受了 5MBq18F-FDG并且于I天后間隔16h接受了 6.0nmol TF2和5MBq68Ga-1MP288 (0.25nmol)的 BALB/c 裸鼠的 PET/CT 圖像。18F-FDG 和 68Ga-MP288 注射后Ih為動(dòng)物成像。圖中示出了 FDG-PET掃描的3D體繪制(A)、腫瘤區(qū)域的橫切面(B)和預(yù)靶向免疫PET掃描的3D體繪制(C)、腫瘤區(qū)域的橫切面(D)。圖 9.16h 前 6.0nmol TF2 注射后 Ih0.25nmol Al18F-MP449 (5MBq)的生物分布，未預(yù)靶向的Al18F-MP449生物分布或Al [18F]生物分布。值作為平均值土標(biāo)準(zhǔn)偏差給出。圖10.右側(cè)(箭頭)具有皮下LS174T腫瘤(0.1g)，間隔16h靜脈內(nèi)接受了 6.0nmolTF2 和 0.25nmol A118F-1MP449 (5MBq)的 BALB/c 裸鼠的靜態(tài) PET/CT 成像研究。Al 18F-MP449后注射Ih為動(dòng)物成像。圖中示出了 3D體繪制(A)腫瘤區(qū)域后視圖和橫截面，(B)冠狀，(C)矢狀。圖11.使用帶末端炔的螯合部分和疊氮化物活化靶向分子，點(diǎn)擊化學(xué)綴合螯合劑部分與祀向分子。圖12.使用帶疊氮化物部分的螯合部分和帶末端炔的靶向分子，點(diǎn)擊化學(xué)綴合螯合劑部分與靶向分子。圖13.用于點(diǎn)擊化學(xué)的環(huán)辛炔衍生物。圖14.用于點(diǎn)擊化學(xué)的疊氮化物衍生物。圖15.用于點(diǎn)擊化學(xué)的硝酮衍生物。圖16.用于點(diǎn)擊化學(xué)的替代性環(huán)辛炔部分。圖17.用于點(diǎn)擊化學(xué)的替代性疊氮化物部分。圖18.1MP479 (SEQ ID NO: 52)的結(jié)構(gòu)。圖19.1MP485 (SEQ ID NO: 53)的結(jié)構(gòu)。圖20.MP487 (SEQ ID NO: 54)的結(jié)構(gòu)。圖21.二-叔丁基-N0DA-MPAA 的合成。圖22.NOTA的馬來(lái)酰亞胺綴合物的合成。發(fā)明詳述提供了以下定義以便理解本文的公開(kāi)內(nèi)容。未明確定義的術(shù)語(yǔ)根據(jù)其簡(jiǎn)單的普通含義使用。如本文所使用，“一種(a) ”或“一種(an) ”可指一項(xiàng)或一項(xiàng)以上。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“和”和“或”可用于指連接詞或轉(zhuǎn)折連詞。即，除非另有說(shuō)明，兩個(gè)術(shù)語(yǔ)應(yīng)理解為等同于“和/或”。如本文所使用，“約”指在數(shù)字的正或負(fù)10%以內(nèi)。例如，“約100”將指介于90和110之間的任何數(shù)字。如本文所使用，“肽”指長(zhǎng)度介于2-100個(gè)氨基酸殘基之間，長(zhǎng)度更優(yōu)選介于2-10個(gè)，更優(yōu)選介于2-6個(gè)氨基酸殘基的天然或非天然氨基酸的任何序列。“氨基酸”可為L(zhǎng)-氨基酸、D-氨基酸、氨基酸類(lèi)似物和氨基酸衍生物或氨基酸模擬物。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)“病原體”包括但不限于真菌、病毒、寄生物和細(xì)菌，包括但不限于人體免疫缺陷病毒(HIV)、 皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒、狂犬病病毒、流感病毒、乙型肝炎病毒、仙臺(tái)病毒(Sendai virus)、貓白血病毒、呼腸孤病毒(Reo virus)、脊髓灰質(zhì)炎病毒(polio virus)、人血清細(xì)小樣病毒、猿病毒40、呼吸道合胞病毒、小鼠乳腺瘤病毒、水痘帶狀皰疫病毒(Varicella-Zoster virus)、登革熱病毒(Dengue virus)、風(fēng)疫病毒、麻疫病毒、腺病毒、人T細(xì)胞白血病毒、愛(ài)波斯坦-巴爾病毒(Epstein-Barr virus)、鼠白血病病毒、腮腺炎病毒、水泡性口腔炎病毒、辛德華斯病毒(Sindbis virus)、淋巴細(xì)胞性脈絡(luò)叢腦膜炎病毒、撫病毒(wart virus)、藍(lán)舌病毒、無(wú)乳鏈球菌(Streptococcusagalactiae)、嗜肺軍團(tuán)菌(Legionella pneumophila)、釀月農(nóng)鏈球菌(Streptococcuspyogenes)、大腸桿菌(Escherichia coli)、淋病奈瑟球菌(Neisseria gonorrhoeae)、腦膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)、肺炎球菌(Pneumococcus)、B型流感嗜血桿菌(Hemophilus influenzae B)、蒼白密螺旋體(Treponema pallidum)、萊姆病螺旋體(Lyme disease spirochete)、銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)、麻風(fēng)分支桿菌(Mycobacterium leprae)、流產(chǎn)布魯氏菌(Brucella abortus)、結(jié)核分支桿菌(Mycobacterium tuberculosis)和破傷風(fēng)梭狀芽胞桿菌(Clostridium tetani)。如本文所使用，“輻解保護(hù)劑”指可添加到18F標(biāo)記絡(luò)合物或分子中以降低18F標(biāo)記絡(luò)合物或分子受輻解的分解速率的任何分子、化合物或組合物?？墒褂萌魏我阎椊獗Ｗo(hù)齊U，包括但不限于抗壞血酸。點(diǎn)擊化學(xué)最初將點(diǎn)擊化學(xué)方法構(gòu)想成通過(guò)以模塊化形式將小亞基連在一起快速生成絡(luò)合物的方法。(見(jiàn)，例如，Kolb 等，2004，Angew Chem Int Ed40:3004-31 ；Evans,2007，Aust J Chem60:384-95。)在本領(lǐng)域中已知各種形式的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，例如銅催化的Huisgenl, 3-偶極環(huán)加成反應(yīng)(Tornoe 等，2002，J Organic Chem67:3057-64)，常常也將其稱(chēng)為“點(diǎn)擊反應(yīng)”。其它替代方案包括環(huán)加成反應(yīng)，例如Diels-Alder反應(yīng)、親核取代反應(yīng)(特別是與如環(huán)氧化物和氮丙啶化合物的小張力環(huán))、脲化合物的羰基化學(xué)形成和牽涉碳-碳雙鍵的反應(yīng)，例如巰基-炔反應(yīng)中的炔。疊氮化物-炔Huisgen環(huán)加成反應(yīng)在還原劑存在下使用銅催化劑以催化末端炔基與第一分子連接的反應(yīng)。在包含疊氮化物部分的第二分子存在下，疊氮化物與活化炔反應(yīng)形成1，4- 二取代的1，2，3-三唑。銅催化的反應(yīng)在室溫下發(fā)生并且具足夠的特異性，以致常常不需要純化反應(yīng)產(chǎn)物。(Rostovstev 等，2002，Angew Chem Int Ed41:2596 ;Tornoe 等，2002，J Org Chem67:3057。)疊氮化物和炔官能團(tuán)很大程度上對(duì)含水介質(zhì)中的生物分子有惰性，使得在絡(luò)合物溶液中發(fā)生反應(yīng)。形成的三唑化學(xué)穩(wěn)定并且不受酶切割，使得點(diǎn)擊化學(xué)產(chǎn)物在生物系統(tǒng)中非常穩(wěn)定。然而，銅催化劑對(duì)活細(xì)胞有毒性，妨礙了生物學(xué)應(yīng)用。已經(jīng)建議將無(wú)銅催化的點(diǎn)擊反應(yīng)用于生命系統(tǒng)中生物分子的共價(jià)修飾。(見(jiàn)，例如,Agard等,2004，J Am Chem Socl26:15046-47。)無(wú)銅催化的反應(yīng)使用環(huán)張力代替銅催化劑以促進(jìn)[3+2]疊氮化物-炔環(huán)加成反應(yīng)(同上)。例如,環(huán)辛炔是包含內(nèi)部炔鍵的8-碳環(huán)結(jié)構(gòu)。閉環(huán)結(jié)構(gòu)促使對(duì)疊氮基團(tuán)有高度反應(yīng)活性而形成三唑的乙炔的鍵角大體上變形。因此，環(huán)辛炔衍生物可用于無(wú)需毒性銅催化劑的無(wú)銅催化的點(diǎn)擊反應(yīng)(同上)。Ning等報(bào)道了另一類(lèi)型的無(wú)銅催化的點(diǎn)擊反應(yīng)(2010，Angew Chem IntEd49:3065-68)，牽涉張力促進(jìn)的炔-硝酮環(huán)加成。為解決原環(huán)辛炔反應(yīng)的速率緩慢,吸電子基團(tuán)與相鄰三鍵連接(同上)。此類(lèi)經(jīng)取代的環(huán)辛炔的實(shí)例包括二氟化環(huán)辛炔、4-聯(lián)苯環(huán)辛炔醇和氮雜環(huán)辛炔(同上)。替代性無(wú)銅反應(yīng)牽涉張力促進(jìn)的炔-硝酮環(huán)加成以生成N-烷基化異 噁唑啉(同上)。據(jù)報(bào)道反應(yīng)具有異?？焖俚姆磻?yīng)動(dòng)力學(xué)并且用于一鍋三步法以定點(diǎn)修飾肽和蛋白質(zhì)(同上)。通過(guò)使適當(dāng)醛與N-甲基羥胺縮合制備硝酮并且在乙腈和水的混合物中發(fā)生環(huán)加成反應(yīng)(同上)。然而，試圖使用與硝酮標(biāo)記的單糖衍生物的反應(yīng)和Jurkat細(xì)胞中的代謝標(biāo)記不成功(同上)。
在一些情況下，可使用細(xì)胞的內(nèi)源合成途徑將用于點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)的活化基團(tuán)并入生物分子中。例如，Agard等(2004, J Am Chem Socl26:15046-47)證明在全乙酰化N-疊氮乙酰甘露糖胺的存在下在CHO細(xì)胞中表達(dá)的重組糖蛋白導(dǎo)致相應(yīng)的N-疊氮乙酰唾液酸生物并入糖蛋白的碳水化合物中。疊氮基衍生化糖蛋白與生物素化環(huán)辛炔特異性反應(yīng)以形成生物素化糖蛋白，而無(wú)疊氮基部分的對(duì)照糖蛋白仍未標(biāo)記(同上)。Laughlin等(2008，Science320:664-667)使用類(lèi)似技術(shù)代謝標(biāo)記用全乙?；疦-疊氮乙酰半乳糖胺孵育的斑馬魚(yú)胚胎中的細(xì)胞表面多糖。疊氮基衍生化多糖與二氟化環(huán)辛炔(DIFO)試劑反應(yīng)以使體內(nèi)多糖可視化。Diels-Alder反應(yīng)也已經(jīng)用于分子的體內(nèi)標(biāo)記。Rossin等(2010，Angew Chem IntEd49:3375-78)報(bào)道了在攜帶有反式-環(huán)辛烯(TCO)活性部分的腫瘤局部抗TAG72 (CC49)抗體和111In標(biāo)記的四嗪DOTA衍生物之間52%的體內(nèi)產(chǎn)率。向帶有結(jié)腸癌異種移植物的小鼠施用TCO標(biāo)記的CC49抗體，接著于I天后注射111In標(biāo)記的四嗪探針(同上)。通過(guò)在注射放射標(biāo)記探針后3h對(duì)活鼠的SPECT成像證明，放射標(biāo)記探針與腫瘤局部抗體的反應(yīng)導(dǎo)致位于腫瘤內(nèi)的明顯放射性，腫瘤與肌肉比例為13:1(同上)。結(jié)果證實(shí)了 TCO和四嗪標(biāo)記分子的體內(nèi)化學(xué)反應(yīng)。在美國(guó)專(zhuān)利N0.6，953,675(其實(shí)施例部分通過(guò)引用并入本文)中進(jìn)一步公開(kāi)了使用標(biāo)記部分的生物并入的抗體標(biāo)記技術(shù)。將此類(lèi)“美化(landscaped)”抗體制備成在糖基化位點(diǎn)具有活性酮基團(tuán)。所述方法牽涉在包含糖或糖前體的酮衍生物的培養(yǎng)基中表達(dá)用編碼在CHl或Vk結(jié)構(gòu)域中具有一個(gè)或多個(gè)N-糖基化位點(diǎn)的抗體的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。酮衍生化糖或前體包括N-乙酰丙酸基甘露糖胺和N-乙酰丙酸基巖藻糖。隨后使美化抗體與包含酮活性部分，例如酰肼、肼、羥氨基或氨基硫脲基團(tuán)的試劑反應(yīng)，以形成標(biāo)記靶向分子。與美化抗體連接的示例性試劑包括螯合劑(如DTPA)、藥物大分子(例如阿霉素-葡聚糖)和含有?；?酰肼的肽。如以下實(shí)施例中更詳細(xì)地討論，美化技術(shù)不限于生成包含酮部分的抗體，但是可代替用于將點(diǎn)擊化學(xué)活性基團(tuán)，例如硝酮、疊氮化物或環(huán)辛炔引入抗體或其它生物分子上。以下實(shí)施例提供了適合體外或體內(nèi)使用的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)的修改?？赏ㄟ^(guò)化學(xué)綴合或通過(guò)生物學(xué)并入形成活性靶向分子?？捎茂B氮基部分、經(jīng)取代的辛炔或炔基或硝酮部分活化靶向分子，例如抗體或抗體片段。靶向分子包含疊氮基或硝酮基時(shí)，相應(yīng)的可靶向構(gòu)建體將包含經(jīng)取代的辛炔或炔基，并且反之亦然。如以上所討論，可通過(guò)在活細(xì)胞中代謝并入產(chǎn)生此類(lèi)活性分子?？蛇x地，如以下實(shí)施例中進(jìn)一步討論，將此類(lèi)部分化學(xué)綴合至生物分子的方法在本領(lǐng)域中眾所周知，并且可利用任何此類(lèi)已知方法。公開(kāi)的技術(shù)可與以下描述的用于PET或NMR成像的18F或19F標(biāo)記方法組合使用，或可選地，可用于遞送可與適合活化的可靶向構(gòu)建體和/或靶向分子綴合的任何治療劑和/或診斷劑。18F標(biāo)記技術(shù) 已知用18F標(biāo)記分子的多種技術(shù)。表I列出了幾種更常報(bào)道的氟化方法的特性。通過(guò)碳的肽標(biāo)記牽涉18F通過(guò)親核取代與輔基結(jié)合，通常分2或3步標(biāo)記并純化輔基，與化合物連接，然后再次純化。這種通用方法已用于通過(guò)酰胺鍵、醛和“點(diǎn)擊化學(xué)”連接輔基(Marik等，2006，Bioconjug Cheml7:1017-21 ;Poethko等，2004，J Nucl Med45:892-902 ；Li等，2007，Bioconjug Cheml8:989-93)。最常用的酰胺鍵形成試劑為4_18F_氟苯甲酸N-琥珀酰亞胺酯(18F-SFB),但是已經(jīng)試驗(yàn)了許多其它類(lèi)別(Marik等，2006)。在一些情況下，例如當(dāng)使用18F標(biāo)記的活性酯酰胺形成基團(tuán)時(shí)，可能需要在偶聯(lián)反應(yīng)期間，在其切割之后保護(hù)肽上的某些基團(tuán)。合成這種18F-SFB試劑和隨后與肽的綴合需要許多合成步驟并且花費(fèi)約2-3h。Poethko等(2004)研發(fā)了一種更簡(jiǎn)單、更有效的18F-肽標(biāo)記方法，其中在約75-90min內(nèi)(包括干燥步驟)4_18F_氟苯甲醛試劑通過(guò)肟連接與肽綴合。更新的“點(diǎn)擊化學(xué)”方法在銅催化劑的存在下用乙炔或疊氮化物將18F標(biāo)記分子連接到肽上(Li等，2007 ；Glaser和Arstad, 2007，Bioconjug Cheml8:989-93)。疊氮化物和乙炔基之間的反應(yīng)形成三唑連接，三唑連接十分穩(wěn)定并且在肽上非常有效地形成，無(wú)需保護(hù)基。點(diǎn)擊化學(xué)(包括干燥步驟)在約75-90min內(nèi)生成高產(chǎn)率( 50%)的18F標(biāo)記肽。表1.所選18F-肽標(biāo)記方法的總結(jié)
權(quán)利要求
1.一種用18F標(biāo)記分子的方法，包括: a)使金屬-18F絡(luò)合物與螯合部分連接；并且 b)使所述螯合部分與分子連接形成18F標(biāo)記分子， 其中通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)使所述螯合部分與所述分子連接。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)選自:(i)硝酮與環(huán)炔；和(ii)疊氮化 物與環(huán)炔。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述環(huán)炔為環(huán)辛炔。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分子為蛋白質(zhì)或肽。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分子為選自抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、抗體融合蛋白、抗原結(jié)合抗體片段和親和體的靶向分子。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述分子為可靶向構(gòu)建體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，進(jìn)一步包括: c)向受試者施用靶向分子； d)留出足夠時(shí)間供所述靶向分子與靶抗原結(jié)合；并且 e)隨后向所述受試者施用所述可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體與所述靶向分子彡口口
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述金屬選自鋁、鎵、銦、镥和鉈。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述金屬為鋁。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述螯合部分選自DOTA、TETA、ΝΟΤΑ、NODA、NODA衍生物、(叔丁基)2N0DA、ΝΕΤΑ、C-NETA、L-NETA、S-NETA、NODA-MPAA、N0DA-MPAEM 和 NOTA 衍生物。
11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，進(jìn)一步包括: c)向受試者施用所述18F標(biāo)記分子；并且 d)使用PET掃描為所述受試者體內(nèi)的所述18F標(biāo)記分子的分布成像。
12.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，進(jìn)一步包括: c)向所述受試者施用所述靶向分子； d)使所述靶向分子定位于靶細(xì)胞、組織、器官或病原體上；并且 e)向所述受試者施用與所述金屬-18F絡(luò)合物結(jié)合的所述螯合部分； 其中所述螯合部分通過(guò)體內(nèi)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與所述靶向分子結(jié)合。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中向培養(yǎng)基中添加有機(jī)溶劑以使所述金屬-18F絡(luò)合物與螯合部分連接。
14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中通過(guò)加熱或微波照射使所述金屬-18F絡(luò)合物與所述螯合部分連接。
15.一種向靶細(xì)胞、組織或病原體遞送診斷劑和/或治療劑的方法，包括: a)使至少一種診斷劑和/或治療劑與可祀向構(gòu)建體連接； b)向受試者施用靶向分子；并且 c)向所述受試者施用所述可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與所述靶向分子結(jié)合。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)選自:(i)硝酮與環(huán)炔；和(ii)疊氮化物與環(huán)炔。
17.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述環(huán)炔為環(huán)辛炔。
18.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述靶向分子選自抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、抗體融合蛋白、抗原結(jié)合抗體片段和親和體。
19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述診斷劑或治療劑選自放射性核素、細(xì)胞毒素劑、藥物、毒素、寡核苷酸、siRNA、促凋亡劑、抗血管生成劑、酶、激素、免疫調(diào)節(jié)劑、硼化合物、光敏劑、熒光化合物、化學(xué)發(fā)光化合物、生物發(fā)光化合物、染料、順磁離子和造影劑。
20.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述診斷劑為18F-金屬絡(luò)合物。
21.一種治療疾病的方法，包括: a)使至少一種治療劑與可靶向構(gòu)建體連接； b)向受試者施用靶向分子，其中所述靶向分子與與所述疾病相關(guān)的抗原結(jié)合；并且 c)向所述受試者施用所述可靶向構(gòu)建體，其中所述可靶向構(gòu)建體通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與所述靶向分子結(jié)合。
22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述可靶向構(gòu)建體包含螯合部分并且所述治療劑與所述螯合部分結(jié)合。
23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)選自:(i)硝酮與環(huán)炔；和(ii)疊氮化物與環(huán)炔。
24.根據(jù)權(quán)利要 求23所述的方法，其中所述環(huán)炔為環(huán)辛炔。
25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述靶向分子選自抗體、單克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、抗體融合蛋白、抗原結(jié)合抗體片段和親和體。
26.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述疾病選自癌癥、心血管病、代謝病、傳染病、炎癥性疾病、自身免疫性疾病、免疫功能紊亂疾病、移植物抗宿主病、器官移植排斥、神經(jīng)病、淀粉樣變性、I型或2型糖尿病、肌萎縮性側(cè)索硬化(ALS)、帕金森氏癥、亨廷頓氏舞蹈病、纖維蛋白凝塊、動(dòng)脈粥樣硬化、心肌缺血、心肌梗塞、肺栓塞和阿爾茨海默病。
27.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述靶向分子與選自以下的抗原結(jié)合:AFP、APRIL、B7、BCMA、BLyS、碳酸酐酶 IX、CCCL19、CCCL21、CCR4、CSAp、CD 1、CD la、CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD11A、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、IGF-1R、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD29、CD30、CD32b、CD33、CD37、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD52、CD54、CD55、CD59、CD64、CD66a-e、CD67、CD70、CD74、CD79a、CD80、CD83、CD95、CD126、CD133、CD138、CD147、CD154、CEACAM5、CEACAM-6、補(bǔ)體因子 C3、C3a、C3b、C5a、C5、CXCR2、CXCR4、CXCR7、CXCL12、纖連蛋白的 ED-B、EGFR、EGP-1 (TROP2)、EGP-2、因子 H、FHL-U Flt_3、葉酸鹽受體、GRO-β、HLA-DR、ΗΜ1.24、HMGB-1、缺氧誘導(dǎo)因子(HIF) ,HIF-1 α、ΗΜ1.24、la、胰島素樣生長(zhǎng)因子-1 (IGF-1)、IFN- Y、IFN-α、IFN-β、IL-2、IL-4R、IL-6R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17、IL-18、IL-25、IP_10、Le(y)、MAGE、mCRP、MCP-l、MIP-lA、MIP_lB、MIF、MUC1、MUC2、MUC3、MUC4、MUC5a_c、MUC16、NCA-95、NCA-90、PlGF, PSMA, RANTES, TlOl、TAC、TACI> TAG、肌腱蛋白、Tn 抗原、Thomson-Friedenreich 抗原、腫瘤壞死抗原、TNF- α、TRAIL受體(Rl和R2)、VEGF、致癌基因產(chǎn)物、gp41、gpl20、β -淀粉樣蛋白、S0D1、纖維蛋白、LDL、糖蛋白Ilb/IIIa、ICAM-1、整聯(lián)蛋白α ν β3、葉酸鹽受體I和心肌肌球蛋白。
28.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述治療劑選自免疫調(diào)節(jié)劑、激素、細(xì)胞毒素齊 、藥物、毒素、酶、反義寡核苷酸、硼化合物、光敏劑和放射性核素。
29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長(zhǎng)因子、淋巴毒素、腫瘤壞死因子、造血因子、集落刺激因子、干擾素、促紅細(xì)胞生成素、血小板生成素或其組合。
30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述免疫調(diào)節(jié)劑選自IL-1、IL-2、IL_3、IL-6、IL-10、IL-12、IL-18、IL-21、粒細(xì)胞-集落刺激因子(G-CSF)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞-集落刺激因子(GM-CSF)。
31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述放射性核素選自225Ac、68Ga、67Ga、9°Y、86Y、111In, 131 1 , 1251 , 1231 , 99mTc,94mTc,186Re,188Re, I77Lu、62Cu、64Cu、67Cu、212B1、213B1、32P、nC、13N、150、76Br 和 211At。
32.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述藥物選自長(zhǎng)春花生物堿、蒽環(huán)類(lèi)抗生素、表鬼臼毒素(epipodophyllotoxin)、紫杉燒(taxane)、抗代謝物、燒化劑、抗生素、C0X-2抑制劑、 抗有絲分裂劑、抗血管生成劑、凋亡劑、阿霉素(doxorubicin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、泰素(taxol)、CPT-11、喜樹(shù)堿(camptothecin)、氮芥、燒基磺酸鹽、亞硝基脲、三氮烯(triazene)、葉酸類(lèi)似物、C0X-2抑制劑、嘧啶類(lèi)似物、嘌呤類(lèi)似物、鉬配位絡(luò)合物、環(huán)磷酰胺、依托泊苷(etoposide)、卡氮芥(carmustine)、長(zhǎng)春新堿(vincristine)、丙卡巴肼(procarbazine)、強(qiáng)的松(prednisone)、甲氨蝶呤、博來(lái)霉素(bleomycin)、地塞米松(dexamethasone)、亞葉酸(Ieucovorin)、丁酸苯酯、苔蘚抑素-1 (bryostatin-Ι)和激素。
33.根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中所述毒素選自篦麻毒素(ricin)、相思豆毒素(abrin)、DNA 酶 1、金黃色葡萄球菌腸毒素-A(Staphylococcal enterotoxin-A)、美洲商陸抗病毒蛋白、白樹(shù)毒素(gelonin)、白喉毒素(diphtheria toxin)、假單胞菌外毒素(Pseudomonas exotoxin)和假單胞菌內(nèi)毒素(Pseudomonas endotoxin)。
34.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述自身免疫性疾病選自免疫介導(dǎo)的血小板減少、急性特發(fā)性血小板減少性紫癜、慢性特發(fā)性血小板減少性紫癜、皮肌炎、干燥綜合征(Sjogren’s syndrome)、多發(fā)性硬化、西登哈姆氏舞蹈病(Sydenham’s chorea)、重癥肌無(wú)力、全身性紅斑狼瘡、狼瘡性腎炎、風(fēng)濕熱、多腺性綜合征、大皰性類(lèi)天皰瘡、糖尿病、亨-舍二氏紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、鏈球菌感染后腎炎、結(jié)節(jié)性紅斑、高安氏動(dòng)脈炎(Takayasu's arteritis)、艾迪生氏病(Addison’s disease)、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)節(jié)病、潰瘍性結(jié)腸炎、多形紅斑、IgA腎病、結(jié)節(jié)性多動(dòng)脈炎、強(qiáng)直性脊柱炎、肺出血性腎炎綜合征(Goodpasture’s syndrome)、血栓閉塞性脈管炎、原發(fā)性膽汁性肝硬化、橋本氏甲狀腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、甲狀腺毒癥、硬皮病、慢性活動(dòng)性肝炎、多肌炎/皮肌炎、多軟骨炎、尋常型天皰瘡、韋格納肉芽腫(Wegener’s granulomatosis)、膜性腎病變、肌萎縮性側(cè)索硬化、脊髓癆、巨細(xì)胞性動(dòng)脈炎/多肌痛、惡性貧血、急進(jìn)性腎小球腎炎和纖維性肺泡炎。
35.根據(jù)權(quán)利要求25所述的方法，其中所述抗體選自hRl(抗IGF-1R)、hPAM4(抗胰腺癌粘蛋白)、hA20 (抗 CD20)、hA19 (抗 CD 19)、hIMMU31 (抗 AFP)、hLLl (抗 CD74)、hLL2 (抗 CD22)、hMu-9 (抗 CSAp)、hL243 (抗 HLA-DR)、hMN-14 (抗 CEACAM5)、hMN-15 (抗CEACAM6)、hRS7 (抗 EGP-1)、hMN-3 (抗 CEACAM6)、Ab 124 (抗 CXCR4)、Ab 125 (抗 CXCR4)、CC49 (抗 TAG-72)、Tn (抗 PSMA)、J591 (抗 PSMA)、HuJ591 (抗 PSMA)、AB-PG1-XG1-026 (抗PSMA 二聚體)、D2/B (抗 PSMA)、G250 (抗碳酸酐酶 IX)、阿侖單抗(alemtuzumab)(抗CD52)、貝伐單抗(bevacizumab)(抗 VEGF)、西妥昔單抗(cetuximab)(抗 EGFR)、吉妥單抗(gemtuzumab)(抗 CD33)、替伊莫單抗(ibritumomab tiuxetan)(抗 CD20)、帕尼單抗(panitumumab)(抗 EGFR)、利妥昔單抗(rituximab)(抗⑶20)、托西莫單抗(tositumomab)(抗 CD20)、GAlOl (抗 CD20)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(抗 ErbB2)、h679 (抗 HSG)、h734 (抗 DTPA)、阿巴伏單抗(abagovomab)(抗 CA125)、阿昔單抗(abciximab)(抗⑶41)、阿達(dá)木單抗(adalimumab)(抗TNF-α )、阿非莫單抗(afelimomab)(抗TNF-α )、阿德木單抗(adecatumumab)(抗 EpCAM)、培化阿珠單抗(alacizumab pegol)(抗 VEGFR2)、ALD518 (抗IL6)、麻安莫單抗(anatumomab mafenatox)(抗 TAG72)、阿塞珠單抗(aselizumab)(抗CD62L)、阿利珠單抗(atIizumab)(抗IL-6R)、巴皮紐阻單抗(bapineuzumab)(抗抗β -淀粉樣蛋白)、巴利昔單抗(basiliximab)(抗CD25)、貝那利珠單抗(benralizumab)(抗⑶125)、貝伐單抗(bevacizumab)(抗VEGF-A)、比西單抗(biciromab)(抗纖維蛋白 II)、貝倫妥單抗-維多汀(brentuximab vedotin)(抗 0)30)、brodalumab (抗IL-17)、卡妥索單抗(catumaxomab)(抗 EpCAM)、西地珠單抗(cedelizumab)(抗⑶4)、賽妥珠單抗(certolizumab pegol)(抗 TNF-α )、西妥昔單抗(cetuximab)(抗 EGFR)、克立昔單抗(clenoliximab)(抗 CD4)、可那木單抗(conatumumab)(抗 TRAIL-R2)、decetuzumab (抗 CD40)、達(dá)利珠單抗(daclizumab)(抗 CD25)、達(dá)雷木單抗(daratumumab)(抗 CD38)、依庫(kù)麗單抗(eculizumab)(抗 C5)、艾西莫單抗(elsiIimomab)(抗 IL-6)、厄馬索單抗(ertumaxomab)(抗HER2/neu)、埃達(dá)珠單抗(etaracizumab)(抗整聯(lián)蛋白α ν β 3)、法索單抗(fanolesomab)(抗CD15)、衛(wèi)材單抗(farletuzumab)(抗葉酸鹽受體 I)、fexakinumab (抗 IL-22)、芳妥珠單抗(fontolizumab)(抗 IFN- Y )、夫蘇木單抗(fresolimumab)(抗TGF-β )、羅氏單抗(gantenerumab)(抗β -淀粉樣蛋白)、加維莫單抗(gaviIimomab)(抗 CD147)、吉妥單抗奧唑米星(gemtuzumab ozogamicin)(抗 CD33)、戈利木單抗(golimumab)(抗TNF-α )、魯昔單抗(gomiliximab)(抗⑶23)、伊巴珠單抗(ibalizumab)(抗⑶4)、英西單抗(imciromab)(抗肌球蛋白)、英夫利昔單抗(infliximab)(抗 TNF- α )、英妥木單抗(intetumumab)(抗 CD51)、伊諾莫單抗(inolimomab)(抗CD25)、伊匹單抗(ipiIimumab)(抗 CD152)、伊妥木單抗(iratumumab)(抗 CD30)、itoIizumab (抗 CD6)、Iebr ikizumab (抗 IL-13)、林妥珠單抗(Iintuzumab)(抗 CD33)、魯卡木單抗(Iucatumumab)(抗 CD40)、馬帕木單抗(mapatumumab)(抗 TRAIL-R1)、馬妥珠單抗(matuzumab)(抗 EGFR)、美泊利單抗(mepoIizumab)(抗 IL-5)、mogamuIizumab (抗CCR4)、莫羅單抗-0)3 (muromonab-Q)3)(抗 0)3)、奈昔木單抗(necitumumab)(抗 EGFR)、ponezumab (抗 β -淀粉樣蛋白)、PR0140 (抗 CCR5)、雷莫蘆單抗(remucirumab)(抗VEGFR2)、羅利珠單抗(rontalizumab)(抗 IFN-α )、魯利單抗(rupIizumab)(抗 Q340L)、替奈昔單抗(teneliximab)(抗⑶40)、替利珠單抗(teplizumab)(抗⑶3)、TGN1412 (抗0)28)、妥珠單抗(tocilizumab)(抗 IL-6R)、托西莫單抗(tositumomab)(抗 0)20)、曲妥珠單抗(trastuzumab)(抗HER2/neu)、曲加珠單抗(tregalizumab)(抗CD4)、維西珠單抗(visilizumab)(抗 0)3)和扎木單抗(zanolimumab)(抗 0)4)。
36.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，進(jìn)一步包括:d)使所述靶向分子或可靶向構(gòu)建體在細(xì)胞中表達(dá)； e)在包含疊氮乙酰葡糖胺、疊氮高丙氨酸或2-氨基-5-己炔酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)所述細(xì)胞；并且 f)將所述疊氮乙酰葡糖胺、疊氮高丙氨酸或2-氨基-5-己炔酸并入所述靶向分子或可靶向構(gòu)建體中。
37.一種DNL構(gòu)建體，包含: a)與來(lái)自AKAP蛋白的錨定結(jié)構(gòu)域(AD)部分連接的第一蛋白或肽；和 b)與來(lái)自蛋白激酶A(PKA)的二聚化和停泊結(jié)構(gòu)域(DDD)部分連接的第二蛋白或肽； 其中2個(gè)拷貝的所述DDD部分形成二聚體并且與所述AD部分結(jié)合以形成靶向遞送絡(luò)合物并且其中所述DDD部分 通過(guò)點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)與所述AD部分共價(jià)連接。
38.根據(jù)權(quán)利要求37所述的DNL構(gòu)建體，其中所述點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)選自:(i)硝酮與環(huán)炔；和(ii)疊氮化物與環(huán)炔。
39.根據(jù)權(quán)利要求38所述的DNL構(gòu)建體，其中所述環(huán)炔為環(huán)辛炔。
40.根據(jù)權(quán)利要求37所述的DNL構(gòu)建體，其中所述蛋白或肽選自單克隆抗體、雙特異性抗體、多特異性抗體、抗體融合蛋白、抗原結(jié)合抗體片段、細(xì)胞因子和親和體。
全文摘要
本申請(qǐng)公開(kāi)了組合物及合成和使用的方法，所述方法牽涉體內(nèi)或體外形成治療性和/或診斷性絡(luò)合物的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)。優(yōu)選地，所述診斷絡(luò)合物對(duì)18F成像有用，而所述治療絡(luò)合物對(duì)化療藥物或毒素的靶向遞送有用。更具體地說(shuō)，可使用牽涉環(huán)辛炔、硝酮或疊氮化物活性部分的點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)，使螯合部分或可靶向構(gòu)建體與靶向分子，例如抗體或抗體片段綴合。在大多數(shù)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)在體內(nèi)發(fā)生。體內(nèi)點(diǎn)擊化學(xué)不限于18F標(biāo)記，但是可用于遞送多種治療劑和/或診斷劑。
文檔編號(hào)A61K101/02GK103221072SQ201180054897
公開(kāi)日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2011年12月2日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月2日
發(fā)明者W·J·麥克布賴(lài)德, C·A·德索扎, D·M·戈德堡 申請(qǐng)人:免疫醫(yī)療公司