專(zhuān)利名稱(chēng)：一種生物堿類(lèi)化合物在制備治療咳嗽藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于藥物化學(xué)領(lǐng)域，更具體而言，涉及一種從百部中提取的生物減類(lèi)化合物百邵定威(stemospironine )、其藥物組合物在治療咳嗽 中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
咳嗽是為清除氣道內(nèi)物質(zhì)(痰液)的一種突然爆發(fā)性呼氣動(dòng)作。 咳嗽本身是一種保護(hù)性反射，能清除咽部和整個(gè)呼吸道的粘性分泌 物、吸入的有害物或異物，因此咳嗽是人體的一種重要的防御機(jī)制，如 果咳嗽減弱或消失是非常有害的，甚至是致命的。但是咳嗽對(duì)人們健康 的影響是辯證的，長(zhǎng)期頻繁咳嗽可影響患者的呼吸、心臟和日常生活、 工作，因此是有害的，也是人們經(jīng)常就醫(yī)的原因。據(jù)美國(guó)調(diào)查，咳嗽是 該國(guó)患者就醫(yī)的第 一位原因，而不明原因的慢性咳嗽占呼吸科門(mén)診的 10%~38%?？人缘陌l(fā)生機(jī)理一般是咳嗽感受器接受刺激，通過(guò)舌咽神經(jīng)、迷走 神經(jīng)傳入通路進(jìn)入咳嗽中樞，然后發(fā)出沖動(dòng)，再沿迷走神經(jīng)傳至相應(yīng)感 受器而產(chǎn)生一系列的呼吸肌群收縮運(yùn)動(dòng)，引起咳嗽?？人酝ǔ０磿r(shí)間分為3類(lèi)急性咳嗽、亞急性咳嗽和慢性咳嗽。急 性咳嗽時(shí)間< 3周，亞急性咳嗽3 8周，慢性咳嗽^8周。1.急性咳嗽 普通感冒是急性咳嗽最常見(jiàn)的病因，其他病因包括急性支氣管炎、急性 鼻竇炎、過(guò)敏性鼻炎、慢性支氣管炎急性發(fā)作、支氣管哮喘(簡(jiǎn)稱(chēng)哮喘) 等。2.亞急性咳嗽最常見(jiàn)原因是感冒后咳嗽(又稱(chēng)感染后咳嗽)、細(xì) 菌性鼻竇炎、哮喘等。3.慢性咳嗽慢性咳嗽原因較多，通?？煞譃閮?類(lèi) 一類(lèi)為初查X線(xiàn)胸片有明確病變者，如肺炎、肺結(jié)核、肺癌等。另 一類(lèi)為X線(xiàn)胸片無(wú)明顯異常，以咳嗽為主或惟一癥狀者，即通常所說(shuō)的 不明原因慢性咳嗽(簡(jiǎn)稱(chēng)慢性咳嗽)。慢性咳嗽的常見(jiàn)原因?yàn)榭人宰?異型哮喘(CVA)、鼻后滴流綜合征(PNDs)、嗜酸粒細(xì)胞性支氣管 炎(EB)和胃食管反流性咳嗽(GERC)，這些原因占了呼吸內(nèi)科門(mén)診 慢性咳嗽比例的70%~95%。其他病因較少見(jiàn)，但涉及面廣，如慢性支 氣管炎、支氣管擴(kuò)張、支氣管內(nèi)膜結(jié)核、變應(yīng)性咳嗽(AC)、心理性咳 嗽等。除了人身體病變會(huì)產(chǎn)生咳嗽外，機(jī)械刺激例如微粒物質(zhì)的吸入或者 刺激性氣體(例如NH3， Cl2)的吸入也能引起劇烈咳嗽；此外，溫度急 劇變化的刺激例如特別冷或特別熱的空氣的吸入也能導(dǎo)致咳嗽。資料顯示，每年全世界約有15。/。的成年人和大約10。/。的未成年人受 到不同程度的咳嗽的千擾。因此，市場(chǎng)對(duì)止咳藥物的需求巨大。治療咳嗽的鎮(zhèn)咳藥物已發(fā)展有很多種，目前在臨床上使用比較廣的 主要是兩類(lèi) 一類(lèi)是中樞性鎮(zhèn)咳藥，以嗎啡類(lèi)化合物為代表，如可待因 (codeine )、右美沙芬(dextrom ethorphan); —類(lèi)是外周性鎮(zhèn)咳藥，如 苯丙派林(benproperine )、莫吉司坦(moguisteine)等。然而，這些化 合物都有不利的副作用。例如嗎啡類(lèi)化合物的使用會(huì)導(dǎo)致成癮、呼吸抑 制、抑制平滑肌的收縮(例如導(dǎo)致便秘)和出現(xiàn)幻覺(jué)。特別是可待因高 度成癮，右美沙芬能誘發(fā)幻覺(jué)、妄想或其它精神病癥狀。此外，具有強(qiáng) 鎮(zhèn)咳活性的藥物例如可待因和美沙芬對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有不利影響。由于目前臨床上用于治療咳嗽的藥物或多或少都有一些嚴(yán)重不利 的副作用，因此需要藥學(xué)工作者研發(fā)無(wú)此類(lèi)副作用并能有效減輕和/或抑 制咳嗽的鎮(zhèn)咳藥物。
百部作為一種傳統(tǒng)中藥，在我國(guó)已經(jīng)使用了2000多年，《本草綱目》 上記載，百部藥用其根，甘苦微溫，具有止咳平喘、殺蟲(chóng)止癢之功效。 在臨床上主治咳嗽上氣、治肺熱、潤(rùn)肺、治疳、殺姚蟲(chóng)、寸白蟲(chóng)及一切 樹(shù)木蛀蟲(chóng)、殺虱及蠅蠓、治齊癬、驅(qū)蟲(chóng)蠶咬毒?！吨袊?guó)藥典》從1985版 開(kāi)始收載百部，規(guī)定藥用百部為百部科百部屬植物直立百部[Stemona sessilifolia (Miq) Miq]、蔓生百部[S .japonica ( Blume ) Miq]和對(duì)葉 百部[S. tuberosa Lour.]的地下部分。百部生長(zhǎng)在海拔370 - 2240米的山坡 叢林下、溪邊、路旁以及山谷和陰濕巖石中，在秦嶺、淮河以南各省區(qū) 以及越南、緬甸、泰國(guó)和印度北部都有分布。目前對(duì)于對(duì)葉百部和直立 百部中的生物堿有關(guān)文獻(xiàn)已經(jīng)有過(guò)一些報(bào)道，但是對(duì)于本發(fā)明所涉及到 的生物堿類(lèi)化合物百部定堿其鎮(zhèn)咳活性未見(jiàn)任何報(bào)道。發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的是提供一種結(jié)構(gòu)式如下的百部生物堿類(lèi)化合物 百部定堿及其藥物組合物在制備治療咳嗽藥物中的應(yīng)用，此化合物能夠 減輕和/或抑制咳嗽，為咳嗽抑制劑。本發(fā)明提供的具有治療咳嗽活性的從對(duì)葉百部或直立百部中提取 的生物》成類(lèi)化合物百部定》威，其具有如下結(jié)構(gòu)式所示的結(jié)構(gòu)本發(fā)明提供的具有治療咳嗽活性的藥物組合物包含治療有效量的 上述百部生物堿類(lèi)化合物百部定堿。


圖1是百部定石威(stemospironine )鎮(zhèn)咳活性的測(cè)定結(jié)果。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)描述，但不作為 對(duì)本發(fā)明的限定。I. 概要本發(fā)明提供從百部科(Stemonaceae )百部屬對(duì)葉百部(^emo"a mZjemya)和直立百部(5"femowo ■sewz'/zyb/Za )中分離獲得的一種生物石咸類(lèi) 化合物百部定石威及其藥物組合物在治療咳嗽中的應(yīng)用。本發(fā)明所述的治療咳嗽活性指的是能夠減輕和/或抑制咳嗽。II. 化合物本發(fā)明提供的從百部中提取的 一種具有治療咳嗽活性的生物堿類(lèi) 化合物，其具有如下結(jié)構(gòu)式所示的結(jié)構(gòu)具體來(lái)說(shuō)，為百部定堿(stemospironine )。 具體實(shí)施例薄層層析(TLC)硅膠板及柱層析用硅膠(200~300目)由青島海 洋化工廠(chǎng)生產(chǎn)；薄層層析斑點(diǎn)用^e危酸香蘭醛乙醇溶液噴霧顯色。實(shí)驗(yàn)中所用的&emow(3 rt/Z)eraya (對(duì)葉百部)和S/e附owa 1se1siw7zyb//<3 (直立百部)干根莖采自于中國(guó)海南省，經(jīng)中國(guó)科學(xué)院上海藥物所沈金 貴副教授鑒定是5femo"r3 fwfegmsa和Sfemo"a se訓(xùn)7i/b/z'a。 這兩種植物材 料的證據(jù)樣本保藏在中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所。本實(shí)驗(yàn)中使用的雄性成年Dunkin-Hartley豚鼠(體重300-500g)，
由香港中文大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。豚鼠置于實(shí)驗(yàn)室內(nèi)(溫度21士1。C; 濕度60%)，自然晝/夜循環(huán)，給以標(biāo)準(zhǔn)的食物和水。在本文中，除非特別說(shuō)明，涉及溶劑比例均為體積比。制備實(shí)施例1將5femcwa&Z^mra干的根莖(7.6kg)切碎，用1(H咅量的蒸餾7jc回 流提取2小時(shí)，過(guò)濾后水溶液蒸干得到水提物(384g)。然后將該水提 物用稀鹽酸溶液(4%)酸化至pH-1~2,減壓抽濾不溶物，得到酸水液 1000mL;用乙醚和上述酸水液進(jìn)行液液分配，萃取三次，每次用乙醚 200mL。酸水用氨水堿化至pH = 9~10，用氯仿反復(fù)萃取，每次用氯仿 200mL,至水相無(wú)生物^威反應(yīng)，合并氯仿萃取液，減壓濃縮氯仿得到總 生物》威提取物(50g)。總生物堿提取物經(jīng)硅膠(100-200目)柱層析分離(硅^用量為 lkg),以石油醚:乙酸乙酯(7:1)、 (6:1)、 (5:1)、 (4:1)、 (3:1)、 (2:1)、 (1:1)、 (1:2)和(1:3)為洗脫液，每個(gè)梯度的洗脫液體積均為10L, 每500mL濃集為一餾分。每一個(gè)梯度的洗脫液合并并濃縮，得到1-9 共9個(gè)部位。部位5,即流動(dòng)相為石油醚:乙酸乙酯(3:1)洗下部位(8.0g )濃縮 溶劑后放于室溫靜置，析出結(jié)晶，將結(jié)晶過(guò)濾出來(lái)，然后經(jīng)乙酸乙酯重 結(jié)晶，得到化合物stemospironine ( 2.6g )。制備實(shí)施例2將5femow""肌7z/o/Z"干根莖(10kg)切碎，用IO倍量的蒸餾水回 流提取2小時(shí)，過(guò)濾后水溶液蒸干得到水提物(562g)。然后將該水提 物用稀鹽酸溶液(4%)酸化，至pH-l-2，減壓抽濾不溶物，得到酸水 液1000mL;用乙醚和上述酸水液進(jìn)行液液分配，萃取三次，每次用乙 醚200mL。酸水用氨水堿化至pH = 9~10，用氯仿反復(fù)萃取，每次用氯
仿200mL，至水相無(wú)生物堿反應(yīng)，合并氯仿萃取液，減壓濃縮氯仿得到 總生物堿提取物(76g)?？偵飰A提取物經(jīng)硅膠(100 ~ 200目)柱層析分離(硅膠用量為 1.5kg)，以石油醚:乙酸乙酯(6:1 )、 (5:1 )、 (4:1 )、 (3:1 )、 (2:1 ), ( 1:1 ) 和(1:2)為洗脫液，每個(gè)梯度的洗脫液體積均為10L,每500mL濃集 為一餾分。每一個(gè)梯度的洗脫液合并并濃縮，得到1 7共7個(gè)部位。部位4,即流動(dòng)相為石油醚乙酸乙酯(3:1)洗下部位(12.0g)濃 縮溶劑后放于室溫靜置，析出結(jié)晶，將結(jié)晶過(guò)濾出來(lái)，然后經(jīng)乙酸乙酯 重結(jié)晶，得到化合物stemospironine ( 3.8g )。試驗(yàn)實(shí)施例本發(fā)明中化合物stemospironine的鎮(zhèn)咳活性測(cè)試(圖1 ) 采用檸檬酸誘導(dǎo)的豚鼠咳嗽模型(Gallicoetal., 1994; Chung et al.， 2003 )。豚鼠隨機(jī)分成不同的組，每組至少有5只豚鼠，被單個(gè)置于密 封透明的有機(jī)玻璃室(25xcmxl2cmxl2cm)內(nèi)，通入霧化的0.5M的檸 檬酸水溶液，每分鐘大約0.5毫升。用超聲波噴霧器(OMRONNE-U12, 東京，日本)，將霧化的檸檬酸溶液變?yōu)槠骄睆絣-5微米的粒子氣溶膠 共通入8分鐘。監(jiān)測(cè)8分鐘內(nèi)的陣發(fā)性咳嗽，咳嗽的聲音由室內(nèi)放置的 麥克風(fēng)記錄和放大。聲波經(jīng)Cool Edit 2000軟件(Syntrillium，Phenix,USA) 的微機(jī)分析，再經(jīng)電腦軟件(CoughCount-CUHKJ003-Copyright)處理 聲音數(shù)據(jù)計(jì)數(shù)咳嗽次數(shù)。每組豚鼠在檸檬酸刺激前30分鐘腹腔或口服 單劑量給藥。腹腔給藥三個(gè)劑量為30、 50、 100mg/kg， 口服給藥量為 100mg/kg。鎮(zhèn)咳活性以給藥組動(dòng)物的咳嗽次數(shù)與空白對(duì)照組(給予相應(yīng) 體積的生理鹽水)相比的咳嗽次數(shù)的減少計(jì)數(shù)。此外，本實(shí)驗(yàn)亦用常用 鎮(zhèn)咳藥可待因?yàn)殛?yáng)性對(duì)照來(lái)驗(yàn)證此豚鼠咳嗽模型，腹腔給藥30 mg/kg可 待因咳嗽抑制率為86%,證明本模型的可行性?？纱蜃鳛殛?yáng)性對(duì)照藥，
其鎮(zhèn)咳活性有著明確的量效關(guān)系，而本模型能夠很好的表現(xiàn)出可待因的 鎮(zhèn)咳活性。圖1是stemospironine鎮(zhèn)咳活'l"生的測(cè)定結(jié)果。結(jié)果圖I,腹腔給藥的鎮(zhèn)咳活性；圖II, 口服給藥的鎮(zhèn)咳活性。與 空白對(duì)照相比* <0.05， **p<0.01具有顯著性差異，腹腔給藥采用方差分 析單向變量分析(ANOVA)的Dunnett，s檢驗(yàn)?？诜o藥采用非配對(duì)t 檢驗(yàn)。結(jié)果表明，化合物stemospironine腹腔給藥表現(xiàn)很好的量效依賴(lài)性 鎮(zhèn)咳活性，最高劑量100mg/kg對(duì)咳嗽抑制率為93%,其ED50是 45.68mg/kg( 130.07pmol/kg )。另夕卜，口服給藥(100 mg/kg )， stemospironine 也表現(xiàn)出很強(qiáng)的鎮(zhèn)咳活性(約83%抑制率)，統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示同劑量 腹腔和口服給藥的鎮(zhèn)咳活性無(wú)顯著性差異。
權(quán)利要求
1、一種結(jié)構(gòu)式如下的百部生物堿類(lèi)化合物百部定堿在制備治療咳嗽藥物中的用途
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于，所述的百部生物堿 類(lèi)化合物百部定》成為咳嗽抑制劑。
3、 一種具有減輕和/或抑制咳嗽活性的藥物組合物，其特征在于， 所述的組合物包含治療有效量的結(jié)構(gòu)式如下的百部生物堿類(lèi)化合物百 部定堿
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了從百部科(Stemonaceae)百部屬對(duì)葉百部(Stemona tuberosa)和直立百部(S.sessilifolia)中分離得到的結(jié)構(gòu)式如下的生物堿類(lèi)化合物百部定堿在制備治療、即減輕和/或抑制咳嗽藥物中的醫(yī)藥用途。上述生物堿類(lèi)化合物具有穩(wěn)定的鎮(zhèn)咳活性。
文檔編號(hào)A61K31/407GK101396359SQ20071004658
公開(kāi)日2009年4月1日 申請(qǐng)日期2007年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2007年9月28日
發(fā)明者陽(yáng) 葉, 徐任生, 李希強(qiáng), 楊新州, 鴿 林, 約翰·安東尼·魯?shù)? 凡 葛 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所;香港中文大學(xué)