專利名稱：增溶紫杉醇的組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于增溶紫杉醇的紫杉醇組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
紫杉醇，一種抗癌劑，對于各種癌癥例如卵巢癌、乳腺癌、食道癌、黑素瘤和白血病顯示極好的細(xì)胞毒性。目前被用于臨床治療的紫杉醇制劑已經(jīng)以乳劑預(yù)濃縮物(自乳化系統(tǒng))形式被商業(yè)化，因?yàn)樯踔僚c勃列斯多·邁耶施貴寶公司(Bristol-Myers Squibb Company)的抗癌藥物相比，它的水溶性也非常低。紫杉醇(泰素)是市場上可買到的注射劑，為溶液形式，其中紫杉醇與增溶劑混合，即在無水乙醇中的聚氧乙烯蓖麻油(聚氧乙烯35蓖麻油、聚氧乙基化的蓖麻油和聚氧乙氧基化的蓖麻油)(美國專利5438072)。然而，已知該藥劑在用法和劑量中有限制，因?yàn)樽仙即贾械脑鋈軇┮鸲拘愿弊饔谩Ｒ虼?，已?jīng)進(jìn)行了許多研究來開發(fā)具有高度穩(wěn)定性和低毒性作用的新的紫杉醇制劑。有許多描述脂質(zhì)乳劑、聚合微粒和脂質(zhì)體的專利。在乳劑制劑中，不僅有利用常規(guī)油脂和乳化劑的乳劑而且有固體脂質(zhì)納米顆粒、乳劑濃縮物等已經(jīng)被授予了專利權(quán)。也已經(jīng)發(fā)展了通過利用脂質(zhì)體、聚合納米顆粒和聚合微粒的其它溶解技術(shù)。這些增溶紫杉醇的制劑利用了已經(jīng)被開發(fā)用于其它不溶藥物的累積的科技進(jìn)步。
雖然紫杉醇目前也被用于治療轉(zhuǎn)移的卵巢癌和乳腺癌，但是在不遠(yuǎn)的將來期望其被處方用于各種癌癥，尤其是轉(zhuǎn)移的實(shí)體瘤(例如肺癌和肝癌)。因此，市場預(yù)測對于紫杉醇充滿希望。
從制藥的觀點(diǎn)來看，由于低溶解度，最常被開出藥方的紫杉醇制劑Taxol@(泰素)當(dāng)稀釋在輸液袋中時(shí)具有形成沉淀的問題。利用管線內(nèi)濾器來阻止沉淀進(jìn)入患者血流。紫杉醇的精確劑量因此是未知的并且時(shí)常是變化的。也已知增塑劑會(huì)從由PVC制成的輸液袋中泄露出來，這引起潛在的健康問題。從藥理學(xué)的觀點(diǎn)來看，賦形劑聚氧乙烯蓖麻油會(huì)引起嚴(yán)重的副作用例如超敏反應(yīng)、血管舒張、呼吸困難、衰弱和高血壓，從制藥和藥理學(xué)的觀點(diǎn)來看，必須通過開發(fā)其它給藥途徑和制劑來提高藥物的穩(wěn)定性和安全性。
最有希望和方便的給藥途徑被認(rèn)為是口服途徑。然而有一個(gè)大的障礙要克服，因?yàn)橛捎诖嬖谟谖改c道上皮細(xì)胞中的p-糖蛋白抑制劑的流出機(jī)理，紫杉醇不被吸收入機(jī)體。直到最近已知許多p-糖蛋白抑制劑，包括金雞納寧，鈣通道阻滯劑例如維拉帕米和二氫吡啶類(例如硝苯地平、尼卡地平和尼群地平)，鈣調(diào)素拮抗劑例如三氟拉嗪，抗高血壓藥例如利血平，長春花生物堿類例如長春新堿和長春堿，類固醇類例如黃體酮，抗心律不齊藥例如胺碘酮和奎尼丁，驅(qū)蟲藥例如阿的平和奎寧，以及免疫抑制劑例如環(huán)孢素A、十字孢堿和他克莫司。
除了紫杉醇的增強(qiáng)的口服生物利用度外，該p-糖蛋白抑制劑可以通過抑制存在于癌細(xì)胞中的p-糖蛋白來幫助克服多藥耐藥。另一方面，已知紫杉醇能被肝微粒體酶代謝。紫杉醇通過CYP2C8和CYP3A4分別轉(zhuǎn)化成6-a-羥基紫杉醇和3’-p-羥基紫杉醇。
環(huán)孢菌素A抑制6-a-羥基紫杉醇的形成。多柔比星、依托泊苷(VP-16)和順鉑抑制3’-p-羥基紫杉醇的形成。并且維拉帕米和他莫昔芬抑制紫杉醇代謝成6-a-羥基紫杉醇和3’-p-羥基紫杉醇。因此，紫杉醇與上述代謝抑制劑的共同給藥也能夠增加紫杉醇的生物利用度。
已經(jīng)開發(fā)了許多制劑來增溶紫杉醇。最廣泛使用且成功的制劑中的一個(gè)是泰素@。脂質(zhì)乳劑(US6391832用于潤滑和傳遞藥物的醫(yī)用乳劑；US6348491用于包裹紫杉醇的水包油乳劑)或在水中形成透明膠體系統(tǒng)的預(yù)濃縮物(US6267985透明的包含油的藥物組合物；US6294192用于疏水性治療劑的改善的傳遞的無甘油三酯的組合物和方法)也是公知的。在預(yù)濃縮物的情況下，透明油組合物形成極小顆粒的分散體，其在400nm的吸收度小于0.3。
上述制劑明顯不同于本發(fā)明中的用于增溶紫杉醇的組合物。本發(fā)明中的組合物粗分散于水中，并且在所有情況下在400nm的吸光度高于0.38并且在大多數(shù)情況下在1至4之間。換句話說，在現(xiàn)有的發(fā)明中已經(jīng)做了努力來制備納米大小的顆?；蚱漕A(yù)濃縮物來增溶紫杉醇，然而本發(fā)明公開了分散得不好并且如果分散則形成一些微米大小的顆粒的組合物。本發(fā)明組合物的優(yōu)點(diǎn)包括紫杉醇不會(huì)在分散體中沉淀出來，同時(shí)其在腸內(nèi)是高度粘膜粘附的。
在商業(yè)化口服紫杉醇制劑中一個(gè)主要的障礙是在用體液稀釋時(shí)形成紫杉醇沉淀的問題。即使制劑在稀釋前是穩(wěn)定的，沉淀也會(huì)在分散體中隨時(shí)間形成。在腸中紫杉醇沉淀根本不能被吸收入機(jī)體。然而，一旦沉淀形成的問題被解決，另一障礙-胃腸道系統(tǒng)中p-糖蛋白的流出系統(tǒng)就等待著來減少紫杉醇的生物利用度。
在本發(fā)明中，粘膜粘附脂質(zhì)-單油酸甘油酯被用作口服傳遞紫杉醇的主要成分。即使將紫杉醇溶解在單油酸甘油酯中，它也在單油酸甘油酯/水系統(tǒng)的立方體相中形成沉淀。因此，我們制備了含油的組合物，其不隨時(shí)間形成紫杉醇沉淀，甚至是在與水混合后。單油酸甘油酯/水系統(tǒng)的立方體相由大約60％(v/v)的水構(gòu)成。另一方面，當(dāng)多于10％的油被加入到單油酸甘油酯中時(shí)，混合物不形成立方體相，但是形成包含大約5-10％水的無定形組合物。值得指出的是該組合物不形成紫杉醇沉淀。該組合物對于腸壁也是非常有粘膜粘附性的。
迄今為止，還沒有開發(fā)出不需要p-糖蛋白抑制劑的口服紫杉醇制劑。當(dāng)與p-糖蛋白抑制劑共同口服給藥時(shí)，口服紫杉醇制劑的生物利用度也非常低。
為克服上述與水接觸形成紫杉醇沉淀以及低口服生物利用度的問題，本發(fā)明提供當(dāng)單獨(dú)給藥或與p-糖蛋白抑制劑共同給藥時(shí)具有高生物利用度的用于增溶紫杉醇的粘膜粘附組合物及其制備方法。
發(fā)明詳述本發(fā)明提供長時(shí)間穩(wěn)定、粘膜粘附和有高度生物利用度的增溶紫杉醇的組合物以及其制備方法。
更具體地，本發(fā)明提供包括至少一種單酸甘油酯、至少一種油和紫杉醇的用于增溶紫杉醇的組合物及其制備方法。
本發(fā)明也提供包括至少一種單酸甘油酯、至少一種油、至少一種乳化劑和紫杉醇的用于增溶紫杉醇的組合物及其制備方法。
本發(fā)明將在下面做詳細(xì)說明。
本發(fā)明提供增溶紫杉醇的組合物。
特別地，上述組合物由4-90％重量的至少一種單酸甘油酯、0.01-90％重量的至少一種油和0.01-20％重量的紫杉醇構(gòu)成(就該組合物的總重量而論)。
上述組合物可以通過在室溫或升高的溫度混合至少一種單酸甘油酯、至少一種油和紫杉醇來制備。
上述單酸甘油酯選自由一種或多種在烴鏈中具有10-22個(gè)碳原子的飽和或不飽和單酸甘油酯組成的組。單酸甘油酯優(yōu)選選自由單油酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單肉豆蔻酸甘油酯、單反油酸甘油酯和單芥酸甘油酯組成的組，和選自從植物或動(dòng)物油的甘油三酯半合成的單酸甘油酯的混合物組成的組，優(yōu)選單油酸甘油酯。
上述油優(yōu)選選自能增溶紫杉醇的由甘油三酯、碘化油和植物油或動(dòng)物油組成的組。
上述甘油三酯選自由一種或多種在烴鏈中具有2-20個(gè)碳原子的飽和或不飽和的甘油三酯組成的組。例如可以使用三醋酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯或三油酸甘油酯。
上述碘化油包括碘化的罌粟籽油例如碘化罌粟油、乙碘油和碘化的大豆油。
上述植物油包括大豆油、棉籽油、橄欖油、罌粟籽油、亞麻子油或芝麻油。
上述動(dòng)物油包括角鯊?fù)榛蚪酋徬?br> 此外，上述組合物也可以包括高至5％重量的其它添加劑。例如，該組合物可以進(jìn)一步包含醇、多元醇或克列莫佛(Cremophor)以改善紫杉醇的溶解性，生育酚或生育酚醋酸酯以防止氧化，脂肪酸、脂肪酸酯或脂肪酸醇以增加藥物吸收以及其它不溶藥物以獲得協(xié)同作用。
上述不溶藥物包括其它抗癌藥、P-糖蛋白抑制劑或肝代謝阻滯劑。
上述其它抗癌藥包括多柔比星、順鉑、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、5-氟尿嘧啶或紫杉醇衍生物。上述紫杉醇衍生物包括多西紫杉醇、bromotaxel和泰索帝。
上述p-糖蛋白抑制劑包括金雞納寧、鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)素拮抗劑、長春花生物堿、抗節(jié)律不齊藥、類固醇、抗高血壓藥、驅(qū)蟲藥或免疫抑制劑。上述鈣通道阻滯劑包括二氫吡啶類例如維拉帕米、硝苯地平、尼卡地平或尼群地平。上述鈣調(diào)素拮抗劑包括三氟拉嗪。上述抗高血壓藥包括利血平。上述長春花生物堿類包括長春新堿或長春堿。上述類固醇包括黃體酮。上述抗心律不齊藥包括胺碘酮和奎尼丁。上述驅(qū)蟲藥包括阿的平和奎寧。上述免疫抑制劑包括環(huán)孢霉素、十字孢堿和他克莫司。
上述肝代謝阻滯劑包括抗癌藥例如環(huán)孢霉素A、多柔比星、依托泊苷(VP-16)、順鉑、維拉帕米和他莫昔芬。
按照本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的組合物可以通過各種途徑給藥包括口服給藥、口腔給藥、粘膜給藥、鼻內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、皮下注射、肌內(nèi)注射、經(jīng)皮給藥、瘤內(nèi)給藥，并且更優(yōu)選口服給藥。
制備上述用于增溶紫杉醇組合物的方法包括步驟1)通過加熱至低于50℃將4-90％重量的至少一種單酸甘油酯化合物溶解在0.01-90％重量的至少一種油中來制備粘稠液體(步驟1)；和2)通過將0.01-20％重量的紫杉醇徹底溶解在步驟(1)中的所述的混合物中來制備均質(zhì)的混合物(步驟2)在步驟(2)中，該混合物可以被加熱至50℃并在水浴類型的超聲波儀中超聲來加速溶解過程。
制備上述用于增溶紫杉醇的組合物的方法也包括步驟1)混合4-90％重量的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90％重量的至少一種油和0.01-20％重量的紫杉醇(步驟1)；和2)通過徹底溶解步驟(1)中的所述組合物來制備均質(zhì)混合物(步驟2)。
在步驟(2)中，上述混合物可以被加熱至50℃并在水浴類型的超聲波儀中超聲或攪拌來加速溶解過程。
上述制備方法只是多種可能方法中的兩種，并且也可以使用其它制備方法來獲得增溶紫杉醇的上述組合物。
本發(fā)明也提供包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物。
更特別地，上述組合物由4-90％重量的至少一種單酸甘油酯、0.01-90％重量的至少一種油、0.01-90％重量的至少一種乳化劑和0.01-20％重量的紫杉醇構(gòu)成(就該組合物的總重量而論)。
上述組合物可以通過在室溫或升高的溫度加入至少一種單酸甘油酯、至少一種油、至少一種乳化劑和紫杉醇來制備。
上述單酸甘油酯選自由一種或多種在烴鏈中具有10-22個(gè)碳原子的飽和或不飽和單酸甘油酯組成的組。單酸甘油酯優(yōu)選選自由單油酸甘油酯、單棕櫚酸甘油酯、單肉豆蔻酸甘油酯、單反油酸甘油酯和單芥酸甘油酯組成的組，或選自從植物或動(dòng)物油的甘油三酯半合成的單酸甘油酯或它們的混合物組成的組，更優(yōu)選單油酸甘油酯。
上述油優(yōu)選選自能增溶紫杉醇的由甘油三酯、碘化油和植物油或動(dòng)物油組成的組。
上述甘油三酯選自由一種或多種在烴鏈中具有2-20個(gè)碳原子的飽和或不飽和的甘油三酯組成的組。例如可以使用三醋酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯或三油酸甘油酯。
上述碘化油包括碘化的罌粟籽油例如碘化罌粟油、乙碘油和碘化的大豆油。
上述植物油包括大豆油、棉籽油、橄欖油、罌粟籽油、亞麻子油或芝麻油。
上述動(dòng)物油包括角鯊?fù)榛蚪酋徬?br> 上述乳化劑優(yōu)選選自由磷脂、非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和膽汁酸組成的組。
磷脂優(yōu)選選自由卵磷脂(PC)及其衍生物、磷脂酰乙醇胺(PE)及其衍生物、磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物和其中親水聚合物與脂質(zhì)首基共軛的聚合脂質(zhì)組成的組。
非離子型表面活性劑選自由泊洛沙姆(也稱作普盧蘭尼克聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)、脫水山梨糖醇酯(司盤)、聚氧乙烯去水山梨糖醇(吐溫)和聚氧乙烯醚(布里杰)組成的組。
陰離子表面活性劑選自由磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物、磷脂酸(PA)及其衍生物和十二烷基硫酸酯(SDS)組成的組。
陽離子表面活性劑選自由1，2-二油酸基三甲基銨丙烷(DOTAP)、溴化二甲基雙十八烷基銨(DDAB)、氯化N-[1-(1，2-二油酸氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨(DOTMA)、1，2-二油酸基乙基磷酸膽堿(DOEPC)和3-β-[N-[(N’，N’-二甲氨基)乙烷]氨基甲?；鵠膽固醇(DC-Chol)組成的組。
膽汁酸選自由膽酸、其鹽和衍生物；去氧膽酸、其鹽和衍生物；鵝去氧膽酸、其鹽和衍生物；以及石膽酸、其鹽和衍生物組成的組。
可以被加入上述組合物中的其它添加劑在5％重量內(nèi)。例如，該組合物可以進(jìn)一步包含醇、多元醇或克列莫佛(Cremophor)以改善紫杉醇的溶解性，生育酚或生育酚醋酸酯以防止氧化，脂肪酸、脂肪酸酯或脂肪酸醇以增加藥物吸收。取決于癥狀，其它不溶藥物也可以被加入按照本發(fā)明的包含乳化劑的該組合物。
上述不溶藥物包括其它抗癌藥、P-糖蛋白抑制劑或肝代謝阻滯劑。
上述其它抗癌藥包括多柔比星、順鉑、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、5-氟尿嘧啶或紫杉醇衍生物。上述紫杉醇衍生物包括多西紫杉醇、bromotaxel和泰索帝。
上述p-糖蛋白抑制劑包括金雞納寧、鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)素拮抗劑、長春花生物堿、抗節(jié)律不齊藥、類固醇、抗高血壓藥、驅(qū)蟲藥或免疫抑制劑。上述鈣通道阻滯劑包括二氫吡啶類例如維拉帕米、硝苯地平、尼卡地平或尼群地平。上述鈣調(diào)素拮抗劑包括三氟拉嗪。上述抗高血壓藥包括利血平。上述長春花生物堿類包括長春新堿或長春堿。上述類固醇包括黃體酮。上述抗心律不齊藥包括胺碘酮和奎尼丁。上述驅(qū)蟲藥包括阿的平和奎寧。上述免疫抑制劑包括環(huán)孢霉素、十字孢堿和他克莫司。
上述肝代謝阻滯劑包括抗癌藥例如環(huán)孢霉素A、多柔比星、依托泊苷(VP-16)、順鉑、維拉帕米和他莫昔芬。
按照本發(fā)明的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物可以通過各種途徑給藥包括口服給藥、口腔給藥、粘膜給藥、鼻內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、皮下注射、肌內(nèi)注射、經(jīng)皮給藥、瘤內(nèi)給藥，并且更優(yōu)選口服給藥。
制備上述包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物的方法包括步驟1)通過加熱至低于50℃混合4-90％重量的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90％重量的至少一種油和0.01-90％重量的至少一種乳化劑來制備粘稠液體(步驟1)；和2)將0.01-20％重量的紫杉醇徹底溶解在步驟(1)中的所述的混合物中來制備均質(zhì)的混合物(步驟2)。
制備包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物的一個(gè)實(shí)施例如下。在通過加熱至低于50℃混合單酸甘油酯、油和乳化劑獲得的均質(zhì)粘稠液體中加入紫杉醇。在50℃或低于50℃攪拌或超聲該混合物3-5分鐘以獲得均質(zhì)組合物。
制備上述包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物的方法也包括步驟1)通過在水浴類型的超聲波儀中超聲將0.01-20％重量的紫杉醇溶解在0.01-90％重量的至少一種油中來制備紫杉醇溶液(步驟1)；和2)通過將步驟(1)中的紫杉醇溶液和0.01-90％重量的至少一種乳化劑和4-90％重量的單酸甘油酯混合來制備均質(zhì)混合物(步驟2)。
上述制備方法只是多種可能方法中的兩種，并且其它制備方法也可以被用于獲得包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的上述組合物。
本發(fā)明的呈粘稠液體、凝膠或半固體形式的制劑是長時(shí)間穩(wěn)定的，因?yàn)樵摻M合物的物理性質(zhì)不改變并且包含紫杉醇的組分不隨時(shí)間降解。本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的組合物也是有效的溶解系統(tǒng)，因?yàn)樗鼈兡鼙蝗菀椎胤稚⒃谒谢蚝芤褐衼硇纬芍睆酱笥?00nm的顆粒，并且分散體不隨時(shí)間形成凝聚物。在400nm波長的分散范圍1和4的吸收度也指出該平均顆粒尺寸是相對大的。
換句話說，本發(fā)明的組合物不形成具有納米大小顆粒的細(xì)微分散體，但是形成具有尺寸為幾百納米至幾微米的顆粒的粗分散體。本發(fā)明組合物的分散體不隨時(shí)間形成紫杉醇凝聚物。當(dāng)給藥入機(jī)體時(shí)，該組合物是高度粘膜粘附的并且粘附在腸壁的廣泛區(qū)域上。該組合物中的紫杉醇通過腸中的粘膜吸收，因?yàn)檎衬ふ掣降膯斡退岣视王タ梢员晃斩鵁o需另外的代謝過程。
附圖簡述

圖1是一幅顯示在口服給藥本發(fā)明實(shí)施例1和2中的增溶紫杉醇的液體制劑后血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的圖。用ELISA來進(jìn)行紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的定量分析。勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@經(jīng)由靜脈內(nèi)途徑給藥，作為對照組。
-●-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶紫杉醇＝66∶33∶1，實(shí)施例1中的組合物)，和-○-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的液體制劑組(2mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶紫杉醇＝65∶33∶2，實(shí)施例2中的組合物)-▲-；靜脈內(nèi)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@組(10@Lg紫杉醇)圖2是一幅顯示在口服給藥包含乳化劑和不同比率的紫杉醇的液體制劑后血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的圖。用ELISA來進(jìn)行紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的定量分析?？诜o藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@，作為對照組。
-●-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例3中的組合物)，和-○-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝54∶27∶16∶2，實(shí)施例9中的組合物)，-▲-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝55∶27∶16∶37，實(shí)施例10中的組合物)，-□-；口服給藥勃列斯多邁耶施貴寶公司的泰素@組(1mg紫杉醇)。
圖3是一幅顯示在口服給藥本發(fā)明實(shí)施例11中的包含乳化劑的液體制劑后血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的圖。用ELISA來進(jìn)行紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的定量分析。勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@是靜脈內(nèi)給藥，作為對照組。
-●-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶普盧蘭尼克F68∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例11中的組合物)，和-○-；靜脈內(nèi)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@組(10pg紫杉醇)。
圖4是一幅顯示在口服給藥有或沒有1mg維拉帕米的本發(fā)明實(shí)施例4中的包含乳化劑的液體制劑后血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的圖。用ELISA來進(jìn)行紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的定量分析。
-●-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶普盧蘭尼克F68∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例4中的組合物)，和-○-；口服給藥維拉帕米和本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶普盧蘭尼克F68∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例4中的組合物+1mg維拉帕米)。
圖5是一幅顯示在口服給藥包含乳化劑的含油組合物后血液中紫杉醇的濃度的圖(該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1)。用HPLC來進(jìn)行紫杉醇的總濃度的定量分析。靜脈內(nèi)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@，作為對照組。
-●-；口服給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇)，和-○-；靜脈內(nèi)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@組(401_tg紫杉醇)。
圖6是一幅顯示在腹膜內(nèi)或肌內(nèi)給藥實(shí)施例3的組合物中包含乳化劑的液體制劑后血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的圖。用ELISA來進(jìn)行紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度的定量分析。
-●-；腹膜內(nèi)給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例3中的組合物)，和-○-；肌內(nèi)給藥本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的液體制劑組(1mg紫杉醇，該組合物的重量比率是單油酸甘油酯∶三辛酸甘油酯∶吐溫80∶紫杉醇＝55∶28∶16∶1，實(shí)施例3中的組合物)。
基于下述實(shí)施例詳細(xì)地解釋本發(fā)明，但是它們不應(yīng)被解釋為限制本在本發(fā)明中使用的緩沖液如下板孔覆蓋緩沖液50mM磷酸鈉，0.15M NaCl和0.02％疊氮化鈉，pH7.0(PBS)，板孔封閉緩沖液包含1％(w/v)的牛血清白蛋白(BSA)的PBS，樣本稀釋緩沖液包含0.25％(w/v)BSA，0.05％(v/v)吐溫-20，20％(v/v)甲醇和0.02％疊氮化鈉的PBS(PBSTM)，抗體稀釋緩沖液包含0.25％(w/v)BSA，0.05％(v/v)吐溫-20和0.02％疊氮化鈉的PBS(PBST)，洗滌緩沖液50mM Tris HCI，pH7.01，0.15M NaCl，包含0.05％(v/v)吐溫20和0.02％疊氮化鈉(TBST)，酶底物緩沖液25mM Tris，pH9.51，0.15M NaCl，包含5mM MgCl2和0.02％(w/v)疊氮化鈉。
實(shí)施例1.按照組合物比率變化的用于增溶紫杉醇的組合物(1)(1)制備用于增溶紫杉醇的組合物通過混合1g單油酸甘油酯和0.5g三辛酸甘油酯來制備粘稠的含油溶液，并在40℃加溫。將15毫克紫杉醇加入含油溶液中并為了完全溶解在水浴類型的超聲波儀中超聲來獲得液體制劑。
(2)對這樣制備的用于增溶紫杉醇組合物的特性分析在通過向2I-tL這樣獲得的液體制劑中加入3mL蒸餾水來稀釋乳劑后，通過應(yīng)用Malvern Zetasizer(Malvern Instruments Limited，英國)來測量乳劑顆粒的大小。通過測量給定的制劑三次來獲得平均顆粒大小和多分散性(Orr，Encyclopedia of emulsion technology，1，369-404，1985)。作為由在對數(shù)正態(tài)分布函數(shù)中對數(shù)尺度制定的方差獲得該多分散性。在下述實(shí)施例中使用此方法測量顆粒尺寸和多分散性。
上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，并且也沒有觀察到相分離。當(dāng)上述組合物在水中渦旋10秒時(shí)，獲得具有平均顆粒尺寸為1230nm的不穩(wěn)定的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀。
實(shí)施例2.按照組合物比率變化的用于增溶紫杉醇的組合物(2)通過混合1g單油酸甘油酯和0.5g三辛酸甘油酯來制備粘稠的含油溶液，并在40℃加溫。將30毫克紫杉醇加入含油溶液中并為了完全溶解在水浴類型的超聲波儀中超聲。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，并且也沒有觀察到相分離。當(dāng)上述組合物在水中渦旋10秒時(shí)，獲得具有平均顆粒尺寸為2080nm的不穩(wěn)定的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀。
實(shí)施例1和2的結(jié)果匯總在下面表1中。
表1.

實(shí)施例3.按照組合物比率變化的含乳化劑的增溶紫杉醇的組合物(1)通過徹底混合1g單油酸甘油酯、0.5g三辛酸甘油酯和0.3g吐溫80來制備粘稠的含油溶液，并在40℃加溫。將18毫克紫杉醇加入含油溶液中并為了完全溶解在水浴類型的超聲波儀中超聲。當(dāng)上述組合物在水中渦旋10秒時(shí)，獲得具有平均顆粒尺寸為600nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例4.按照組合物比率變化的含乳化劑的增溶紫杉醇的組合物(2)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、1g三辛酸甘油酯、0.4g吐溫80和10mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為530nm的分散體。在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例3和4的結(jié)果匯總在下面表2中。
表2.

比較實(shí)施例1.不含油的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的組合物(1)如實(shí)施例1制備該組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.2g吐溫和12mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為700nm的分散體。在偏振光顯微鏡下觀察到了紫杉醇沉淀，并且在制備后1小時(shí)該分散體變得不穩(wěn)定。
比較實(shí)施例2.不含油的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的組合物(2)如實(shí)施例1制備該組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.24g普蘭羅尼克F-68和12.4mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為640nm的分散體。在偏振光顯微鏡下觀察到了紫杉醇沉淀，并且在制備后1小時(shí)該分散體變得不穩(wěn)定。
比較實(shí)施例3.不含單油酸甘油酯的用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的組合物(1)如實(shí)施例1制備該組合物和分散的液體，除了使用1g三辛酸甘油酯、0.2g吐溫和12mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為560nm的分散體。在偏振光顯微鏡下沒有觀察到了紫杉醇沉淀，并且也沒有觀察到相分離。
實(shí)施例5.按照油變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(1)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g三丁酸甘油酯、0.3g吐溫80和18mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為950nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例6.按照油變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(2)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g碘化油(碘化油，Laboratoire Guerbet，法國，碘含量38％重量)、0.3g吐溫80和18mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為680nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例7.按照油變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(3)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g角鯊?fù)?Sigma Chemical Company)、0.3g吐溫80和18mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為598nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例8.按照油變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(4)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g紅花籽油(Sigma Chemical Company)、0.3g吐溫80和18mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為1040nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例5-8的結(jié)果匯總在下面表3中。
表3

實(shí)施例9.按照紫杉醇含量變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(1)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g三辛酸甘油酯、0.3g吐溫80和38mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為1450nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例10.按照紫杉醇含量變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物(2)如實(shí)施例1制備組合物和分散的液體，除了使用1g單油酸甘油酯、0.5g三辛酸甘油酯、0.3g吐溫80和54mg紫杉醇，并通過與實(shí)施例1相同的方法來測量它們的顆粒尺寸和多分散性。獲得了平均顆粒尺寸為1630nm的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。與其它在實(shí)施例1-7中的組合物不同，上述組合物在室溫和在冰箱中分別以液體或固體存在。
實(shí)施例9和10的結(jié)果匯總在下面表4中。
表4

實(shí)施例11.按照乳化劑變化的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物如實(shí)施例3制備組合物和分散的液體，除了使用普羅蘭尼克F68(BASF公司)替代吐溫80。獲得了平均顆粒尺寸為420nm(多分散性0.284)的分散體。在制備該分散體24小時(shí)后，在偏振光顯微鏡下沒有觀察到紫杉醇沉淀，也沒有觀察到相分離。上述組合物在室溫和在冰箱中分別以半固體或固體存在，但是在40℃或高于40℃時(shí)以液體存在。
實(shí)施例12.體內(nèi)口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物(1)通過應(yīng)用在上面實(shí)施例1中制備的用于增溶紫杉醇的組合物來進(jìn)行動(dòng)物實(shí)驗(yàn)。
①口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物將100微升包含1mg紫杉醇的粘膜粘附制劑給予先前通過應(yīng)用胃探子禁食4小時(shí)的Balb/C小鼠(6-7星期大，雌性)。做為對照組，被口服給藥分散在0.5ml水中的167@LI勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@(對應(yīng)于1mg紫杉醇)。100毫升在比較實(shí)施例3中制備的不含單油酸甘油酯的三辛酸甘油酯/吐溫80組合物(包含1mg紫杉醇)被用作另一對照并口服給藥，在口服給藥該組合物1、2、3和4小時(shí)后，測定從眼睛收集的血液中紫杉醇的濃度。
作為口服給藥的對照，勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@被靜脈內(nèi)給予Balb/C小鼠(6-7星期大，雌性)，并且在靜脈內(nèi)注射4小時(shí)后測定血液中紫杉醇的濃度。在將0.1ml泰素@分散在5.9ml水中后，將0.1ml分散體(相應(yīng)于10紫杉醇)通過快速濃注給藥入禁食4小時(shí)的Balb/C小鼠的尾靜脈。在給藥該組合物0.5、1、2和4小時(shí)后收集血液，并且測定從眼睛收集的血液中紫杉醇的濃度。
②測定血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度(ELISA方法)
通過應(yīng)用Hawaii Biotech Company的抗-紫杉烷單克隆試劑盒(型號編號8A10)來測定紫杉醇及其代謝產(chǎn)物在血中的總濃度。已知紫杉醇通過CYP2C8和CYP3A4會(huì)分別轉(zhuǎn)化為6-α-羥基紫杉醇和3’-p-羥基紫杉醇。包括紫杉醇的初級代謝產(chǎn)物的各種代謝產(chǎn)物存在于血液中?？?紫杉烷單克隆試劑盒使得我們能夠測定紫杉醇和所有包含紫杉烷環(huán)的代謝產(chǎn)物的濃度(Grothaus，G.P.，Bignami，G，S.，O′Malley，S.，Harada，K.E.，Byrnes，J.B.，Waller，D.F.，Raybould，T.J.G.，Mcguire，M.T.and Alvaro，B.，Taxane-specific monoclonalantibodiesmeasurement of Taxol，baccatin 111，and‘totaltaxanes’In Taxus brevifolia extracts by enzyme Immunoassay.J.Nat.Prod.58，pp.1003-10147 1995)。
將血液樣本連續(xù)地稀釋4次。用磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)稀釋紫杉醇-蛋白覆蓋抗原(藍(lán)色標(biāo)記)100倍。將1000稀釋的抗原溶液放入96孔板的每個(gè)孔中，將該板溫育1小時(shí)。在將該板用TBST洗滌4小時(shí)后，通過加入包含1％牛血清蛋白的PBS將其封閉1小時(shí)。在將每個(gè)孔用TBST連續(xù)洗滌4次后，將50ptl連續(xù)稀釋的樣本放在每個(gè)孔中。在用PBST連續(xù)稀釋HBC紫杉醇標(biāo)準(zhǔn)品(紅色標(biāo)記)后，將50稀釋的標(biāo)準(zhǔn)溶液放在每個(gè)孔中。將50微升通過混合4.5mlPBST和50抗-紫杉烷兔抗體(綠色標(biāo)記)制備的抗體溶液加入每個(gè)孔中。在用TBST洗滌孔四次后，加入100@tl用PBST稀釋1000次的第二抗體溶液并溫育一小時(shí)。在用TBST洗滌孔四次后，在每個(gè)孔中加入200 1mg/ml的pNPP溶液。在室溫溫育該板1小時(shí)后，通過酶標(biāo)儀在414nm測量吸光度并與在690nm的吸光度比較用于定量分析。
③口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物的結(jié)果血液中紫杉醇濃度隨時(shí)間的變化顯示在圖1中。當(dāng)快速濃注時(shí)紫杉醇的生物利用度被設(shè)置在100％時(shí)，通過下式計(jì)算口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物時(shí)的相對生物利用度。

其中，AUC口服和AUC靜脈內(nèi)分別代表口服和靜脈內(nèi)給藥后的曲線下面積，并且劑量靜脈內(nèi)和劑量口服分別代表口服和靜脈內(nèi)給藥的紫杉醇劑量。當(dāng)與快速濃注比較時(shí)，口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物時(shí)的生物利用度是19.5％。
實(shí)施例13.體內(nèi)口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物(2)如實(shí)施例12，將50微升包含1mg紫杉醇的在實(shí)施例2中制備的包含乳劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。最為口服給藥的對照，勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@被靜脈內(nèi)給藥(相應(yīng)于10@tg的紫杉醇/小鼠)。用ELISA測定血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。圖1顯示與實(shí)施例12比較的結(jié)果。當(dāng)與快速濃注比較時(shí)，當(dāng)口服給藥用于增溶紫杉醇的組合物時(shí)的生物利用度是9.5±5％。
實(shí)施例14.體內(nèi)口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物-紫杉醇含量的影響如實(shí)施例12，通過應(yīng)用相同的方法，將包含1mg紫杉醇在實(shí)施例3、9和10中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。作為對照組，如實(shí)施例11口服(相應(yīng)于1mg紫杉醇)和靜脈內(nèi)(相應(yīng)于10l_tg/小鼠)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@。如圖2所示，用ELISA測定血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。通過設(shè)定在實(shí)施例12中快速濃注時(shí)泰素@的生物利用度為100％計(jì)算的生物利用度列在表5中。當(dāng)與快速濃注比較時(shí)，口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物的生物利用度大約為10-30％。另一方面，口服給藥泰素@的生物利用度是1.7±3％。
表5

實(shí)施例15.體內(nèi)口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物-乳化劑的影響如實(shí)施例12，通過應(yīng)用相同的方法，將包含1mg紫杉醇在實(shí)施例11中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。做為對照組，靜脈內(nèi)給藥勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@(相應(yīng)10@tg/小鼠)。如圖3所示，用ELISA測定血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。當(dāng)與快速濃注比較時(shí)，口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物的生物利用度大約為13.4±4％。
實(shí)施例16.體內(nèi)口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物-維拉帕米的共同給藥如實(shí)施例12，通過應(yīng)用相同的方法，將包含1mg紫杉醇在實(shí)施例4中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。給予另一組小鼠包含1mg紫杉醇在實(shí)施例4中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物和1mg維拉帕米。如圖4所示，用ELISA測定血液中紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。當(dāng)與實(shí)施例12中泰素@的快速濃注比較時(shí)，口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物時(shí)的生物利用度大約為2.7％。然而，當(dāng)共同給藥維拉帕米時(shí)，口服生物利用度增加至17.6％。
實(shí)施例17.體內(nèi)口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物-用HPLC測定紫杉醇濃度如實(shí)施例12，通過應(yīng)用相同的方法，將包含1mg紫杉醇在實(shí)施例3中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。用HPLC測定紫杉醇濃度。當(dāng)使用上述ELISA方法時(shí)，測定紫杉醇及其代謝產(chǎn)物的總濃度。然而，HPLC分析僅檢測樣本中的完整的紫杉醇分子。
①測定血液中紫杉醇濃度(HPLC方法)通過在3000rpm離心收集的血液10分鐘獲得血漿，并儲(chǔ)存在-20℃直到被分析。向200血漿中加入以100@tg/ml溶解在乙腈中的10丁基-p-羥基苯甲酸溶液作為內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)，通過加入1ml叔-丁基甲基醚提取該樣本并渦旋30秒。為分離有機(jī)層，在3000rpm離心上述溶液5分鐘，取出0.8ml有機(jī)層并在氮?dú)饬飨赂稍?。將殘留物溶解?0 60％的乙腈中。將三十微升上述樣本注射入HPLC以分析紫杉醇的濃度。HPLC系統(tǒng)包括Shisheido Nanospace半微量柱、SI-1/2001泵、SI-1/2002 UVNIS檢測器、SI-112004柱烘箱、SI-112003自動(dòng)采樣器、SI-1/2009脫氣單元、SI-1/2011、2012旋轉(zhuǎn)高壓六通閥和Shisheido-MicroChrom軟件。CAPCELPAK MF Ph-2 cartridge(4.6×20mm)被用作預(yù)處理柱，并且應(yīng)用CAPCELL PAK C18 UG120(2.0×250mm)濃縮柱完成分離化合物。流動(dòng)相是50％磷酸鹽緩沖溶液(0.1％，pH＝6.86)(泵A)和50％乙腈(泵B)，并將柱溫維持在30℃。通過柱轉(zhuǎn)換方法分析血液中紫杉醇濃度。在預(yù)處理柱和分析柱的情況下，流動(dòng)相-0.1％磷酸鹽緩沖溶液/乙腈溶液(以重量計(jì)84∶16)的流動(dòng)速率分別為0.5ml/min和0.1ml/min。切換閥被設(shè)在A位置以除去預(yù)處理柱洗脫液，并且使分析柱的洗脫液通過UV檢測器。因?yàn)橥ㄟ^預(yù)處理柱后，分別在4.1-7.2分鐘和6.4-9.3分鐘檢測內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)和紫杉醇，將切換閥在4.0分鐘設(shè)置在B位置以使預(yù)處理柱的洗脫液通過濃縮柱。在10分鐘，將切換閥再次設(shè)在A位置，以使來自濃縮柱的流體轉(zhuǎn)至分析柱。在227nm收集色譜圖并通過應(yīng)用Syscon軟件(Shisheido)來分析。
②口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物如實(shí)施例12，通過應(yīng)用相同的方法，將包含1mg紫杉醇在實(shí)施例3中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。做為口服給藥的對照，靜脈內(nèi)給藥小鼠(6-7星期大，雌性)勃列斯多·邁耶施貴寶公司的泰素@并且測定血液中的紫杉醇濃度4小時(shí)。在將0.4ml泰素@分散在5.6ml水中后，將0.1ml分散體(相應(yīng)于40@tg紫杉醇)通過快速濃注給藥入禁食4小時(shí)的Balb/C小鼠的尾靜脈。在給藥該組合物直至4小時(shí)后從眼睛收集血液，測定收集的血液中紫杉醇的濃度。通過HPLC測定的紫杉醇濃度顯示在圖5中。當(dāng)與快速濃注比較時(shí)，口服給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物時(shí)的生物利用度是大約30.3％。
實(shí)施例18.體內(nèi)腹膜內(nèi)給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物通過腹膜內(nèi)給藥，將50微升包含1mg紫杉醇在實(shí)施例3中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。如圖6所示，用ELISA測定紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。
實(shí)施例19.體內(nèi)肌內(nèi)給藥包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物通過肌內(nèi)給藥，將50微升包含1mg紫杉醇在實(shí)施例3中制備的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物給予Balb/C小鼠。如圖6所示，用ELISA測定紫杉醇及其代謝產(chǎn)物隨時(shí)間的總濃度。
如上所述，本發(fā)明的用于增溶紫杉醇的組合物可以穩(wěn)定地增溶紫杉醇，并且當(dāng)分散在水中時(shí)也不會(huì)形成紫杉醇沉淀物。在含水環(huán)境中，該組合物也形成顆粒為30nm-5@tm的不穩(wěn)定的分散體。當(dāng)按照本發(fā)明的該增溶紫杉醇的組合物經(jīng)由口服、腹膜內(nèi)和肌內(nèi)給藥時(shí)，血液中的紫杉醇濃度可以維持超過4個(gè)小時(shí)。
權(quán)利要求
1.用于增溶紫杉醇的組合物，包含4-90重量％的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90重量％的至少一種油和0.01-20重量％的紫杉醇。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述單酸甘油酯選自由在烴鏈中具有10-22個(gè)碳原子的飽和或不飽和單酸甘油酯組成的組。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述單酸甘油酯化合物選自由單油酸甘油酯、單棕櫚油酸甘油酯、單肉豆蔻油酸甘油酯、單反油酸甘油酯和單芥酸甘油酯組成的組，或選自由從植物或動(dòng)物油的甘油三酯半合成的單酸甘油酯的混合物組成的組。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述油選自由甘油三酯、碘化油、植物油和動(dòng)物油組成的組。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述甘油三酯選自由在每個(gè)烴鏈中具有2-20個(gè)碳原子的飽和或不飽和的甘油三酯組成的組。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述甘油三酯選自由三醋酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯和三油酸甘油酯組成的組。
7.根據(jù)權(quán)利要求4的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述碘化油選自由碘化罌粟油、碘化的罌粟籽油、乙碘油和碘化的大豆油組成的組。
8.根據(jù)權(quán)利要求4的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述植物油選自由大豆油、棉籽油、橄欖油、罌粟籽油、亞麻子油和芝麻油組成的組。
9.根據(jù)權(quán)利要求4的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述動(dòng)物油選自由角鯊?fù)楹徒酋徬┙M成的組。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的用于增溶紫杉醇的組合物，另外包含0.01-5重量％的其它添加劑。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述其它添加劑選自由克列莫佛、生育酚、生育酚醋酸酯、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪酸醇、不溶藥物、醇類和多元醇類組成的組。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述不溶藥物選自由抗癌藥、P-糖蛋白抑制劑和肝代謝阻滯劑組成的組。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗癌藥選自由多柔比星、順鉑、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、5-氟尿嘧啶和紫杉醇衍生物組成的組。
14.根據(jù)權(quán)利要求12的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述紫杉醇衍生物選自由多西紫杉醇、bromotaxel和泰索帝組成的組。
15.根據(jù)權(quán)利要求12的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述p-糖蛋白抑制劑選自由金雞納寧、鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)素拮抗劑、抗高血壓藥、長春花生物堿類、類固醇類、抗心律不齊藥、驅(qū)蟲藥或免疫抑制劑組成的組。
16.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述鈣通道阻滯劑選自由維拉帕米和二氫吡啶類例如硝苯地平、尼卡地平和尼群地平組成的組。
17.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述鈣調(diào)素拮抗劑選自由三氟拉嗪組成的組。
18.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗高血壓藥選自由利血平組成的組。
19.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述長春花生物堿類選自由長春新堿和長春花堿組成的組。
20.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述類固醇類選自由黃體酮組成的組。
21.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗心律不齊藥選自由胺碘酮和奎尼丁組成的組。
22.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述驅(qū)蟲藥選自由阿的平和奎寧組成的組。
23.根據(jù)權(quán)利要求15的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述免疫抑制劑選自由環(huán)孢霉素A、十字孢堿和他克莫司組成的組。
24.根據(jù)權(quán)利要求12的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述肝代謝阻滯劑選自由環(huán)孢霉素A、抗癌藥例如多柔比星、依托泊苷(VP-16)和順鉑、維拉帕米和他莫昔芬組成的組。
25.根據(jù)權(quán)利要求11的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述醇類選自由甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇組成的組。
26.根據(jù)權(quán)利要求11的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述多元醇類選自由乙二醇、丙二醇和聚乙二醇組成的組。
27.根據(jù)權(quán)利要求11-26中任一項(xiàng)的用于增溶紫杉醇的組合物，其中給藥途徑選自口服給藥、口腔給藥、粘膜給藥、鼻內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、皮下注射、肌內(nèi)注射。
28.制備根據(jù)權(quán)利要求1-26中任一項(xiàng)的用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中所述方法包括步驟1)將4-90重量％的至少一種單酸甘油酯化合物溶解在0.01-90重量％的至少一種油中；和2)通過攪拌將0.01-20重量％的紫杉醇徹底溶解在步驟(1)中的所述混合物中。
29.根據(jù)權(quán)利要求28的制備方法，其中在步驟(1)中將所述混合物加熱至50℃以加速溶解過程。
30.根據(jù)權(quán)利要求28的制備方法，其中在步驟(2)中將所述混合物加熱至50℃并在水浴類型的超聲波儀中超聲以加速溶解過程。
31.制備根據(jù)權(quán)利要求1-26中任一項(xiàng)的用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中所述方法包括步驟混合4-90重量％的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90重量％的至少一種油和0.01-20重量％的紫杉醇并徹底溶解。
32.根據(jù)權(quán)利要求31的制備方法，其中將所述混合物加熱至50℃并在水浴類型的超聲波儀中超聲以加速溶解過程。
33.包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其包含4-90重量％的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90重量％的至少一種油、0.01-90重量％的至少一種乳化劑和0.01-20重量％的紫杉醇。
34.根據(jù)權(quán)利要求33的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述單酸甘油酯選自由在烴鏈中具有10-22個(gè)碳原子的飽和或不飽和單酸甘油酯組成的組。
35.根據(jù)權(quán)利要求34的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述單酸甘油酯化合物選自由單油酸甘油酯、單棕櫚油酸甘油酯、單肉豆蔻油酸甘油酯、單反油酸甘油酯和單芥酸甘油酯組成的組，或選自由從植物或動(dòng)物油的甘油三酯半合成的單酸甘油酯的混合物組成的組。
36.根據(jù)權(quán)利要求33的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述油選自由甘油三酯、碘化油、植物油和動(dòng)物油組成的組。
37.根據(jù)權(quán)利要求36的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述甘油三酯選自由在每個(gè)烴鏈中具有2-20個(gè)碳原子的飽和或不飽和的甘油三酯組成的組。
38.根據(jù)權(quán)利要求37的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述甘油三酯選自由三醋酸甘油酯、三丁酸甘油酯、三己酸甘油酯、三辛酸甘油酯、三癸酸甘油酯和三油酸甘油酯組成的組。
39.根據(jù)權(quán)利要求37的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述碘化油選自由碘化罌粟油、碘化的罌粟籽油、乙碘油和碘化的大豆油組成的組。
40.根據(jù)權(quán)利要求37的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述植物油選自由大豆油、棉籽油、橄欖油、罌粟籽油、亞麻子油和芝麻油組成的組。
41.根據(jù)權(quán)利要求37的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述動(dòng)物油選自由角鯊?fù)楹徒酋徬┙M成的組。
42.根據(jù)權(quán)利要求33的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述乳化劑選自由磷脂、非離子型表面活性劑、陰離子表面活性劑、陽離子表面活性劑和膽汁酸組成的組。
43.根據(jù)權(quán)利要求42的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述磷脂選自由卵磷脂(PC)及其衍生物、磷脂酰乙醇胺(PE)及其衍生物、磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物和其中親水聚合物與脂質(zhì)首基共軛的聚合脂質(zhì)組成的組。
44.根據(jù)權(quán)利要求42的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述非離子型表面活性劑選自由泊洛沙姆(普盧蘭尼克聚氧乙烯-聚氧丙烯共聚物)、脫水山梨糖醇酯(脫水山梨糖醇酯司盤)、聚氧乙烯去水山梨糖醇(吐溫)和聚氧乙烯醚(布里杰)組成的組。
45.根據(jù)權(quán)利要求42的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述陰離子表面活性劑選自由磷脂酰絲氨酸(PS)及其衍生物、磷脂酸(PA)及其衍生物和十二烷基硫酸酯(SDS)組成的組。
46.根據(jù)權(quán)利要求42的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述陽離子表面活性劑選自由1，2-二油酸基三甲基銨丙烷(DOTAP)、溴化二甲基雙十八烷基銨(DIDAB)、氯化N-[1-(1，2-二油酸氧基)丙基]-N，N，N-三甲基銨(DOTMA)、1，2-二油酸基乙基磷酸膽堿(DOEPC)和3P-[N-[(N’，N’-二甲氨基)乙烷]氨基甲酰基]膽固醇(DC-hol)組成的組。
47.根據(jù)權(quán)利要求42的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述膽汁酸選自由膽酸、其鹽和衍生物；去氧膽酸、其鹽和衍生物；鵝去氧膽酸、其鹽和衍生物；以及石膽酸、其鹽和衍生物組成的組。
48.根據(jù)權(quán)利要求33的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，另外包含0.01-5重量％的其它添加劑。
49.根據(jù)權(quán)利要求48的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述其它添加劑選自由克列莫佛、生育酚、生育酚醋酸酯、脂肪酸、脂肪酸酯、脂肪酸醇、不溶藥物、醇類和多元醇類組成的組。
50.根據(jù)權(quán)利要求49的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述不溶藥物選自由抗癌藥、P-糖蛋白抑制劑和肝代謝阻滯劑組成的組。
51.根據(jù)權(quán)利要求50的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗癌藥選自由多柔比星、順鉑、卡鉑、卡莫司汀(BCNU)、達(dá)卡巴嗪、依托泊苷、5-氟尿嘧啶和紫杉醇衍生物組成的組。
52.根據(jù)權(quán)利要求50的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述紫杉醇衍生物選自由多西紫杉醇、bromotaxel和泰索帝組成的組。
53.根據(jù)權(quán)利要求50的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述p-糖蛋白抑制劑選自由金雞納寧、鈣通道阻滯劑、鈣調(diào)素拮抗劑、長春花生物堿類、抗心律不齊藥、類固醇類、抗高血壓藥、驅(qū)蟲藥和免疫抑制劑組成的組。
54.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述鈣通道阻滯劑是選自由維拉帕米、硝苯地平、尼卡地平和尼群地平組成的組的二氫吡啶類。
55.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述鈣調(diào)素拮抗劑是三氟拉嗪。
56.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗高血壓藥是利血平。
57.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述長春花生物堿類選自由長春新堿和長春花堿組成的組。
58.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述類固醇類是黃體酮。
59.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述抗心律不齊藥選自由胺碘酮和奎尼丁組成的組。
60. 根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述驅(qū)蟲藥選自由阿的平和奎寧組成的組。
61.根據(jù)權(quán)利要求53的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述免疫抑制劑選自由環(huán)孢霉素類、十字孢堿和他克莫司組成的組。
62.根據(jù)權(quán)利要求50的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述肝代謝阻滯劑選自由抗癌藥例如環(huán)孢霉素A、多柔比星、依托泊苷(VP-16)和順鉑、維拉帕米和他莫昔芬組成的組。
63.根據(jù)權(quán)利要求49的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述醇類選自由甲醇、乙醇、丙醇和異丙醇組成的組。
64.根據(jù)權(quán)利要求49的包含乳化劑的用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述多元醇類選自由乙二醇、丙二醇和聚乙二醇組成的組。
65.根據(jù)權(quán)利要求33-64中任一項(xiàng)的包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物，其中給藥途徑選自口服給藥、口腔給藥、粘膜給藥、鼻內(nèi)給藥、腹膜內(nèi)給藥、皮下注射、肌內(nèi)注射、透皮給藥和瘤內(nèi)注射。
66.制備根據(jù)權(quán)利要求33-64中任一項(xiàng)的包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中所述方法包括步驟1)通過加熱至低于50℃混合4-90重量％的至少一種單酸甘油酯化合物、0.01-90重量％的至少一種油和0.01-90重量％的至少一種乳化劑來制備粘稠液體(步驟1)；和2)通過將0.01-20重量％的紫杉醇徹底溶解在步驟(1)中的所述的混合物中來制備均質(zhì)的混合物(步驟2)。
67.根據(jù)權(quán)利要求66的制備包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中在步驟(1)中將所述混合物加熱至50℃以加速溶解過程。
68.根據(jù)權(quán)利要求66的制備包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中在步驟(2)中將所述混合物加熱至50℃以加速溶解過程。
69.根據(jù)權(quán)利要求66的制備包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中在步驟(2)中將所述混合物在水浴類型的超聲波儀中超聲以加速溶解過程。
70.制備根據(jù)權(quán)利要求33-64中任一項(xiàng)的包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中所述方法包括步驟1)通過在水浴類型的超聲波儀中超聲將0.01-20重量％的紫杉醇溶解在0.01-90重量％的至少一種油中來制備紫杉醇溶液(步驟1)；和2)通過將步驟(1)中的紫杉醇溶液和0.01-90重量％的至少一種乳化劑和4-90重量％的單酸甘油酯混合來制備均質(zhì)混合物(步驟2)。
71.根據(jù)權(quán)利要求70的制備包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物的方法，其中在步驟(2)中將所述混合物加熱至50℃并在水浴類型的超聲波儀中超聲以加速溶解過程。
72.根據(jù)權(quán)利要求1-26和權(quán)利要求33-64中任一項(xiàng)包含乳化劑用于增溶紫杉醇的組合物，其中所述組合物在室溫在液體或半固體狀態(tài)。
全文摘要
本發(fā)明涉及用于增溶紫杉醇的紫杉醇組合物及其制備方法，其中所述組合物包含4－90重量％的至少一種單酸甘油酯、0.01－90重量％的至少一種油和0.01－20重量％的紫杉醇。本發(fā)明也涉及用于增溶紫杉醇的包含乳化劑的紫杉醇組合物及其制備方法，其中所述組合物包含4－90重量％的至少一種單酸甘油酯、0.01－90重量％的至少一種油、0.01－90重量％的至少一種乳化劑和0.01－20重量％的紫杉醇。本發(fā)明的組合物是有效的紫杉醇傳遞系統(tǒng)，因?yàn)樵摻M合物增溶紫杉醇，在被分散于水中后不形成聚集體，良好吸附在腸壁上，并且因此具有高生物利用度。
文檔編號A61K47/22GK1671370SQ03817346
公開日2005年9月21日 申請日期2003年7月18日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月20日
發(fā)明者鄭蕙嬋, 鄭曙榮, 權(quán)翊贊, 樸榮澤, 李仁鉉, 陸淳鴻, 催永郁, 樸在亨, 鄭鎮(zhèn)旭 申請人:韓國科學(xué)技術(shù)研究院