專利名稱：亞磺酰氨基取代的咪唑并吡啶的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在1-位上具有磺酰胺官能基的咪唑并吡啶化合物，和涉及含有所述化合物的藥物組合物。本發(fā)明進一步涉及這些化合物作為免疫調(diào)節(jié)劑以誘導(dǎo)動物中細胞因子的生物合成和治療疾病包括病毒性疾病和腫瘤性疾病的用途。本發(fā)明還涉及該化合物及其所用中間體的制備方法。
背景技術(shù)：
關(guān)于1H-咪唑并[4，5-c]喹啉環(huán)系的首篇可靠的報道，是由Backman等在J.Org.Chem.15，1278-1284(1950)中描述可能能夠用作抗瘧疾劑的1-(6-甲氧基-8-喹啉基)-2-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉的合成。隨后報道了多種取代的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉的合成。例如，由Jain等人，J.Med.Chem.11，pp87-92(1968)，合成了可以作為抗驚厥藥和心血管藥的1-[2-(4-哌啶基)乙基]-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉化合物。此外，Baranov等在Chem.Abs.85，94362(1976)中，公開了幾個2-氧代咪唑并[4，5-c]喹啉化合物，以及Berenyi等在J.Heterocyclic Chem.18，1537-1540(1981)中，也已經(jīng)公開了某些2-氧代咪唑并[4，5-c]喹啉。
隨后發(fā)現(xiàn)某些1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺及其1-和2-取代的衍生物可用作抗病毒劑，支氣管擴張劑和免疫調(diào)節(jié)劑。這些還具體在美國專利US 4,689,338；4,698,348；4,929,624；5,037,986；5268,376；5,346,905；和5,389,640進行了描述。
在美國專利US 5,446,153；5,494,916；和5,644,063中公開了用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的取代的1H-咪唑并吡啶-4-胺化合物，但這些專利中公開的化合物在1-位上沒有胺取代。在PCT申請WO 00/76505，WO00/76518和美國專利US6,331,539中公開了某些在1-位具有酰胺，磺酰胺和脲官能基的1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺。上述專利和已公開的專利申請在此一并引入作為參考。
盡管有近期新發(fā)現(xiàn)的作為免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑的化合物，但是對具有通過誘導(dǎo)細胞因子生物合成或其它機理來調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)能力的化合物的需求一直是存在的。

發(fā)明內(nèi)容
我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一組新的可誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成的化合物。因此，本發(fā)明提供了在1-位上具有磺酰胺官能基的咪唑并吡啶-4-胺化合物。我們發(fā)現(xiàn)這些化合物可以用作細胞因子生物合成的誘導(dǎo)劑，這些化合物如式(I)所示，更具體的如下文所示。式(I)如下所示 其中X，Y，Z，R1，R2，R3，R4和R5如這里所述。
式(I)化合物可以用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑是因為當給動物施用時，這些化合物表現(xiàn)出誘導(dǎo)細胞因子生物合成和另外調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)的能力。這使得該化合物可用于治療對免疫反應(yīng)的這些變化有響應(yīng)的一系列疾病如病毒性疾病和腫瘤。
本發(fā)明進一步提供了含有免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)化合物的藥物組合物，提供了通過給動物施用式(I)化合物來誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成，治療動物病毒感染，和/或治療腫瘤性疾病的方法。
此外，本發(fā)明還提供了合成本發(fā)明化合物的方法和在合成這些化合物時所采用的中間體。
本發(fā)明的具體描述如前所述，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了某些可以誘導(dǎo)細胞因子生物合成和調(diào)節(jié)動物免疫反應(yīng)的化合物。所述化合物為如下式(I)所示的化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；Y表示-SO2-；Z表示鍵，或-NR6-；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，或烯基，各個基團可以是未被取代的或者被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-取代的芳基；
-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代雜芳基；-N3；-鹵原子；-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；
-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基，烯基和雜環(huán)基情況下可以是氧代；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；
-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-雜環(huán)基；-取代雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-取代芳基；-CO-雜芳基；和-CO-取代雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；R5是H或C1-10烷基，或者R5能夠與X形成環(huán)；或者當R1是烷基時，R5和R1可以連接形成環(huán)；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
化合物的制備本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程I制備，其中R1，R2，R3，R4，R5，X，Y和Z的定義如上所述，Bn表示芐基和R’表示1-4個碳原子的烷基，1-4個碳原子的全氟烷基，苯基，或被鹵素或1-4個碳原子烷基取代的苯基。
在反應(yīng)流程I步驟(1)中，式X所示的3-硝基吡啶-2，4-二磺酸酯與式R1-Z-Y-N(R5)-X-NH2所示的胺反應(yīng)得到式XI所示的3-硝基-4-氨基吡啶-2-磺酸酯。由于原則上可以被置換的兩個磺酸基的存在，反應(yīng)可能產(chǎn)生多種反應(yīng)產(chǎn)物的混合物，該混合物通過常規(guī)技術(shù)如柱層析易被分離。該反應(yīng)優(yōu)選在叔胺如三乙胺存在下、通過向式X化合物在合適的溶劑如二氯甲烷的溶液中，加入胺而進行的。由于磺酸基是輕易于離去的基團，反應(yīng)可在低溫下進行(0℃)以減少不需要的2-氨基化和2，4-二氨基化的副產(chǎn)物的量。3-硝基吡啶-2，4-二磺酸酯是已知的，通過已知的合成方法很容易制備，參見例如Lindstom等，美國專利US5,446,153等和其中引述的參考文獻。
在反應(yīng)流程I步驟(2)中，使式XI所示3-硝基-4-氨基吡啶-2-磺酸酯與二芐基胺反應(yīng)得到式XII所示的2-二芐基氨基-3-硝基吡啶-4-胺。該反應(yīng)是在惰性溶劑如苯、甲苯或二甲苯中，將式XI化合物、二芐基胺以及叔胺如三乙胺的混合物加熱進行的。
在反應(yīng)流程I步驟(3)中，將式XII 2-二芐基氨基-3-硝基吡啶-4-胺中的硝基還原為氨基。還原反應(yīng)優(yōu)選采用NiB2，它在甲醇中由硼氫化鈉和氯化鎳水合物就地產(chǎn)生。該反應(yīng)優(yōu)選在室溫下進行。
在反應(yīng)流程I步驟(4)中，使式XIII所示2-二芐基氨基吡啶-3，4-二胺與羧酸或其等同物反應(yīng)得到式XV所示的4-二芐基氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。合適的羧酸的等同物包括原酸酯和鏈烷酸1，1-二烷氧基烷酯。選擇的羧酸或其等同物應(yīng)能夠使得式XV化合物得到需要的R2取代基。例如，原甲酸三乙酯可以制得其中R2是氫的化合物，和原乙酸三乙酯可以制得其中R2是甲基的化合物。該反應(yīng)可在沒有溶劑或在惰性溶劑如甲苯存在下進行。反應(yīng)應(yīng)充分加熱以除去反應(yīng)中生成的任何副產(chǎn)物醇或水?？梢匀芜x加入催化劑如吡啶鹽酸鹽。
或者式XV化合物可以通過兩步制備(a)使式XIII所示二胺與式R2C(O)Cl或R2C(O)Br所示的酰鹵反應(yīng)得到式XIV化合物，然后(b)環(huán)化。在步驟(4a)中，將酰鹵加到二胺在惰性溶劑中形成的溶液中，惰性溶劑如乙腈、吡啶或二氯甲烷。反應(yīng)可在室溫進行。在步驟(4b)中，在堿存在下將步驟(4a)產(chǎn)物在醇溶劑中加熱，優(yōu)選的在過量三乙胺存在下在乙醇中加熱回流步驟(4a)產(chǎn)物或?qū)⑵渑c氨甲醇溶液一起加熱。或者步驟(4b)也可以通過在吡啶中加熱步驟(4a)產(chǎn)物進行。如果步驟(4a)就是在吡啶中進行的，那么步驟(4b)就可在分析顯示步驟(4a)已經(jīng)完成后直接加熱反應(yīng)混合物來進行。
在反應(yīng)流程I步驟(5)中，氫解式XV所示的4-二芐基氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶得到式I所示4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選的，在氫氧化鈀/碳存在下在甲酸中加熱式XV化合物，采用常規(guī)技術(shù)可以分離出所得到的產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程I
本發(fā)明化合物可以根據(jù)反應(yīng)流程II來制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，Bn為芐基，BOC是叔丁氧羰基和W是O或S。
在反應(yīng)流程II步驟(1)中除去式XVI的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶上的氨基保護基得到式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選地，在室溫下用三氟甲磺酸(triflic acid)處理式XVI化合物在合適溶劑如二氯甲烷中形成的溶液。采用在反應(yīng)流程I中所述的合成方法可以制備得到式XVI化合物。在步驟(1)中，式X的2，4-二磺酸酯與式BOC-NR5-X-NH2反應(yīng)，然后如上所述進行步驟(2)-(4)得到式XVI化合物，它是式XV所示化合物的下游產(chǎn)品。
在反應(yīng)流程II步驟(2a)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-C(O)Cl酰氯或式R1-C(O)OC(O)-R1所示的酸酐反應(yīng)得到式XVII所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基酰胺。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下將酰氯或酸酐加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷或乙腈中形成的溶液中進行。反應(yīng)可在低溫(0℃)或室溫下進行。采用常規(guī)方法可以分離出產(chǎn)物或其可藥用鹽。
在反應(yīng)流程II步驟(2b)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-N＝C＝O所示的異氰酸酯或式R1-N＝C＝S所示的異硫代氰酸酯反應(yīng)，得到式XVIII所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基脲或硫脲。反應(yīng)優(yōu)選在低溫(0℃)下將異氰酸酯或異硫代異氰酸酯加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷中形成的溶液中進行。采用常規(guī)方法可以分離出產(chǎn)物或其可藥用鹽。
在反應(yīng)流程II步驟(2c)中，式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-S(O)2-Cl所示的磺酰氯或式R1-S(O)2-O-S(O)2-R1所示的磺酸酐反應(yīng)，得到式XIX所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺，它是式I的下游產(chǎn)品。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下，將磺酰氯或磺酸酐加到式II化合物在合適溶劑如二氯甲烷中形成的溶液中進行。反應(yīng)可在低溫(0℃)或室溫下進行。采用常規(guī)方法可以分離出產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程II 本發(fā)明化合物可以根據(jù)反應(yīng)流程III制備，其中R1，R2，R3，R4，R5，R6和X的定義如上所述。
在反應(yīng)流程III步驟(1)中，式II所示1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與式R1-N(R5)S(O)2-Cl所示的磺酰氯反應(yīng)，得到式XXI所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺，它是式I的下游產(chǎn)品。反應(yīng)優(yōu)選在堿如三乙胺存在下，將氨磺酰氯加到式II化合物在合適溶劑如1，2-二氯乙烷中形成的溶液中進行。反應(yīng)可在高溫下進行。采用常規(guī)方法可以出分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
或者，式XXI所示磺酰胺可通過兩步制備，(a)式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶與磺酰氯反應(yīng)就地生成式XX所示氨磺酰氯，然后(b)使所得到的氨磺酰氯與式R1-N(R6)H所示胺反應(yīng)。在步驟(1a)中，反應(yīng)在1當量4-(二甲基氨基)吡啶存在下，將磺酰氯的二氯甲烷溶液加到式II所示化合物的溶液中。反應(yīng)優(yōu)選在低溫(-78℃)下進行。加料完畢后，可使得反應(yīng)混合物任選地恢復(fù)到室溫。在步驟(1b)中，將含有2當量R1-N(R6)H和2當量三乙胺的二氯甲烷溶液加到步驟(1a)的反應(yīng)混合物中，反應(yīng)優(yōu)選在低溫(-78℃)下進行。采用常規(guī)方法可以出分離產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程III
本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程IV制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，和BOC表示叔丁氧羰基。
在反應(yīng)流程IV步驟(1)中，采用常規(guī)氯化試劑氯化式XXII所示的2，4-二羥基-3-硝基吡啶得到式XXIII所示的2，4-二氯-3-硝基吡啶。優(yōu)選地，式XXII所示化合物與磷酰氯混合、加熱。許多式XXII所示的2，4-二羥基-3-硝基吡啶化合物是已知的，而其他的化合物通過已知的方法很容易制備，參見例如Lindstom等，美國專利US 5,446,153和其中所引述的參考文獻。
在反應(yīng)流程IV步驟(2)中，使式XXIII所示的2，4-二氯-3-硝基吡啶與式BOC-NR5-X-NH2所示的胺反應(yīng)得到式XXIV所示的2-氯-3-硝基吡啶。該反應(yīng)優(yōu)選在叔胺如三乙胺存在下，將胺加到式XXIII所示的化合物在合適的溶劑如N，N-二甲基甲酰胺中形成的溶液中進行的。
在反應(yīng)流程IV步驟(3)中，式XXIV所示的2-氯-3-硝基吡啶與苯酚反應(yīng)得到式XXV所示的3-硝基-2-苯氧基吡啶。苯酚與氫化鈉在合適的溶劑如二甘醇二甲醚或四氫呋喃中反應(yīng)得到酚鹽。然后所得到的酚鹽可選擇在室溫或高溫下與式XXIV所示的化合物反應(yīng)。
在反應(yīng)流程IV步驟(4)中，還原式XXV所示的3-硝基-2-苯氧基吡啶得到XXVI所示的3-氨基-2-苯氧基吡啶。優(yōu)選地，上述還原反應(yīng)采用常規(guī)的多相氫化催化劑如鉑/碳，或鈀/碳。反應(yīng)在帕爾反應(yīng)器中在合適的溶劑如異丙醇或甲苯或它們的混合溶劑中進行。
在反應(yīng)流程IV步驟(5)中，XXVI所示的3-氨基-2-苯氧基吡啶與羧酸或其等同物反應(yīng)得到式IV所示的4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉。合適的羧酸的等同物包括原酸酯和鏈烷酸1，1-二烷氧基烷酯。選擇的羧酸或其等同物應(yīng)能夠使得式IV所示的化合物得到需要的R2取代基。例如，原甲酸三乙酯可以制得其中R2是氫的化合物，和原戊酸三甲酯可以制得其中R2是丁基的化合物。該反應(yīng)可在沒有溶劑或在惰性溶劑如甲苯存在下進行。反應(yīng)應(yīng)充分加熱以除去反應(yīng)中生成的任何副產(chǎn)物醇或水?？梢匀芜x加入催化劑如吡啶鹽酸鹽。
或者步驟(5)可以通過下述步驟實現(xiàn)(i)使式XXVI所示的化合物與式R2C(O)Cl或R2C(O)Br所示的酰鹵反應(yīng)，然后(ii)環(huán)化。在步驟(i)中，將酰鹵加到式XXVI所示的化合物在惰性溶劑中形成的溶液中，惰性溶劑如乙腈、吡啶或二氯甲烷。反應(yīng)可在室溫進行?？梢匀芜x地加入催化劑如吡啶鹽酸鹽。在步驟(ii)中，在吡啶中加熱步驟(i)產(chǎn)物。如果步驟(i)是在吡啶中進行的，那么兩步可以合并為一步。
在反應(yīng)流程IV步驟(6)中，除去式IV所示化合物中的BOC基團得到式V所示的4-苯氧基-IH-咪唑并[4，5-c]吡啶。優(yōu)選地，在低溫下用三氟乙酸或鹽酸處理式IV所示的化合物在合適的溶劑如二氯甲烷中形成的溶液。
在反應(yīng)流程IV步驟(7)中，采用反應(yīng)流程II步驟(2c)的方法將式V所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶轉(zhuǎn)化為式VI所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。
在反應(yīng)流程IV步驟(8)中，氨化式VI所示4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺得到式XIX所示的4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基磺酰胺。反應(yīng)可通過在密封管中混合式VI所示的化合物與乙酸銨并加熱(～150℃)進行。采用常規(guī)方法可以分離出產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程IV 本發(fā)明化合物可以按照反應(yīng)流程V制備，其中R1，R2，R3，R4，R5和X的定義如上所述，和BOC表示叔丁氧羰基。
在反應(yīng)流程V步驟(1)中，氨化式IV所示的4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶得到式XXVIII所示的N-(4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙酰胺。優(yōu)選高溫下(140℃-160℃)混合式IV所示的化合物和乙酸銨。反應(yīng)可選擇在高壓釜中進行。
在反應(yīng)流程V步驟(2)中，酸性條件下水解式XXVIII所示的N-(4-氨基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙酰胺得到式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。優(yōu)選混合式XXVIII所示的化合物和鹽酸/乙醇并加熱。
在反應(yīng)流程V步驟(3)中，利用常規(guī)方法將式II所示的1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-胺轉(zhuǎn)變?yōu)槭絏IX所示的磺酰胺，它是式I的下游產(chǎn)品。按照反應(yīng)流程II的步驟(2c)所示方法進行反應(yīng)。采用常規(guī)方法可以分離出產(chǎn)物或其可藥用鹽。
反應(yīng)流程V
本發(fā)明也提供了幾種用作合成式I化合物的中間體的新化合物。下面將詳述這些中間體的結(jié)構(gòu)式(II)-(VI)。
式(II)所示的一組中間體化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；
-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
式(III)所示的另一組中間體化合物
其中Q表示NO2或NH2；X表示亞烷基或亞烯基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
式(IV)所示的另一組中間體化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；
-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
式(V)所示的另一組中間體化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R5)2；
-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵素，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
式(VI)所示的另一組中間體化合物
其中X表示亞烷基或亞烯基；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，C1-20烷基或C2-20烯基，各個基團可以是未被取代的或者被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-N3；-鹵原子；
-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基、烯基和雜環(huán)基情況下，可以是氧代；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；
-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及每個R5各自獨立地表示H或C1-10烷基；或者R5與X連接形成環(huán)了；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
這里所用的術(shù)語“烷基”、“烯基”和前綴“烷”包括直鏈或支鏈基團也包括環(huán)狀基團，即環(huán)烷基和環(huán)烯基。除非特別說明，這些基團是指含有1-20個碳原子，而烯基是指含有2-20個碳原子的基團。優(yōu)選的基團含有至多10個碳原子。環(huán)狀基團可以是單環(huán)或多環(huán)的和優(yōu)選含3-10個環(huán)碳原子。環(huán)狀基團的實例包括環(huán)丙基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)丙基甲基、金剛烷基、降冰片烷基和降冰片烯基。
這里的術(shù)語“鹵代烷基”是指被一個或多個鹵素取代的基團，包括全氟烷基。該定義也適合于含前綴“鹵”的基團。合適的鹵代烷基的實例包括氯甲基，三氟甲基等。
這里的術(shù)語“芳基”包括碳芳環(huán)或碳芳環(huán)系。芳基的實例包括苯基、萘基、聯(lián)苯基、芴基或茚基。術(shù)語“雜芳基”是指包括含至少一個環(huán)雜原子(如O，S，N)的芳環(huán)或環(huán)系。合適的雜芳基包括呋喃基，噻吩基，吡啶基，喹啉基，異喹啉基，吲哚基，異吲哚基，三唑基，吡咯基，四唑基，咪唑基，吡唑基，噁唑基，噻唑基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，咔唑基，苯并噁唑基，嘧啶基，苯并咪唑基，喹喔啉基，苯并噻唑基，1，5-二氮雜萘基，異噁唑基，異噻唑基，嘌呤基，喹唑啉基等。
“雜環(huán)基”是指包括含至少一個環(huán)雜原子(如O，S，N)的非芳香環(huán)或環(huán)系并且包括所有上述雜芳基的全飽和或部分飽和的衍生物。雜環(huán)基的實例包括吡咯烷基，四氫呋喃基，嗎啉基，硫代嗎啉基，哌啶基，哌嗪基，噻唑烷基，異噻唑烷基和咪唑烷基。
這里的芳基，雜芳基，和雜環(huán)基可以是未取代的或被一個或多個選自下述的取代基所取代烷基，烷氧基，亞甲基二氧，亞乙基二氧，烷硫基，鹵代烷基，鹵代烷氧基，鹵代烷硫基，鹵原子，硝基，羥基，巰基，氰基，羧基，甲?；?，芳基，芳氧基，芳硫基，芳基烷氧基，芳基烷硫基，雜芳基，雜芳氧基，雜芳硫基，雜芳基烷氧基，雜芳基烷硫基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基，雜環(huán)基，雜環(huán)烷基，烷基羰基，烯基羰基，烷氧基羰基，鹵代烷基羰基，鹵代烷氧基羰基，烷硫基羰基，芳基羰基，雜芳基羰基，芳氧基羰基，雜芳氧基羰基，芳硫基羰基，雜芳硫基羰基，烷?；趸轷；蚧轷；被蓟驶趸?，芳基羰基硫基，烷基氨基磺?；?，烷基磺?；蓟酋；s芳基磺?；?，芳基二嗪基，烷基磺酰基氨基，芳基磺?；被?，芳基烷基磺?；被?，烷基羰基氨基，烯基羰基氨基，芳基羰基氨基，芳基烷基羰基氨基，芳基羰基氨基烷基，雜芳基羰基氨基，雜芳基烷基羰基氨基，烷基磺?；被?，烯基磺?；被?，芳基磺?；被蓟榛酋；被s芳基磺?；被?，雜芳基烷基磺?；被榛被驶被?，烯基氨基羰基氨基，芳基氨基羰基氨基，芳基烷基氨基羰基氨基，雜芳基氨基羰基氨基，雜芳基烷基氨基羰基氨基，在雜環(huán)基情況下，也表示氧代。如果其它基團被描述為“取代的”或“任選取代的”，那么這些基團可以被一個或多個上面列舉的取代基所取代。
通常某些取代基是優(yōu)選的。例如，優(yōu)選的Z表示鍵或-NR5-；和R1優(yōu)選表示C1-4烷基，芳基，或取代的芳基。優(yōu)選的R2包括含有1-4個碳原子的烷基(即，甲基，乙基，丙基，異丙基，正丁基，仲丁基，異丁基和叔丁基)，甲氧基乙基，乙氧基甲基和環(huán)丙基甲基。R3和R4優(yōu)選表示甲基。如果存在，一個或多個上述優(yōu)選的取代基可以任何組合方式在本發(fā)明化合物中存在。
本發(fā)明化合物包括其可藥用的任何形式，包括異構(gòu)體如非對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體，鹽，溶劑化物，多晶型物，等等。特別的，如果某一化合物是光學(xué)活性的，那么本發(fā)明還特別包括各個化合物的對映異構(gòu)體和對映異構(gòu)體的外消旋混合物。
藥物組合物和生物活性本發(fā)明藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明上述化合物和可藥用載體。
術(shù)語“治療有效量”是指足以產(chǎn)生治療效果的本發(fā)明化合物的量，這里的治療效果是指例如產(chǎn)生細胞因子誘導(dǎo)作用、抗腫瘤活性和/或抗病毒活性。雖然，在本發(fā)明藥物組合物中采用的活性化合物的具體量取決于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員公知的一些因素如化合物的理化性質(zhì)、載體的性質(zhì)和所采用的治療方案，但是本發(fā)明組合物應(yīng)當含有足夠的活性成分使受者能夠得到劑量為約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg的化合物。可以采用任何常規(guī)劑型如片劑、錠劑、非腸道制劑、糖漿、霜劑、膏劑、氣霧劑、經(jīng)皮貼劑、經(jīng)粘膜貼劑等。
在施用時，本發(fā)明化合物可以作為治療方案中單獨的治療劑使用，也可以與一種或多種其它活性劑聯(lián)合用藥，這些活性劑包括其它的免疫調(diào)節(jié)劑、抗病毒劑、抗菌劑、抗體、蛋白質(zhì)、肽、低核苷酸等。
下面進行的試驗證明本發(fā)明化合物顯示可誘導(dǎo)某些細胞因子產(chǎn)生。這些結(jié)果表明本發(fā)明化合物可用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑以多種不同方式調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，使得它們可以用于多種疾病的治療中。
可由施用本發(fā)明化合物誘導(dǎo)產(chǎn)生的細胞因子包括干擾素(α)(IFN-α)和/或腫瘤壞死因子(α)(TNF-α)以及某些白介素(IL)。其生物合成可由本發(fā)明化合物誘導(dǎo)的細胞因子包括IFN-α，TNF-α，IL-1，IL-6，IL-10和IL-12以及其它多種細胞因子。在這些作用中，上述細胞因子和其它細胞因子可以抑制病毒產(chǎn)生和腫瘤細胞生長，使得這些化合物可用于治療病毒性疾病和腫瘤。因此，本發(fā)明提供了誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成的方法，包括向動物施用有效量的本發(fā)明化合物或組合物。
已發(fā)現(xiàn)某些本發(fā)明化合物可以在不伴隨產(chǎn)生顯著水平炎性細胞因子的情況下，優(yōu)先誘導(dǎo)含有pDC2細胞(前體樹突細胞-2型)的造血細胞種群，例如PBMC(周圍血單核細胞)中的IFN-α的表達。
除了誘導(dǎo)細胞因子產(chǎn)生的能力，本發(fā)明化合物也影響到先天免疫系統(tǒng)的其它方面，例如可以刺激天然殺傷細胞的活性，這種作用也可能是基于細胞因子的誘導(dǎo)作用。本發(fā)明化合物也可以激活巨噬細胞，而巨噬細胞刺激氮氧化物的分泌和更多細胞因子的產(chǎn)生。進一步的，本發(fā)明化合物可以造成B-淋巴細胞的增殖和分化。
本發(fā)明化合物對獲得性免疫反應(yīng)也有影響。例如，雖然不確信對T-細胞有直接的作用和對T-細胞細胞因子有直接的誘導(dǎo)作用，但當施用本發(fā)明化合物時，可以直接誘導(dǎo)1型輔助T細胞(Th1)細胞因子IFN-γ的產(chǎn)生和抑制2型輔助T細胞(Th2)細胞因子IL-4，IL-5和IL-13的產(chǎn)生。這里活性是指化合物可用于治療需要促進ThI反應(yīng)和/或抑制Th2反應(yīng)的那些疾病?？紤]到本發(fā)明化合物抑制Th2免疫反應(yīng)的能力，本發(fā)明化合物有望可用于治療特應(yīng)性疾病例如特應(yīng)性皮炎、哮喘、過敏癥、過敏性鼻炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡；也可用作對細胞調(diào)節(jié)免疫的疫苗佐劑；和可能會用于治療復(fù)發(fā)的真菌疾病和衣原體疾病。
本發(fā)明化合物的免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)作用使得它可以用于治療許多的疾病。因為它們有誘導(dǎo)細胞因子IFN-α和/或TNF-α產(chǎn)生的能力，本發(fā)明化合物可特別用于治療病毒性疾病和腫瘤。本發(fā)明化合物的免疫調(diào)節(jié)活性表明本發(fā)明化合物可以治療的疾病例如包括但不限于下面例舉的疾病病毒性疾病包括生殖器疣；普通疣；跖疣；乙型肝炎；丙型肝炎；I和II單純皰疹病毒疾?。挥|染性軟疣；天花，特別是重型天花；HIV；CMV；VZV；鼻病毒；腺病毒；冠狀病毒疾?。涣鞲?；和副流感；上皮內(nèi)瘤形成如頸上皮內(nèi)瘤形成；人乳頭狀瘤病毒(HPV)和相關(guān)的瘤形成疾病；真菌疾病例如念珠菌屬感染疾病，曲霉屬感染疾病和隱球菌性腦膜炎；腫瘤性疾病，例如，基底細胞癌，毛細胞白血病，卡波西肉瘤，腎細胞癌，鱗狀細胞癌，骨髓性白血病，多發(fā)性骨髓瘤，黑色素瘤，非何杰金氏淋巴瘤，皮膚的T-細胞淋巴瘤，以及其它的癌癥；寄生蟲病例如卡氏肺孢子蟲病，隱孢子蟲病，莢膜組織胞漿菌病，弓形體病，錐蟲感染，和利什曼??；和細菌感染例如結(jié)核，和鳥分支桿菌感染?？梢圆捎帽景l(fā)明化合物治療的其它疾病和癥狀包括光化性角化病；濕疹；嗜酸性細胞增多癥；特發(fā)性血小板增多；麻風(fēng)；多發(fā)性硬化癥；奧門綜合征；盤狀狼瘡；鮑恩病；類鮑恩丘疹?。话咝蚊摪l(fā)；抑制手術(shù)后瘢痕疙瘩和其它術(shù)后疤痕的形成。此外，這些化合物可以促進或刺激傷口的愈合，傷口包括慢性傷口。這些化合物還可以用于治療在例如移植病人、腫瘤病人和HIV病人中對細胞調(diào)節(jié)的免疫系統(tǒng)進行抑制后出現(xiàn)的機會性感染和腫瘤。
有效誘導(dǎo)細胞因子生物合成的化合物的量是指足以使一種或多種細胞，例如單核細胞、巨噬細胞、樹突細胞和B-細胞，產(chǎn)生一種或多種細胞因子如IFN-α、TNF-α、IL-1、IL-6、IL-10和IL-12，這些細胞因子的量在其背景水平上顯示增加。確切的用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是應(yīng)當期望是在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg劑量范圍內(nèi)。本發(fā)明也提供了治療動物病毒感染和腫瘤性疾病的方法，包括向動物施用治療有效量本發(fā)明化合物或組合物?；衔锏闹委熁蛞种撇《靖腥镜挠行Я渴侵概c未接受治療的對照組化合物相比減少一種或多種病毒感染的表現(xiàn)例如病毒損傷、病毒載荷、病毒生產(chǎn)率和死亡率的化合物的用量。確切的有效用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是應(yīng)當期望是在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg劑量范圍內(nèi)。化合物的治療腫瘤性疾病有效量是指使腫瘤大小或腫瘤病灶數(shù)目減小的化合物的用量。同樣的，確切的用量取決于本領(lǐng)域公知的因素，但是應(yīng)當期望是在約100ng/kg-約50mg/kg，優(yōu)選約10μg/kg-約5mg/kg劑量范圍內(nèi)。
本發(fā)明進一步提供了下述實施例，它們只是為了進行說明但不是以任何方式限定本發(fā)明。
下述實施例中，利用Waters Fraction Lynx自動純化系統(tǒng)通過制備性高效液相色譜純化某些化合物。利用Micromass LC-TOFMS分析制備性HPLC的流分，合并適當?shù)牧鞣植㈦x心蒸發(fā)合適的級分得到所需化合物的三氟乙酸鹽。柱子Phenomenex Luna C18(2)，21.2×50mm，粒徑10μm，孔隙100，流速25mL/min，12分鐘內(nèi)用5-95％B非線性梯度洗脫，然后再在95％B下保持2分鐘，其中A是0.05％三氟乙酸/水，B是0.05％三氟乙酸/乙腈，通過質(zhì)量控制選擇收集流分。
實施例符號說明Calculated for(calcd for)計算值；Found檢測值；Quartet四重峰；Quintet五重峰；Sextet六重峰；Hept七重峰實施例1N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]苯甲酰胺
步驟A將三乙胺(16.8mL，123.8mmol)加到4-羥基-5，6-二甲基-3-硝基-2(1H)-吡啶酮(7.6g，41.2mmol)的二氯甲烷(200mL)懸浮液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入三氟甲磺酸酐(13.7mL，82.5mmol)并攪拌所得的反應(yīng)混合物30分鐘。一次性加入單-叔丁氧羰基-1，4-丁基二胺(7.6g，41.2mmol)并使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝亍?小時后反應(yīng)混合物用1％碳酸鈉水溶液(2×100mL)洗滌，用硫酸鎂干燥然后減壓濃縮得到粗產(chǎn)品。將該粗產(chǎn)品溶于二氯甲烷中并通過硅膠層，先用二氯甲烷洗脫硅膠層以除去一些雜質(zhì)，然后用2-5％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫以回收所需的產(chǎn)物。合并含有產(chǎn)物的流分并減壓蒸餾得到12g 4-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁基}氨基)-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2-基三氟甲磺酸酯，為淺黃色油狀物。
步驟B將步驟A所得的物質(zhì)與三乙胺(2.5g，24.7mmol)，二芐基胺(4.8g，24.7mmol)和甲苯(150mL)混合，然后加熱回流4小時。反應(yīng)混合物用1％碳酸鈉水溶液洗滌，然后減壓濃縮得到粗產(chǎn)品。將其溶于二氯甲烷中并通過硅膠層，用2-20％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫硅膠。合并含有產(chǎn)物的流分并減壓蒸餾得到～13g 4-{[2-(二芐基氨基)-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C將硼氫化鈉(1.4g，36mmol)緩慢加入到氯化鎳水合物(2.9g，12.3mmol)的甲醇溶液中并攪拌30分鐘。一次性加入步驟B產(chǎn)物的甲醇溶液。緩慢加入硼氫化鈉直到生成的泡沫是無色的。過濾反應(yīng)混合物，濾液減壓濃縮。將所得殘留物與二氯甲烷混合并過濾以除去鹽。減壓濃縮濾液得到～12g 4-{[3-氨基-2-(二芐基氨基)-5，6-二甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟D將戊酰氯(3mL，24.7mmol)加到步驟C產(chǎn)物的乙腈(200mL)溶液中。在室溫下攪拌。反應(yīng)混合物減壓濃縮，將所得殘留物與乙醇和三乙胺(5g，49mmol)混合，反應(yīng)混合物加熱回流過夜，然后減壓濃縮。使所得殘留物在二氯甲烷和水之間分配。分離出二氯甲烷層并通過硅膠柱，用9∶90∶1的乙酸乙酯∶二氯甲烷∶甲醇混合溶劑洗脫該柱。合并含有產(chǎn)物的流分并減壓濃縮得到6.5g 4-[2-丁基-4-(二芐基氨基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為油狀物。
步驟E將三氟甲磺酸(16g，107mmol)加到步驟D產(chǎn)物(6.5g，11.4mmol)的二氯甲烷(250mL)溶液中，所得的混合物攪拌過夜，加入氫氧化銨(50mL)和水(100mL)并攪拌30分鐘。分離各層并用二氯甲烷(100mL)提取水層。合并有機層，用1％碳酸鈉水溶液，鹽水依次洗滌并減壓濃縮。將所得殘留物與甲醇(30mL)混合，攪拌30分鐘后過濾。減壓濃縮濾液并將所得殘留物與1％碳酸鈉水溶液混合并攪拌。用己烷提取混合物以除去有機雜質(zhì)，用二氯甲烷提取含有不溶性油狀物的水層。有機層與硫酸鎂混合，攪拌5分鐘并過濾。減壓濃縮濾液得到固體，用甲苯重結(jié)晶，得到1g 1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟F將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入苯甲酰氯(0.07mL，0.5mmol)并撤去冰浴。反應(yīng)混合物用水洗滌兩次，然后減壓濃縮。所得的殘留物通過快速柱層析法純化，以10％甲醇/二氯甲烷洗脫得到油狀棕色的物質(zhì)。用最少量異丙醇將該物質(zhì)溶解，然后在攪拌下加入乙磺酸(55mg，0.5mmol)。在室溫攪拌反應(yīng)混合物～1小時，然后在沙浴上短時間加熱直到它變成均相。使溶液冷卻到室溫然后在冰浴中冷卻，通過過濾分離所得的沉淀得到111mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]苯甲酰胺晶體，熔點127.8-128.8℃。
元素分析Calculated for C23H31N5O％C，70.20；％H，7.94；％N，17.80；Found％C，69.82；％H，7.70；％N，17.68.
實施例2N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲烷磺酰胺 將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(160mL)溶液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入甲磺酸酐(90mg，0.5mmol)后撤去冰浴。反應(yīng)混合物攪拌35分鐘，用水洗滌3次，減壓濃縮，并用最少量的乙酸甲酯研磨。過濾分離所得的晶體，然后在Abderhalden干燥器中干燥，得94mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，熔點130-130.5℃。
元素分析Calculated for C17H29N5O2S％C，55.56；％H，7.95；％N，19.06；Found％C，55.37；％H，7.89；％N，18.03.
實施例3N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-氟苯磺酰胺水合物 將三乙胺(0.07mL，0.5mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入4-氟苯磺酰氯(11.3mg，0.5mmol)后撤去冰浴。在室溫下攪拌48小時，用水洗滌(2×150mL)，然后減壓濃縮。用乙酸甲酯將所得殘留物重結(jié)晶，然后在Abderhalden干燥器中干燥，得50mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-氟苯磺酰胺水合物，為白色晶體，熔點133.1-133.7℃。
元素分析Calculated for C22H30FN5O2S·H2O％C，56.75；％H，6.93；％N，15.04；Found％C.56.99；％H，6.58；％N，15.24.
實施例4N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基脲 將異氰酸苯酯(0.056mL，0.5mmol)加到冷卻的1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(150mg，0.5mmol)的二氯甲烷(150mL)溶液中，撤去冰浴。5分鐘后生成白色沉淀，。反應(yīng)混合物攪拌30分鐘然后減壓濃縮得到灰白色晶體。用少量乙醚將所需物轉(zhuǎn)移至漏斗中以過濾分離，然后在Abderhalden干燥器中干燥，得185mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基脲，熔點195.8-196.8℃。
元素分析Calculated for C23H32N6O％C，67.62；％H，7.89；％N，20.57；Found％C，66.84；％H，7.71；％N，20.54.
實施例5N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基硫脲水合物 采用實施例4的方法，使1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(100mg，0.35mmol)與異硫代氰酸苯酯(0.041mL，0.35mmol)反應(yīng)，得到97mg的N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N’-苯基硫脲水合物，為白色晶體，熔點160.0-160.8℃。
元素分析Calculated for C23H32N6S·H2O％C，62.41；％H，7.74；％N，18.99；Found％C，62.39；％H，7.47；％N，18.52.
實施例6N’-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺
將三乙胺(0.031mL，0.23mmol)加到1-(4-氨基丁基)-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(67mg，0.23mmol)的二氯甲烷(45mL)溶液中，并在冰浴中冷卻所得的混合物。加入二甲基氨磺酰氯(0.025mL，0.23mmol)后撤去冰浴。在室溫下攪拌反應(yīng)混合物～113小時，HPLC分析表明反應(yīng)并未完成。減壓除去二氯甲烷。加入1，2-二氯乙烷(50mL)并將反應(yīng)混合物加熱到60℃。3小時后加入更多的二甲基氨磺酰氯(2.5μl)并繼續(xù)加熱。22小時后反應(yīng)升至回流溫度，并回流100小時。用水提取2次，合并水相并減壓濃縮。用乙酸甲酯重結(jié)晶所得的殘留物，得10mg的N’-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺，為灰白色晶體，熔點129.5-131℃。M/Z＝397.1(M+H)+。
實施例7N-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲烷磺酰胺 步驟A加熱回流5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(60.0g，326mmol)和磷酰氯(600mL)的混合物2小時，減壓濃縮反應(yīng)混合物。將所得的殘留物與乙酸乙酯(300mL)混合然后過濾。濾液用碳酸氫鈉水溶液洗滌。分離各層并用乙酸乙酯提取水層兩次。合并有機層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到棕色固體。通過層析純化上述棕色固體(用60/40的乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)得到55g 2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶。
步驟B將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(60g，339mmol)緩慢加到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(50g，226mmol)，無水N，N-二甲基甲酰胺(500mL)和三乙胺(50mL，339mmol)的混合物中。攪拌反應(yīng)混合物過夜并減壓濃縮得到油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中然后用水洗滌。用硫酸鎂干燥有機層然后減壓濃縮得到深色油狀物。通過層析純化所得上述深色油狀物(用40/60乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)，得到64.5g 4-(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為鮮橙色油狀物，經(jīng)放置固化。
步驟C將苯酚(18.50g，196mmol)的二甘醇二甲醚(50mL)溶液緩慢滴加到冷卻的(0℃)的氫化鈉(8.28g，60％于礦物油中，207mmol)的二甘醇二甲醚(50mL)的懸浮液中。1小時后氣體發(fā)生停止，向反應(yīng)混合物中緩慢滴加4-(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(68.95g，185mmol)的二甘醇二甲醚(200mL)溶液。滴加完畢后加熱回流4小時，減壓濃縮反應(yīng)混合物得到黑色油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中并用1N氫氧化鈉提取以除去過量苯酚。用硫酸鎂干燥有機層然后減壓濃縮。通過層析純化殘留物(用30/70乙酸乙酯/己烷洗脫硅膠)得到40.67g 4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為橙色油狀物。
步驟D混合4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(9.17g，21.3mmol)，甲苯(50mL)，異丙醇(5mL)和5％鉑/炭(7.0g)并在帕爾反應(yīng)器中氫氣氣氛(50psi，3.5Kg/cm2)下保持過夜。通過過濾除去催化劑并減壓濃縮濾液。高真空度下干燥所得棕色油狀物得到7.47g 4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟E加熱回流步驟D產(chǎn)物，原乙酸三乙酯(3.59mL，19.58mmol)，無水甲苯(75mL)和吡啶鹽酸鹽(0.75g)的混合物1小時，然后減壓濃縮得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于乙酸乙酯中然后用水(×2)洗滌，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥然后減壓濃縮得到6.74g 4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。
步驟F將4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯(6.70g，15.8mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液緩慢滴加到冷卻的(0℃)的三氟乙酸(60mL)和二氯甲烷(100mL)的混合物中，使反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭⒎胖眠^夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用5％氫氧化鈉水溶液調(diào)成堿性(pH14)。分離各層并用二氯甲烷提取水層。合并有機層，用硫酸鎂干燥，并減壓濃縮，得到4.50g 4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基胺，為棕色油狀物。
步驟G加熱步驟F產(chǎn)物，三乙胺(2.0mL，14.6mmol)和無水乙腈(450mL)的混合物直到得到一均相溶液。向反應(yīng)混合物中緩慢加入甲磺酸酐(2.54g，14.6mmol)，反應(yīng)斷定在10分鐘內(nèi)完成。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用5％氫氧化鈉水溶液洗滌。分離水層并用二氯甲烷提取。合并有機層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到棕色固體。通過層析純化該物質(zhì)(用95/5二氯甲烷/甲醇洗脫硅膠)得到4.49g N-[4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，為淺棕色固體。
步驟H混合N-[4-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲烷磺酰胺(4.20g，10.4mmol)和乙酸銨(42g)并在密封管中于150℃加熱36小時，冷卻反應(yīng)混合物，然后溶于氯仿中。用10％氫氧化鈉水溶液提取所得的溶液。分離水層然后用氯仿提取多次。合并有機層，用硫酸鎂干燥并減壓濃縮得到黃色油狀物。將該油狀物溶于甲醇中并與1M氫氯酸的二乙醚溶液(10.4mL)混合。過濾分離所得到白色沉淀然后干燥。將固體溶于水中并用固體碳酸鈉調(diào)至pH10。通過過濾分離所得到的白色固體，用二乙醚洗滌，然后80℃真空干燥得到2.00gN-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺，熔點228-230℃。
元素分析Calculated for C14H23N5O2S％C，51.67；％H，7.12；％N，21.52；Found％C，51.48；％H，6.95；％N，21.51.
實施例8N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲烷磺酰胺 步驟A將三乙胺(3.3mL，23.7mL)加到冷卻的(0℃)的4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(8.60g，21.5mmol)和無水二氯甲烷(200mL)的混合物中。加入乙氧基乙酰氯(2.76g，22.5mmol)。1小時后反應(yīng)混合物溫?zé)岬绞覝夭嚢?小時。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到4-({3-[(乙氧乙?；?氨基]-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基}氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。將該油狀物與吡啶(130mL)混合并加熱回流過夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物得到棕色油狀物。將所得油狀物溶于二氯甲烷中，然后用水洗滌。用硫酸鎂干燥有機層并減壓濃縮。將殘留物溶于二乙醚，然后真空濃縮，得到8.21g的4-[2-(乙氧甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟B采用實施例7步驟F的方法，水解步驟A產(chǎn)物得到5.76g的4-[2-(乙氧甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺，為棕色油狀物。
步驟C采用實施例7步驟G的方法的，使4-[2-(乙氧甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(5.52g，15.0mmol)與甲磺酸酐(2.74g，15.7mmol)反應(yīng)得到6.26g的N-{4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺，為棕色油狀物。
步驟D采用實施例7步驟H的方法，氨化N-{4-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺(5.86g，13.1mmol)得到1.58g的N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺，為白色固體，熔點165-167℃。
元素分析Calculated for C16H27N5O3S％C，52.01；％H，7.37；％N，18.95；Found％C，51.83；％H，7.39；％N，18.88.
實施例9N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺 步驟A在氮氣氣氛中，將4-[2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(122mg，0.33mmol)溶于二氯甲烷和三乙胺(0.093mL，0.67mmol)中，在冰水浴中冷卻該溶液，將4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰氯(106mg，0.33mmol)的二氯甲烷溶液/漿液滴加到上述溶液中。移走冰浴并繼續(xù)攪拌反應(yīng)16小時。用10％碳酸鈉水溶液使反應(yīng)淬滅。分離水相并用二氯甲烷提取，合并有機相，用水，接著用鹽水洗滌，干燥(硫酸鈉)，輕輕傾倒并蒸發(fā)得到黃色油狀物。通過閃式層析純化(以92∶8二氯甲烷/甲醇至95∶5二氯甲烷/甲醇梯度洗脫硅膠)得到101mg的N-[4-(2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺，為淺黃色固體。通過HPLC測定純度97+％。
MS(CI)648(M+H)步驟B
將N-[4-(2-丁基-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺(101mg，0.16mmol)和乙酸銨(1.1g)置于帶有攪拌棒的加壓管中，密封該管并在150℃加熱16小時。冷卻反應(yīng)混合物至室溫并用水稀釋。用10％氫氧化鈉水溶液將所得的含水粘稠混合物調(diào)至堿性，并用氯仿(3×25mL)提取。依次用水，鹽水洗滌合并的有機相，干燥(硫酸鈉)，輕輕傾倒并蒸發(fā)得到黃色油狀物。通過快速柱層析法純化(以95∶5二氯甲烷/甲醇至9∶1二氯甲烷/甲醇梯度洗脫，和最后94∶5∶1二氯甲烷/甲醇/三乙胺洗脫硅膠)，得到14mg N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-[[2-(二甲基氨基)乙氧基](苯基)甲基]苯甲酰胺，為黃色油狀物。
1H-NMR(500 MHz，DMSO-d6)δ8.41(t，J＝5.5Hz，1H)，7.76(d.J＝8.3Hz，2H)；7.43(d，J＝8.3，2H)，7.37-7.31(m，4H)，7.26-7.22(m，1H)，5.84(bs，2H)，5.52(s，1H)，4.22(t，J＝7.7Hz，2H)，3.49(t，J＝5.8Hz，2H)，3.29(dd，J＝6.4，12.4Hz，2H)，2.76(t，J＝7.7Hz，2H)，2.58(t，J＝5.7Hz，2H)，2.32(s，3H)，2.27(s，3H)，2.22(s，6H)，1.73-1.65(m，4H)，1.61-1.55(m，2H)，1.35(sextet，J＝7.4Hz，2H)，0.86(t，J＝7.4Hz，3H)；13C-NMR(125MHz，DMSO-d6)δ165.9，153.0，148.1，145.4，142.0，138.6，133.5，128.23，127.4，127.3，127.1，126.4，126.1，124.5，103.0，82.0，66.3，58.0，45.2，43.6，38.4，29.3，28.8，26.1，26.0，21.7，21.0，13.6，12.2.
HRMS(CI)m/e 571.3763(M+H)，(571.3761 calcd for C34H47N6O2，M+H).
實施例10N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺
步驟A90℃下加熱6-甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(50g，0.29mol)和磷酰氯(500mL)的混合物一整夜，減壓除去過量的磷酰氯。將所得黑色油狀物倒入水(1.8L)和冰中。用氯仿(×8，3L總體積)提取混合物并過濾除去黑色顆粒并破乳。用10％碳酸鈉(×2)和鹽水洗滌合并的有機物，干燥，然后減壓下濃縮得到52g琥珀油。用庚烷(115mL)重結(jié)晶該油狀物得到43.5g2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶的大琥珀晶體。
步驟B90分鐘內(nèi)，將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(32.12g，170.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液加到2，4-二氯-6-甲基-3-硝基吡啶(35.09g，169.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(500mL)溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物過夜。利用24/40短路徑蒸餾頭和溫水通過真空蒸餾除去溶劑。將殘留物溶解在乙酸乙酯(700mL)中，用水洗滌(3×100mL)，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。柱層析(50×450mm硅膠，用1∶1的己烷和乙酸乙酯洗脫)純化粗產(chǎn)品，得到59.90g 4-[(2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C10分鐘內(nèi)，將苯酚(9.45g，100mmol)加到冷卻的(0℃)的氫化鈉(4.24g，60％，106mmol)的無水四氫呋喃(100mL)懸浮液中。0℃下攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。50分鐘內(nèi)，加入4-[(2-氯-6-甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(33.92g，94.5mmol)的無水四氫呋喃(250mL)溶液，同時反應(yīng)混合物保持0℃。反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢枰徽?，減壓濃縮。將殘留物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，用1N氫氧化鈉(300mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后濃縮至干燥。柱層析(400g硅膠，用7∶3的己烷和乙酸乙酯洗脫)純化粗產(chǎn)品，得到25.4g 4-[(6-甲基-3-硝基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟D混合步驟C的產(chǎn)物在甲苯(300mL)和異丙醇(33mL)的混合溶劑中形成的溶液和催化劑(16.68g的5％Pt/C)，并在帕爾反應(yīng)器中氫氣氣氛(30psi，2.1Kg/cm2，再充氣一次)下保持5小時。反應(yīng)混合物過濾除去催化劑，并減壓濃縮得到23.4g 4-[(3-氨基-6-甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為深色油狀物。
步驟E將步驟D產(chǎn)物溶解再二氯甲烷(500mL)中，然后在氮氣氣氛下冷卻至0℃。40分鐘內(nèi)，加入乙氧基乙酰氯(7.9g，63.5mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液，并使反應(yīng)混合物保持在0℃下。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢柽^夜。用水(2×100mL)和鹽水(100mL)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到26.4g 4-({3-[(乙氧基乙酰)氨基]-6-甲基-2-苯氧基吡啶-4-基}氨基)丁基氨基甲酸叔丁酯。
步驟F混合步驟E的產(chǎn)物和吡啶(250mL)和吡啶鹽酸鹽(20.85g，180mmol)，并在氮氣氣氛下加熱回流過夜。真空蒸餾除去吡啶。將殘留物分配在乙酸乙酯(600mL)和水(300mL)之間。分離各層。用水(2×300mL)洗滌有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到8.17g 4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為深色油狀物。用15％氫氧化鈉將水層的pH值調(diào)整至11，然后用乙酸乙酯(5×250mL)提出。合并提取液，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到9.46g 4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁烷-1-胺。
步驟G5分鐘內(nèi)，將甲磺酸酐(0.822g，4.72mmol)加入到4-[2-(乙氧基甲基)-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁-1-胺(1.5g，4.23mmol)在氯仿(35mL)和三乙胺(0.77mL)混合溶劑中形成的溶液中。攪拌反應(yīng)混合物2.5小時，然后用1N氫氧化鈉(10mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮，得到2.6g N-[4-(2-乙氧基甲基-6-甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基)甲磺酰胺粗產(chǎn)物。
步驟H混合步驟G的粗產(chǎn)物和乙酸銨(25.37g)，150℃下在壓力容器中加熱14.5小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后分配在氯仿(250mL)和10％氫氧化鈉之間。用氯仿(5×100mL)提取水層。用硫酸鎂干燥合并的有機層，然后減壓濃縮得到棕色油狀物。柱層析(10g硅膠，用2％甲醇在含有0.5％三乙胺的氯仿中洗脫)純化該油狀物，得到0.514g產(chǎn)物。將產(chǎn)物溶解在熱氯仿中，用活性炭處理，然后過濾，減壓濃縮得到0.37g N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺，為固體，熔點162-164℃。
元素分析Calculated for C15H25N5O3S·0.05HCl％C，50.43；％H，7.07；％Cl，0.50；％N，19.60；Found％C，50.36；％H，6.94；％Cl，0.63；％N，19.54.
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.53(s，1H)，5.09(s，2H)，4.71(s，2H)，4.55(bs，1H)，4.16(t，J＝7.5Hz，2H)，3.58(quartet，J＝7.1Hz，2H)，3.16(m，2H)，2.93(s，3H)，2.47(s，3H)，1.92(quintet，J＝7.5Hz，2 H)，1.64(quintet，J＝7.2Hz，2H)，1.23(t，J＝6.9Hz，3H)；MS(CI)m/e 356(M+H)
實施例112-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(甲基磺基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺 步驟A將4-(2-氨基乙基)-1-芐基哌啶(9.88g，45.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液滴加到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(10.00g，45.2mmol)和三乙胺(12.6mL，90.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(320mL)溶液中。室溫下攪拌反應(yīng)混合物約20小時，然后減壓濃縮。將殘留物分配在乙酸乙酯和水之間。分層，并用乙酸乙酯提取水層。合并有機層，用鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮得到橙色油狀物。通過快速柱層析法(400mL硅膠，用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，然后用15％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，最后用40％的乙酸乙酯的己烷溶液洗脫)純化油狀物，得到11.00g N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-胺。
步驟B將氫化鈉(1.196g，60％，29.9mmol)加入到苯酚(2.81g，29.9mol)的二甘醇二甲醚(40mL)溶液。停止放出氣體后，混合物攪拌15分鐘。將N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-胺(10.9g，27.2mmol)的熱二甘醇二甲醚溶液加入到酚鹽混合物中。加熱回流該反應(yīng)混合物1.5小時，冷卻至室溫，然后濃縮除去二甘醇二甲醚(60℃浴，21Pa)。柱層析(首先用1％甲醇的二氯甲烷中的溶液洗脫殘余二甘醇二甲醚，然后用5％甲醇的二氯甲烷中的溶液洗脫)純化殘余物得到產(chǎn)物。濃縮流分，得到5.91g N-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-胺，為橙棕色油狀物，通過靜置固化。
步驟C20分鐘內(nèi)，分批將硼氫化鈉(0.727g，19.2mmol)加入到氯化鎳(II)六水合物(1.52g，6.40mmol)的甲醇溶液中。15分鐘內(nèi)滴加入步驟B甲醇的溶液。加入更多硼氫化鈉(50mg)。用過濾試劑層過濾反應(yīng)混合物，并用甲醇洗滌過濾器。濾液減壓濃縮。柱層析法(硅膠填料，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)分離殘余物，得到4.6g N4(原文有誤？)-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-3，4-二胺，為橙棕色油狀物，通過靜置固化。
步驟D將乙氧基乙酰氯(1.31g，10.7mmol)逐滴滴加到步驟C的產(chǎn)物和三乙胺(1.64mL，13mmol)的二氯甲烷(60mL)溶液中。攪拌反應(yīng)混合物約20小時，然后減壓濃縮得到N-(4-{[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]氨基}-5，6-二甲基-2-苯氧基哌啶-3-基)-2-乙氧基乙酰胺粗產(chǎn)品。將該乙酰胺溶解在吡啶(60mL)中，加入吡啶鹽酸鹽(1.17g)，加熱回流4小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后減壓除去吡啶。用5％碳酸鈉(100mL)和水(50mL)稀釋殘余物，然后倒入二氯甲烷(300mL)中。用水和鹽水依次洗滌有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。通過層析(用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫)純化該殘余物，得到5.1g 1-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶，為橙紅色固體。
步驟E在耐壓瓶(350mL)中混合步驟D的產(chǎn)物和乙酸銨(51g)。密封耐壓瓶，然后150℃下加熱24小時，隨后170℃下加熱過夜。冷卻反應(yīng)混合物，然后倒入水中。用氫氧化銨使所得溶液呈堿性，然后用氯仿(×2)提取。用鹽水洗滌合并的有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在異丙醇(50mL)中。滴加入乙磺酸(21mmol)，并加熱回流30分鐘。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫過夜，然后減壓濃縮。將所得油狀殘余物溶解在水(200mL)中，用二氯甲烷(×3)提取，然后用10％氫氧化鈉調(diào)為堿性(pH14)。用氯仿(×3)提取水層。用鹽水洗滌合并的有機層，用硫酸鎂干燥，然后濃縮得到棕色油狀物，使之固化。將該固體用乙腈重結(jié)晶，得到2.54g褐色固體。將該固體溶解在2％甲醇的二氯甲烷溶液，過硅膠(130g)柱。用2％甲醇的含有1％三乙胺的二氯甲烷溶液洗脫該柱子。濃縮流分得到2.4g 1-[2-(1-芐基哌啶-4-基)乙基]-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為灰白色固體。
步驟F將步驟E的產(chǎn)物溶解在50/50乙醇/甲醇的沸騰混合物中。緩慢冷卻溶液，然后加入到裝有鈀/碳(0.60g)的帕爾燒瓶中，所述鈀/碳已用乙醇濕潤。將燒瓶放入氫氣氣氛下約40小時，其間再加入1.7g催化劑。通過過濾試劑層過濾反應(yīng)混合物，并用甲醇洗滌濾餅。減壓濃縮濾液。將殘余物與二氯甲烷混合，然后濃縮。高真空度下干燥所得固體，得到1.5g 2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟G將甲磺酸酐(0.161g，0.923mmol)一次性加入到冷卻的(0℃)的2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(0.306g，0.923mmol)在二氯甲烷(10mL)中形成的淤漿中。攪拌過夜，然后再次加入甲磺酸酐(20mg)。用氯仿稀釋反應(yīng)混合物，然后倒入5％氫氧化鈉(25mL)中。用水和鹽水洗滌有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到白色固體。將其與二氯甲烷和甲烷(4mL)混合，然后減壓濃縮得到白色固體。用乙腈重結(jié)晶，得到237mg 2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{[2-1-(甲磺基)哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為白色晶體，熔點214.7℃。
元素分析Calculated for C19H31N5O3S％C，55.72；％H，7.63；％N，17.10；Found％C，56.08；％H，7.45；％N，17.32.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.76(s，2H)，4.64(s，2H)，4.35-4.29(m，2H)，3.6-3.48(m，4H)，2.85(s，3H)，2.71(dt，J＝10，2.1Hz，2H)，2.39(s，3H)，2.31(s，3H)，1.83(d，j＝10.8Hz，2H)，1.75-1.67(m，2H)，1.62-1.48(m，1H)，1.34-1.20(m，2H)，1.15(t，J＝7.0Hz，3H)；13C NMR(75Hz，DMSO-d6)δ149.3，148.3，146.4，138.8，124.5，102.7，65.2，64.5，45.4，42.6，37.7，34.0，32.7，30.9，21.9，14.9，12.4；MS(CI)m/e 410.2209(410.2226 calcd for C19H31N5O3S，M+H).
實施例12N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]甲磺酰胺 步驟A將3-氨基丙基氨基甲酸叔丁酯(121.39g，697mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(200mL)溶液緩慢逐滴加入到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(110g，498mmol)和三乙胺(104mL，746mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(900mL)溶液中。室溫下攪拌20小時后，加熱至55℃。24小時后加入0.1當量氨基甲酸酯。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫過夜，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯(3L)中。將溶液分成3等份(每份1L)。用水(2×1L)洗滌各等份。用碳酸鉀將水洗液的pH調(diào)整至10，然后用乙酸乙酯提取。合并所有的乙酸乙酯層，硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮得到181g粗產(chǎn)物。用乙腈重結(jié)晶該產(chǎn)物得到138g 3-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為黃色晶體。
步驟B用己烷洗去氫化鈉(17.23g，60％)的礦物油，然后與二甘醇二甲醚(50mL)混合。氮氣氣氛下冷卻混合物。滴加到苯酚(35.82g，408mmol)的二甘醇二甲醚(150mL)溶液中。停止放出氣體后，攪拌反應(yīng)混合物15分鐘。加入步驟A的產(chǎn)物。62℃下加熱反應(yīng)混合物幾天，然后將溫度增加至120℃，攪拌過夜。使之冷卻至室溫，然后與水(4L)混合，攪拌約4.5小時，然后使之靜置過夜。將固體溶解在乙酸乙酯中，然后過濾除去顆粒物。減壓下濃縮濾液。將殘余物溶解在乙酸乙酯(～2L)，用飽和碳酸鉀洗滌(3×2L)，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到152.3g3-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯。
步驟C在氫化燒瓶中，將5％Pt/C和甲苯(50mL)的混合物加入到步驟B產(chǎn)物在甲苯(1850mL)和異丙醇(125mL)混合溶劑中形成的溶液中。將該燒瓶放入氫氣氣氛下過夜。再加入22.5g催化劑，并把燒瓶放回氫化器中。6小時后加入催化劑(40g)和異丙醇(50mL)。將燒瓶放回氫化器中過夜。過濾反應(yīng)混合物除去催化劑。減壓下濃縮濾液，得到3-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為油狀物。將油狀物溶解在吡啶(1300mL)中。
步驟D將一部分步驟C的吡啶溶液(650ml)在冰浴中冷卻10分鐘。5分鐘內(nèi)緩慢加入乙酰氯(12.65g，0.1779mmol)。撤去冰浴并加熱回流。將溫度降低到110℃，攪拌反應(yīng)混合物過夜。減壓下除去吡啶。用庚烷將殘余物制成淤漿，然后減壓下濃縮?；旌蠚堄辔锖鸵宜嵋阴?1L)和水(1L)。用50％氫氧化鈉將pH調(diào)整至12并分層。過濾有機層除去顆粒物，然后減壓下濃縮。用乙酸乙酯淤漿純化殘余物得到39.8g 3-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基氨基甲酸叔丁酯，為淺棕色絨狀固體。
步驟E在2L燒瓶中混合步驟D的產(chǎn)物和乙酸銨(410g)。將一團紙巾塞入瓶頸。145℃下攪拌加熱反應(yīng)混合物20.5小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用氫氧化銨將pH調(diào)整至11，并用氯仿提取混合物。用1％碳酸鈉(7×1L)洗滌提取物?；旌祥_始的水相和頭三遍洗液，過濾除去顆粒物，然后濃縮至體積約1L。用氯仿在連續(xù)萃取器中將該溶液提取一整夜。減壓下濃縮氯仿提取液，得到27.1g灰白色固體。用乙酸甲酯將該產(chǎn)物制成淤漿，得到約16.5g N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]乙酰胺。用乙腈重結(jié)晶一部分(0.5g)，得到約0.3g純乙酰胺，為白色固體，熔點181.4-182.1℃。元素分析Calculated for C14H21N5O·0.50H2O％C，59.13；％H，7.80；％N，24.63；Found％C，59.08；％H，8.00；％N，24.73.
步驟F將濃鹽酸(5mL)緩慢加入N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]乙酰胺(15.94g，57.9mmol)的無水乙醇(100mL)溶液中。立即形成沉淀物并且混合物變稠。加入乙醇(50mL)，隨后加入濃鹽酸(119.5mL)。該反應(yīng)混合物加熱回流2天。減壓下除去溶劑。將水(250mL)加入殘余物，加入固體碳酸鉀直至pH達到7，此時加入氯仿(250mL)。加入碳酸鈉直至pH達到10，然后加入50％氫氧化鈉直至pH達到14。再加入氯仿(500mL)稀釋混合物，然后室溫下攪拌2天。分離有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。用乙腈重結(jié)晶殘余物得到8.42g 1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為灰白色結(jié)晶體，熔點191.5-191.9℃。
元素分析Calculated for C12H19N5·0.25H2O％C，60.61；％H8.26；％N，29.45；Found％C，60.50；％H，8.28；％N，29.57.
步驟G將甲磺酰氯(0.86mL，11.1mmol)加入到冷凍(0℃)的1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(1.00g，4.3mmol)在氯仿(50mL)和三乙胺(1.85mL，13.3mmol)混合溶劑中形成的溶液中。15分鐘后，從冰浴中取出反應(yīng)混合物，室溫下攪拌過夜。約5小時內(nèi)，加入三份三乙胺(0.6當量)和甲磺酰氯(0.5當量)，然后攪拌過夜。用水稀釋該反應(yīng)混合物，然后在連續(xù)萃取裝置中用氯仿提取一周。減壓濃縮氯仿提取物，得到黃色油狀物。通過層析(用0-5％梯度甲醇在氯仿中的溶液洗脫)提出該油狀物，得到0.61g固體。用乙腈、異丙醇和水的混合溶劑重結(jié)晶，得到0.31g N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]甲磺酰胺的甲磺酸鹽，為無色晶體，熔點241.6-242.2℃。
元素分析Calculated for C13H21N5O2S·CH4O3S％C，41.26；％H，6.18；％N，17.19；Found％C，41.36；％H，6.35；％N，17.32.
1H NMR(Bruker 300MHz，DMSO-d6)δ12.76(s，1H)，7.81(s，2H)，7.18(t，J＝5.6Hz.1H)，4.36(t，J＝8.1，2H)，3.09(q，J＝6.2Hz，2H)，2.93(s，3H)，2.58(s，3H)，2.42(s，6H)，2.36(s，3H)，1.90(p，J＝8.1Hz，2H).
MS(CI)m/e 408(M+H).
實施例13N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}甲磺酰氨 步驟A利用實施例12步驟D的一般方法，用乙氧基乙酰氯(21.81g，178mmol)處理3-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丙基氨基甲酸叔丁酯的吡啶溶液(參見實施例12步驟C)。混合該粗產(chǎn)物和二氯甲烷(2L)和水(2L)。用50％氫氧化鈉將pH調(diào)整為12，并攪拌混合物30分鐘。分離有機相，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。用庚烷稀釋殘余物，然后濃縮除去殘余吡啶。重復(fù)幾次該步驟得到64.8g3-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基氨基甲酸叔丁酯，為棕褐色。
步驟B2L燒瓶中混合乙酸銨(500g)和3-[2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基氨基甲酸叔丁酯(35.09g，77mmol)。用一團紙巾塞住燒瓶頸。150℃下加熱攪拌27小時后冷卻至室溫，然后放入冰浴中。加入氫氧化銨直至pH達到11。加入氫氧化鈉(50％)直到pH達到14。通過過濾分離所得沉淀物，然后溶解在氯仿(4L)中。將該氯仿溶液分成兩份，用飽和碳酸鉀(2×2L)洗滌每一份。合并有機物，用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到30.3g粗產(chǎn)物。用乙酸甲酯將產(chǎn)物制成淤漿，得到13.7g N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}乙酰銨，為灰色固體，熔點161.8-162.3℃。
元素分析Calculated for C16H25N5O2％C，60.17；％H，7.89；％N，21.93；Found％C，59.97；％H，7.70；％N，22.1 9.
1H NMR(Bruker 300MHz，CHCl3-d)δ4.91(s，2H)，4.73(s，2H)，4.43(t，J＝8.1Hz，2H)，3.59(q，J＝6.8Hz，2H)，2.81(t，J＝6.8Hz，2H)，2.47(s，3H)，2.45(s，3H)，1.94(p，J＝8.1Hz，2H)，1.22(t，J＝6.8Hz，3H)，1.08(s，2H).
MS(CI)m/e 278(M+H).
步驟C利用實施例12步驟F的一般方法，水解N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}乙酰銨(13.14g，4.1mmol)，純化得到10.81g 1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為棕色固體，熔點126.8-127.2℃。
元素分析Calculated for C14H23N5O％C，60.62；％H，8.36；％N，25.25；Found％C，60.49；％H，8.38；％N，25.33.
步驟D利用實施例12步驟G的一般方法，使1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(1.00g，3.6mmol)與甲磺酰氯反應(yīng)，得到0.67g N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}甲磺酰氨，為灰白色固體，熔點223.2-223.9℃。
元素分析Calculated for C15H25N5O3S％C，50.69；％H，7.09；％N，19.70；Found％C，50.44；％H，6.95；％N，19.67.
1H NMR(Bruker 300MHz，DMSO-d6)δ7.18(t，J＝5.6Hz，1H)，5.74(s，2H)，4.64(s，2H)，4.33(t，J＝8.1Hz，2H)，3.53(q，J＝7.5Hz，2H)，3.06(q，J＝6.2Hz，2H)，2.91(s，3H)，2.39(s，3H)，2.31(s，3H)，1.92(p，J＝8.1Hz，2H)，1.14(t，J＝6.8Hz，3H).
MS(CI)m/e 356(M+H).
實施例14N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰氨 步驟A將丙腈(120mL)加入丙二酰二氯(100g)，氮氣下攪拌反應(yīng)混合物24小時。加入二噁烷(200ml)。過濾分離所得固體，用水洗滌并抽干。將它溶解在甲醇(～75mL)中，然后與二噁烷(300mL)混合。減壓下減少反應(yīng)混合物體積，直至形成稠的沉淀物。通過過濾分離所得沉淀物，用二噁烷洗滌，空氣干燥得到64.4g鹽酸6-氯-4-羥基-5-甲基-1H-吡啶-2-酮，為白色固體。
步驟B將鹽酸6-氯-4-羥基-5-甲基-1H-吡啶-2-酮(64g)溶解在硫酸(325mL)中，同時在冰浴中冷卻。90分鐘內(nèi)逐滴滴加硝酸。再攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后倒入冰水(2L)中。通過過濾分離所得沉淀物，用水洗滌，然后干燥得到42.5g 6-氯-4-羥基-5-甲基-3-硝基-1H-吡啶-2-酮，為淺黃色固體。
步驟C將三乙胺(102mL，742mmol)加入到冷卻的(冰浴)6-氯-4-羥基-5-甲基-3-硝基-1H-吡啶-2-酮(50.6g，247mmol)和無水二氯甲烷(1800mL)的混合物中。45分鐘內(nèi)逐滴滴加三氟甲磺酸酐(83.2mL，495mmol)。1小時后，20分鐘內(nèi)加入4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(51.2g，272mmol)。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜。用水洗滌(4×1L)反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到橙色油狀物。通過柱層析(1100mL硅膠，用50/50乙酸乙酯/己烷洗脫)純化該油狀物得到93.5g 4-({4-[(叔丁氧基羰基)氨基]丁基}氨基)-6-氯-5-甲基-3-硝基吡啶-2-基三氟甲磺酸酯，為黃色油狀物。
步驟D混合步驟C的粗產(chǎn)物和甲苯(2L)、三乙胺(25.4mL)和二苯胺(35.5mL)，加熱回流1小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用水(4×4L)和鹽水(200mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到100g橙色油狀物。通過柱層析(1200mL硅膠，用20/80乙酸乙酯/己烷洗脫)純化一部分(70g)得到52g 4-{[2-氯-6-(二苯基氨基)-3-甲基-5-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺黃色油狀物。
步驟E將氫硼化鈉(0.40g，10.6mmol)緩慢加入氯化鎳(II)六水合物(0.70g，2.93mmol)的甲醇(75mL)溶液中。15分鐘后，向反應(yīng)混合物中加入4-{[2-氯-6-(二苯基氨基)-3-甲基-5-硝基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯在甲醇(25mL)和二氯甲烷(20mL)混合溶劑中形成的溶液。緩慢加入氫硼化鈉(0.93g)。30分鐘后，高效液相色譜分析表明，反應(yīng)已完成。利用相同條件將反應(yīng)放大到起始物48.7g。合并小試和放大試驗的反應(yīng)混合物，通過Celite過濾助劑層過濾。將濾液通過硅膠填料，用50/50二氯甲烷/甲醇洗滌填料。減壓濃縮濾液得到46.3g 4-{[3-氨基-6-氯-4-(二苯基氨基)-5-甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺棕色油狀物。
步驟F將三乙胺(12.2mL)加入到冷凍(0℃)的步驟E的產(chǎn)物的二氯甲烷(300mL)溶液中。通過另一個加料口加入乙氧基乙酰氯(10.8g)的二氯甲烷(100mL)溶液中。使反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝剡^夜。分析表明，還有一些起始物，因此加入0.2當量?；?。1小時后，用水(3×500mL)洗滌反應(yīng)混合物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到4-{[2-氯-6-(二苯基氨基)-5-(2-乙氧基乙?；被?-3-甲基吡啶-4-基]氨基}丁基氨基甲酸叔丁酯，為棕色油狀物。將油狀物溶解在吡啶(300mL)中。加入鹽酸吡啶(40g)，加熱回流該反應(yīng)混合物4小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在乙酸乙酯(500mL)中，用水(500mL)洗滌。形成乳液，向水層中加入氯化鈉澄清。將有機層在用硫酸鎂干燥，減壓濃縮得到52.1g深棕色油狀物。通過柱層析法(硅膠，30/70乙酸乙酯/己烷)純化該油狀物，得到24.8g 4-[6-氯-4-(二苯基氨基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為淺黃色油狀物。
步驟G15分鐘內(nèi)，將三氟乙酸(160mL)加入到冷凍的(0℃)步驟F產(chǎn)物的二氯甲烷(500mL)溶液中。反應(yīng)混合物攪拌過夜，然后減壓濃縮。將殘余物分配在二氯甲烷(500mL)和10％氫氧化鈉(500mL)之間。用二氯甲烷(×2)提取堿性層。用硫酸鎂干燥合并的有機層，然后減壓濃縮，得到棕色油狀物。將油狀物溶解在異丙醇(100mL)中，然后與41mL 1M鹽酸的乙醚溶液混合。將乙醚(200mL)緩慢加入混合物中。過濾分離所得沉淀物，用乙醚洗滌，80℃真空烘箱中干燥過夜，得到11.25g所得產(chǎn)物的鹽酸鹽，為白色固體。將固體溶解在水(200mL)中，與碳酸鈉(15g)混合，然后用二氯甲烷(3×500mL)提取。用硫酸鎂干燥合并的提取物，然后減壓濃縮得到10.2gl-(4-氨基丁基)-N，N-二苯基-6-氯-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為透明油狀物。
步驟H氮氣氣氛下，向10％鈀/碳(10g)和乙醇(200mL)混合物中加入甲酸銨(13.7g)。將步驟H的產(chǎn)物溶解在熱的乙醇(600mL)和甲醇(400mL)混合物中，然后加入到反應(yīng)混合物中。加熱回流反應(yīng)混合物4小時，然后使之冷卻至室溫過夜。分析表明，反應(yīng)大約僅完成了一半，因此再加入催化劑(5g)和甲酸銨(5g)，加熱回流反應(yīng)混合物4小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后通過Celite過濾助劑層過濾。用50/50乙醇/甲醇(1L)洗滌濾餅。減壓除去溶劑得透明油狀物。將油狀物分配在二氯甲烷(500mL)和10％氫氧化鈉(500mL)之間。用二氯甲烷抽提水層。用硫酸鎂干燥合并的有機層，然后減壓濃縮得到4.30g 1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為透明油狀物，靜置后部分固化。
步驟I將甲磺酰氯(4當量)滴加到1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(2.25g，8.11mmol)、三乙胺(10.2mL，73.0mmol)和氯仿(225mL)混合物中。減壓除去溶劑，得到油狀物。將油狀物溶解在10％氫氧化鈉(200mL)中，然后用氯仿抽提(3×300mL)。用硫酸鎂干燥合并的提取物，然后減壓濃縮，得到透明油狀物。通過色譜法(硅膠，用90/10二氯甲烷/甲醇洗脫)純化該油狀物得到白色固體。80℃下將產(chǎn)物真空干燥過夜，得到0.71g N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰氨，為白色固體，熔點173-175℃。
元素分析Calculated for C15H25N5O3S％C，50.69；％H，7.09；％N，19.70；Found％C，50.51；％H，6.91；％N，19.49.
實施例15-30步驟A加熱回流5，6-二甲基-3-硝基吡啶-2，4-二醇(14.87g)在磷酰氯(150mL)中的懸浮液2小時。通過蒸餾除去過量的磷酰氯。將殘余物溶解在水中，用氫氧化銨中和，用乙酸乙酯抽提兩次。合并有機層，用鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，然后減壓濃縮。用沸騰的己烷將殘余物制成淤漿，熱過濾。冷卻濾液。通過過濾分離所得沉淀物，空氣干燥得到6.8g 2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶，為白色粉末。
步驟B將4-氨基丁基氨基甲酸叔丁酯(8.52g，45.24mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液加入到2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(10.00g，45.24mmol)和三乙胺(12.6mL，90.5mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(300mL)溶液中。攪拌過夜，然后減壓濃縮。將殘余物分配在水和乙酸乙酯之間。分層，用乙酸乙酯提取水層。合并有機物，用鹽水洗滌，然后減壓濃縮得到棕色油狀殘余物。通過快速柱層析法(400mL硅膠，開始用10％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗滌，然后梯度增加到15％，然后25％)純化該產(chǎn)物，得到8.1g4-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為黃色固體。
步驟C10分鐘內(nèi)，將苯酚(2.164g，23.00mmol)固體加入到氫化鈉(0.972g，24.3mmol)的二甘醇二甘醚(24mL)的懸浮液中。攪拌反應(yīng)混合物30分鐘，然后加入步驟B的產(chǎn)物固體。反應(yīng)混合物在80℃下攪拌2.5小時后冷卻至室溫，過夜。減壓除去二甘醇二甘醚得到油狀殘余物。將殘余物與冷水混合，攪拌過夜。加入乙酸乙酯，并分層。用乙酸乙酯抽提水層。合并有機層，用水和鹽水洗滌，硫酸鈉上干燥，快速柱層析法(400mL硅膠，用25％乙酸乙酯在己烷中的溶液洗滌)純化，得到7.1g 4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為橙色油狀物，隨后固化。
步驟D將4-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯在甲苯(150mL)和異丙醇(10mL)混合溶劑中形成的溶液加入到10％鈀/碳在甲苯中形成的淤漿中混合，放入氫氣氣氛下的帕爾容器中24小時。在1.5小時(2.2g)和3小時(3g)時再加入催化劑。通過Celite過濾劑層過濾反應(yīng)混合物除去催化劑。用乙醇(1L)、乙醇/甲醇(1L)和甲醇(1L)洗滌過濾劑層。濾液減壓濃縮。將殘余物與二氯甲烷和庚烷混合，然后減壓濃縮得到6.17g 4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯，為淤漿狀棕黃色油狀物。
步驟E將乙酸二乙氧基甲酯(2.76mL，16.93mmol)和吡啶鹽酸鹽(0.037g，0.323mmol)加入到步驟D產(chǎn)物的甲苯(72mL)溶液中。反應(yīng)回流2小時，然后冷卻至室溫過夜。減壓濃縮反應(yīng)混合物，然后將殘余物與甲苯混合并濃縮，重復(fù)一次。將所得油狀物溶解在氯仿中，用飽和碳酸鈉、水和鹽水洗滌；用硫酸鎂干燥；然后減壓濃縮得到5.37g4-(6，7-二甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯，為非常深的棕色油狀物/固體。
步驟F試管中混合步驟E的產(chǎn)物和乙酸銨(47g)。將試管密封，150℃下加熱20小時。將反應(yīng)混合物倒入水中，用10％氫氧化鈉將pH調(diào)整為10。用氯仿(×9)提取堿性溶液。用固體氯化鈉處理堿性層，然后用氯仿提取。合并有機物，硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮得到淺黃色固體。將固體溶解在氯仿和甲醇的混合溶劑中，然后與50mL乙醚中的1N鹽酸混合。除去溶劑，并將所得油狀物溶解在水中。用二氯甲烷(×3)提取該溶液，用50％氫氧化鈉使之呈堿性(pH10)，然后用氯仿(×3)提取。向水溶液中加入氯化鈉，用氯仿(×3)提取該水溶液。合并有機物，硫酸鈉上干燥，減壓濃縮得到黃色固體。用乙醇再結(jié)晶所得固體，得到2.62g固體。將一部分(500mg)溶解在甲醇中，減壓濃縮，然后在70℃下的真空烘箱中干燥一周，得到0.46gN-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺固體，熔點217-219℃。
元素分析
Calculated for C14H21N5O％C，61.07；％H，7.69；％N，25.43；Found％C，60.87；％H，7.75；％N，25.43.
步驟G將N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺(～2.1g)在6N鹽酸(30mL)中形成的溶液密封在燒瓶中，然后在100℃下加熱約30小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后過濾除去所有顆粒物。用25％氫氧化鈉使濾液呈堿性(pH14)，然后用氯仿(×2)提取。將水層與氯化鈉(20g)合并，然后用氯仿(×3)提取。合并有機物，用鹽水洗滌，硫酸鈉干燥，然后減壓濃縮得到1.44g 1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺。
步驟H利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中過夜。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。
實施例30N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-{(E)-[4-(二甲基氨基)苯基]二氮烯基}苯磺酰胺
利用實施例15-29的方法，將4-二甲基氨基偶氮苯-4’-磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為521.2452。
實施例31N’-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺 利用實施例15-29的方法，將二甲基磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為341.1770。
實施例32-46利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見實施例10的步驟F)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中16小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。

實施例47N-[4-(4-氨基-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-{(E)-[4-(二甲基氨基)苯基]二氮烯基}苯磺酰胺 利用實施例32-46的方法，將4-二甲基氨基偶氮苯-4’-磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-2-乙氧基甲基-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為565.2720。
實施例48N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}-1-[(1S，4R)-2-乙氧基甲基-6-甲基-2-氧代雙環(huán)[2.2.1]庚-1-基]甲酰胺
利用實施例32-46的方法，將D-(+)-10-樟腦磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為565.2720。
實施例49-56利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見實施例11的步驟F)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中16小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。

實施例571-(2-{1-[4-(4-二甲基氨基苯基偶氮)苯磺基]哌啶-4-基}乙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺 利用實施例49-56的方法，將4-二甲基氨基偶氮苯-4’-磺酰氯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為619.3185。
實施例584-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]乙基}-N，N-二甲基哌啶-1-磺酰胺
利用實施例49-56的方法，使二甲基磺酰氯與2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-(2-哌啶-4-基乙基)-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為439.2510。
實施例591-[4-(1，1-二氧代異噻唑烷基-2-基)丁基]-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺 步驟A利用實施例15步驟E的一般方法，使4-[(3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]丁基氨基甲酸叔丁酯(3.41g，8.51mmol)與原丁酸三甲酯(1.50mL，9.37mmol)反應(yīng)得到3.2g 4-(6，7-二甲基-4-苯氧基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基氨基甲酸叔丁酯的粗產(chǎn)品，為淺紫色半固體。
步驟B150℃下，在密封管中加熱步驟A的產(chǎn)物和乙酸銨(32g)的混合物過夜。再次加入乙酸銨(10g)，再次密封壓力燒瓶，160℃下加熱混合物20小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用水稀釋，用氫氧化銨使之呈堿性，用固體氯化鈉使之飽和，然后用氯仿(×4)提取。合并提取物，用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到黃色固體。將該固體溶解在氯仿中，用2％氫氧化鈉洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到橙黃色固體。用異丙醇重結(jié)晶該固體，得到N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺固體，熔點200.1-201.4℃。
元素分析Calculated for C17H27N5O％C，64.32；％H，8.57；％N，22.06；Found％C，64.21；％H，8.49；％N，21.96.
步驟C在壓力容器中混合N-[4-(4-氨基-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]乙酰胺和6N鹽酸(75mL)。密封容器，然后在100℃下加熱過夜。再加入1mL 6N鹽酸，繼續(xù)再加熱6小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫過夜，然后用乙酸乙酯(×2)提取。冰浴中冷卻水層，用50％氫氧化鈉使之呈堿性(pH13)，用氯化鈉使之飽和，然后用氯仿(×3)提取。用鹽水洗滌合并的有機物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到0.98g 1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為褐色固體。
步驟D將氯代丙磺酰氯(0.221mL，1.82mmol)逐滴滴加到冷凍的(0℃)1-(4-氨基丁基)-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(0.500g，1.82mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液中。加完后，反應(yīng)混合物攪拌20分鐘，然后滴加三乙胺(0.245mL，2.51mmol)。加完后，攪拌反應(yīng)混合物20分鐘，然后將反應(yīng)混合物倒入水中。分層，用鹽水洗滌有機層，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮。將殘余物溶解在N，N-二甲基甲酰胺(10mL)中。加入1，8-二氮雙環(huán)[5，4，0]十一-7-烯(0.272mL，1.82mmol)，攪拌過夜。將反應(yīng)混合物倒入水中，用氯仿提取(×3)。依次用水、鹽水洗滌合并的提取物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到淺黃色油狀物。將該油狀物溶解在乙腈中，然后減壓濃縮得到淺黃白色固體。用異丙醇重結(jié)晶，得到0.53g 1-[4-(1，1-二氧代異噻唑烷-2-基)丁基]-6，7-二甲基-2-丙基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺，為橙黃色固體，熔點155.1-161.2℃。
元素分析
Calculated for C18H29N5O2S％C，56.97；％H，7.70；％N，18.45；Found％C，56.61；％H，7.77；％N，18.14.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ5.67(s，2H)，4.21(apparent t，J＝7.5Hz，2H)，3.2-3.08(m，4H)，2.92(t，J＝6.5Hz，2H)，2.77(t，J＝7.5Hz，2H)，2.37(s，3H)，2.30(s，3H)，2.19(quintet，J＝6.7Hz，2H)，1.78(sextet，J＝7.4Hz，2H)，1.73-1.55(m，4H)，1.00(t，J＝7.4Hz，3H)；MS(CI)m/e 380.2117(380.2120 calcd for C18H29N5O2S，M+H).
實施例60-69利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見實施例11的步驟F)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入合適的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中16小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。
實施例70N’-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N，N-二甲基磺酰胺
利用實施例60-69的方法，將二甲基磺酰氯與1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為341.1770。
實施例71 利用實施例60-69的方法，將D-(+)-10-樟腦磺酰氯與1-(3-氨基丙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為448.2317。
實施例72-87利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(25mg，參見實施例13的步驟C)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中～17小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。
實施例88N’-[4-(4-氨基-2-乙氧基甲基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]-N，N-二甲基磺酰胺
利用實施例72-87的方法，將二甲基磺酰氯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為385.2001。
實施例89 利用實施例72-87的方法，將D-(+)-10-樟腦磺酰氯與1-(3-氨基丙基)-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)得到所需產(chǎn)物。觀察到的準確質(zhì)量為492.2629。
實施例90-112步驟A將2，4-二氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶(60g，271mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(600mL)溶液冷卻到0℃。逐滴滴加三乙胺(44.8mL，326mmol)，隨后滴加2-氨基乙基氨基甲酸叔丁酯(52.2g，326mmol)。30分鐘后，撤去冰浴，加熱至60℃。在60℃下過夜，然后減壓濃縮得到橙色油狀物。將該油狀物溶解在乙酸乙酯(1L)中，用水(3×500mL)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮得到黃色油狀物。用甲醇(～100mL)研磨該油狀物。過濾分離得固體，用冷甲醇洗滌，得到72.3g 2-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯固體。
步驟B向冰凍(0℃)的氫化鈉(0.52g，60％，13.1mmol)在二甘醇二甲醚(4mL)中形成的懸浮液中分批加入苯酚(1.19g，12.6mmol)。然后攪拌30分鐘。加入2-[(2-氯-5，6-二甲基-3-硝基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(3.0g，8.70mmol)的二甘醇二甲醚(6mL)溫溶液，90℃下加熱反應(yīng)混合物過夜。冷卻反應(yīng)混合物，緩慢倒入水(100mL)中。過濾分離，得褐色固體，用水洗滌，干燥，然后用異丙醇(25mL)重結(jié)晶得到2.07g2-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色針狀物。用66.5g起始物重復(fù)該反應(yīng)，得到50.4g白色針狀物的產(chǎn)物，熔點158-160℃。
步驟C向2-[(2，3-二甲基-5-硝基-6-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(50.4g)在甲苯(500mL)和甲醇(40mL)混合溶劑中形成的溫溶液中加入催化劑(5g，5％鉑/碳)。將反應(yīng)混合物放入氫氣氣氛(50psi，3.4×105Pa)下。2小時后再次加入催化劑(4g)，繼續(xù)氫化過夜。通過Celite過濾助劑層過濾反應(yīng)混合物，用熱甲苯(1L)洗滌濾餅。減壓濃縮濾液，得到45.1g 2-[3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色固體。
步驟D加熱回流2-[3-氨基-5，6-二甲基-2-苯氧基吡啶-4-基)氨基]乙基氨基甲酸叔丁酯(43.7g，117mmol)、原乙酸三乙酯(22.6mL，123mmol)、吡啶鹽酸鹽(4.4g)和甲苯(440mL)的混合物30分鐘。減壓濃縮反應(yīng)混合物，得到棕色油狀物。將油狀物溶解在乙酸乙酯(1L)中，并用水(2×500mL)洗滌。合并水洗液，用乙酸乙酯(2×500mL)提取。用鹽水洗滌合并的有機物，用硫酸鎂干燥，然后減壓濃縮，得到46.4g 2-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯，為白色固體，熔點180.182℃。
步驟E160℃下，在密封管中加熱乙酸銨(95g)和2-(2，6，7-三甲基-4-苯氧基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基氨基甲酸叔丁酯(9.5g)的混合物24小時。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后分配在水和氯仿之間。用50％氫氧化鈉使水層呈堿性，然后用氯仿(10×400mL)提取。用硫酸鎂干燥合并的有機物，然后減壓濃縮得到棕色固體。將固體溶解在異丙醇(80mL)中，然后與1M鹽酸的乙醚(23.7mL)溶液混合。通過過濾分離所得沉淀物，用冷的異丙醇和乙醚洗滌，然后80℃下真空烘箱中干燥過夜得到5.0g N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]乙酰胺鹽酸鹽，為白色固體，熔點＞250℃。
元素分析Calculated forC13H19N5O·1.00HCl％C，52.43；％H，6.77；％N，23.52；Found％C，52.25；％H，6.81；％N.23.41.
用34g起始物重復(fù)該反應(yīng)，得到18g乙酰胺鹽酸鹽，為淺褐色固體。
步驟F混合N-[2-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]乙酰胺鹽酸鹽(18g)、鹽酸(231mL)和乙醇(350mL)，并在90℃下加熱過夜。使反應(yīng)混合物冷卻至室溫，然后用乙醚(200mL)稀釋。通過過濾分離所得沉淀物，用冷乙醇和乙醚洗滌，然后80℃下真空干燥過夜，得到17.3g 1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺鹽酸鹽，為白色針狀物。
元素分析
Calculated for C11H17N5·2.8HCl·0.25H2O％C，40.32；％H，6.26；％N，30.83；Found％C，40.54；％H，6.15；％N，30.87.
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ8.19(t，J＝6.2Hz，1H)，7.91(s，2H)，4.34(t，J＝6.6Hz，2H)，3.39(quartet，J＝6.4Hz，2H)，2.56(s，3H)，2.43(d，J＝8.1Hz，6H)，1.77(s，3H)；MS(CI) m/e 262(M+H)將3g產(chǎn)物溶解在水(150mL)中，然后與碳酸鈉(30g)混合。攪拌混合物30分鐘，然后用氯仿在連續(xù)萃取器中連續(xù)提取過夜。用硫酸鎂干燥氯仿提取物，然后減壓濃縮得到1.7g游離堿，為淺褐色固體。
步驟G利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(20mg)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，渦旋，然后放入室溫下的搖動器中4小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。

實施例113N’-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)乙基]-N，N-二甲基磺酰胺 利用實施例90-112的方法，使二甲基磺酰氯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需產(chǎn)物。觀察到的精確質(zhì)量為327.1621。
實施例114 利用實施例90-112的方法，使D-(+)-10-樟腦磺酰氯與1-(2-氨基乙基)-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需產(chǎn)物。觀察到的精確質(zhì)量為434.2217。
實施例115-135利用下述方法制備下表中的化合物。向裝有1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(23.5mg，參見實施例14，步驟H)的氯仿(5mL)溶液的測試管中加入適量的磺酰氯(1.1當量)。給測試管蓋上蓋子，然后放入室溫下的搖動器中4小時。真空離心除去溶劑。利用上述方法通過制備性HPLC純化殘余物，得到所需化合物的三氟乙酸鹽。下表示出了游離堿的結(jié)構(gòu)和觀察到的精確質(zhì)量(m+H)。

實施例136N’-[4-(4-氨基-2-乙氧基甲基-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺 利用實施例115-135的方法，使二甲基磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需產(chǎn)物。觀察到的精確質(zhì)量為385.2029。
實施例137 利用實施例115-135的方法，使D-(+)-10-樟腦磺酰氯與1-(4-氨基丁基)-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺反應(yīng)，得到所需產(chǎn)物。觀察到的精確質(zhì)量為492.2655。
在人體細胞中的細胞因子誘導(dǎo)作用采用體外人血細胞體系來評估細胞因子誘導(dǎo)作用。如Testerman等在“Cytokine Induction by the Immunomodulators Imiquimod and S-27609”，Journal of Leukocyte Biology，58，365-372(1995年9月)中所述，活性是建立在對分泌到培養(yǎng)基中的干擾素(α)和腫瘤壞死因子(α)(分別為IFN和TNF)進行測量的基礎(chǔ)上的。
培養(yǎng)用的血液細胞制備物通過靜脈穿刺將從健康捐獻者獲得的全血收集于EDTA的vacutainer管中，采用Histopaque-1077通過密度梯度離心從全血中分離周圍血單核細胞(PBMC)。用Dublecco氏磷酸鹽緩沖鹽水(DPBS)或Hank氏平衡鹽溶液(HBSS)稀釋PBMC兩倍。收集PBMC層并用DPBS或HBSS洗滌兩次，然后以4×106細胞/mL懸浮在RPMI完全培養(yǎng)基中。將PBMC懸浮液加到放置了等體積含試驗化合物的RPMI完全培養(yǎng)基的48孔平底無菌組織培養(yǎng)板中(Costar，Cambridge，MA或Becton Dickinson Labware，Lincoln Park，NJ)。
化合物制備將化合物溶解到二甲亞砜(DMSO)中。在向培養(yǎng)孔中加的DMSO的最終濃度不得超過1％。通常試驗化合物測試濃度在30-0.014μM。
培養(yǎng)將濃度為60μM的試驗化合物的溶液加到含RPMI完全培養(yǎng)基的孔1中，然后在各孔中制備系列稀釋3倍的稀釋液。隨后，向各孔中加入等體積的PBMC懸浮液，使得試驗化合物的濃度在所需的范圍(30-0.014μM)。最終PBMC懸浮液的濃度在2×106細胞/mL。用無菌槊料蓋子蓋上培養(yǎng)板，輕輕混勻，然后在37℃在5％二氧化碳氣氛培養(yǎng)18-24小時分離培養(yǎng)后在4℃以1000rpm(～200×g)離心培養(yǎng)板5-10分鐘，用無菌聚丙烯吸量管移去無細胞存在的培養(yǎng)液上清液并轉(zhuǎn)移到聚丙烯管中。在分析前樣品保持在-30℃到-70℃。通過ELISA對樣品進行干擾素(α)和腫瘤壞死因子(α)分析。
通過ELISA對樣品進行干擾素(α)和腫瘤壞死因子(α)分析采用Human Multi-Species試劑盒(PBL Biomedical Laboratories，New Brunswick，NJ)通過ELISA測定干擾素(α)濃度。測定結(jié)果以pg/mL表示。
采用ELISA試劑盒(得自Biosource International，Camarillo，CA)測定腫瘤壞死因子(α)(TNF)濃度?；蛘咄ㄟ^OrigenM-SeriesImmunoassay測試TNF濃度，并用購自IGEN International，Gaithersburg，MD的IGEN M-8分析儀讀數(shù)。免疫測定利用人TNF俘獲并測定購自Biosource International，Camarillo，CA的抗體對。測定結(jié)果以pg/mL表示。
下表列出了各個化合物可誘導(dǎo)干擾素和腫瘤壞死因子的最低濃度。A“*”表示在任何試驗化合物濃度下均未觀察到誘導(dǎo)作用產(chǎn)生。



本發(fā)明參照多個實施例進行了描述。前面提供的詳細的說明書和實施例只是為了清楚地理解，并非給本發(fā)明加不必要的限制。根據(jù)所公開的實施例進行多種多樣的變換而不偏離本發(fā)明的精神和范圍對本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是顯而易見的。因此，本發(fā)明的范圍不應(yīng)局限于這里所具體描述的組合物和結(jié)構(gòu)，而應(yīng)當通過下面權(quán)利要求的文字進行限定。
權(quán)利要求
1.下式(I)所示的化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；Y表示-SO2-；Z表示鍵，或-NR6-；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，烷基或烯基，各個基團可以是未被取代的或者被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-取代的芳基；-取代的雜芳基；-取代的雜環(huán)基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-取代芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-取代雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-O-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-取代雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-取代雜芳基；-N3；-鹵原子；-鹵代烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基，烯基和雜環(huán)基情況下可以是氧代；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代的烷基或烯基；-OH；-鹵原子；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-取代芳基；-雜芳基；-取代雜芳基；-雜環(huán)基；-取代雜環(huán)基；-CO-芳基；-CO-(取代芳基)；-CO-雜芳基；和-CO-(取代雜芳基)；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；R5是H或C1-10烷基，或者R5能夠與X形成環(huán)；或者當R1是烷基時，R5和R1可以連接形成環(huán)；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中X表示亞烷基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R1表示烷基，芳基或取代芳基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R5表示H和R1表示芳基或取代芳基。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中Z表示鍵。
6根據(jù)權(quán)利要求5的化合物或鹽，其中R1表示烷基，芳基或取代芳基。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物或鹽，其中R1表示取代芳基。
8.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R5與X連接形成哌啶環(huán)。
9.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中X表示亞烷基和R1表示烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中Z表示-NR6-。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物或鹽，其中R1和R5都表示甲基。
12.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R2表示H，烷基或烷基-O-烷基。
13.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R2表示烷基-O-烷基。
14.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R2表示-CH2-O-C2H5-。
15.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中X表示-(CH2)2-4-。
16.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物或鹽，其中R3和R4獨立地表示H或烷基。
17.選自下述物質(zhì)的化合物N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺；N-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-4-氟苯磺酰胺；N’-[4-(4-氨基-2-丁基-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]-N，N-二甲基磺酰胺；N-[4-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丁基]甲磺酰胺；N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺；N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺；2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1-{2-[1-(甲磺?；?哌啶-4-基]乙基}-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺；N-[3-(4-氨基-2，6，7-三甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基)丙基]甲磺酰胺；N-{3-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丙基}甲磺酰胺；N-{4-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-7-甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]丁基}甲磺酰胺；N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-1，1-二甲基乙基}甲磺酰胺；和N-{2-[4-氨基-2-(乙氧基甲基)-6，7-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-1-基]-1，1-二甲基乙基}丙烷-2-磺酰胺；或其可藥用鹽。
18.含有治療有效量的權(quán)利要求1化合物和可藥用載體的藥物組合物。
19.含有治療有效量的權(quán)利要求5化合物和可藥用載體的藥物組合物。
20.含有治療有效量的權(quán)利要求17化合物和可藥用載體的藥物組合物。
21.誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
22.治療動物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
23.治療動物腫瘤性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求1化合物。
24.誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求5化合物。
25.治療動物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求5化合物。
26.治療動物腫瘤性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求5化合物。
27.誘導(dǎo)動物中細胞因子生物合成的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
28.治療動物病毒性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
29.治療動物腫瘤性疾病的方法，所述方法包括向動物施用治療有效量的權(quán)利要求17化合物。
30.式(VI)所示化合物 其中X表示亞烷基或亞烯基；R1表示芳基，雜芳基，雜環(huán)基，C1-20烷基或C2-20烯基，各個基團可以是未被取代的或者被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代-烷基；-烯基；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-取代的環(huán)烷基；-O-烷基；-O-(烷基)0-1-芳基；-O-(烷基)0-1-雜芳基；-O-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-COOH；-CO-O-烷基；-CO-烷基；-S(O)0-2-烷基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜芳基；-S(O)0-2-(烷基)0-1-雜環(huán)基；-(烷基)0-1-N(R6)2；-(烷基)0-1-NR6-CO-O-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-烷基；-(烷基)0-1-NR6-CO-芳基；-(烷基)0-1-NR6-CO-雜芳基；-N3；-鹵原子；-鹵烷基；-鹵代烷氧基；-CO-鹵代烷基；-CO-鹵代烷氧基；-NO2；-CN；-OH；-SH；和在烷基、烯基和雜環(huán)基情況下，可以是氧代；R2選自下述基團-氫；-烷基；-烯基；-烷基-O-烷基；-烷基-S-烷基；-烷基-O-芳基；-烷基-S-芳基；-烷基-O-烯基；-烷基-S-烯基；和-被一個或多個各自獨立地選自下述基團的取代基所取代的烷基或烯基-OH；-鹵素；-N(R6)2；-CO-N(R6)2；-CS-N(R6)2；-SO2-N(R6)2；-NR6-CO-C1-10烷基；-NR6-CS-C1-10烷基；-NR6-SO2-C1-10烷基；-CO-C1-10烷基；-CO-O-C1-10烷基；-N3；-芳基；-雜芳基；-雜環(huán)基；-CO-芳基；和-CO-雜芳基；R3和R4各自獨立地選自氫，烷基，烯基，鹵原子，烷氧基，氨基，烷基氨基，二烷基氨基和烷硫基；以及R5表示H或C1-10烷基；每個R6各自獨立地表示H或C1-10烷基；或其可藥用鹽。
全文摘要
在1－位含有磺酰胺官能基的咪唑并吡啶化合物可以用作免疫反應(yīng)調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明的化合物和組合物可以誘導(dǎo)多種細胞因子的生物合成從而可用于治療多種疾病包括病毒性疾病和腫瘤性疾病。
文檔編號A61P17/14GK1599739SQ02824286
公開日2005年3月23日 申請日期2002年6月7日 優(yōu)先權(quán)日2001年12月6日
發(fā)明者約瑟夫·F·德拉里亞, 沙達·A·哈拉德森, 菲利普·D·埃普內(nèi), 凱爾·J·林德斯特倫, 布里翁·A·梅里爾 申請人:3M創(chuàng)新有限公司