專利名稱：二環(huán)雜芳族化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有糖蛋白激素激動或拮抗活性的化合物，具體地說為具有促黃體激素(LH)激動活性的化合物。本發(fā)明進而涉及二環(huán)雜芳族衍生物、含有它們的藥物組合物以及這些化合物在醫(yī)學(xué)療法中的用途，具體地說為節(jié)育的用途。
在各種機體功能中，包括代謝、溫度調(diào)節(jié)和生殖過程，促性腺激素都發(fā)揮重要功能。垂體促性腺激素FSH例如在卵泡發(fā)育與成熟的刺激中扮演關(guān)鍵角色，而LH誘發(fā)排卵(Sharp，R.M.Clin.Endocrinol.33787-807；Dorrington and Armstrong，Recent Prog.Horm.Res.35301-342，1979)。目前，LH在臨床上與FSH聯(lián)合用于卵巢刺激，也就是體外受精(IVF)的卵巢過度刺激，還用于不孕不排卵婦女的排卵誘發(fā)(Insler，V.，Int.J.Fertility 3385-97，1988；Navotand Rosenwaks，J.Vitro Fert.Embryo Transfer 53-13，1988)，以及用于男性性腺機能減退和男性不育。
促性腺激素作用于特定的生殖腺細胞類型，引發(fā)排卵和睪丸的分化與類固醇生成。這些垂體與胎盤激素的作用受特異性血漿膜受體的介導(dǎo)，后者是一大家族G-蛋白偶聯(lián)受體的成員。它們由單一的多肽和七個跨膜結(jié)構(gòu)域組成，能夠與Gs蛋白發(fā)生相互作用，引起腺苷酸環(huán)化酶的激活。
用于治療目的的促性腺激素可以從人尿來源中分離，純度低(Morse等，Amer.J.Reproduct.Immunol.and Microbiology 17143，1988)。作為替代選擇，它們可以被制成重組促性腺激素。
關(guān)于其他治療性蛋白質(zhì)，有必要將促性腺激素通過皮下或肌內(nèi)方式給藥。不過將有利的是用能夠通過例如口服或透皮途徑給藥的小分子激活受體。
本發(fā)明描述了這類小分子量激素類似物的制備，它們選擇性地激活促性腺激素受體之一。這應(yīng)當(dāng)被視為本發(fā)明的主要優(yōu)點之一。
因而，本發(fā)明在于根據(jù)通式I的二環(huán)雜芳族衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 式I其中R1是(3-8C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；優(yōu)選地，R1是(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；R2是(1-4C)烷基、(2-4C)鏈烯基、(2-4C)炔基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；R3是(1-8C)烷基、(3-8C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；Y是CH或N；Z是NH2或OH；A是S、N(H)、N(R4)、O或一條鍵，R4可以選自與R2所述相同的基團；B是N(H)、O或一條鍵。
R1中的環(huán)系可以可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自R5、NHR5、N(R4)R5、OR5和/或SR5，其中R5是(6-14C)芳基、(4-13C)雜芳基、(6-14C)芳基羰基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(3-8C)環(huán)烷基、(6-14C)芳基磺?；?、(6-14C)芳基氨基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(6-14C)芳基氨基磺?；?、(6-14C)芳氧基磺酰基、(2-8C)鏈烯基、(2-8C)炔基、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(2-8C)鏈烯基磺?；?、(2-8C)鏈烯氧基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)烷基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺?；?1-8C)烷氧基磺?；?，其中的烷基可以可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自羥基、(1-8C)烷氧基、(2-7C)雜環(huán)烷基(1-8C)烷氧基、(3-8C)環(huán)烷基(1-8C)烷氧基、(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基、(4-13)雜芳基(1-8C)烷氧基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(3-8C)環(huán)烷基、(6-14C)芳基、(4-13C)雜芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)烷基碳酰氧基、(6-14C)芳基碳酰氧基、(1-8C)烷基羰基、(6-14C)芳基羰基、胺、(1-8C)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、(6-14C)(二)芳基氨基、(二)[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基和/或(1-8C)(二)烷基氨基。優(yōu)選地，R1中的取代基選自NHR5或OR5。R5在R1的任何取代基中優(yōu)選地是(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(6-14C)芳基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基或(1-8C)(二)烷基氨基羰基，其中的烷基可以可選地被(2-7C)雜環(huán)烷基、(4-13)雜芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)烷基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、胺和/或(1-8C)(二)烷基氨基取代。在烷基上最優(yōu)選的取代基是(2-7C)雜環(huán)烷基、(1-8C)(二)烷基氨基、胺和(1-8C)(二)烷基氨基羰基。
在R1上最優(yōu)選的是可選被上述取代基之一取代的苯基，優(yōu)選地在間位取代。
在根據(jù)本發(fā)明的化合物中，X1-X2是C＝C、C(O)-NH、NH-C(O)、C(O)-O、O-C(O)、C＝N或N＝C。如果R5是(1-8C)烷基磺酰基、(6-14C)芳基磺?；?、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基、(6-14C)芳基氨基磺?；?1-8C)烷氧基磺?；?、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(2-8C)鏈烯基磺酰基、(2-8C)鏈烯氧基羰基或(6-14C)芳氧基磺?；?，那么X1-X2還可以是S或O。
根據(jù)本發(fā)明的優(yōu)選化合物是根據(jù)通式I的化合物，其中B是N(H)或一條鍵和/或Z是NH2。在這些優(yōu)選的化合物中，其中B是N(H)或一條鍵且Z是NH2的那些是尤其優(yōu)選的。更優(yōu)選的是除了上述B和Z的定義以外還優(yōu)選地由下述R1所定義的化合物，即R1是(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基，可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自N(R4)R5、NHR5、R5、OR5和/或SR5，優(yōu)選地被NHR5或OR5取代。
在所有上述化合物中，Y所優(yōu)選的是N，B所優(yōu)選的是N(H)或一條鍵。如果B是一條鍵，那么R3優(yōu)選地是(2-7C)雜環(huán)烷基。
進而，在所有上述化合物中，X1-X2優(yōu)選地是C＝C、C＝N或N＝C，最優(yōu)選為C＝C。如果R5是(1-8C)烷基磺酰基、(6-14C)芳基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺?；?6-14C)芳基氨基磺?；?、(1-8C)烷氧基磺?；?、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(2-8C)鏈烯基磺?；?、(2-8C)鏈烯氧基羰基或(6-14C)芳氧基磺酰基，那么除了上述基團以外，X1-X2所優(yōu)選的還可以是S。
最優(yōu)選的是選自下組的化合物叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氫吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺。
從本發(fā)明中排除的是化合物5-羥基-2-甲基-4-(哌啶-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯、5-羥基-2-甲基-4-(嗎啉-4-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯和5-羥基-2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯。
所放棄的內(nèi)容涉及Chem.Pharm.Bull.18(7)，1385-1393(1970)的公開內(nèi)容。
用在式I定義中的術(shù)語(1-8C)烷基表示具有1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷基，例如甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、己基和辛基。(1-6C)烷基是優(yōu)選的，(1-3C)烷基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(2-8C)鏈烯基表示具有2-8個碳原子的直鏈或支鏈鏈烯基，例如乙烯基、2-丁烯基等。(1-6C)鏈烯基是優(yōu)選的，(1-3C)鏈烯基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(2-8C)炔基表示具有2-8個碳原子的直鏈或支鏈炔基，例如乙炔基和丙炔基。最優(yōu)選的是(2-4C)炔基。
術(shù)語(6-14C)芳基表示具有6-14個碳原子的芳族烴基，例如苯基、萘基、四氫萘基、茚基、蒽基，它可以可選地被一個或多個取代基取代，取代基例如——但不限于——羥基、鹵素、硝基、三氟甲基、氰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(1-8C)烷基氨基羰基或(1-8C)(二)烷基氨基，烷基部分具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基。最優(yōu)選的芳族烴基是苯基。
術(shù)語(3-8C)環(huán)烷基表示具有3-8個碳原子的環(huán)烷基，是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基或環(huán)辛基。
術(shù)語(2-7C)雜環(huán)烷基表示具有2-7個碳原子、優(yōu)選2-5個碳原子的雜環(huán)烷基，并且至少包括一個選自N、O或S的雜原子。優(yōu)選的雜原子是N或O。含氮雜環(huán)烷基可以經(jīng)由碳或氮原子連接。最優(yōu)選的雜環(huán)烷基是哌啶、嗎啉和吡咯烷。
術(shù)語(2-7C)雜環(huán)烷基羰基表示與羰基連接的、如前述定義的具有2-7個碳原子的雜環(huán)烷基。
術(shù)語(1-8C)烷氧基表示具有1-8個碳原子的烷氧基，烷基部分具有與前述定義相同的含義。(1-6C)烷氧基是優(yōu)選的，(1-3C)烷氧基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)烷氧基羰基表示這樣的烷氧基羰基，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。(1-6C)烷氧基羰基是優(yōu)選的，(1-3C)烷氧基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(2-8C)鏈烯氧基羰基表示這樣的鏈烯氧基羰基，它的鏈烯基含有2-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。(2-6C)鏈烯氧基羰基是優(yōu)選的，(2-3C)鏈烯氧基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)烷氧基磺?；硎具@樣的烷氧基磺?；?，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。(1-6C)烷氧基磺?；莾?yōu)選的，(1-3C)烷氧基磺?；亲顑?yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)(二)烷基氨基表示具有1-8個碳原子的(二)烷基氨基，烷基部分具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)(二)烷基氨基。
術(shù)語二[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基表示(二)[烷氧基烷基]氨基，它的烷基和烷氧基部分都具有1-3個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。
術(shù)語(6-14C)(二)芳基氨基表示具有6-14個碳原子的(二)芳基氨基，芳基部分具有與前述相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)(二)芳基氨基。最優(yōu)選的(二)芳基氨基是(二)苯基氨基。
術(shù)語(1-8C)烷硫基表示具有1-8個碳原子的烷硫基，烷基部分具有與前述相同的含義。最優(yōu)選的是(1-4C)烷硫基。
術(shù)語(6-14C)芳氧基羰基表示這樣的芳氧基羰基，它的芳基含有6-14個碳原子，更優(yōu)選6-10個碳原子，并且具有與前述相同的含義。最優(yōu)選的是苯氧基羰基。
術(shù)語(6-14C)芳氧基磺酰基表示這樣的芳氧基磺?；?，它的芳基含有6-14個碳原子，更優(yōu)選6-10個碳原子，并且具有與前述相同的含義。最優(yōu)選的是苯氧基磺?；?。
術(shù)語(6-14C)芳基(1-8C)烷基表示具有7-22個碳原子的芳基烷基，其中的烷基是如前述所定義的(1-8C)烷基，芳基是如前述所定義的(6-14C)芳基。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基(1-4C)烷基。苯基(1-4C)烷基、例如芐基是最優(yōu)選的芳基烷基。
術(shù)語(4-13C)雜芳基表示取代或未取代的芳族基團，具有4-13個、優(yōu)選4-9個碳原子，至少包括一個選自N、O和/或S的雜原子，例如咪唑基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、四氫喹啉基、異喹啉基、四氫異喹啉基、吲哚基、吖啶醇基、呋喃基或吡啶基。雜芳基上的取代基可以選自關(guān)于芳基所列舉的取代基。優(yōu)選的雜芳基是噻吩基、呋喃基、吡啶基和嘧啶基。含氮雜芳基可以經(jīng)由碳或氮原子連接。
術(shù)語鹵素表示氟、氯、溴或碘。
術(shù)語(2-7C)雜環(huán)烷基(1-8C)烷氧基表示與(1-8C)烷氧基連接的、如前述所定義的含有2-7個碳原子的雜環(huán)烷基，烷氧基部分具有與前述相同的含義。更優(yōu)選的是(2-5C)雜環(huán)烷基(1-4C)烷氧基。
術(shù)語(3-8C)環(huán)烷基(1-8C)烷氧基表示與(1-8C)烷氧基連接的、如前述所定義的含有3-8個碳原子的環(huán)烷基，烷氧基部分具有與前述相同的含義。更優(yōu)選的是(3-6C)環(huán)烷基(1-4C)烷氧基。
術(shù)語(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基表示與(1-8C)烷氧基連接的、如前述所定義的含有6-14個碳原子的芳基，烷氧基部分具有與前述相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基(1-4C)烷氧基，苯基(1-4C)烷氧基是最優(yōu)選的。(4-13C)雜芳基(1-8C)烷氧基是(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基的類似物，在雜芳基環(huán)中至少包括一個選自N、O和S的雜原子。更優(yōu)選的是(4-9C)雜芳基(1-4C)烷氧基。
術(shù)語(1-8C)烷基羰基表示這樣的烷基羰基，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)烷基羰基，(1-4C)烷基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(6-14C)芳基羰基表示這樣的芳基羰基，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基羰基，苯基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)烷基磺?；硎具@樣的烷基磺?；耐榛?-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)烷基磺?；?，(1-4C)烷基磺?；亲顑?yōu)選的。
術(shù)語(2-8C)鏈烯基磺?；硎具@樣的鏈烯基磺?；逆溝┗?-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(2-6C)鏈烯基磺酰基，(2-4C)鏈烯基磺?；亲顑?yōu)選的。
術(shù)語(6-14C)芳基磺?；硎具@樣的芳基磺?；?，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基磺?；交酋；亲顑?yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)烷基碳酰氧基表示這樣的烷基碳酰氧基，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)烷基碳酰氧基，最優(yōu)選的是(1-4C)烷基碳酰氧基。
術(shù)語(6-14C)芳基碳酰氧基表示這樣的芳基碳酰氧基，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基碳酰氧基，苯基碳酰氧基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)(二)烷基氨基羰基表示這樣的(二)烷基氨基羰基，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)(二)烷基氨基羰基，(1-4C)(二)烷基氨基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(6-14C)(二)芳基氨基羰基表示這樣的(二)芳基氨基羰基，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)(二)芳基氨基羰基，(二)苯基氨基羰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)(二)烷基氨基磺?；硎具@樣的(二)烷基氨基磺?；?，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)(二)烷基氨基磺?；?，(1-4C)(二)烷基氨基磺酰基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(6-14C)(二)芳基氨基磺?；硎具@樣的(二)芳基氨基磺?；?，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)(二)芳基氨基磺?；?二)苯基氨基磺?；亲顑?yōu)選的。
術(shù)語(1-8C)烷基碳酰氨基表示這樣的烷基碳酰氨基，它的烷基含有1-8個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(1-6C)烷基碳酰氨基，(1-4C)烷基碳酰氨基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(6-14C)芳基碳酰氨基表示這樣的芳基碳酰氨基，它的芳基含有6-14個碳原子，并且具有與前述定義相同的含義。更優(yōu)選的是(6-10C)芳基碳酰氨基，苯基碳酰氨基是最優(yōu)選的。
術(shù)語(2-7C)雜環(huán)烷氧基表示與氧原子連接的、如前述所定義的含有2-7個碳原子的雜環(huán)烷基。最優(yōu)選的是(2-5C)雜環(huán)烷氧基。
術(shù)語(3-8C)環(huán)烷氧基表示與氧原子連接的、如前述所定義的含有3-8個碳原子的環(huán)烷基。
術(shù)語(6-14C)芳氧基表示與氧原子連接的、如前述所定義的含有6-14個碳原子的芳基。更優(yōu)選的是(6-10C)芳氧基，苯氧基是最優(yōu)選的。(4-13C)雜芳氧基是(6-14C)芳氧基的類似物，在雜芳基環(huán)中至少包括一個選自N、O和S的雜原子。更優(yōu)選的是(4-9C)雜芳氧基。
已經(jīng)顯示上述式I化合物能夠與LH受體結(jié)合，顯示激動LH的活性。
本發(fā)明進一步在于藥物組合物，包含具有通式I的二環(huán)雜芳族衍生物或其鹽。
因而，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以用于治療。本發(fā)明的進一方面在于具有通式I的二環(huán)雜芳族化合物在制備節(jié)育藥物中的用途。優(yōu)選地，本發(fā)明化合物用于激活LH受體。
本發(fā)明的二環(huán)雜芳族衍生物可以具有一個或多個手性碳原子。因此可以獲得手性純的化合物或非對映體和/或?qū)τ丑w的混合物。用于獲得手性純化合物的方法是本領(lǐng)域熟知的，例如結(jié)晶或色譜。
關(guān)于治療用途，式I化合物的鹽是其中抗衡離子是藥學(xué)上可接受的那些。不過，根據(jù)式I的堿的酸加成鹽例如也可以用于制備或純化藥學(xué)上可接受的化合物。所有的鹽無論是藥學(xué)上可接受的與否，都包括在本酸加成鹽的實例包括得自無機酸和有機酸的那些，無機酸例如鹽酸、磷酸、硫酸，優(yōu)選鹽酸，有機酸例如檸檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸、馬來酸、丙二酸、富馬酸、乙醇酸、琥珀酸等。
適合于式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽——也稱活性成分——的給藥途徑是肌內(nèi)注射、皮下注射、靜脈內(nèi)注射或腹膜內(nèi)注射、口服和鼻內(nèi)給藥。優(yōu)選地，化合物可以口服給藥?；钚猿煞只蚱渌幬锝M合物的精確劑量和給藥方案將有必要取決于所要達到的治療效果(不育的治療；避孕)，并且可以因特定化合物、給藥途徑和接受藥物治療的個體年齡與狀況而異。
一般而言，腸胃外給藥比更多依賴于吸附的其他給藥方法需要更低的劑量。不過，人用劑量優(yōu)選地含有0.0001-25mg每kg體重。所需劑量可以是單一劑量或多個亞劑量，在全天內(nèi)按適當(dāng)間隔給藥，或者在女性受治療者的情況下，在整個月經(jīng)周期中按適當(dāng)日期間隔給藥。劑量以及給藥方案可以存在性別差異。
在體外或來自體內(nèi)應(yīng)用中，例如IVF應(yīng)用，本發(fā)明化合物是在培養(yǎng)基中使用的，濃度大約0.01-5μg/ml。
本發(fā)明因而還涉及藥物組合物，包含與藥學(xué)上可接受的助劑和可選的其他治療劑混合的根據(jù)式I的二環(huán)雜芳族化合物。在可與組合物的其他成分相容和對其接受者無害的意義上，助劑必須是“可接受的”。藥物組合物包括適合于口服、直腸、鼻、局部(包括透皮、頰和舌下)、陰道或腸胃外(包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)和真皮內(nèi))給藥的那些。組合物可以通過藥學(xué)領(lǐng)域熟知的任意方法加以制備，例如利用Gennaro等，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版，MackPublishing Co.，1990，尤其參見第8部分PharmaceuticalPreparations and Their Manufacture)所述方法。
這類方法包括使活性成分與任意助劑締合的步驟。助劑也稱輔助成分，包括本領(lǐng)域常用的那些(Gennaro，出處同上)，例如填充劑、粘合劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑、著色劑、矯味劑和濕潤劑。
適合于口服給藥的藥物組合物可以是離散的劑量單位，例如丸劑、片劑或膠囊劑，或者是粉劑或顆粒劑，或者是溶液或懸液。活性成分還可以是大丸劑或糊劑。組合物可以進一步被加工成用于直腸給藥的栓劑或灌腸劑。
關(guān)于腸胃外給藥，適合的組合物包括水性和非水性無菌注射劑。組合物可以存在于單位劑量或多劑量容器中，例如密封的小瓶和安瓿，并且可以貯存在冷凍干燥(凍干)條件下，僅需在使用前加入無菌的液體載體，例如水。
適合于通過鼻吸入給藥的組合物或制劑包括微細的粉劑或霧劑，這可以借助計量劑量的壓力氣霧劑、霧化器或吹入器生成。
本發(fā)明的二環(huán)雜芳族衍生物還可以以可植入的藥具形式給藥，它由活性材料的核心組成，包以釋放速率調(diào)節(jié)性的膜。這類植入物是供皮下或局部應(yīng)用的，將按大約恒定的速率釋放活性成分，歷經(jīng)相當(dāng)長的時間階段，例如從數(shù)周至數(shù)年。用于制備可植入藥具的方法本身是本領(lǐng)域已知的，例如歐洲專利0,303,306(AKZO N.V.)所述。
因而，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以用于與天然LH相同的臨床目的，優(yōu)點在于它們顯示改變了的穩(wěn)定性，并且可以通過不同的方式給藥。
由式(I-a)代表的其中B＝NH的本發(fā)明化合物一般可以按照本領(lǐng)域已知的式(II)酸與式(III)胺的縮合作用加以制備。 上述反應(yīng)是這樣進行的，在室溫下，在適合的溶劑中，例如非質(zhì)子傳遞溶劑，例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷，使用一種偶聯(lián)劑，例如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)或溴代三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽(PyBrOP)，和一種叔胺堿，例如N，N-二異丙基乙胺(DiPEA)。
同樣，由式(I-b)代表的其中B＝O的式(I)化合物可以以與上述關(guān)于式(I-a)化合物相同的方式加以制備，從通式(II)酸和式(IV)醇開始。
由式(I-c)代表的其中B是一條鍵的式(I)化合物可通過適當(dāng)?shù)挠袡C金屬試劑與式(V)衍生物在非質(zhì)子傳遞溶劑、例如THF中的反應(yīng)加以制備。有關(guān)的取代反應(yīng)可以參見文獻S.V.Frye，M.C.Johnson，N.L.Valvano，J.Org.Chem.563750，1991。利用關(guān)于式(I-a)酰胺制備所述條件，可以從式(II)酸和N-甲氧基-N-甲基胺合成式(V)的Weinreb酰胺。 適合于制備中間體酸(II)的方法是本領(lǐng)域已知的堿介導(dǎo)的通式(VI)乙基酯的皂化作用。皂化作用發(fā)生的條件是在堿的存在下，例如氫氧化鋰、氫氧化鉀或氫氧化鈉，在含水二噁烷中，在高溫下(40℃至回流)，繼之以酸處理。 式(VII)二環(huán)內(nèi)酰胺是可用于制備對應(yīng)亞胺(VIII)的原料。在典型的實驗中，在高溫下(60℃至回流)，在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例?，4-二噁烷，使用磷酰氯將內(nèi)酰胺轉(zhuǎn)化為對應(yīng)的氯代亞胺。在適合的催化劑的存在下，在乙醇中，用還原劑處理，例如氫，可以分離所需的通式(VIII)亞胺。有關(guān)的還原作用已經(jīng)有文獻報道，例如參見E.Bisagni，C.Landras，S.Thirot和C.Huel，Tetrahedron 5210427，1996。 通式(VII)二環(huán)內(nèi)酰胺可以這樣制備，在偶聯(lián)劑的作用下，例如TBTU/DiPEA，(IX)型酸與氨基丙二酸二乙酯縮合，再在堿性條件下，中間體酰胺在乙醇中環(huán)化。芳構(gòu)化作用和伴隨的去乙氧羰基化作用得到(VII)型二環(huán)。在可供替代的程序中，可以使用甘氨酸乙酯代替氨基丙二酸二乙酯。例如參見M.Blanco，M.G.Lorenzo，I.Perillo，C.B.Schapira，J.Heterocycl.Chem.33361，1996。中間體酰胺的環(huán)化作用還可以通過氯化錫(IV)進行。氯化錫(IV)在有關(guān)系統(tǒng)上進行環(huán)閉合的用途已有報道A.C.Veronese，R.Callegari，C.F.Morelli，Tetrahedron 5112277，1995。 在非親核性堿的影響下，例如碳酸鉀或叔丁醇鉀，在非質(zhì)子傳遞溶劑中，將式(IX)酸用溴乙酸乙酯處理，可以得到通式(X)的芳族內(nèi)酯。有關(guān)結(jié)構(gòu)已經(jīng)有文獻描述C.Bhakta，Indian J.Chem.Sect.B.25189，1986。
在堿性條件下，將式(XI)乙烯基衍生物用丙二酸二乙酯處理，引起共軛加成作用。中間體加合物可以通過氯化錫(IV)介導(dǎo)的反應(yīng)和處理被環(huán)化為式(XII)二環(huán)。作為替代選擇，在這種程序中可以使用丙二酸叔丁基乙基酯代替丙二酸二乙酯。 在高溫下，在適當(dāng)?shù)娜軇┲校缍妆?，用適合的氧化劑、例如DDQ或鈀催化劑處理，發(fā)生式(XII)衍生物的芳構(gòu)化作用，得到通式(XIII)的喹唑啉或喹啉。另見K.Kobayashi，T.Uneda，K.Takada，H.Tanaka，T.Kitamura，O.Morikawa，H.Konishi，J.Org.Chem.62664，1997。 在另一種方法中，在適合的非質(zhì)子傳遞溶劑中，例如THF，在低溫下(-78℃)，使用一種強堿，例如六甲基二硅烷基氨基化鋰(LiHMDS)或二異丙氨基化鋰(LDA)去質(zhì)子化通式(XIV)甲基吡啶/嘧啶的甲基。然后使陰離子與3-乙氧基丙烯酸乙酯反應(yīng)。共軛加成后，環(huán)化為通式(XIII)喹啉或喹唑啉，參見K.Kobayashi，K.Takada，H.Tanaka，T.Uneda，T.Kitamura，Chem.Lett.25，1996；K.Kobayashi，T.Uneda，K.Takada，H.Tanaka，T.Kitamura，O.Morikawa，H.Konishi，J.Org.Chem.62664，1997。 在堿性條件下，將通式(XV)氯化物用(N-烷基)β-丙氨酸乙酯(XVI)處理，得到通式(XVII)二環(huán)。有關(guān)的轉(zhuǎn)化作用已經(jīng)描述在P.Y.Boamah，N.Haider，G.Heinisch，Arch.Pharm.(Weinheim)323207，1990。 在高溫下，使用披鈀碳，可以將其中R6＝H的式(XVII)化合物氧化為式(XVIII)衍生物。例如參見M.Onda，K.Kawakami，Chem.Pharm.Bull.201484，1972。使用DDQ，可以將其中R6＝H或烷基的式(XVII)化合物轉(zhuǎn)化為式(XVIII)亞胺，這描述在H.Ishii，Chem.Pharm.Bull.26864，1978；J.I.DeGraw，P.H.Christie，W.T.Colwell，F(xiàn).M.Sirotnak，J.Med.Chem.35320，1992。 作為替代選擇，式(XVIII)亞胺可以從對應(yīng)的式(XIX)內(nèi)酰胺以與它們的式(VIII)區(qū)域異構(gòu)類似物相似的方式(參見上文)加以制備，也就是使用POCl3轉(zhuǎn)化為氯代亞胺，隨后使用氫和適當(dāng)?shù)拇呋瘎┻M行脫鹵作用。 式(XIX)內(nèi)酰胺可以通過在適合的堿的存在下式(XX)氨基吡啶/嘧啶與丙二酸氯乙酯的?；饔眉右灾苽?。隨后在堿(乙醇鈉的乙醇溶液)或氯化錫(IV)的作用下，中間體無環(huán)丙二酰胺的環(huán)閉合作用得到(XIX)型二環(huán)內(nèi)酰胺。相似的轉(zhuǎn)化作用已經(jīng)有文獻報道，例如參見A.C.Veronese，R.Callegari，C.F.Morelli，Tetrahedron 5112277，1995；W.Stadlbauer，S.Prattes，W.Fiala，J.Heterocycl.Chem.35627，1998。 根據(jù)式(XX)氨基吡啶/嘧啶的取代模式，式(XIX)內(nèi)酰胺可以這樣制備，通過氯化錫(IV)介導(dǎo)的丙二酸二乙酯的偶聯(lián)，繼之以在高溫下在適合溶劑中(例如240℃，二苯醚)的環(huán)化作用。
以相似的方式，(XXII)型內(nèi)酯可以通過式(XXI)內(nèi)酰胺與丙二酸氯乙酯的O-?；饔煤碗S后的環(huán)化作用加以制備。 通式(XXIII)呋喃并吡啶/嘧啶可以這樣獲得，在丙酮中，使用碳酸鉀進行(XXI)型內(nèi)酰胺的選擇性O(shè)-烷基化作用，隨后在乙醇鈉的乙醇溶液的影響下進行環(huán)閉合作用。 通式(XXIV)噻吩并吡啶/嘧啶可以這樣獲得，在強堿的影響下，將氯化物(XV)用巰基乙酸乙酯處理。在典型的實驗中，使1當(dāng)量氯化物(XV)與1.5當(dāng)量巰基乙酸乙酯和2當(dāng)量叔丁醇鉀在THF中反應(yīng)。在這些條件下，無環(huán)硫化物經(jīng)歷自發(fā)的環(huán)化作用，生成通式(XXIV)噻吩并吡啶/嘧啶。如果R1是被吸電子基團、例如硝基取代的(雜)芳基，那么上述環(huán)化作用經(jīng)由兩步程序完成，牽涉中間體硫醚的分離，繼之以在甲苯/EtOH中，在回流溫度下，用叔堿處理，例如DIPEA，以進行噻吩環(huán)的生成。
通式(IX)吡啶/嘧啶羧酸酯可以這樣獲得，在水與有機助溶劑的混合物中，例如1，4-二噁烷或甲醇，在高溫下(40℃至回流)，使用強堿，例如氫氧化鋰或氫氧化鉀，進行式(XXV)烷氧基羰基吡啶/嘧啶的皂化作用，繼之以酸處理。如果W＝CO2烷基，那么R7優(yōu)選地是芐基，以便能夠進行芐基酯官能的選擇性氫解作用，同時取代基W保持不受影響。 式(XXV)化合物能夠通過在一氧化碳和適當(dāng)醇(R7OH，XXVI)的存在下的鈀催化的氯化物(XV)的烷氧基羰基化作用加以制備。相似的轉(zhuǎn)化作用已經(jīng)出現(xiàn)在文獻中，例如參見Y.Bessard，R.Crettaz，Heterocycles 512589，1999。 鈀催化的氯化物(XV)與乙烯基三丁基錫或四乙烯基錫的反應(yīng)得到通式(XI)乙烯基吡啶/嘧啶。這種類型的轉(zhuǎn)化作用已經(jīng)廣泛有文獻報道，例如參見L.L.Gundersen，A.K.Bakkestuen，A.J.Aasen，H.Oeveras，F(xiàn).Rise，Tetrahedron 509743，1994；F.Guillier，F(xiàn).Nivoliers，A.Godard，F(xiàn).Marsais，G.Queguiner，J.Heterocycl.Chem.361157，1999。
根據(jù)通式(XV)氯化物的取代模式，通式(XI)乙烯基吡啶/嘧啶還可以這樣制備，將氯化物用亞甲基三苯基磷烷取代，繼之以與(低聚)甲醛反應(yīng)。
類似地，在鈀催化劑的存在下，在非質(zhì)子傳遞溶劑中，例如THF，將通式(XV)氯化物用三甲基鋁處理，得到通式(XIV)甲基吡啶/嘧啶。有關(guān)的合成已經(jīng)公開在Q.Lu，I.Mangalagiu，T.Benneche andK.Undheim，Acta Chem.Sc.51302，1997。 由式(XXI-a)代表的其中Y＝N的式(XXI)化合物可以經(jīng)由若干文獻方法制備。 例如，其中R1＝(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基的式(XXI-a)衍生物可以通過其中W是如前述所定義的乙基酯(XXVII)與醛(XXVIII)和化合物(XXIX)的縮合作用加以合成，化合物(XXIX)可以是異硫脲(XXIX-a)、異脲(XXIX-b)、單取代的胍(XXIX-c)、二取代的胍(XXIX-d)或脒(XXIX-e)。 在典型的實驗中，將組分(XXVII)、(XXVIII)和(XXIXa-e)懸浮在適當(dāng)?shù)娜軇┲?，例如乙醇、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氫呋喃或吡啶，加入一種堿，例如碳酸鉀、乙酸鈉、甲醇鈉或乙醇鈉。反應(yīng)發(fā)生在高溫下(70℃至回流)。例如參見S.Kambe，K.Saito and H.Kishi，Synthesis287，1979；A.M.Abd-Elfattah，S.M.Hussain and A.M.El-Reedy，Tetrahedron 393197，1983；S.M.Hussain，A.A.El-Barbary and S.A.Mansour，J.Heterocycl.Chem.22169，1985。在W＝C(O)OEt的情況下，芳構(gòu)化作用發(fā)生于氧化劑的加入之后，例如DDQ或氧。有關(guān)的環(huán)化作用還可以在固體載體上進行，例如Merrifield樹脂，并使用適當(dāng)?shù)倪B接劑，例如參見A.L.Mrzinzik and E.R.Felder，J.Org.Chem.63723，1998；T.Masquelin，D.Sprenger，R.Baer，F(xiàn).Gerberand Y.Mercadal，Helv.Chim.Acta 81646，1998。
由式(XX-a)代表的其中Y＝N的通式(XX)化合物可以經(jīng)由相似的縮合策略制備，使用丙二腈。
作為替代選擇，通式(XX)化合物可以這樣獲得，使用氨水和適當(dāng)?shù)挠袡C助溶劑，例如1，4-二噁烷，進行式(XV)氯化物的氨解作用。這種轉(zhuǎn)化作用還可以利用氯化銨和叔胺堿、例如DiPEA在非質(zhì)子傳遞溶劑、例如DMF中完成。 通式(XV)氯化物可以這樣合成，在適當(dāng)?shù)娜軇┲校?，4-二噁烷，在高溫下(60℃至回流)，進行本領(lǐng)域已知的內(nèi)酰胺(XXI)與POCl3的反應(yīng)。 其中Y＝N且R1不是(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基的式(XV)衍生物可以經(jīng)由式(XXX)衍生物中的Cl被各種親核試劑的單取代作用加以制備。有關(guān)的取代反應(yīng)可以在文獻中找到，例如S.Kohra，Y.Tominagaand A.Hosomi，J.Heterocycl.Chem.25959，1988；A.A.Santilli，D.H.Kim and S.V.Wanser，J.Heterocycl.Chem.8445，1971；J.Clark，M.S.Shannet，D.Korakas and G.Varvounis，J.Heterocycl.Chem.301065，1993；S.Tumkevicius，Liebigs Ann.Org.Bioorg.Chem.91703，1995。 由式(XXI-b)代表的其中Y＝CH、A＝S且W＝CN的通式(XXI)吡啶可以這樣獲得，將通式(XXXI)α，β-不飽和二腈先后用二硫化碳和烷基碘R2-I烷基化，得到通式(XXXII)化合物，如P.Milart，Tetrahedron 5415643-15656，1998所述。式(XXXII)化合物在酸性條件下的環(huán)化作用得到通式(XXI-b)吡啶，如K.Peseke，Z.Chem.29442-443(1989)所述。 由式(XXI-c)代表的其中A是一條鍵、Y＝CH且W是如前述所定義的通式(XXI)化合物可以這樣制備，在氧的存在下，在適合的溶劑中，例如二甲基亞砜，使用強堿，例如叔丁醇鉀，進行通式(XXXIII)不飽和酮與其中W是如前述所定義的通式(XXXIV)酰胺的反應(yīng)。有關(guān)的環(huán)化作用已經(jīng)描述在R.Jain，F(xiàn).Roschangar，M.A.Ciufolini，Tetrahedron Lett.363307，1995。
測定促性腺激素受體結(jié)合的方法以及測定促性腺激素生物活性的體外與體內(nèi)測定法是熟知的。一般而言，使被表達的受體與供試化合物接觸，測量結(jié)合或功能性反應(yīng)的刺激或抑制。
為了測量功能性反應(yīng)，在適合的宿主細胞中表達編碼LH受體基因的分離DNA，優(yōu)選人的受體。這樣一種細胞可能是中國倉鼠卵巢細胞，但是其他細胞也是適合的。優(yōu)選地，細胞是哺乳動物來源的(Jia等，Mol.Endocrin.，5759-776，1991)。
構(gòu)建表達重組LH的細胞系的方法是本領(lǐng)域熟知的(Sambrook等，Molecular Cloninga Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，最新版)。受體的表達是通過編碼所需蛋白質(zhì)的DNA的表達而實現(xiàn)的。位點定向誘變、附加序列的連接反應(yīng)、PCR和適合表達系統(tǒng)的構(gòu)建的技術(shù)迄今都是本領(lǐng)域熟知的。編碼所需蛋白質(zhì)的DNA的一部分或全部可以利用標(biāo)準(zhǔn)固相技術(shù)合成構(gòu)建，優(yōu)選地包括有利于連接反應(yīng)的限制位點?？梢韵駾NA編碼序列提供適合于所包括的編碼序列的轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)譯的控制元件。眾所周知，表達系統(tǒng)現(xiàn)在與各種宿主是相容的，包括原核生物宿主，例如細菌，和真核生物宿主，例如酵母、植物細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞等。
然后使表達受體的細胞與供試化合物接觸，觀察結(jié)合或功能性反應(yīng)的刺激或抑制。
作為替代選擇，含有被表達的受體的分離細胞膜可以用于測量化合物的結(jié)合。
關(guān)于結(jié)合的測量，可以使用放射或熒光標(biāo)記的化合物。作為參照化合物，可以使用人重組LH。在替代選擇中，還可以進行競爭結(jié)合測定。
另一種測定法牽涉通過測定受體介導(dǎo)的cAMP蓄積刺激作用篩選LH受體激動劑化合物。因而，這樣一種方法牽涉受體在宿主細胞表面上的表達和使該細胞暴露于供試化合物。然后測量cAMP的量。cAMP的水平將減少或增加，取決于供試化合物對受體結(jié)合的抑制或刺激效果。
除了直接測量被暴露細胞中的例如cAMP水平以外，還可以使用這樣的細胞系，除了用編碼DNA的受體轉(zhuǎn)染以外，還用編碼報道基因的第二種DNA轉(zhuǎn)染，這種基因的表達響應(yīng)于cAMP的水平。這類報道基因可能是cAMP可誘導(dǎo)的或者可能是以這樣一種方式構(gòu)建的，使它們與新的cAMP響應(yīng)元件連接。一般而言，報道基因表達可能受任意響應(yīng)元件的控制，這些元件的反應(yīng)改變cAMP的水平。適合的報道基因例如是LacZ、堿性磷酸酶、螢火蟲熒光素酶和綠色熒光蛋白。這類反式激活測定法的原理是本領(lǐng)域熟知的，例如描述在Stratowa，Ch，Himmler，A andCzernilofsky，A.P.(1995)Curr.Opin.Biotechnol.6574。
關(guān)于選擇活性化合物，在10-5M下試驗必須導(dǎo)致活性比使用LH作為參照時的最大活性高20％。另一種標(biāo)準(zhǔn)可以是EC50值必須＜10-5M，優(yōu)選＜10-7M。
技術(shù)人員將認識到，所需的EC50值取決于所試驗的化合物。例如，EC50小于10-5M的化合物一般被視為藥物選擇的候選對象。優(yōu)選地，該數(shù)值低于10-7M，更優(yōu)選10-8M。不過，具有更高EC50但是對特定受體是選擇性的化合物可能甚至是更好的候選對象。
篩選LH受體激動化合物還可以利用小鼠萊迪希細胞生物測定法進行(Van Damme，M.，Robersen，D.and Diczfalusy，E.(1974).Acta Endocrinol.77655-671；Mannaerts，B.，Kloosterboer，H.and Schuurs，A.(1987).Neuroendocrinology ofreproduction；R.Rolland等編，Elsevier Science PublishersB.V.，49-58)。在這種測定法中，可以在從雄性小鼠分離的萊迪希細胞中測量對LH受體介導(dǎo)的睪酮產(chǎn)生的刺激作用。
為了測量LH受體激動化合物的體內(nèi)活性，可以研究對未成熟小鼠的排卵誘發(fā)作用。在這種測定法中，可以將未成熟雌性小鼠用尿FSH引發(fā)(prime)，大約48小時后用LH激動化合物處理。在LH激動劑處理后殺死動物，可以通過顯微鏡檢查評估輸卵管中的卵子數(shù)量。
本發(fā)明的化合物可以在臨床上應(yīng)用于現(xiàn)在使用LH或hCG的范疇。這些包括性腺機能減退男性或女性受治療者中的LH替代、中期給藥誘發(fā)排卵(排卵誘發(fā)(OI))或受控制的黃體過度刺激(COH)或刺激。
下列實施例闡述本發(fā)明，決不應(yīng)當(dāng)被解釋為限制發(fā)明的范圍。
實施例實施例1叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(a)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-羥基-嘧啶將硫酸S-甲基異硫脲(139mg)、3-甲氧基苯甲醛(243μl)、氰基乙酸乙酯(112μl)與碳酸鉀(145mg)在絕對乙醇(2ml)中的混合物在60℃下攪拌5小時。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻至0℃，過濾，將殘余物在水(H2O)中加熱直至得到澄清的溶液。將該溶液用2N HCl水溶液酸化至pH2，在冰浴中冷卻至0℃。過濾收集所得晶體，在真空中干燥。
收率186mgMS-ESI[M+H]+＝274.2TLCRf＝0.50，硅膠，二氯甲烷(CH2Cl2)/甲醇(CH3OH)＝9/1(v/v)(b)6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶向攪拌著的5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-羥基-嘧啶(實施例1a，305mg)的無水1，4-二噁烷(1ml)溶液加入磷酰氯(0.75ml)。加入一滴N，N-二甲基苯胺。在80℃下3小時后，將混合物在冰浴中冷卻至0℃，緩慢加入碎冰。放熱反應(yīng)停止后，加入H2O(3ml)。過濾收集固體，在真空中干燥。
收率244mgMS-ESI[M+H]+＝292.2TLCRf＝0.86，硅膠，CH2Cl2(c)5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯向攪拌著的2-巰基乙酸乙酯(92μl)與6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(實施例1b，244mg)的無水四氫呋喃(THF)(4ml)溶液加入叔丁醇鉀(150mg)。1小時后，將混合物在冰浴中冷卻至0℃，用H2O(10ml)稀釋。過濾收集固體，在真空中干燥。
收率260mgMS-ESI[M+H]+＝376.2TLCRf＝0.44，硅膠，CH2Cl2(d)5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸將5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(實施例1c，9.27g)溶于1，4-二噁烷(270ml)與H2O(30ml)的混合物。加入氫氧化鋰(10g)，將混合物在80℃下攪拌48小時。通過蒸發(fā)從混合物中除去1，4-二噁烷，將殘余物溶于H2O。向剩余溶液加入3N HCl水溶液酸化至pH2。濾出所得沉淀，用H2O洗滌。通過與1，4-二噁烷、再與二乙醚共蒸發(fā)除去沉淀中的痕量水，在50℃真空中干燥過夜。
收率8.45gMS-ESI[M+H]+＝348.0TLCRf＝0.2，硅膠，CH2Cl2/CH3OH 9/1(v/v)(e)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸(實施例1d，7.0g)溶于無水CH2Cl2(100ml)。加入苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TBTU)(8.0g)、N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)(6.6ml)和叔丁胺(4.0ml)，將混合物在室溫下攪拌5小時。將反應(yīng)混合物用5％NaHCO3水溶液(2*100ml)和1M HCl水溶液(2*100ml)洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在真空中濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用庚烷(hept)/乙酸乙酯(EtOAc)＝1/0至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率6.5gMS-ESI[M+H]+＝403.0HPLCRt＝33.56min，柱子3μm Luna C-18(2)100*2.0mm，流速0.25ml/min，烘箱溫度40℃，檢測210nm+254nm，洗脫劑H2O/乙腈(CH3CN)/CH3OH＝在50min內(nèi)從70/28.5/1.5至0/95/5(v/v)(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1e，1.8g)溶于無水CH2Cl2(30ml)，將所得溶液冷卻至0℃。滴加三溴化硼(1.28ml)的無水CH2Cl2(30ml)溶液，將混合物在室溫下攪拌過夜。向反應(yīng)混合物滴加飽和NaHCO3水溶液，直至放熱反應(yīng)停止。然后，通過蒸發(fā)從混合物中除去CH2Cl2，加入大量EtOAc。將有機層用飽和NaHCO3水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮。
收率1.3gMS-ESI[M+H]+＝389.2HPLCRt＝17.44min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN/CH3OH＝在50min內(nèi)從90/9.5/0.5至0/95/5(v/v)(g)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)溶于無水CH2Cl2(5ml)。加入DIPEA(500μl)和氯甲酸甲酯(199μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用H2O洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率93mgMS-ESI[M+H]+＝447.4HPLCRt＝17.56min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例2叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例1g所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)與氯甲酸烯丙酯(274μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率102mgMS-ESI[M+H]+＝473.4HPLCRt＝19.82min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例3叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(芐氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例1g所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)與氯甲酸芐基酯(368μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率112mg
MS-ESI[M+H]+＝523.2HPLCRt＝22.22min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例4叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基-芐氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例1g所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)與氯甲酸對硝基芐基酯(554mg)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率47mgMS-ESI[M+H]+＝568.4HPLCRt＝21.45min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例5叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例1g所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)與氯甲酸苯基酯(324μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率89mgMS-ESI[M+H]+＝509.4HPLCRt＝21.12min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)
實施例6叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基-苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例1g所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)與氯甲酸對硝基苯基酯(207mg)的反應(yīng)。在減壓下蒸發(fā)溶劑，得到粗的標(biāo)題化合物。
收率569mgMS-ESI[M+H]+＝554.6TLCRf＝0.5，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)實施例7叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例1f，100mg)溶于無水CH2Cl2(5ml)，加入幾滴N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。加入二乙基氨基甲酰氯(68mg)和DIPEA(217μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用H2O洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率75mgMS-ESI[M+H]+＝488.4TLCRf＝0.6，硅膠，hept/EtOAc＝1/1(v/v)實施例8叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氫吡啶基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基-苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例6，142mg)溶于CH2Cl2。加入1，2，3，6-四氫吡啶(117μl)和DIPEA(224μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌。在減壓下濃縮有機層。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/H2O＝在45min內(nèi)從20/80至100/0(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率76mgMS-ESI[M+H]+＝498.2HPLCRt＝13.90min，柱子5μm Luna C-18(2)150*4.60mm，流速1ml/min，檢測210nm，洗脫劑H2O/CH3CN＝在15min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例9叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對甲苯磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(a)5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-羥基-嘧啶將硫酸S-甲基異硫脲(69.0g)、3-硝基苯甲醛(75.0g)、氰基乙酸乙酯(56.0ml)與碳酸鉀(72.5g)在絕對EtOH(1500ml)中的混合物在60℃下攪拌16小時。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻至0℃。濾出所得沉淀，用絕對EtOH洗滌，溶于熱水(100℃)。將該溶液冷卻至室溫，用2N HCl酸化至pH2，在冰浴中冷卻至0℃。濾出所得沉淀，用冰水洗滌。通過與1，4-二噁烷共蒸發(fā)除去沉淀中殘留的水。
收率54.0gMS-ESI[M+H]+＝289.0TLCRf＝0.3，硅膠，DCM/MeOH＝9/1(v/v)(b)6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶向攪拌著的5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-羥基-嘧啶(實施例9a，25.0g)的無水1，4-二噁烷(300ml)溶液加入POCl3(100ml)。在90℃下3小時后，將混合物冷卻至室溫，在減壓下濃縮。將殘余物溶于1，4-二噁烷(100ml)，將所得溶液冷卻至0℃。小心地加入冰水。濾出所得沉淀，用水洗滌。通過與1，4-二噁烷共蒸發(fā)除去沉淀中殘留的水。
收率26.0gMS-ESI[M+H]+＝307.0TLCRf＝0.5，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(c)乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶向攪拌著的2-巰基乙酸乙酯(9.3ml)與6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(實施例9b，26.0g)的EtOH(250ml)與DCM(250ml)溶液加入DIPEA(15.7ml)。在室溫下1小時后，向混合物加入0.1N HCl水溶液(500ml)，然后用DCM萃取(3*500ml)，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。
收率28.0gMS-ESI[M+H]+＝390.4TLCRf＝0.5，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(d)5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯將乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶(實施例9c，28.0g)與DIPEA(30ml)在甲苯(150ml)與EtOH(150ml)中的混合物在回流溫度下(100℃)攪拌16小時。然后將混合物冷卻至室溫，在減壓下濃縮。通過與甲苯共蒸發(fā)除去殘留的DIPEA。
收率28.0gMS-ESI[M+H]+＝391.2TLCRf＝0.6，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)
(e)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(實施例9d，780mg)溶于1，4-二噁烷(10ml)。加入乙醇(10ml)和氯化錫(II)(1.1g)，將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌過夜。在真空中濃縮反應(yīng)混合物后，將殘余物再次溶于EtOAc(50ml)，用4M NaOH水溶液(10ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。利用實施例1d所述方法將所得衍生物5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(558mg)中的乙酯基皂化為對應(yīng)的酸(430mg)，隨后與叔丁胺(200μl)反應(yīng)，生成對應(yīng)的叔丁酰胺(按照實施例1e)。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/1(v/v)作為洗脫劑。
收率391mgMS-ESI[M+H]+＝388.0TLCRf＝0.43，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對甲苯磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)溶于無水吡啶(5ml)。加入對甲苯磺酰氯(70mg)，將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用0.1M HCl水溶液洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率63mgMS-ESI[M+H]+＝542.4HPLCRt＝23.46min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN/CH3OH＝在50min內(nèi)從10/72/17/1至10/18/68/4(v/v)實施例10叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，2.5g)溶于CH2Cl2(25ml)與吡啶(25ml)的混合物。如Bull.Chem.Soc.Jpn.39，1937-1941(1966)所述制備2-溴-乙磺酰氯。滴加2-溴-乙磺酰氯(2g)的CH2Cl2(5ml)溶液，將混合物在室溫下攪拌2小時。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率1.4gMS-ESI[M+H]+＝478.6TLCRf＝0.80，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)實施例11叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-哌啶子基乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例10，87mg)溶于無水THF(5ml)。加入哌啶(181μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/0.1％三氟乙酸(TFA)水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與0.1％TFA水溶液的混合物中冷凍干燥。
收率89mg(TFA鹽)
MS-ESI[M+H]+＝563.4HPLCRt＝18.4min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從60/40至0/100(v/v)實施例12叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(硫代嗎啉-4-基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例11所述方法進行硫代嗎啉(184μl)與叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例10，87mg)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與0.1％TFA水溶液的混合物中冷凍干燥。
收率120mg(TFA鹽)MS-ESI[M+H]+＝581.2HPLCRt＝17.2min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從60/40至0/100(v/v)實施例13叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(雙-(2-甲氧基乙基)-氨基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例11所述方法進行雙-(2-甲氧基乙基)胺(244mg)與叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例10，87mg)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與0.1％TFA水溶液的混合物中冷凍干燥。
收率60mg(TFA鹽)MS-ESI[M+H]+＝611.4HPLCRt＝17.9min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從60/40至0/100(v/v)實施例14叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(N-甲基哌嗪基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例11所述方法進行N-甲基哌嗪(184μl)與叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例10，87mg)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與0.1％TFA水溶液的混合物中冷凍干燥。
收率85mg(TFA鹽)MS-ESI[M+H]+＝578.4HPLCRt＝16.1min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在25min內(nèi)從60/40至0/100(v/v)實施例15叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)溶于無水CH2Cl2(5ml)。加入氯甲酸甲酯(199μl)和DIPEA(500μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。反應(yīng)混合物用H2O洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/10％CH3CN水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率80mgMS-ESI[M+H]+＝446.2HPLCRt＝20.44min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/72/18至10/18/72(v/v)實施例16叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺利用實施例15所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)與氯甲酸烯丙酯(274μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/10％CH3CN水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率66mgMS-ESI[M+H]+＝472.2HPLCRt＝22.37min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/72/18至10/18/72(v/v)實施例17叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(芐氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺利用實施例15所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)與氯甲酸芐基酯(368μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/10％CH3CN水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率112mgMS-ESI[M+H]+＝522.4HPLCRt＝24.10min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/72/18至10/18/72(v/v)實施例18叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺利用實施例15所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)與氯甲酸乙酯(247μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/10％CH3CN水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率74mgMS-ESI[M+H]+＝460.4HPLCRt＝21.77min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/72/18至10/18/72(v/v)實施例19叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺利用實施例15所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，100mg)與氯甲酸苯基酯(324μl)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/10％CH3CN水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率47mg
MS-ESI[M+H]+＝508.4HPLCRt＝23.25min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/72/18至10/18/72(v/v)實施例20叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例9e，1g)溶于無水CH2Cl2(10ml)。隨后，滴加氯甲酸對硝基苯基酯(520mg)的無水CH2Cl2(10ml)溶液，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌。1小時后，將反應(yīng)混合物用H2O洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。
收率1.42gMS-ESI[M+H]+＝553.6TLCRf＝0.7，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)實施例21叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例20，142mg)溶于無水CH2Cl2(5ml)。加入嗎啉(112μl)和DIPEA(225μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌。在減壓下濃縮有機層。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率22mgMS-ESI[M+H]+＝501.2
HPLCRt＝8.62min，柱子Luna C-18(見實施例8)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在15min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例22叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(鄰茴香氨基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例21所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例20，142mg)與鄰茴香胺(159mg)的脲偶聯(lián)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率18mgMS-ESI[M+H]+＝537.2HPLCRt＝12.94min，柱子Luna C-18(見實施例8)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在15min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例23叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氫吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺按照實施例21所述方法進行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例20，142mg)與1，2，3，6-四氫吡啶(118μl)的脲偶聯(lián)。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。然后將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率18mgMS-ESI[M+H]+＝497.2HPLCRt＝11.19min，柱子Luna C-18(見實施例8)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在15min內(nèi)從40/60至0/100(v/v)實施例24叔丁基5-羥基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(a)2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基-1，4-二氫嘧啶-5-羧酸乙酯將硫酸S-甲基異硫脲(13.9g)、3-甲氧基苯甲醛(7.5g)、乙酰乙酸乙酯(6.5g)與碳酸氫鈉(21g)在DMF(200ml)中的混合物在70℃下攪拌18小時。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二乙醚稀釋，用H2O和飽和NaCl水溶液洗滌。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率7.3gMS-ESI[M+H]+＝321.0TLCRf＝0.2，硅膠，hept/EtOAc＝3/1(v/v)(b)2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-5-羧酸乙酯將2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基-1，4-二氫嘧啶-5-羧酸乙酯(實施例24a，7.65g)溶于甲苯(200ml)與CH2Cl2(100ml)的混合物。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(5.45g)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌15分鐘。加入0.2M NaOH水溶液(250ml)。分離有機層，用H2O(2*250ml)和飽和NaCl水溶液(2*250ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝4/1(v/v)作為洗脫劑。
收率4.0gMS-ESI[M+H]+＝319.2TLCRf＝0.4，硅膠，hept/EtOAc＝3/1(v/v)(c)5-羥基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯向冷卻至-78℃的新鮮制備的LDA的無水THF溶液(1ml)加入2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-5-羧酸乙酯(實施例24b，318mg)的無水THF(2ml)溶液。將混合物在-78℃下攪拌30分鐘，加入3-乙氧基丙烯酸酯(217μl)。然后將混合物在-78℃下攪拌，3小時后達到室溫。向反應(yīng)混合物加入0.1M HCl水溶液(20ml)，隨后用EtOAc(25ml)萃取。將有機層用水(25ml)和飽和NaCl水溶液(25ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/1(v/v)作為洗脫劑，再從CH3OH中重結(jié)晶。
收率38mgMS-ESI[M+H]+＝371.2TLCRf＝0.6，硅膠，hept/EtOAc＝2/3(v/v)(d)叔丁基5-羥基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺將5-羥基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例24c，38mg)溶于1，4-二噁烷(4ml)與1M KOH水溶液(0.5ml)的混合物。將混合物回流48小時，然后冷卻至室溫，加入0.1M HCl水溶液(15ml)酸化?；旌衔镉肅H2Cl2(15ml)萃取。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下蒸發(fā)，得到5-羥基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-喹唑啉-6-羧酸。將后者溶于DMF(2ml)。加入叔丁胺(53μl)和TBTU(96mg)，將混合物在室溫下攪拌3小時。加入EtOAc(15ml)，將有機層用飽和NaHCO3水溶液(15ml)和飽和NaCl水溶液(15ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下蒸發(fā)。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝7/3(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，10％CH3CN水溶液/CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從57/40/3至7/90/3(v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從水與1，4-二噁烷的混合物中冷凍干燥。
收率25mgMS-ESI[M+H]+＝398.2HPLCRt＝9.75min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH2/H2O/CH3CN/CH3OH＝在15min內(nèi)從5/35/57/3至5/10/81/4(v/v)實施例25叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(a)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-乙烯基-嘧啶將6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(實施例1b，1.46g)懸浮在1，4-二噁烷(10ml)中。加入四(三苯膦)鈀(O)(350mg)，混合物用氮氣氛沖洗。加入四乙烯基錫(1.26ml)，將混合物回流5小時。然后將反應(yīng)混合物倒在EtOAc(100ml)與H2O(100ml)的混合物中。將有機層用飽和NaCl水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/CH2Cl2＝1/0至1/3(v/v)洗脫。
收率1.05gMS-ESI[M+H]+＝284.2TLCRf＝0.4，硅膠，hept/CH2Cl2＝1/2(v/v)(b)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-(1，1-雙-(乙氧羰基)丙-3-基)嘧啶將5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-乙烯基-嘧啶(實施例25a)溶于乙醇(2ml)與甲苯(2ml)的混合物。加入碳酸鉀(690mg)和丙二酸二乙酯(272μl)，將混合物在室溫下攪拌4小時。然后將反應(yīng)混合物倒在0.5M HCl水溶液(25ml)與EtOAc(50ml)的混合物中。將有機層用H2O(50ml)和飽和NaCl水溶液(50ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用甲苯/EtOAc＝100/0至95/5(v/v)作為洗脫劑。
收率344mgMS-ESI[M+H]+＝444.2TLCRf＝0.3，硅膠，甲苯/EtOAc＝95/5(v/v)
(c)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-7，8-二氫喹唑啉-6-羧酸乙酯將5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-(1，1-雙-(乙氧羰基)丙-3-基)嘧啶(實施例25b，81mg)溶于無水CH2Cl2(1ml)。滴加1M氯化錫(IV)的CH2Cl2溶液(1ml)，將混合物在室溫下攪拌1小時。然后向反應(yīng)混合物加入H2O(10ml)和EtOAc(10ml)。將有機層用H2O(10ml)和飽和NaCl水溶液(10ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝1/0至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率24mgMS-ESI[M+H]+＝372.2TLCRf＝0.5，硅膠，hept/EtOAc＝3/1(v/v)(d)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯將5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-7，8-二氫喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例25c，22mg)溶于CH2Cl2(1ml)。加入0.06M 2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌的CH2Cl2溶液(1.2ml)，將混合物在室溫下攪拌15分鐘。在減壓下濃縮反應(yīng)混合物。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用甲苯/EtOAc＝95/5(v/v)作為洗脫劑。
收率20mgMS-ESI[M+H]+＝370.0TLCRf＝0.3，硅膠，hept/EtOAc＝1/3(v/v)(e)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸將5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例25d，490mg)溶于15ml 1，4-二噁烷，加入2M KOH水溶液(3ml)。將混合物在回流下加熱5小時，在70℃下加熱76小時。將混合物冷卻至室溫，加入0.5M HCl水溶液?；旌衔镉肅H2Cl2萃取(2*50ml)，合并有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮，得到粗的標(biāo)題化合物。
收率406mg(粗)MS-ESI[M+H]+＝342.2TLCRf＝0.0，硅膠，hept/EtOAc＝2/3(v/v)(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺向1.8M 5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸的DMF溶液(1.8ml)加入TBTU(173mg)和叔丁胺(95μl)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時，然后倒入EtOAc(25ml)與飽和NaHCO3水溶液(50ml)的混合物中。分離有機相，用0.5M HCl水溶液(50ml)和鹽水(50ml)洗滌，繼之以干燥(MgSO4)和在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，使用hept/EtOAc＝1/0至2/3(v/v)作為洗脫劑。將標(biāo)題化合物從含有1.5當(dāng)量HCl的二噁烷與水的混合物中冷凍干燥。
收率44mgMS-ESI[M+H]+＝397.2HPLCRt＝21.52min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/70/20至10/10/80(v/v)實施例26叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吡咯烷-1-基)-乙氧基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(a)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-喹唑啉-6-酰胺將叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(實施例25f，1.5g)的無水CH2Cl2溶液冷卻至0℃。滴加BBr3(1.1ml)的CH2Cl2(25ml)溶液，加入完全后，將混合物在室溫下攪拌3小時。混合物用CH2Cl2稀釋，小心地加入飽和NaHCO3水溶液(200ml)。將混合物劇烈攪拌1.5小時，直至全部固體溶解。含水層用CH2Cl2萃取兩次。將第一份有機層用飽和NaHCO3水溶液和鹽水洗滌。合并有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝1/0至1/1(v/v)作為洗脫劑。
收率930mgMS-ESI[M+H]+＝383.4TLCRf＝0.3，硅膠，hept/EtOAc＝2/3(v/v)(b)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吡咯烷-1-基)-乙氧基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺將K2CO3(1.0g)、鹽酸1-(2-氯乙基)吡咯烷(66mg)與叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羥基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(實施例26a，121mg)在丙酮中的混合物在回流下加熱過夜。將混合物冷卻至室溫，過濾除去固體，在減壓下濃縮濾液。將殘余物溶于EtOAc，用水和鹽水洗滌。將有機相干燥(MgSO4)，在真空中濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，10％CH3CN水溶液/CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從72/25/3至27/70/3(v/v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從水、TFA與CH3CN的混合物中冷凍干燥。
收率42mg(TFA鹽)MS-ESI[M+H]+＝480.4HPLCRt＝12.93min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/70/20至10/10/80(v/v)實施例27叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(a)5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-[(三苯基亞膦基)-甲基]-嘧啶在-78℃下，向無水溴化甲基三苯基鏻(29.5g)的二甲氧基乙烷(400ml)懸液加入1.6M正丁基鋰的己烷溶液。將混合物在-78℃下攪拌1小時，加入6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(實施例9b，10.1g)的二甲氧基乙烷(100ml)溶液，除去冷卻浴。1小時后，反應(yīng)完全，加入水(15ml)。過濾除去固體，繼之以濃縮反應(yīng)混合物，得到深色殘余物，與乙酸乙酯攪拌，得到懸液。過濾，用水和鹽水洗滌殘余物，用MgSO4干燥有機層，繼之以在真空中濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝4/1至1/1(v/v)作為洗脫劑。
收率7.04gMS-ESI[M+H]+＝299.2TLCRf＝0.4，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(b)5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-乙烯基-嘧啶將5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-[(三苯基亞膦基)-甲基]-嘧啶(實施例27a，7.04g)的THF(64ml)溶液用60℃的甲醛水溶液(37wt％，3.55ml)處理1小時。混合物冷卻至室溫后，將其用EtOAc(100ml)稀釋，用水洗滌(2*50ml)，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率1.42gMS-ESI[M+H]+＝547.2TLCRf＝0.6，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(c)(2-(5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-6-基)-乙基)-丙二酸叔丁基乙基酯將碳酸鉀(1.88g)和丙二酸叔丁基乙基酯懸浮在EtOH(82ml)中，緩慢加入5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-乙烯基-嘧啶(實施例27b，2.71g)的甲苯/CH2Cl2(33ml)溶液(約1.5小時)。加入完全后，將混合物攪拌額外40分鐘。將混合物用EtOAc稀釋，用水(2x)和鹽水洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/CH2Cl2＝1/1(v/v)作為洗脫劑。
收率1.42gMS-ESI[M+H]+＝487.2
TLCRf＝0.5，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(d)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7，8-二氫喹唑啉-6-羧酸乙酯將(2-(5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-6-基)-乙基)-丙二酸叔丁基乙基酯(實施例27c，1.40g)的CH2Cl2(15ml)溶液冷卻至0℃。滴加SnCl4溶液(1M CH2Cl2溶液，11.5ml)，除去冰浴，將溶液在室溫下攪拌額外30分鐘。加入水(64ml)和EtOAc(64ml)，將混合物劇烈攪拌，直至全部固體溶解。將有機相用水和鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮，得到標(biāo)題化合物，為粗產(chǎn)物。
收率1.19g(粗)MS-ESI[M+H]+＝387.2TLCRf＝0.5，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(e)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯將粗5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7，8-二氫喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例27d，1.19g)的CH2Cl2(31ml)溶液冷卻至0℃。滴加DDQ(1.14g)的甲苯(31ml)溶液，除去冰浴，將溶液在室溫下攪拌額外30分鐘。將混合物用CH2Cl2(約100ml)稀釋，用飽和NaHCO3水溶液(3*100ml)和鹽水(2*50ml)洗滌。合并含水層，用CH2Cl2反萃取。合并有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率735mgMS-ESI[M+H]+＝385.2TLCRf＝0.5，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(f)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯向5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例27e，1.54g)與SnCl2·2H2O(4.52g)在1，4-二噁烷(35ml)中的混合物加入EtOH(35ml)和濃HCl水溶液(690μl)。將反應(yīng)混合物在90℃下攪拌5小時。冷卻至室溫和在減壓下濃縮后，將殘余物懸浮在EtOAc(35ml)中。向混合物加入2M NaOH至pH10，加入THF和鹽水。將所得混合物攪拌40分鐘，然后分離有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率818mgMS-ESI[M+H]+＝355.2TLCRf＝0.3，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(g)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸將5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(實施例27f，658mg)的1，4-二噁烷溶液用70℃的KOH水溶液(2M，4.2ml)處理18小時。反應(yīng)混合物冷卻至室溫后，將其用4N HCl酸化至pH1。混合物用CH2Cl2萃取(3x)。合并有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮，得到粗標(biāo)題化合物。
收率215mgMS-ESI[M+H]+＝327.2TLCRf＝0，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(h)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺按照實施例1e所述程序進行5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸(實施例27g，192mg)向?qū)?yīng)叔丁酰胺的轉(zhuǎn)化。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率243mgMS-ESI[M+H]+＝382.2HPLCRt＝6.57min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從45/55至0/100(v/v)
實施例28叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(嗎啉-4-基)-乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(a)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺向叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(實施例27h，791mg)的CH2Cl2(60ml)懸液加入DIPEA(1.08ml)，繼之以緩慢加入溴乙酰氯(242μl)的CH2Cl2(20ml)溶液。在室溫下40分鐘后，將反應(yīng)混合物用飽和NHCO3水溶液洗滌(3x)，繼之以干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。粗標(biāo)題化合物用于下一步時無需進一步純化。收率1.20g(粗)MS-ESI[M+H]+＝504.2TLCRf＝0.4，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(b)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(嗎啉-4-基)-乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺向叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(實施例28a，88mg)的乙腈溶液加入嗎啉(148μl)，將混合物攪拌18小時。此后加入CH2Cl2(15ml)，將混合物用飽和NaHCO3水溶液洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在真空中濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，使用CH2Cl2/MeOH＝1/0至9/1(v/v)作為洗脫劑。將標(biāo)題化合物從含有1.5當(dāng)量HCl的乙腈與水的混合物中冷凍干燥。
收率82mg(HCl鹽)MS-ESI[M+H]+＝509.2HPLCRt＝13.00min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從75/25至0/100(v/v)實施例29
叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N-(叔丁基)-甘氨酰)-氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺按照實施例28b所述方法進行叔丁胺(275μl)與叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(實施例28a，130mg)的反應(yīng)。標(biāo)題化合物首先經(jīng)過硅膠色譜純化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作為洗脫劑，然后經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，CH3CN/0.1％TFA水溶液＝在30min內(nèi)從10/90至90/10(v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與HCl水溶液的混合物中冷凍干燥。
收率28mg(HCl鹽)MS-ESI[M+H]+＝495.4HPLCRt＝12.93min，柱子Luna C-18(見實施例1e)，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/H2O/CH3CN＝在20min內(nèi)從10/70/20至10/10/80(v/v)實施例305-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7-羥基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(a)6-氨基-5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)嘧啶將6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(實施例9b，10.0g)的溶液用氫氧化銨(28％NH3水溶液，15ml)處理，將混合物攪拌過夜。過濾收集所生成的晶體，用水洗滌。將產(chǎn)物在50℃真空下干燥，得到標(biāo)題化合物。
收率8.9gMS-ESI[M+H]+＝288.2TLCRf＝0.3，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(b)2-(氨基-[6-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-5-基]-亞甲基)丙二酸二乙酯向6-氨基-5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)嘧啶(實施例30a，5.74g)的1，2-二氯丙烷(200ml)懸液加入丙二酸二乙酯(9.1ml)。將混合物冷卻至0℃，滴加SnCl4(14ml)的1，2-二氯丙烷(50ml)溶液。加入完全后，將懸液在回流下加熱18小時。使混合物冷卻至室溫，有固體沉降后，小心地潷出1，2-二氯丙烷。將所得固體與EtOAc(300ml)和水(300ml)攪拌，直至溶解完全。將有機層用水(500ml)和鹽水(500ml)洗滌，干燥(MgSO4)，在真空中濃縮。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，使用hept/EtOAc＝1/0至3/2(v/v)作為洗脫劑。
收率3.78gMS-ESI[M+H]+＝448.4TLCRf＝0.2，硅膠，hept/EtOAc＝3/2(v/v)(c)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7-羥基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯將2-(氨基-[6-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-5-基]-亞甲基)丙二酸二乙酯(實施例30b，1.34g)的二苯醚(30ml)懸液在氮氣流下加熱至240℃達2小時?；旌衔锢鋮s至室溫后，加入庚烷(200ml)，過濾收集固體。標(biāo)題化合物經(jīng)過硅膠色譜純化，使用CH2Cl2/丙酮＝1/0至4/1(v/v)作為洗脫劑。
收率590mgMS-ESI[M+H]+＝402.4TLCRf＝0.3，硅膠，CH2Cl2/丙酮＝9/1(v/v)實施例31叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((硫代嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(a)5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-羥基-嘧啶將鹽酸芐脒(16.4g)、3-硝基苯甲醛(15.1g)、氰基乙酸乙酯(11.2ml)與碳酸鉀(16.6g)在絕對EtOH(250ml)中的混合物在60℃下攪拌8小時。將反應(yīng)混合物在冰浴中冷卻至0℃。濾出所得沉淀，用絕對EtOH洗滌，在水中加熱(100℃)，直至得到澄清溶液。將溶液冷卻至50℃，加入2N HCl水溶液酸化至pH2，在冰浴中冷卻至0℃。濾出所得沉淀，用冰水洗滌。通過與1，4-二噁烷共蒸發(fā)除去殘留的水。
收率15.0gMS-ESI[M+H]+＝319.2TLCRf＝0.3，硅膠，DCM/MeOH＝9/1(v/v)(b)6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-嘧啶向攪拌著的5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-羥基-嘧啶(實施例31a，15.0g)與二甲基苯胺(0.5ml)的無水1，4-二噁烷p.a.(200ml)溶液加入POCl3(50ml)。在90℃下3小時后，濾出溫?zé)岬幕旌衔?，在減壓下濃縮濾液。將殘余物溶于1，4-二噁烷，加入冰水。濾出所得沉淀，用水洗滌。通過與1，4-二噁烷共蒸發(fā)除去殘留的水。
收率15.8gMS-ESI[M+H]+＝337.4TLCRf＝0.8，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(c)乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶在氮氣氛下，向攪拌著的2-巰基乙酸乙酯(5.15ml)與6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-嘧啶(實施例31b，15.8g)的EtOH(125ml)與DCM(125ml)溶液加入DIPEA(8.71ml)。在室溫下2小時后，將混合物用DCM稀釋直至完全溶解，用0.5N HCl水溶液洗滌，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。
收率19.7gMS-ESI[M+H]+＝421.2TLCRf＝0.7，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(d)5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯向攪拌著的乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶(實施例31c，19.7g)的絕對EtOH(100ml)與甲苯p.a.(100ml)溶液加入DIPEA(20.0ml)。在100℃下48小時后，將混合物冷卻至0℃。濾出所得沉淀，用冷EtOH洗滌，在40℃真空中干燥。
收率17.0gMS-ESI[M+H]+＝421.2TLCRf＝0.5，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(e)5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯向5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(實施例31d，16.6g)的1，4-二噁烷p.a.(250ml)溶液加入氯化錫(II)(23.0g)的絕對EtOH(250ml)溶液。加入37％HCl水溶液(6.9ml)，將混合物在回流(90℃)下加熱16小時。使混合物冷卻至室溫，在減壓下濃縮。將殘余物懸浮在EtOAc(500ml)中。加入4N NaOH至pH 10-11。向混合物加入飽和NaCl水溶液稀釋。分離有機層，干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。
收率17.0gMS-ESI[M+H]+＝421.2TLCRf＝0.5，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(f)5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸向5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(實施例31e，17.0g)的1，4-二噁烷(210ml)與水(80ml)溶液加入氫氧化鉀(20.0g)。在90℃下16小時后，將混合物冷卻至0℃。濾出所得沉淀，懸浮在水(300ml)中，冷卻至0℃。向混合物加入2N檸檬酸水溶液酸化至pH3，在0℃下攪拌，2小時后達到室溫。濾出所得沉淀，用水洗滌，在40℃真空中干燥。
收率13.3gMS-ESI[M+H]+＝363.0TLCRf＝0.2，硅膠，DCM/MeOH＝95/5(v/v)(g)叔丁基5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺在氮氣氛下，向5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸(實施例31f，13.3g)在DCM(250ml)與DMF(50ml)中的混合物加入DIPEA(15.3ml)、叔丁胺(9.3ml)和TBTU(14.1g)。在室溫下3小時后，將混合物用DCM稀釋，用飽和NaHCO3水溶液、0.1NHCl水溶液和飽和NaCl水溶液洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)過硅膠色譜純化，使用庚烷/EtOAc＝3/7至1/1(v/v)作為洗脫劑。
收率14.7gMS-ESI[M+H]+＝418.4TLCRf＝0.4，硅膠，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)(h)叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺將叔丁基5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例31g，2.0g)溶于無水CH2Cl2(20ml)。隨后，滴加氯甲酸對硝基苯基酯(520mg)的無水CH2Cl2(10ml)溶液，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌。3小時后，反應(yīng)混合物用H2O洗滌。將有機層干燥(MgSO4)，在減壓下濃縮。
收率2.9gMS-ESI[M+H]+＝583.2TLCRf＝0.6，硅膠，庚烷/EtOAc＝1/1(v/v)
(i)叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((硫代嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺向叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例31h，150mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入硫代嗎啉(300μl)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。隨后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌。在減壓下濃縮有機層。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率89mgMS-ESI[M+H]+＝547.2HPLCRt＝11.71min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，檢測UV＝210nm，烘箱溫度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH 2.1/水/ACN＝10/30/60至10/5/85(v/v/v)，運行時間＝20min實施例32叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺向N，N-二異丙基乙胺(DIPEA，0.50ml)與叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例31h，250mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入鹽酸二甲胺(150mg)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。隨后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌。在減壓下濃縮有機層。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率75mgMS-ESI[M+H]+＝489.2HPLCRt＝19.58min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，檢測UV＝210nm，烘箱溫度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH2.1/水/ACN＝10/60/30至10/5/85(v/v/v)，運行時間＝20min實施例33叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺向叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(對硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(實施例31h，150mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入嗎啉(250mg)，將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過夜。隨后，將反應(yīng)混合物用CH2Cl2稀釋，用H2O洗滌。在減壓下濃縮有機層。標(biāo)題化合物經(jīng)過HPLC純化，使用Luna C-18柱，H2O/CH3CN＝在45min內(nèi)從80/20至0/100(v/v)梯度洗脫。將標(biāo)題化合物從1，4-二噁烷與H2O的混合物中冷凍干燥。
收率63mgMS-ESI[M+H]+＝489.2HPLCRt＝19.39min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，檢測UV＝210nm，烘箱溫度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脫劑磷酸鹽緩沖液50mM pH2.1/水/ACN＝10/60/30至10/5/85(v/v/v)，運行時間＝20min實施例34CHO-LH與CHO-FSH體外生物活性在中國倉鼠卵巢(CHO)細胞中試驗化合物的LH激動活性，該細胞是用人LH受體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染和用指示螢火蟲熒光素酶報道基因表達的cAMP響應(yīng)元件(CRE)/啟動子共轉(zhuǎn)染的。配體與Gs偶聯(lián)的LH受體的結(jié)合將導(dǎo)致cAMP增加，這繼而將誘導(dǎo)熒光素酶報道基因構(gòu)建體的反式激活增加。熒光素酶信號是用發(fā)光計數(shù)器量化的。關(guān)于供試化合物，計算EC50值(導(dǎo)致半數(shù)最大(50％)刺激作用的供試化合物濃度)。為此，使用軟件程序GraphPad PRISM 3.0版(GraphPad software Inc.，SanDiego)。結(jié)果表明，實施例9、11、12、13、14、25和27化合物的EC50值在10-6與10-7M之間。實施例1、2、3、4、5、17、22、26、28、29、31和33化合物顯示10-7與10-8M之間的EC50值，而實施例7、15、16、18、21、23和32化合物的EC50值低于10-8M。
權(quán)利要求
1.根據(jù)通式I的二環(huán)雜芳族化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽， 式I其中R1是(3-8C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；全都可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自R5、NHR5、N(R4)R5、OR5和/或SR5；R2是(1-4C)烷基、(2-4C)鏈烯基、(2-4C)炔基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；R3是(1-8C)烷基、(3-8C)環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基；R4可以選自與R2所述相同的基團；R5是(6-14C)芳基、(4-13C)雜芳基、(6-14C)芳基羰基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(2-8C)鏈烯基磺?；?、(2-8C)鏈烯氧基羰基、(3-8C)環(huán)烷基、(6-14C)芳基磺酰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(6-14C)芳基氨基磺?；?、(6-14C)芳氧基磺?；?2-8C)鏈烯基、(2-8C)炔基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)烷基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基或(1-8C)烷氧基磺?；?，其中的烷基可以可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自羥基、(1-8C)烷氧基、(2-7C)雜環(huán)烷基(1-8C)烷氧基、(3-8C)環(huán)烷基(1-8C)烷氧基、(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基、(4-13)雜芳基(1-8C)烷氧基、(2-7C)雜環(huán)烷基、(3-8C)環(huán)烷基、(6-14C)芳基、(4-13C)雜芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)烷基碳酰氧基、(6-14C)芳基碳酰氧基、(1-8C)烷基羰基、(6-14C)芳基羰基、胺、(1-8C)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、(6-14C)(二)芳基氨基、(二)[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基和/或(1-8C)(二)烷基氨基；Y是CH或N；Z是NH2或OH；A是S、N(H)、N(R4)、O或一條鍵；B是N(H)、O或一條鍵；X1-X2是C＝C、C(O)-NH、NH-C(O)、C(O)-O、O-C(O)、C＝N、N＝C，或者如果R5是(1-8C)烷基磺?；?6-14C)芳基磺?；?、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺?；?6-14C)芳基氨基磺?；?1-8C)烷氧基磺?；?2-7C)雜環(huán)烷基羰基、(2-8C)鏈烯基磺?；?、(2-8C)鏈烯氧基羰基或(6-14C)芳氧基磺?；?，那么X1-X2還可以是S或O，其條件是該化合物不是5-羥基-2-甲基-4-(哌啶-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯、5-羥基-2-甲基-4-(嗎啉-4-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯或5-羥基-2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中B是N(H)或一條鍵。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中Z是NH2。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3的化合物，其中R1是(6-14C)芳基或(4-13C)雜芳基，可選地被一個或多個取代基取代，取代基選自N(R4)R5、NHR5、R5、OR5和/或SR5。
5.根據(jù)權(quán)利要求4的化合物，其中R5是(6-14C)芳基羰基、(2-7C)雜環(huán)烷基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基，其中的烷基可以可選地被(2-7C)雜環(huán)烷基、(4-13C)雜芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)烷基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、胺和/或(1-8C)(二)烷基氨基取代。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5的化合物，其中R1是苯基，可選地被一個或多個取代基取代。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中R1是在間位上被取代的。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7的化合物，其中Y是N。
9.根據(jù)權(quán)利要求1-8的化合物，其中B是N(H)，或者B是一條鍵，且R3是(2-7C)雜環(huán)烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求1-9的化合物，其中X1-X2是C＝C、C＝N、S或N＝C。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中X1-X2是C＝C或S。
12.化合物，選自叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((嗎啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氫吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺或叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺。
13.用于治療的根據(jù)權(quán)利要求1-12的化合物。
14.藥物組合物，包含與藥學(xué)上可接受的助劑混合的根據(jù)權(quán)利要求1-12的二環(huán)雜芳族化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-12任意一項的二環(huán)雜芳族衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽或溶劑化物在制備節(jié)育藥物中的用途。
全文摘要
根據(jù)通式I的二環(huán)雜芳族化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽，其中R
文檔編號A61K31/519GK1462273SQ01816067
公開日2003年12月17日 申請日期2001年9月17日 優(yōu)先權(quán)日2000年9月22日
發(fā)明者C·M·蒂默斯, W·F·J·卡斯坦斯 申請人:阿克佐諾貝爾公司