專利名稱：具有神經(jīng)營養(yǎng)活性的吡咯烷和哌啶、以及含有它們的相關(guān)組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及具有神經(jīng)營養(yǎng)活性的新的吡咯烷和哌啶。這些化合物以及相關(guān)組合物和方法可用于治療和預(yù)防神經(jīng)疾病例如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。
背景技術(shù)：
神經(jīng)變性疾病神經(jīng)變性疾病在全球范圍內(nèi)給公眾健康帶來了嚴重威脅。最嚴重的這類疾病之一是阿爾茨海默氏病(“AD”)，這是造成老年人癡呆的主要原因，并且在美國是排名第四的常見死亡病因。在美國，據(jù)估計總共有兩百萬-三百萬人患有AD，并且對于65歲以上的人群，有5％以上的人患有AD。雖然AD的精確病因尚有待確定，但是該疾病的特征是存在大量淀粉樣蛋白斑，在涉及認知功能的腦區(qū)域有神經(jīng)原纖維結(jié)，以及從基底前腦到皮層和海馬區(qū)域發(fā)生的膽堿能神經(jīng)元變性。目前對于AD沒有任何有效治療。Brinton，R.D.和Yamazaki，R.S.，Pharm.Res.，1998，15，386-398。
與AD相似，帕金森氏病(“PD”)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(″CNS″)的進行性變性疾病。在一般人群中，該疾病的一生發(fā)生率大約為2％。在PD中，塞梅林神經(jīng)節(jié)的多巴胺能神經(jīng)元的變性導(dǎo)致在控制自發(fā)性運動的腦區(qū)域—紋狀體中多巴胺水平下降。因此，標準治療已把目標集中在施用能補充腦患病區(qū)域多巴胺水平的活性劑(例如L-多巴和溴隱亭)上。然而，由于神經(jīng)細胞持續(xù)死亡和該疾病的進展，這種多巴胺能治療方案失去了治療效力。同時，在PD早期中觀察到的無意識震顫發(fā)展成動作困難期，并最終不能運動。因此，人們正在積極地尋求替代治療。Pahwa，R.和Koller，W.C.，Drugs Today，1998，34，95-105。
軀體感覺神經(jīng)系統(tǒng)的神經(jīng)變性疾病也構(gòu)成了一類衰弱其可能地致死的病癥。肌萎縮性側(cè)索硬化(“ALS”)是致命的疾病，其特征是上和下運動神經(jīng)元的進行性變性。雖然ALS的精確病因尚是未知的，但是普遍的理論提出，興奮毒性和/或氧化應(yīng)激反應(yīng)是致病因素。利魯唑是第一個被批準市售的用于ALS的藥物。其具有抗興奮毒性的作用，并且已表明能提高ALS患者的存活比例。然而，該藥物不能治愈ALS，目前正在進行替代活性劑的臨床試驗。Louvel，E.，Hugon，J.和Doble，A.，Trends Pharmacol.Sci.，1997，18，196-203。
外周神經(jīng)病是多種代謝和血管疾病的繼發(fā)癥。特別是約有30％的糖尿病患者患有某些類型的外周神經(jīng)病，這些神經(jīng)病可影響小的有髓神經(jīng)纖維，引起疼痛和溫度感覺喪失，或影響大的神經(jīng)纖維，引起運動或軀體感覺缺陷。藥物治療是針對癥狀的，最佳的治療和預(yù)防方法仍然是通過飲食和施用胰島素來維持正常血糖水平。Bissels，G.J.和Van Dam，P.S.，Neurosci.Res.Commun.，1997，20，1-10。
現(xiàn)在有大量證據(jù)表明，一些蛋白生長因子或神經(jīng)營養(yǎng)因子的不足可能在外周和中樞神經(jīng)變性疾病中起著重要的病因作用。Tomlinson，D.R.，F(xiàn)ernyhough，P.和Diemel，L.T.，Diabetes，1997，46(suppl.2)S43-S-49；Hamilton，G.S.，Chem.Ind.，(London)1998，4，127-132；Louvel，E.，Hugon，J.和Doble，A.，TrendsPharmacol.Sci.，1997，18，196-203；Ebadi，M.，等人，Neurochem.Int.，1997，30，347-374。
這些神經(jīng)營養(yǎng)因子可根據(jù)結(jié)構(gòu)分為兩類1)神經(jīng)營養(yǎng)素(neutrophins)，包括神經(jīng)生長因子(“NGF”)；神經(jīng)膠質(zhì)細胞衍生神經(jīng)營養(yǎng)生長因子(“GDNF”)；腦衍生神經(jīng)營養(yǎng)因子(“BDNF”)；神經(jīng)營養(yǎng)素3(“NT-3”)；神經(jīng)營養(yǎng)素4/5(“NT-4/5”)；神經(jīng)營養(yǎng)素2(“NT-2”)；和與細胞因子分子家族有關(guān)的纖毛狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(“CNTF”)。所有神經(jīng)營養(yǎng)因子都促進軸突分枝，誘導(dǎo)分化，并抑制特定外周和中樞神經(jīng)元亞群中的編程性細胞死亡或細胞程序死亡。例如，NGF對脊神經(jīng)節(jié)的交感神經(jīng)和感覺神經(jīng)元以及CNS中內(nèi)隔膜的膽堿能神經(jīng)元具有營養(yǎng)作用，這表明其有可能用于治療AD。CNTF對神經(jīng)元，包括副交感神經(jīng)、感覺、交感神經(jīng)、運動、小腦、海馬、和中隔神經(jīng)元的寬闊橫斷面具有營養(yǎng)作用。特別值得關(guān)注的是這樣的事實，CNTF部分防止神經(jīng)損害后骨骼肌的萎縮，但是對于受神經(jīng)支配的肌肉則沒有影響，這表明CNTF主要在病理狀態(tài)下起作用。因此，目前正在評價CNTF對于肌與骨骼疾病例如ALS的影響。
蛋白神經(jīng)營養(yǎng)劑的臨床應(yīng)用受到了其有限生物利用度的嚴重阻礙，尤其是在CNS中更是如此。需要將這些活性劑直接施用到腦中以實現(xiàn)治療效果—這是比較危險和麻煩的給藥途徑。
化學(xué)活性劑Lyons，W.E.，等人(Proc.Natl.Acad.Sci.，1994，91(8)，3191-5)描述了免疫抑制藥物FK506的神經(jīng)營養(yǎng)作用，該藥物在PC12細胞和感覺神經(jīng)節(jié)培養(yǎng)物中表現(xiàn)出神經(jīng)營養(yǎng)活性 Vertex Pharmaceuticals，Inc.(“Vertex”)在南非申請964852中公開了一些化合物，這些化合物可用于抑制FKBP12親免疫因子的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶(rotamase)活性，并刺激軸突在細胞培養(yǎng)物中生長。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Vertex PCT申請WO 92/19593公開了一系列化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FK506結(jié)合蛋白(“FKBP”)的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，并抑制T細胞生長。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的實例 Vertex PCT申請WO 94/07858公開了一系列化合物，據(jù)述這些化合物可作為耐多種藥物的癌細胞的致敏劑而維持、提高或恢復(fù)細胞對治療劑或預(yù)防劑的敏感性。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的實例 共同屬于Guilford Pharmaceuticals，Inc.，GPI NIL Holdings，Inc.和Johns Hopkins University School of Medicine(統(tǒng)稱為“Guilford”)的專利公開了一些化合物，這些化合物可用于抑制FKBP型親免疫因子的活性，刺激神經(jīng)元生長和再生，以及治療神經(jīng)疾病。
特別是，Guilford的U.S.專利5,696,135和PCT申請WO96/40140公開了使用涉及FK506和雷怕霉素的2-哌啶酸衍生物來治療動物中神經(jīng)疾病的的方法。據(jù)述其中的化合物可用于抑制FKBP型親免疫因子的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，在體外刺激小雞脊神經(jīng)節(jié)中的神經(jīng)元生長，并促進大鼠中受損的坐骨神經(jīng)的恢復(fù)。
Guilford的U.S.專利5,798,355公開了使用大環(huán)和無環(huán)2-哌啶酸衍生物的方法，據(jù)述這些衍生物能抑制FKBP型親免疫因子的酶活性，和刺激神經(jīng)元生長和再生。
Guilford的U.S.專利5,614,547和5,795,908、以及PCT申請WO 96/40633公開了一系列N-乙醛酰基-脯氨?；セ衔铮瑩?jù)述這些化合物可用于抑制FKBP-12親免疫因子旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，和治療神經(jīng)疾病。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的U.S.專利5,801,197和PCT申請WO 97/16190公開了一系列非免疫抑制性2-哌啶酸衍生物，據(jù)述這些化合物可用于治療動物中受損害的神經(jīng)。下述結(jié)構(gòu)是這系列類似物的代表性結(jié)構(gòu) Guilford的U.S.專利5,721,256公開了一些化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。下述結(jié)構(gòu)是這系列氨磺?；衔锏牡湫痛?Guilford的U.S.專利5,801,187和PCT申請WO 98/13355公開了一系列雜環(huán)酯和酰胺化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的PCT申請WO 98/13343公開了一系列雜環(huán)硫酯和酮化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的PCT申請WO 98/29116公開了一系列雜環(huán)硫酯的N-連接的氨磺?；衔铮瑩?jù)述這些化合物可用于抑制FKBP旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的PCT申請WO 98/29117公開了一系列雜環(huán)硫酯的N-連接的脲和氨基甲酸酯化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的PCT申請WO 98/37882公開了使用小分子氨基甲酸酯和脲化合物的方法，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP型親免疫因子的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，刺激神經(jīng)元生長和再生。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表
Guilford的PCT申請WO 98/37885公開了一系列雜環(huán)酯、酰胺、硫酯和酮的N-氧化物化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及治療動物中神經(jīng)疾病。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 Guilford的PCT申請WO 98/25950公開了一系列含有至少2個脯氨酸殘基的四肽和五肽化合物，據(jù)述這些化合物可用于抑制FKBP的旋轉(zhuǎn)異構(gòu)酶活性，促進神經(jīng)元生長和再生，以及影響動物中神經(jīng)元的活動。
都屬于Ariad Gene Therapeutics，Inc.(“Ariad”)的專利和出版物公開了一些活性劑，據(jù)述這些活性劑可用于將親免疫因子多聚化、基因治療應(yīng)用、激活基因轉(zhuǎn)錄、激動細胞程序死亡、或在培養(yǎng)物或全生物體中生長的工程細胞中啟動其它生物事件。
特別是，Ariad的PCT申請WO 96/06097、WO 97/31898、WO97/31899和Holt，D.A.，等人(Bioorg.Med.Chem.，1998，6(8)，1309-1335)公開了一些化合物，這些化合物包括下述結(jié)構(gòu)代表的一系列多聚化劑
共同屬于Cephalon，Inc.和Kyowa Hakko Kogyo Co.，Ltd.(統(tǒng)稱為“Cephalon”)的專利描述了在治療神經(jīng)變性疾病中具有潛在臨床應(yīng)用性的小分子神經(jīng)營養(yǎng)劑。
特別是，Cephalon的U.S.專利5,756,494、5,621,101和5,461,146、以及PCT申請WO 96/13506和WO 94/02488公開了一系列吲哚并咔唑蛋白激酶抑制劑，據(jù)述這些抑制劑對中樞膽堿能神經(jīng)元、脊神經(jīng)節(jié)和脊髓有神經(jīng)營養(yǎng)作用。下述結(jié)構(gòu)是這些化合物的典型代表 上述活性劑沒有一種經(jīng)證實對人神經(jīng)變性疾病具有治療或預(yù)防效力。因此，存在著對于具有這種效力的活性劑的迫切且未滿足的需要。
附圖簡述附

圖1表示的是，使用大鼠面神經(jīng)壓迫模型，本發(fā)明化合物30的體內(nèi)生物活性。在該模型中，壓縮面神經(jīng)引起該側(cè)面部上的腮須肌肉麻痹。在另一側(cè)上的未處理的面神經(jīng)用作內(nèi)對照。結(jié)果證明，與載體和內(nèi)對照相比，用化合物30治療使得麻痹一側(cè)的腮須動作恢復(fù)得更快。與載體和內(nèi)對照相比的麻痹一側(cè)的腮須動作恢復(fù)速度顯示在該附圖中。
發(fā)明概述本發(fā)明提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i)R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii)R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且(d)A選自COO(CH2)mAr、 (此處的R1與在(a)部分中描述的R1相同或不同)、CONR4(CH2)mAr、(CH2)mO(CH2)nAr和(CH2)nAr，(i) R4是H或C1-4烷基；(ii) Ar選自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(iii) m是1-4；且(iv) n是0-4。
本發(fā)明還提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中R″是C(1-4)-直鏈或支鏈烷基。
本發(fā)明還提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i)R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii)R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且
(d)B是(CH2)nAr或 ，其中n為0-4。
本發(fā)明還提供了刺激神經(jīng)元生長的方法，包括使神經(jīng)元與有效量的一種本發(fā)明化合物接觸。本發(fā)明還提供了包含一種本發(fā)明化合物和可藥用載體的藥物組合物。
本發(fā)明還提供了治療患有其特征是由疾病或創(chuàng)傷引起的神經(jīng)元損傷的病癥的個體的方法，包括給所述個體施用治療有效量的本發(fā)明藥物組合物。最后，本發(fā)明還提供了抑制個體中其特征是由疾病引起的神經(jīng)元損傷的病癥發(fā)作的方法，包括給所述個體施用預(yù)防有效量的本發(fā)明藥物組合物。發(fā)明詳述本發(fā)明提供了具有令人驚奇的神經(jīng)營養(yǎng)活性的新的吡咯烷和哌啶。這些化合物、以及相關(guān)藥物組合物和方法可用于治療和預(yù)防神經(jīng)疾病例如帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。
具體來說，本發(fā)明提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i)R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii)R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且(d)A選自COO(CH2)mAr、 (此處的R1與在(a)部分中描述的R1相同或不同)、CONR4(CH2)mAr、(CH2)mO(CH2)nAr和(CH2)nAr，(i) R4是H或C1-4烷基；(ii) Ar選自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(iii)m是1-4；且(iv) n是0-4。
在一個實施方案中，該化合物具有下述結(jié)構(gòu)，其中R1彼此相同或不同。 在優(yōu)選的實施方案中，這一化合物選自本發(fā)明化合物4、14、30、31、35、38、43、44、55、56、58、60、62和64。
本發(fā)明還提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中R″是C(1-4)-直鏈或支鏈烷基。
本發(fā)明還提供了具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i) R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii) R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且(d)B是(CH2)nAr或 ，其中n為0-4。
在優(yōu)選的實施方案中，該化合物選自本發(fā)明化合物24、26、37和59。
本發(fā)明化合物可以作為游離堿分離出來并使用。本發(fā)明化合物還可以作為可藥用鹽分離出來并使用。這樣的鹽的實例包括氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、鹽酸鹽、高氯酸鹽、硫酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、蘋果酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、苯甲酸鹽、扁桃酸鹽、甲磺酸鹽、羥乙磺酸鹽(hydroethanesulfonic)、苯磺酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、2-萘磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、環(huán)己烷氨基磺酸鹽和葡糖二酸鹽。
本發(fā)明還提供了刺激神經(jīng)元生長的方法，包括使神經(jīng)元與有效量的一種本發(fā)明化合物接觸。所述接觸可例如在體外或體內(nèi)進行。
本發(fā)明還提供了包含一種本發(fā)明化合物和可藥用載體的藥物組合物。
可藥用載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的，并包括但不限于約0.01-約0.1M、優(yōu)選0.05M的磷酸鹽緩沖液或0.8％鹽水。這樣的可藥用載體可以是水或非水溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的實例有丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油、和可注射用的有機酯例如油酸乙酯。水載體包括水、乙醇、醇/水溶液、甘油、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)?？诜d體可以是酏劑、糖漿劑、膠囊、片劑等。典型固體載體是惰性物質(zhì)例如乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纖維素、硬脂酸鎂、磷酸二鈣、甘露醇等。非胃腸道給藥用載體包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖溶液、葡萄糖和氯化鈉、乳酸鹽林格氏溶液和不揮發(fā)油。靜脈內(nèi)載體包括液體和營養(yǎng)補充物、電解質(zhì)補充物例如以林格氏葡萄糖溶液為基質(zhì)的電解質(zhì)補充物等。還可以含有防腐劑和其它添加劑，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。可以按照需要使用本領(lǐng)域已知的常規(guī)技術(shù)將所有載體與崩解劑、稀釋劑、制粒劑、潤滑劑、粘合劑等混合。
本發(fā)明還提供了治療患有其特征是由疾病或創(chuàng)傷引起的神經(jīng)元損傷的病癥的個體的方法，包括給所述個體施用治療有效量的本發(fā)明藥物組合物。
本文所用術(shù)語“個體”包括但不限于任何動物或人工改型的動物。在優(yōu)選的實施方案中，個體是人。
本發(fā)明組合物的施用可用任意本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種不同方法來完成或進行。本發(fā)明化合物可例如靜脈內(nèi)、局部、肌內(nèi)、口服、皮下施用，并且可直接施用到腦脊髓流體和/或腦中。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明藥物組合物是口服施用。此外，給藥可包括在合適的時間內(nèi)給個體施用多個劑量?？梢罁?jù)常規(guī)方法來決定給藥方案。
特征是神經(jīng)元損害的病癥有很多，其包括但不限于下述病癥阿爾茨海默氏病、皮克病、彌漫性雷維小體病(diffuse Lewy bodydisease)、進行性核上性麻痹(Steel-Richardson綜合征)、多系統(tǒng)變性(Shy-Drager綜合征)、運動神經(jīng)元疾病包括肌萎縮性側(cè)索硬化、變性共濟失調(diào)、皮層基底變性、Guam ALS-帕金森氏-癡呆并發(fā)癥、亞急性致硬化性全腦炎、亨廷頓氏舞蹈病、帕金森氏病、synucleinopathies、原發(fā)性進行性失語癥、條紋狀黑質(zhì)變性、3型Machado-Joseph病/脊髓小腦運動失調(diào)和橄欖體腦橋小腦變性、Gilles De La Tourette’s病、延髓和假延髓病麻痹、脊柱和脊髓延髓肌肉萎縮(Kennedy’s病)、原發(fā)性側(cè)索硬化、家族性痙攣性截癱、Werdnig Hoffmann病、Kugelberg-Welander病、Tay-Sach’s病、Sandhoff病、家族性痙攣病、Wohlfart-Kugelberg-Welander病、痙攣性麻痹、進行性多灶性腦白質(zhì)病、和朊病毒疾病(包括Creutzfeldt-Jakob、Gerstmann-Strussler-Scheinker病、Kuru和致死性家族性失眠癥)。
其它病癥包括但不限于彌散性白質(zhì)病(Binswanger氏病)、頭部創(chuàng)傷和彌散性腦損傷、脊髓損傷、顱內(nèi)和脊柱內(nèi)損傷(包括但不限于挫傷、穿透、剪切、壓迫和撕裂)、腦缺血或梗塞導(dǎo)致的中風(fēng)、栓塞性閉塞和血栓形成性閉塞、和任何類型的顱內(nèi)出血(包括但不限于硬膜外、硬膜下、蛛網(wǎng)膜下和大腦內(nèi)出血)。
另外的病癥包括但不限于脫髓鞘性疾病例如多發(fā)性硬化；多神經(jīng)根神經(jīng)炎(格-巴二氏綜合征)；亞急性脫髓鞘性多神經(jīng)?。患毙陨⒉バ阅X脊髓炎、急性出血性腦白質(zhì)炎或全身性紅斑狼瘡引起的腦損傷；與多灶性腦損傷、神經(jīng)病和/或脊髓病有關(guān)的貝切特氏綜合征；與神經(jīng)損傷或萎縮或脊髓病有關(guān)的肉樣瘤??；導(dǎo)致腦、脊髓、神經(jīng)損傷、腦膜神經(jīng)根炎、和/或脊髓病的細菌或病毒感染；亞急性混合變性；橫貫性脊髓炎；利伯氏遺傳性神經(jīng)??；亞急性壞死性腦病(Leigh氏病)；具有脫髓鞘作用的線粒體腦病；異染性腦白質(zhì)病變；克拉貝氏?。籉abry氏?。荒I上腺白質(zhì)營養(yǎng)不良(adrenoleukodystrophy)；視神經(jīng)脊髓炎(德維克氏綜合征)；脫髓鞘性神經(jīng)鞘疾??；顱和外周神經(jīng)病，包括但不限于Déjerine-Sottas神經(jīng)病及其變型；Charcot-Marie-Tooth病及其變型；遺傳性多神經(jīng)?。桓杏X和運動神經(jīng)??；軸索神經(jīng)??；腎上腺脊髓神經(jīng)??；雷弗素姆氏?。挥捎谶策Y、急性或慢性毒素/藥物中毒而導(dǎo)致的涉及軸索、脫髓鞘、感覺、運動和/或自主障礙的神經(jīng)病；弗里德希氏共濟失調(diào)；共濟失調(diào)性毛細管擴張；和異染性腦白質(zhì)營養(yǎng)不良；慢性神經(jīng)病，包括但不限于糖尿病和其它代謝失調(diào)和血內(nèi)蛋白異常(代謝性神經(jīng)病，包括由于酒精中毒所致的那些)；和炎性/免疫過程(炎性神經(jīng)病、與帶狀皰疹有關(guān)的神經(jīng)病、和麻瘋病性神經(jīng)炎)。
其它病癥，包括但不限于外周或顱神經(jīng)創(chuàng)傷性神經(jīng)病、貝爾麻痹和其它面神經(jīng)病、三叉神經(jīng)病、前庭神經(jīng)病、副神經(jīng)病、迷走神經(jīng)病、舌咽神經(jīng)病、視神經(jīng)病、眼球運動神經(jīng)病、多顱神經(jīng)麻痹、叢病、根疾病、自發(fā)性臂叢神經(jīng)炎、神經(jīng)叢炎、多灶性神經(jīng)病、和自主神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)病。
在一個本發(fā)明實施方案中，所治療的病癥是與疾病引起的，并選自帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。在另一個實施方案中，所治療的病癥是由于腦、脊髓、或外周神經(jīng)創(chuàng)傷引起的。
最后，本發(fā)明還提供了抑制個體中其特征是疾病引起的神經(jīng)元損傷的病癥發(fā)作的方法，包括給所述個體施用預(yù)防有效量的本發(fā)明藥物組合物。
在一個實施方案中，所抑制的病癥選自帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。
本文所用的藥物組合物的“治療有效量”是足以停止、逆轉(zhuǎn)或減輕病癥進行的量。藥物組合物的“預(yù)防有效量”是足以抑制病癥發(fā)作，即消除、改善和/或延遲病癥發(fā)作的量。確定本發(fā)明藥物組合物的治療和預(yù)防有效量的方法是本領(lǐng)域已知的。施用給人的藥物組合物的有效量可例如通過數(shù)學(xué)方法從動物實驗結(jié)果來確定。
在一個實施方案中，治療和/或預(yù)防有效量是足以遞送約0.01mg/kg-約200mg/kg體重本發(fā)明化合物的劑量。在另一個實施方案中，治療和/或預(yù)防有效量是足以遞送約0.1mg/kg-約100mg/kg體重本發(fā)明化合物的劑量。在優(yōu)選的實施方案中，治療和/或預(yù)防有效量是足以遞送約1mg/kg-約30mg/kg體重本發(fā)明化合物的劑量。
通過下述實驗詳述可更好地理解本發(fā)明，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易理解，這些實驗詳述僅是舉例說明在權(quán)利要求書中更全面描述的本發(fā)明。此外，在整個本申請中提及了多篇不同出版物。將這些出版物的公開內(nèi)容引入本發(fā)明以作參考，來更全面地描述本發(fā)明所屬于的領(lǐng)域的狀態(tài)。實驗詳述I.一般合成方法本發(fā)明代表性化合物可依據(jù)下述一般合成方法來合成，并在下述合成方案1中說明。在這些合成方案中，交替地使用阿拉伯和羅馬數(shù)字來表示不同化合物。通過阿拉伯數(shù)字在該節(jié)中提及的化合物不與通過阿拉伯數(shù)字在表1中以及本文別處提及的具體化合物相混淆。
合成方案1通式1a化合物 [其中 和 具有本文所用含義；Z是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、(C1-C6)-直鏈或支鏈鏈烯基或(C5-C7)環(huán)烷基、或苯基；其中該苯環(huán)具有1-3個獨立地選自氫、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素的取代基；Y是A或低級烷氧基羰基；且A具有本文所用含義]可這樣制得根據(jù)下述草氨酸酯的活性，將通式1b化合物 [其中 和 具有本文所用含義；R是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基；Y是A或低級烷氧基羰基；且A具有本文所用含義]與適當保護的格式試劑在惰性溶劑例如四氫呋喃或乙醚中于約-78℃-約0℃溫度下反應(yīng)約2小時-約6小時。
合成方案2或者，化合物1a和1b[其中 和 具有本文所用含義；R是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基；Y是A或低級烷氧基羰基；A具有本文所用含義；且Z是(C1-C6)-直鏈或支鏈烷基、(C1-C6)-直鏈或支鏈鏈烯基或(C5-C7)環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基、或苯基；其中該苯環(huán)具有1-3個獨立地選自氫、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素的取代基]可這樣制得將通式2化合物 [其中 和A具有本文所用含義]與適當保護的乙醛酰氯或烷基草酰氯在惰性溶劑例如二氯甲烷中反應(yīng)約2小時-約6小時。一般情況下，該反應(yīng)在有機胺例如二異丙基乙基胺或三乙胺存在下于約0℃-約37℃進行。
對于定義如上的化合物1a，該轉(zhuǎn)化還可以這樣進行在偶聯(lián)劑例如二異丙基碳化二亞胺、二環(huán)己基碳化二亞胺、或苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(Castro’s試劑)存在下，將定義如上的化合物2與適當保護的乙醛酸在惰性溶劑例如四氫呋喃、二甲基甲酰胺、或二氯甲烷中于約0℃-約37℃縮合2小時-約24小時。
合成方案3通式3化合物 [其中 和A具有本文所用含義；且R3是苯基烷基；其中該苯環(huán)具有1-3個獨立地選自氫、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素的取代基]可這樣制得將定義如上的化合物2與苯基烷基磺酰氯在惰性溶劑例如二氯甲烷中反應(yīng)約2小時-約24小時。一般情況下，該反應(yīng)在有機胺例如二異丙基乙基胺或三乙胺存在下于約0℃-約37℃溫度下進行。
合成方案4
定義如上的化合物2可由定義如上的通式4化合物通過按照標準方法除去N-芐氧基羰基而制得 這樣的方法包括使用貴金屬催化劑例如鈀/炭在醇溶劑中于室溫(RT)催化氫化約4小時-約24小時，或者與三溴化硼在惰性溶劑例如二氯甲烷中于約-78℃-約25℃溫度下反應(yīng)約2小時-約6小時，或者與強酸例如氫溴酸在乙酸中于約20℃-約100℃反應(yīng)約2小時-約6小時。對于后一方法，產(chǎn)物通常是作為氫溴酸鹽分離出來。
合成方案5通式5a化合物 [其中 、m、和Ar具有本文所用含義]可這樣制得將定義如上的通式5b化合物 與芳族或雜芳族醇例如3-羥基吡啶反應(yīng)。該反應(yīng)一般在偶氮二甲酸衍生物例如偶氮二甲酸二乙酯或1，1’-(偶氮基二羰基)二哌啶和膦衍生物例如三苯基膦或三正丁基膦存在下在惰性溶劑例如四氫呋喃或甲苯中進行約12-約24小時。該反應(yīng)溫度可以為約20℃-約65℃。
合成方案6通式6a和6b化合物 [其中 、R4、m、和Ar具有本文所用含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]可這樣制得將通式6c化合物 [其中 和 具有本文所用含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]與芳基烷基胺或芳基烷醇衍生物反應(yīng)。該反應(yīng)是通過加入試劑例如二苯基磷酰基疊氮化物、氯甲酸異丙烯酯、或氯甲酸異丁酯與有機胺堿例如三乙胺或二異丙基乙基胺在惰性溶劑例如四氫呋喃或二甲基甲酰胺中經(jīng)由酰基疊氮化物或混合酸酐中間體進行的。還可以加入?；呋瘎├缍谆被拎ぁＴ摲磻?yīng)一般在約0℃-約25℃溫度下進行約12-約24小時。
合成方案7化合物5b可通過用金屬氫化物還原劑例如硼氫化鋰或硼氫化鈉/氯化鋰混合物將化合物7還原而制得 [其中 和m具有本文所用含義；且R是低級烷基]。該反應(yīng)一般在醇溶劑例如乙醇或甲醇中、加入或不加入四氫呋喃、于約室溫-約65℃溫度下進行約24小時-約72小時。
合成方案8化合物6c可這樣制得將通式8化合物 [其中 和 具有如上所述的含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；R2和R3具有本文所用含義；且R′是低級烷基]與堿金屬氫氧化物或堿金屬碳酸鹽例如氫氧化鋰、氫氧化鈉或碳酸鉀在混合水溶劑體系例如四氫呋喃/水或乙醇/水中于約室溫-約80℃溫度下進行約3小時-約24小時。
合成方案9通式9a化合物 [其中 和m具有本文所用含義；且R是低級烷基]可這樣制得將定義如上的通式9b化合物 與α-溴酮基酯例如溴丙酮酸乙酯或γ-溴乙酰乙酸乙酯在醇溶劑例如乙醇中縮合。該反應(yīng)可在約20℃-約80℃進行約2小時-約24小時。
合成方案10定義如上的通式10a化合物可按照類似方法制得 將化合物9b與定義如上的通式10b化合物 在醇溶劑例如乙醇中于約80℃溫度下縮合約3小時-約24小時。
合成方案11定義如上的化合物10b可這樣制得將定義如上的通式11化合物 與溴化氫在惰性溶劑例如乙醚中反應(yīng)。該反應(yīng)一般在約0℃-約25℃溫度下進行直至N2釋放完全。
合成方案12
化合物11可通過下述方法由通式12化合物制得 [其中 具有如上所述的含義]將化合物12的酰氯衍生物與重氮甲烷或三甲基甲硅烷基重氮甲烷在有機堿例如三乙胺或二異丙基乙基胺存在下反應(yīng)。該反應(yīng)一般在惰性溶劑例如四氫呋喃、乙腈、或二者的混合物中于約0℃-約25℃溫度下進行約2小時-約24小時。所述酰氯可用文獻中的標準方法由相應(yīng)的酸制得，例如通過將相應(yīng)的酸與草酰氯在惰性溶劑例如二氯甲烷或四氫呋喃中在催化量的二甲基甲酰胺存在下反應(yīng)而獲得。
合成方案13通式13化合物 [其中 具有本文所用含義；且R是低級烷基]可這樣制得將化合物12與衍生自異氰基乙酸烷基酯的陰離子在極性惰性溶劑例如二甲基甲酰胺中反應(yīng)約12小時-24小時。通常使用堿金屬碳酸鹽例如碳酸鉀以生成所需陰離子。為了促進反應(yīng)，通過與二苯基磷?；B氮化物反應(yīng)來將化合物12羧酸在原位轉(zhuǎn)化成活性反應(yīng)物例如酰基疊氮化物。
合成方案14通式14a化合物 [其中 、和Ar具有如上所述的含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]可這樣制得在偶聯(lián)劑例如水溶性碳化二亞胺、二異丙基碳化二亞胺或二環(huán)己基碳化二亞胺存在下，在惰性溶劑例如二甘醇二甲醚或二氧雜環(huán)己烷中，將通式14b化合物 [其中Ar具有本文所用含義]與通式14c化合物反應(yīng) [其中 具有如上所述的含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]該反應(yīng)通常在約50℃-約110℃進行約5小時-約24小時。
化合物14b可通過將芳烷基腈與羥基胺鹽酸鹽在極性質(zhì)子溶劑例如乙醇中在無機堿例如碳酸鉀存在下反應(yīng)而制得。該反應(yīng)通常在約20℃-約100℃溫度下進行約12小時-約72小時。
合成方案15通式15a化合物 [其中R是COCOR2、COOR3或SO2R3；R2和R3具有本文所用含義；V是(CH2)nAr或 ；且Ar具有本文所用含義]可這樣制得將通式15b化合物 [其中R是COCOR2、COOR3或SO2R3；R2和R3具有本文所用含義；V是(CH2)nAr或 ；且Ar具有本文所用含義]與環(huán)化脫氫試劑反應(yīng)，例如與在吡啶中的亞硫酰氯反應(yīng)，與六甲基二硅氮烷在氟化四正丁基銨和咪唑存在下反應(yīng)，與Et3N+S(O)2N-COOMe(Burgess試劑)反應(yīng)，或者在三乙胺存在下與三氟甲磺酸酐反應(yīng)。對于在吡啶中的亞硫酰氯，與該二?；卵苌锏某跏挤磻?yīng)是在約0℃進行約2小時-約6小時。閉環(huán)成噁二唑的隨后反應(yīng)在惰性溶劑例如甲苯中于約80℃-約150℃進行約3小時-約24小時。二?；卵苌锱c六甲基二硅氮烷的反應(yīng)通常在惰性溶劑例如甲苯或氯苯中于約80℃-約150℃進行約6小時-72小時。對于Burgess試劑，與該二?；卵苌锏姆磻?yīng)通常在惰性溶劑例如四氫呋喃中于約室溫進行約24小時-約72小時。該二?；卵苌锱c三氟甲磺酸酐和三乙胺的反應(yīng)通常在惰性溶劑例如二氯甲烷、四氫呋喃、或乙醚中于約0℃-約25℃溫度下進行約1小時-約24小時。
合成方案16化合物15b可這樣制得將化合物14c的混合酸酐或酰氯衍生物[其中 具有如上所述的含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]與通式16a化合物反應(yīng) [其中V是(CH2)nAr或 ；且Ar具有本文所用含義]。該反應(yīng)一般在惰性溶劑例如四氫呋喃或二氯甲烷中、加入或不加入叔胺堿例如三乙胺或二異丙基乙基胺、于約0℃-約25℃進行約6小時-約24小時。所述混合酸酐或酰氯衍生物可用文獻中的標準方法由相應(yīng)的酸制得，例如通過將相應(yīng)的酸與氯甲酸異丁酯或氯甲酸乙酯在三乙胺或二異丙基胺存在下反應(yīng)，或者將相應(yīng)的酸與草酰氯在惰性溶劑例如二氯甲烷或四氫呋喃中在催化量的二甲基甲酰胺存在下反應(yīng)而獲得。
對于定義如上的化合物15b，該轉(zhuǎn)化還可以這樣實現(xiàn)在偶聯(lián)劑例如二異丙基碳化二亞胺、二環(huán)己基碳化二亞胺、或苯并三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(Castro’s試劑)存在下，將定義如上的化合物16a與化合物14c在惰性溶劑例如四氫呋喃、二甲基甲酰胺、或二氯甲烷中于約0℃-約37℃縮合2小時-約24小時?；衔?6a[其中V是(CH2)nAr或 ；且Ar具有本文所用含義]可由相應(yīng)的低級烷基酯衍生物通過與肼在醇溶劑例如乙醇中于回流溫度下反應(yīng)約6小時-約24小時而制得?；蛘?，化合物16a可這樣制得經(jīng)由三甲基甲硅烷基酯中間體，將相應(yīng)的羧酸衍生物與肼在惰性溶劑例如二氯甲烷、四氫呋喃、或二甲基甲酰胺中于約0℃-約25℃溫度下反應(yīng)約1小時-約24小時。甲硅烷基酯可用本領(lǐng)域技術(shù)人員常用的方法在原位制得，例如將羧酸與N，O-二(三甲基)乙酰胺在約0℃-約25℃溫度下反應(yīng)約1小時-約6小時。
合成方案17通式17化合物 [其中 具有本文所用含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]可這樣制得將化合物14c的混合酸酐或酰氯[其中 具有本文所用含義；R是COCOR2、COOR3或SO2R3；且R2和R3具有本文所用含義]與約0.5-1當量肼一水合物在約0℃-約25℃反應(yīng)約4小時-約24小時。
該反應(yīng)一般在惰性溶劑例如四氫呋喃或二氯甲烷中、加入或不加入叔胺堿例如三乙胺或二異丙基乙基胺來進行。所述混合酸酐或酰氯衍生物可用文獻中的標準方法由相應(yīng)的酸制得，例如通過將相應(yīng)的酸與氯甲酸異丁酯或氯甲酸乙酯在三乙胺或二異丙基胺存在下反應(yīng)，或者將相應(yīng)的酸與草酰氯在惰性溶劑例如二氯甲烷或四氫呋喃中在催化量的二甲基甲酰胺存在下反應(yīng)而獲得。
在化合物3的合成中使用的苯基烷基磺酰氯，在化合物6a和6b的合成中使用的芳基烷基胺和芳基烷醇衍生物，通式12化合物，在化合物16a的合成中使用的芳烷基羧酸低級烷基酯衍生物，和在化合物14b的制備中使用的芳烷基腈當不能商購獲得時，可依據(jù)文獻通過常規(guī)合成方法用標準試劑和反應(yīng)條件由易得原料制得。
應(yīng)當理解，當A是 ，時，其中 和R1具有本文所用含義，本發(fā)明化合物可包含兩個R1基團。因此，許多上述反應(yīng)可通過向適當反應(yīng)物中加入另外一當量的試劑來同時在兩個R1上進行。此外，可通過使用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的適當保護基方法來選擇性地修飾其中一個R1，而不修飾另一個R1。
當本發(fā)明化合物具有至少一個手性中心時，它們可作為對映體存在。當化合物具有兩個或更多個手性中心時，它們還可以作為非對映體存在。應(yīng)當理解，所有這樣的異構(gòu)體及其混合物都在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，對于這些化合物，一些晶形可作為多晶型物存在，并且這樣的多晶型物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。此外，某些化合物可以與水或常用有機溶劑形成溶劑化物(例如水合物)，并且這樣的溶劑化物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
II.所選的本發(fā)明化合物在優(yōu)選的本發(fā)明實施方案中，本發(fā)明化合物選自下表所示的化合物。
表1
III.具體合成方法作為本發(fā)明代表的具體化合物可按照下述實施例制得。為了清楚起見，在下述實施例中制得的本發(fā)明化合物通過術(shù)語“化合物”和附在其后面的適當數(shù)字表示(例如“化合物1”)。在本發(fā)明化合物的合成中的中間體稱為“參考實施例”。沒有采取任何嘗試來優(yōu)化這些反應(yīng)的產(chǎn)率。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當知道如何通過常規(guī)改變反應(yīng)時間、溫度、溶劑和/或試劑來提高這樣的產(chǎn)率。
一些參考實施例的產(chǎn)物可用作制備一種以上本發(fā)明化合物的中間體。在這些情況下，選擇用于制備本發(fā)明此后化合物的中間體在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍內(nèi)。
參考實施例1 向N-芐氧羰基-L-脯氨酸(9.96g，40.0mmol)和碳酸鉀倍半水合物(26.50g，160.0mmol)在DMF(60mL)內(nèi)的冷(0℃)的懸浮混合物中加入二苯基磷?；B氮化物(12.0mL，55.6mmol)和異氰基乙酸甲酯(7.30mL，80.3mmol)。移去冰浴，并將該反應(yīng)混合物在室溫(RT)攪拌約20小時。加入鹽水，并將該反應(yīng)混合物過濾。用CHCl3/CH3OH(9∶1，150mL)萃取該濾液。將有機溶液用H2O(3×)、鹽水(4×)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用2％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了所示噁唑(7.47g，產(chǎn)率56％)，為淺棕色油狀物，NMR表明其是45∶55旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物。
CIMS MH+＝331(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1.95-2.00(m，3H)，2.30-2.45(m，1H)，3.45-3.60(m，2H)，3.71(s，0.55×3H)，3.82(s，1.35H)，4.91(d，Jab＝12.82，1.1H)，5.03(d，Jab＝12.82，0.9H)，5.45-5.48(m，0.45H)，5.52-5.54(m，0.55H)，7.02(br s，1H)，7.26-7.34(m，4H)，8.32-8.39(m，1H).
參考實施例2 向參考實施例1的甲酯(7.27g，22.6mmol)在THF/H2O混合物(2∶1，270mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入氫氧化鋰(594.7mg，24.8mmol)。將所得混合物在約室溫攪拌過夜。將該反應(yīng)混合物用4.80g檸檬酸在100mL水中的溶液酸化，用CHCl3(2×150mL)萃取。將合并的有機萃取液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了所示甲酸(6.66g，產(chǎn)率93％)，為白色薄片狀固體。
CIMS M-1＝315M-45＝271(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，a 45∶55旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.95-2.05(m，3H)，2.25-2.40(m，1H)，3.35-3.60(m，2H)，4.91(d，Jab＝12.82，0.55×2H)，5.03(d，Jab＝12.82，0.45×2H)，5.45-5.48(m，0.45×1H)，5.52-5.54(m，0.55×1H)，7.00(br s，1H)，7.20-7.45(m，5H)，8.25-8.35(m，1H).
化合物1 向參考實施例2的噁唑-4-甲酸(632.3mg，2.00mmol)與三乙胺(0.62mL，4.45mmol)在DMF(2mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入二苯基磷?；B氮化物(0.48mL，2.22mmol)和3-氨基甲基吡啶(0.22mL，2.16mmol)。將所得混合物在約室溫攪拌約1天，用水(25mL)稀釋，并用EtOAc(2×25mL)萃取。將合并的有機萃取液用水(6×50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用100％EtOAc洗脫，獲得了化合物1(0.49g，產(chǎn)率60％)，為無色不流動油狀物。
MS(loop pos)MH+＝407(100％)；M+Na＝429(10％).1H NMR(300MHz，CDCl3)，a 45∶55旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.90-2.15(m，3H)，2.30-2.45(m，1H)，3.55-3.70(m，2H)，4.45-4.65(m，2H)，4.85-5.20(m，2H)，5.65-5.70(m，0.45×1H)，5.75-5.80(m，0.55×1H)，7.0(br s，1H)，7.20-7.40(m，6H)，8.45-8.50(m，1H)，8.55-8.60(m，1H).
化合物2
將化合物1(0.39g，0.96mmol)和10％鈀/炭(0.05g)在CH3OH(25mL)中的不均勻混合物在50psi氫氣壓力下于約室溫振搖約3小時。將該混合物經(jīng)由硅藻土床過濾，并用CH3OH洗滌濾餅。將合并的濾液真空濃縮，獲得了化合物2(0.25g，產(chǎn)率96％)，為不流動油狀物，不用進一步純化使用。
MS(loop pos)MH+＝273(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ1.8-2.2(m，4H)，2.95-3.05(m，1H)，3.10-3.20(m，1H)，4.554.70(m，2H)，4.90(t，J＝7.00Hz，1H)，7.20-7.35(m，2H)，7.60-7.75(m，3H)，8.53(d，J＝4.13Hz，1H)，8.62(s，1H).
化合物3 向化合物2(0.25g，0.91mmol)與三乙胺(140mL，1.00mmol)在二氯甲烷(10mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入α-甲苯磺酰氯(184.2mg，0.966mmol)。在約室溫攪拌約6小時后，將該反應(yīng)混合物用35.6mg磺酰氯與30mL三乙胺處理。將該反應(yīng)混合物用二氯甲烷(40mL)稀釋，用水(2×50mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過濾并濃縮至干。通過制備TLC以色譜法純化粗產(chǎn)物，用100％EtOAc洗脫，獲得了化合物3(0.17g，產(chǎn)率44％)，為taffy固體。
MS(loop pos)MH+＝427(100％).1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.72-1.80(m，1H)，1.95-2.11(m，2H)，2.27-2.36(m，1H)，3.07-3.15(m，1H)，3.44-3.52(m，1H)，4.27(d，Jab＝13.97Hz，1H)，4.41(d，Jab＝13.96Hz，1H)，4.44-4.71(m，3H)，5.72-5.77(m，1H)，7.28-7.45(m，6H)，7.69-7.72(m，2H)，8.53(d，J＝4.13Hz，1H)，8.62(s，1H).
化合物4 向參考實施例2的噁唑-4-甲酸(1.26g，4.00mmol)、三乙胺(0.62mL，4.445mmol)、DMAP(49.5mg，0.405mmol)和3-吡啶基甲醇(0.39mL，4.02mmol)在THF(20mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入氯甲酸異丙烯酯(0.48mL，4.39mmol)。溫熱至約室溫后，將該深黃色不均勻的反應(yīng)混合物在約室溫攪拌約20小時。將該反應(yīng)用EtOAc稀釋，用水洗滌，并用1N鹽酸萃取。用無水碳酸鈉將該酸性水溶液堿化，并用氯仿(2×100mL)萃取。將該氯仿溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用100％EtOAc洗脫，獲得了化合物4(0.61g，產(chǎn)率37％)，為無色不流動油狀物。MS(loop pos)MH+＝408(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.98-2.10(m，3H)，2.25--2.45(m，1H)，3.50-3.70(m，2H)，4.86-5.39(m，4H)，5.59-5.61(m，1H)，5.65-5.85(m，1H)，7.05(br s，1H)，7.30-7.35(m，5H)，7.66-7.80(m，2H)，8.58-8.71(m，2H).
參考實施例3
向參考實施例1的甲酯(3.66g 11.0mmol)與氯化鋰(2.50g，58.9mmol)在EtOH/THF混合物(4∶3；175mL)內(nèi)的溶液中分兩批加入硼氫化鈉(2.10g，55.0mmol)。將所得不均勻混合物在約室溫攪拌約3天。用NH4Cl水溶液(200mL)處理該反應(yīng)混合物，并用CHCl3(3×150mL)萃取。將該有機溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用3％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了所示醇(2.87g，產(chǎn)率86％)，為無色油狀物。
MS(loop pos)MH+＝303(100％)；1HNMR(300MHz，CDCl3)δ1.90-2.10(m，1H)，2.15-2.40(m，3H)，3.45-3.70(m，2H)，4.40-4.50(m，1H)，4.60-4.80(m，2H)，4.90-5.15(m，2H)，5.20-5.30(m，1H)，7.30-7.35(m，5H)，7.35(s，5H)，7.75(s，1H).
化合物5 向參考實施例3的噁唑-4-甲醇(2.34g，7.74mmol)、三苯基膦(3.05g，11.6mmol)和3-羥基吡啶(1.11g，11.7mmol)在THF(60mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入DEAD(1.86mL，11.7mmol)。將所得混合物在約室溫攪拌過夜，并濃縮至干。通過硅膠色譜純化該油狀物，用3％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了含有副產(chǎn)物的化合物5的粗產(chǎn)物。將該油狀物溶于CH2Cl2(50mL)中，并用1N鹽酸(5×80mL)洗滌。將該酸性水溶液用NaHCO3/Na2CO3堿化，并萃取到CHCl3(3×50mL)中。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了化合物5(0.47g)，為油狀物，該油狀物在靜置時會固化。該化合物不用進一步純化直接使用。
MS(loop pos)MH+＝380(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)1∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.90-2.10(m，2H)，2.15-2.30(m，2H)，3.45-3.65(m，2H)，4.40-4.60(m，1H)，4.95-5.30(m，4H)，7.10-7.25(m，2H)，7.30(s，5H)，7.75-8.00(m，1H)，8.15(br s，0.5×1H)，8.25-8.30(m，1H)，8.40(br s，0.5×1H).
化合物6、7和8 將化合物5的粗產(chǎn)物(0.43g)與10％鈀/炭(0.05g)在CH3OH(35mL)中的不均勻混合物在約54psi氫氣壓力下于約室溫振搖約6.5小時。將混合物經(jīng)由硅藻土床過濾；并用CH3OH洗滌濾餅。將濾液真空濃縮，獲得了殘余物。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用CHCl3∶CH3OH∶NH4OH(90∶9∶1)洗脫，獲得了化合物6(0.10g)，為油狀物。MS(loop pos)MH+＝246(100％)。
向化合物6(0.10g，0.41mmol)與三乙胺(70mL，0.50mmol)在CH2Cl2(10mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入乙基草酰氯(70mL，0.63mmol)。將該反應(yīng)混合物攪拌約2小時，用另外的CH2Cl2(50mL)稀釋，并用NaCl水溶液(3×50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了化合物7(0.10g，產(chǎn)率71％)，為油狀物，不用進一步純化直接用于下一步驟。MS(loop pos)MH+＝346(100％)。
向化合物7(0.10g，0.29mmol)在THF(10mL)內(nèi)的冷(-78℃)溶液中加入在乙醚中的過量1，1-二甲基丙基氯化鎂(1M，1.40mL)，并在約-78℃攪拌約2小時。將該反應(yīng)混合物用NH4Cl水溶液(25mL)處理，并用EtOAc(2×50mL)萃取。將該EtOAc溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用1∶1 EtOAc∶己烷洗脫，獲得了化合物8(55.5mg，產(chǎn)率52％)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝372(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(3至1)，δ0.66(t，J＝7Hz，0.25×3H)，0.75(t，J＝7Hz，0.75×3H)，0.80(s，0.25×3H)，0.88(s，0.25×3H)，1.07(s，0.75×3H)，1.10(s，0.75×3H)，1.56-1.59(m，2H)，1.88-1.98(m，2H)，2.08-2.29(m，2H)，3.42-3.60(m，2H)，4.93(d，J＝12Hz，0.25×1H)，4.99(d，J＝12Hz，0.25×1H)，5.08(d，J＝12Hz，0.75×1H)，5.18(d，J＝12Hz，0.75×1H)，5.34-5.38(m，1H)，7.47-7.54(m，1H)，7.32-7.39(m，1H)，8.18-8.20(m，1H)，8.34-8.35(m，1H)8.35(s，0.75×1H)，8.41(s，0.25×1H).
參考實施例4 將參考實施例1的甲酯(2.00g，6.00mmol)與10％鈀/炭(0.20g)在CH3OH(40mL)中的不均勻混合物在54psi氫氣壓力下于約室溫振搖約20小時。將該混合物經(jīng)由硅藻土床過濾，用CH3OH(75mL)洗滌濾餅。將合并的濾液濃縮，獲得了所示吡咯烷(1.20g，產(chǎn)率100％)，為黃色固體。
MS(loop pos)MH+＝197(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ2.10-2.25(m，3H)，2.40-2.50(m，1H)，3.40-3.60(m，2H)，3.95(s，3H)，5.40-5.50(m，1H)，7.95(s，1H).
參考實施例5 向參考實施例4的吡咯烷(1.18g，6.00mmol)和三乙胺(0.94mL，6.74mmol)在CH2Cl2(100mL)內(nèi)的冷(0℃)混合物中加入在CH2Cl2(25mL)內(nèi)的乙基草酰氯(0.80mL，8.70mmol)。將所得反應(yīng)混合物在約室溫攪拌約2小時，用NaCl水溶液(3×75mL)洗滌，并用Na2SO4干燥。將CH2Cl2過濾并濃縮，獲得了殘余物，通過色譜法純化(用35％己烷的EtOAc溶液洗脫)，獲得了所示草氨酸酯(1.23g，產(chǎn)率72％)，為油狀物，該油狀物會固化。
1H NMR(300MHz，CDCl3)，1∶1.5旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.35(t，J＝7Hz，0.6×3H)，1.20(t，J＝7Hz，0.4×3H)，1.95-2.20(m，3H)，2.40-2.50(m，1H)，3.40-3.60(m，2H)，3.89(s，0.6×3H)，3.91(s，0.4×3H)，4.00-4.15(m，0.4×2H)，4.29-4.40(m，0.6×2H)，5.70-5.75(m，0.6×1H)，5.90-5.95(m，0.4×1H)，7.75(s，0.6×1H)，7.80(s，0.4×1H).
參考實施例6 向參考實施例5的草氨酸酯(0.87g，3.08mmol)在無水THF(10mL)內(nèi)的冷(-78℃)溶液中加入在乙醚中的過量1，1-二甲基丙基氯化鎂(1M，4.60mL，4.60mmol)，并將所得混合物在約-78℃攪拌約3小時。用NH4Cl水溶液(25mL)處理該反應(yīng)混合物，并用EtOAc(2×25mL)萃取。將該EtOAc溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。用284.5mg草氨酸酯和1.50mL二甲基丙基氯化鎂重復(fù)該反應(yīng)。通過硅膠色譜純化合并的粗產(chǎn)物，用1∶1 EtOAc∶己烷洗脫，獲得了所示草酰胺(0.95g，產(chǎn)率96％)，為無色油狀物。
MS(loop pos)MH+＝323(90％).1HNMR(300MHz，CDCl3)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(3至1)，δ0.70(t，J＝7.4Hz，0.25×3H)，0.80(t，J＝7.4Hz，0.75×3H)，1.00(s，0.25×3H)，1.05(s，0.25×3H)，1.15(s，0.75×6H)，1.65-1.75(m，2H)，1.90-2.20(m，0.75×2H)，2.35-2.50(m，0.25×2H)，3.55-3.70(m，0.75×1H)，3.75-3.80(m，0.25×1H)，3.90(s，1H)，5.70-5.80(m，1H)，7.75(s，0.75×1H)，7.80(s，0.25×1H).
參考實施例7 將參考實施例6的4-甲氧羰基噁唑(0.93g，2.88mmol)和氫氧化鋰(76.9mg，3.21mmol)在THF/H2O混合物(2∶1；30mL)中的溶液在約0℃攪拌約1小時，在約室溫攪拌約22小時。將該反應(yīng)混合物用Et2O(2×75mL)洗滌，用檸檬酸水溶液(pH＝1.0)酸化，并用CHCl3(3×50mL)萃取。將該氯仿溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了油狀物。用乙醚將該油狀物覆蓋，并放置在高度真空下，獲得了所示甲酸(0.80g，產(chǎn)率90％)，為白色固體。
MS(loop neg)M-1＝307(100％).1H NMR(300MHz，THF-d8)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(2.5至1)，δ0.70(t，J＝7.4Hz，0.30×3H)，0.85(t，J＝7.4Hz，0.70×3H)，0.92(s，0.30×3H)，0.95(s，0.30×3H)，1.15(s，0.70×6H)，1.45-1.65(m，2H)，1.90-2.20(m，3H)，2.30-2.40(m，1H)，3.50-3.65(m，2H)，5.65-5.73(m，0.7×1H)，5.75-5.80(m，0.3×1H)，7.9(s，0.7×1H)，8.00(s，0.3×1H).
化合物9 向參考實施例7的噁唑-4-甲酸(0.31g，1.00mmol)、三乙胺(0.17mL，1.22mmol)、DMAP(12.1mg，0.099mmol)和3-吡啶基甲醇(0.11mL，1.13mmol)在THF(15mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入氯甲酸異丙烯酯(0.12mL，1.10mmol)。溫熱至室溫后，將該深黃色不均勻反應(yīng)混合物在約室溫攪拌約20小時。將該反應(yīng)用水稀釋，并萃取到氯仿(2×50mL)中。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用3％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了化合物9(222.8mg，產(chǎn)率56％)，為淺黃色不流動油狀物。
MS(loop pos)MH+＝400(100％).1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(3至1)，δ0.62(t，J＝7.4Hz，0.25×3H)，0.76(t，J＝7.4Hz，0.75×3H)，0.83(s，0.25×3H)，0.86(s，0.25×3H)，1.11(s，0.75×6H)，1.44-1.49(m，0.25×2H)，1.58(q，J＝7.41，7.42，7.41Hz，0.75×2H)，1.88-2.04(m，3H)，2.25-2.34(m，1H)，3.34-3.61(m，2H)，5.31-5.39(m，2H)，5.52-5.59(m，1H)，7.42-7.46(m，1H)，7.89-7.91(m，1H)，8.44(s，0.75×1H)，8.50(s，0.25×1H)，8.57(d，J＝4.56Hz，1H)，8.69(s，1H).
化合物10 向參考實施例7的噁唑-4-甲酸(308.2mg，1.00mmol)和三乙胺(310mL，2.22mmol)在DMF(2mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入二苯基磷?；B氮化物(480mL，1.16mmol)和3-氨基甲基吡啶(110mL，2.16mmol)。將所得混合物在約室溫攪拌約1天，用水(25mL)稀釋，并用EtOAc(2×50mL)萃取。將該EtOAc溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物(用5％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了化合物10(310mg，產(chǎn)率78％)，為油狀物。MS(loop pos)MH+＝399(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物(2至1)，δ0.65(t，J＝7.4Hz，0.33×3H)，0.75(t，J＝7.4Hz，0.67×3H)，0.85(s，0.33×3H)，0.90(s，0.33×3H)，1.15(s，0.67×6H)，1.45-1.65(m，2H)，1.80-2.00(m，3H)，2.25-2.40(m，1H)，3.40-3.60(m，2H)，4.35-4.50(m，2H)，5.60-5.65(m，0.67×1H)，5.70-5.75(m，0.33×1H)，7.20-7.30(m，2H)，7.55-7.75(m，1H)，8.50-8.65(m，2H)，8.90-9.00(m，1H).
參考實施例8 將N-CBz-L-脯氨酰胺(1.12g，4.51mmol)和2，4-二(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫雜-2，4-二磷雜環(huán)戊烷(diphosphetane)-2，4-二硫化物(Lawesson’s試劑；911.3mg，2.25mmol)在苯(20mL)中的不均勻混合物于回流狀態(tài)下攪拌約1小時。然后加入933.0mgLawesson’s試劑，并將該反應(yīng)繼續(xù)回流1小時。將該反應(yīng)混合物濃縮，獲得了硫代酰胺粗產(chǎn)物。用EtOH(10mL)將該殘余物溶解，用溴丙酮酸乙酯(300uL，1.00mmol)處理，并攪拌回流過夜。冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混合物用固體K2CO3處理，攪拌約10分鐘并濃縮。用CHCl3(50mL)將殘余物溶解，用H2O(2×)洗滌，并用Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用2％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了所示噻唑(0.63g，產(chǎn)率39％)，為淺黃色油狀物。
MS(loop pos)MH+＝361(50％)，M+Na＝383(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.23(t，J＝7.32，7.66，3H)，1.93-2.37(m，3H)，3.50-3.59(m，2H)，4.30(q，J＝7.04，7.05，7.08Hz，2H)，4.94-5.22(m，3H)，7.08-7.38(m，5H)，8.32(s，0.33H)，8.41(s，0.67H).
參考實施例9
將參考實施例8的乙酯(0.55g，1.53mmol)與氫氧化鋰(37.5mg，1.56mmol)在THF/H2O混合物(2∶1；6mL)中的溶液在約0℃攪拌約1小時，在約室溫攪拌約2小時。用氯化鈉水溶液將該反應(yīng)混合物稀釋，用CHCl3(2×15mL)洗滌，用檸檬酸(427mg)酸化，然后用CHCl3(2×20mL)萃取。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了所示甲酸(0.51g，產(chǎn)率100％)，為油狀物，不用進一步純化直接使用。
MS(loop neg)M-1＝331(50％).1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.93-2.35(m，3H)，2.25-2.40(m，1H)，3.39-3.50(m，2H)，4.94-5.21(m，3H)，4.94-5.22(m，3H)，7.04-7.12(m，1H)，7.25-7.37(m，4H)，8.33(s，1H)，13.0(br s，1H).
化合物11 向參考實施例9的噻唑-4-甲酸(0.51g，1.53mmol)和三乙胺(0.48mL，3.44mmol)在DMF(3mL)內(nèi)的冷溶液中加入二苯基磷?；B氮化物(376mL，1.72mmol)和3-氨基甲基吡啶(180mL，1.77mmol)，將所得混合物在約室溫攪拌約1天，用水(25mL)稀釋，并用EtOAc(2×25mL)萃取。將該EtOAc溶液用水(6×50mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用100％EtOAc洗脫，獲得了化合物11(0.44g，產(chǎn)率68％)，為無色不流動油狀物。
MS(loop pos)MH+＝423(100％)M+Na＝445(10％).1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.90-2.05(m，2H)，2.15-2.45(m，2H)，3.45-3.70(m，2H)，4.60-4.65(m，2H)，4.95-5.25(m，3H)，5.65-5.85(m，1H)，7.05(br s，1H)，7.20-7.40(m，5H)，7.66-7.70(m，1H)，7.55-7.65(m，1H)，8.00-8.05(m，1H)，8.50-8.65(m，2H).
化合物12 將化合物11(0.38g，0.90mmol)與30％溴化氫的乙酸(2mL)在混合物于約室溫攪拌約2小時。從該反應(yīng)混合物中沉淀出了產(chǎn)物的二氫溴酸鹽。向該反應(yīng)混合物中加入乙醚，并通過過濾收集化合物12(407.8mg，產(chǎn)率100％)，為米色吸濕性固體。
MS(looppos)MH+＝289(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.95-2.25(m，3H)，2.40-2.50(m，2H)，3.30-3.40(m，1H)，3.45-3.55(m，1H)，4.65-4.70(m，2H)，5.15-5.25(m，1H)，7.90-8.10(m，1H)，8.40(s，1H)，8.50-8.55(m，1H)，8.80-8.85(m，1H)，8.90(s，1H)，9.15-9.30(m，1H)，9.35-9.45(m，1H)，9.75-9.90(m，1H).
化合物13
向化合物12的二氫溴酸鹽(203.0mg，0.453mmol)和三乙胺(210mL，1.50mmol)在二氯甲烷(4mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入α-甲苯磺酰氯(95.0mg，0.498mmol)。3小時后，再向該反應(yīng)混合物中加入DMAP(10mg)、三乙胺(100mL)和α-甲苯磺酰氯(44.8mg)。將該反應(yīng)混合物攪拌過夜。真空除去溶劑和揮發(fā)性物質(zhì)。通過制備TLC純化粗產(chǎn)物，用5％CH3OH的CHCl3溶液洗脫，獲得了化合物13(67.6mg，產(chǎn)率34％)，為米色固體。
MS(loop pos)MH+＝443(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ1.90-2.05(m，2H)，2.10-2.20(m，2H)，3.30-3.50(m，2H)，4.3(s，2H)，4.60-4.70(m，2H)，4.85-4.95(m，1H)，7.10-7.20(m，1H)，7.30-7.45(m，5H)，7.50-7.65(m，1H)，7.70-7.75(m，1H)，8.05(s，1H)，8.50-8.55(m，1H)，8.60(s，1H).
參考實施例10 將參考實施例8 N-CBz保護的2-吡咯烷基-4-甲氧羰基噻唑(3.33g，9.25mmol)在CH3CO2H(10mL)中的溶液用30％HBr的CH3CO2H(4mL)溶液處理，并在室溫攪拌約6小時。用乙醚將沉淀出的吡咯烷基噻唑二氫溴酸鹽覆蓋，并通過過濾收集。用乙醚洗滌該白色固體，在真空烘箱中于約室溫干燥過夜，獲得了作為二氫溴酸鹽的所示吡咯烷(2.48g，產(chǎn)率69％)。
MS(loop pos)MH+＝227(100％).元素分析C10H14N2O2S-2.0HBr計算值C 30.95，H 4.15，N 7.22，S 8.26，Br41.69；實測值C 31.18，H 4.07，N 7.11，S 7.91，Br41.84.1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.31(t，J＝7.12，7.21Hz，3H)，2.03-2.21(m，3H)，2.50-2.53(m，1H)，3.33-3.35(m，2H)，4.33(q，J＝7.04，7.05，7.08Hz，2H)，5.10(t，J＝6.94，6.94Hz，1H)，8.66(s，1H)，9.2-9.5(m，2H)，9.80(br s，1H).
參考實施例11 向參考實施例10的吡咯烷(1.53g，5.00mmol)在CH2Cl2(100mL)內(nèi)的冷(0℃)混合物中加入三乙胺(1.70mL，1.21mmol)和乙基草酰氯(0.82mL，7.34mmol)。將所得反應(yīng)混合物于約室溫攪拌約2小時，用氯化鈉水溶液(2×150mL)洗滌，用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了草氨酸酯(1.45g，產(chǎn)率89％)，為油狀物，不用進一步純化直接使用。
MS(loop pos)MH+＝327(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，2∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.20-1.35(m，6H)，1.8-2.2(m，3H)，2.30-2.45(m，1H)，3.65-3.80(m，2H)，4.20-4.35(m，4H)，5.35-5.40(m，0.67×1H)，5.59-5.61(m，0.33×1H)，8.42(s，0.67×1H)，8.47(s，0.33×1H).
參考實施例12 向參考實施例11的草氨酸酯(1.39g，4.26mmol)在無水THF(25mL)內(nèi)的冷(-78℃)溶液中加入在乙醚中的過量1，1-二甲基丙基氯化鎂(1M，7.80mL，7.80mmol)，并將所得混合物在約-78℃攪拌約5小時。將該反應(yīng)混合物用NH4Cl水溶液處理(25mL)，并用EtOAc(2×25mL)萃取。將該EtOAc溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用35％EtOAc的己烷溶液洗脫，獲得了草酰胺(1.01g，產(chǎn)率67％)，為白色固體。
MS(loop pos)MH+＝353(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.65(t，J＝7.1Hz and 1Hz，0.20×3H)，0.75(t，J＝7.10Hz，7.10Hz，0.80×3H)，0.95(s，0.10×3H)，0.97(s，0.10×3H)，1.15(s，0.80×6H)，1.25(t，J＝7.10Hz，7.10Hz，3H)，1.55-1.70(m，2H)，1.85-2.00(m，2H)，2.05-2.15(m，1H)，2.25-2.40(m，1H)，3.35-3.60(m，1H)，4.33(q，J＝7.04，7.05，7.08Hz，2H)，5.30-5.40(m，1H)，8.40(s，0.80×1H)，8.45(s，0.20×1H).
參考實施例13 將參考實施例12的乙酯(0.95g，2.70mmol)與氫氧化鋰(71.9mg，3.00mmol)在THF/H2O混合物(2.5∶1；35mL)中的溶液在約0℃攪拌約1小時，在約室溫攪拌約20小時。將該反應(yīng)混合物用乙醚(2×50mL)洗滌，并用檸檬酸水溶液酸化。用CHCl3(2×75mL)萃取沉淀出的甲酸。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮，獲得了所示甲酸(0.81g，產(chǎn)率93％)，為白色固體，不用進一步純化直接使用。
MS(loop neg)M-1＝323.1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.65(t，J＝7.1Hz和1Hz，0.20×3H)，0.75(t，J＝7.10Hz，7.10Hz，0.80×3H)，0.95(s，0.10×3H)，0.97(s，0.10×3H)，1.15(s，0.80×6H)，1.55-1.70(m，2H)，1.85-2.00(m，2H)，2.05-2.15(m，1H)，2.25-2.40(m，1H)，3.35-3.60(m，1H)，5.30-5.40(m，1H)，8.35(s，0.80×1H)，8.40(s，0.20×1H)13.5(s，1H).
化合物14 向參考實施例13的噻唑-4-甲酸(322.2mg，1.00mmol)和三乙胺(310mL，2.22mmol)在DMF(3mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入二苯基磷?；B氮化物(250mL，1.16mmol)和3-氨基甲基吡啶(110mL，1.08mmol)。將所得混合物在約室溫攪拌約1天，用氯化鈉水溶液(25mL)洗滌，并用CHCl3(3×25mL)萃取。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物(用100％EtOAc洗脫)，獲得了0.44g化合物14，為無色不流動油狀物。然后通過錐形制備TLC板純化該油狀粗產(chǎn)物，用5％CH3OH在CHCl3中的混合物洗脫，獲得了化合物14(271.8mg，產(chǎn)率66％)，為無色玻璃狀物。
MS(loop pos)MH+＝415(100％).1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.64(t，J＝7.45Hz，7.45Hz，0.20×3H)，0.78(t，J＝7.40Hz，7.40Hz，0.80×3H)，0.95(s，0.10×3H)，0.97(s，0.10×3H)，1.15(s，0.80×6H)，1.45-1.65(m，2H)，1.90-2.05(m，2H)，2.10-2.20(m，1H)，2.25-2.40(m，1H)，3.42-3.48(m，1H)，3.50-3.58(m，1H)，4.47(d，J＝6.28Hz，2H)，5.31-5.33(m，0.20×1H)，5.37-5.40(m，0.80×1H)，7.33-7.37(m，1H)，7.70-7.73(m，1H)，8.21(s，0.80×1H)，8.25(s，0.20×1H)，8.44-8.46(m，1H)，8.54(br s，1H)，9.00(t，J＝6.17，6.20Hz，1H).
化合物15 向參考實施例13的噻唑-4-甲酸(322.6mg，1.00mmol)、三乙胺(0.17mL，1.22mmol)、DMAP(13.0mg，0.100mmol)和3-吡啶基甲醇(0.11mL，1.13mmol)在THF(15mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入氯甲酸異丙烯酯(0.12mL，1.10mmol)。溫熱至室溫后，將該不均勻反應(yīng)混合物在約室溫攪拌約20小時。將該反應(yīng)用水洗滌，并用EtOAc(2×25mL)萃取。將該EtOAc溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過錐形制備TLC板純化粗產(chǎn)物，用3％CH3OH在CHCl3中的混合物洗脫，獲得了化合物15(240.0mg，產(chǎn)率59％)，為淺黃色固體。
MS(loop pos)MH+＝416(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.64(t，J＝7.45Hz，7.45Hz，0.20×3H)，0.78(t，J＝7.40Hz，7.40Hz，0.80×3H)，0.98(s，0.10×3H)，1.00(s，0.10×3H)，1.14(s，0.80×3H)，1.15(s，0.80×3H)，1.53-1.65(m，2H)，1.94-1.99(m，2H)，2.05-2.15(m，1H)，2.31-2.38(m，1H)，3.44-3.56(m，2H)，5.37(m+s，3H)，7.42-7.46(m，1H)，7.88-7.90(d，J＝7.70Hz，1H)，8.54-8.59(m+s，2H)，8.69(s，1H).
參考實施例14
向參考實施例8的4-甲氧羰基噻唑(3.64g，10.0mmol)和氯化鋰(2.12g，50.0mmol)在EtOH(100mL)和THF(75mL)內(nèi)的溶液中加入氫氧化鈉(1.94g，51.3mmol)。6小時后，向該反應(yīng)混合物中再加入224mg LiCl和205mg NaBH4，并再攪拌約18小時。用氯化銨水溶液處理該反應(yīng)混合物，并用氯仿(3×100mL)萃取。將該CHCl3溶液用Na2SO4干燥，過濾并濃縮至干。通過硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用5％CH3OH在CHCl3中的混合物洗脫，獲得了所示醇(2.39g，產(chǎn)率75％)，為無色油狀物。
MS(loop pos)MH+＝319(100％).1H NMR(300MHz，CDCl3)，δ1.85-2.05(m，3H)，2.10-2.40(m，2H)，2.60-2.70(m，1H)，3.40-3.55(m，1H)，3.60-3.70(m，1H)，4.65-4.75(m，2H)，5.05-5.30(m，3H)，7.05(br s，1H)，7.10(br s，1H)，7.20-7.40(m，3H).
化合物16 將參考實施例14的噻唑-4-甲醇(2.17g，6.83mmol)與三苯基膦(3.38g，12.8mmol)、偶氮二甲酸二乙酯(1.64mL，10.4mmol)和3-羥基吡啶(0.97g，10.2mmol)在THF(110mL)中合并，并按照與制備化合物5相同的方法進行處理。該反應(yīng)獲得了化合物16(2.08g)與肼副產(chǎn)物的粗產(chǎn)物，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝396(100％).1H NMR(300 MHz，DMSO-d6)，δ1.85-2.05(m，3H)，2.10-2.40(m，1H)，3.40-3.55(m，2H)，4.90-5.20(m，5H)，7.05(br s，1H)，7.10(br s，1H)，7.30-7.60(m，5H)，8.12-8.15(m，1H)，8.35-8.37(m，1H)，9.00(s，1H).
化合物17 將化合物16的粗產(chǎn)物(1.85g)與30％HBr在CH3CO2H(12mL)中的混合物于約室溫攪拌約2小時。將該反應(yīng)混合物用水(25mL)稀釋，并用Et2O(3×75mL)萃取。用碳酸鈉水溶液將該酸性水層堿化，并用CHCl3(10×100mL)萃取該高度水溶性的游離堿。將水層濃縮至潮濕的固體，并用CHCl3(3×125mL)萃取。將合并的CHCl3溶液干燥(Na2SO4)，過濾并濃縮，獲得了化合物17(0.55g)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝262(40％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.67-1.84(m，2H)，2.10-2.22(m，1H)，2.82-3.00(m，2H)，3.43(brs，1H)，4.41-4.45(m，1H)，5.16(s，2H)，7.31-7.36(m，1H)，7.47-7.51(m，1H)，7.55(s，1H)，8.18(d，J＝4.36Hz，1H)，8.37(d，J＝2.86Hz，1H).
化合物18 按照與制備化合物7相同的方法處理在CH2Cl2(100mL)中的化合物17(0.55g，2.00mmol)、三乙胺(0.69mL，4.95mmol)和乙基草酰氯(0.35mL，3.13mmol)，獲得了化合物18(0.33g，產(chǎn)率46％)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝362(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，3∶2旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.05(t，J＝7.40Hz，7.41Hz，0.40×3H)，1.25(t，J＝7.41，7.40Hz，0.60×3H)，1.80-2.15(m，3H)，2.25-2.45(m，1H)，3.55-3.75(m，2H)，4.00(q，J＝7.12Hz，7.13Hz，7.10Hz，0.4×2H)，4.30(q，J＝7.12Hz，7.13Hz，7.10Hz，0.60×2H)，5.20(s，2H)，5.32-5.39(m，0.60×1H)，5.40-5.55(m，0.40×1H)，7.32-7.40(m，1H)，7.45-7.52(m，1H)，7.69(s，0.60×1H)，7.75(s，0.40×1H)，8.19(d，J＝4.36Hz，1H)，8.38-8.39(m，1H).
化合物19 按照與制備化合物8相同的方法處理在THF(10mL)中的化合物18(0.31g，0.86mmol)和1，1-二甲基丙基氯化鎂(1M，2.25mL，2.25mmol)，獲得了化合物19(0.17g，產(chǎn)率51％)，為黃色油狀物。
MS(loop pos)MH+＝388(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.65(t，J＝7.41Hz，7.42Hz，0.20×3H)，0.79(t，J＝7.37，7.40Hz，0.80×3H)，0.93(s，0.10×6H)，0.97(s，0.10×6H)，1.16(s，0.40×6H)，1.17(s，0.40×6H)，1.63(q，J＝7.40，7.42，7.45Hz，2H)，1.95-1.97(m，2H)，2.07-2.13(m，1H)，2.26-2.36(m，1H)，5.20(s，2H)，5.34-5.40(m，1H)，7.32-7.36(m，1H)，7.49-7.53(m，1H)，7.70(s，0.80×1H)，7.76(s，0.20×1H)，8.19(d，J＝3.96Hz，1H)，8.38(br s，1H).
參考實施例15 向乙酰乙酸乙酯(65mL，510mmol)在無水Et2O(100mL)內(nèi)的冷(0℃)溶液中加入溴(26.40mL，512.4mmol)。將該反應(yīng)混合物在約室溫靜置約1天，然后倒在冰上，并用無水Na2CO3洗滌直至呈堿性。將該乙醚溶液用鹽水洗滌，并用氯化鈣干燥約4天。將該乙醚溶液過濾并濃縮，獲得了81.66g淺棕色油狀物，并用碳酸鉀固體穩(wěn)定。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1.50(t，J＝7.40，7.40Hz，3H)，3.70(s，2H)，4.00(s，2H)，4.20(q，J＝7.40，7.40Hz，2H).
參考實施例16 將參考實施例8的N-CBz-脯氨酸硫代酰胺(4.36g，16.5mmol)、和參考實施例15的90％γ-溴乙酰乙酸乙酯(4.80g，22.5mmol)在乙醇(170mL)中的溶液于回流狀態(tài)下攪拌約2小時。將該反應(yīng)混合物濃縮至干。通過硅膠色譜純化殘余物，用1％CH3OH在CHCl3中的混合物洗脫，獲得了所示噻唑(6.25g，產(chǎn)率100％)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝375(40％).1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.15-1.25(m，3H)，1.80-2.10(m，3H)，2.25-2.40(m，1H)，3.35-3.55(m，2H)，3.75(s，2H)，4.05(q，J＝7.40，7.42，7.45Hz，2H)，4.95-5.20(m，3H)，7.10(br s，1H)，7.25-7.40(m，5H).
參考實施例17 將參考實施例16的乙酯(3.01g，8.00mmol)、氯化鋰(1.72g，40.6mmol)和硼氫化鈉(1.51g，mmol)在EtOH/THF(4∶3；175mL)中合并，并按照與制備參考實施例14產(chǎn)物相同的方法處理，獲得了所示醇(2.40g，產(chǎn)率90％)，為淺黃色油狀物。
1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.80-2.05(m，3H)，2.20-2.40(m，1H)，2.80(t，J＝6.52，6.52Hz，2H)，3.40-3.60(m，2H)，3.65-3.70(m，2H)，4.65(t，1H(OH)，4.90-5.20(m，3H)，7.05(br s，1H)，7.15(br s，1H)，7.25-7.40(m，4H).
化合物20 按照與制備化合物5相同的方法處理在THF(20mL)中的參考實施例17的噻唑-4-乙醇(1.51g，4.55mmol)、三苯基膦(2.37g，9.04mmol)、偶氮二甲酸二乙酯(1.00mL，6.35mmol)和3-羥基吡啶(0.60g，6.31mmol)，獲得了化合物20的粗產(chǎn)物(0.82g)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝410(100％).1HNMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.90-2.02(m，3H)，2.20-2.40(m，1H)，3.15(t，J＝6.52，6.52Hz，2H)，3.47-3.60(m，2H)，4.30-4.40(m，2H)，4.93-5.20(m，3H)，7.05(br s，1H)，7.20-7.70(m，7H)，8.15(d，J＝4.3Hz，1H)，8.28-8.32(m，1H).
化合物21 按照與制備化合物17相同的方法處理化合物20(0.71g)和30％HBr在CH3CO2H(5mL)中的溶液，獲得了化合物21(0.85g)，為吸濕性二氫溴酸鹽。
MS(loop pos)MH+＝276(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，δ1.90-2.20(m，3H)，2.40-2.50(m，1H)，3.25-3.40(m+t，J＝6.52，6.52Hz，4H)，4.60(t，J＝6.52，6.52Hz，2H)，5.00-5.10(m，1H)，7.60(s，1H)，7.95-8.05(m，1H)，8.25-8.30(m，1H)，8.65(d，J＝4.3Hz，1H)，8.80(s，1H)，9.10-9.25(br s，1H)，9.75-9.90(br s，1H).
化合物22
按照與制備化合物7相同的方法處理在CH2Cl2(25mL)中的化合物21(0.78g，1.78mmol)、三乙胺(0.63mL，4.52mmol)和乙基草酰氯(0.30mL，2.68mmol)，獲得了化合物22(0.42g，63％)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝376(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，3∶2旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ1.20-1.30(m，3H)，1.95-2.10(m，3H)，2.25-2.45(m，1H)，3.15(q，J＝7.40，7.42，7.45Hz，2H)，3.50-3.75(m，2H)，4.20-4.40(m，4H)，5.30-5.35(m，0.60×1H)，5.50-5.55(m，0.40×1H)，7.25-7.33(m，1H)，7.35-7.40(m，2H)，8.15-8.18(m，1H)，8.20-8.22(m，1H)，(q，J＝7.40，7.42，7.45Hz，2H).
化合物23 按照與制備化合物8相同的方法處理在THF(25mL)中的化合物22(0.41g，1.09mmol)和1，1-二甲基丙基氯化鎂(1M，3.00mL，3.00mmol)，獲得了化合物23(224.4mg，產(chǎn)率51％)，為油狀物。
MS(loop pos)MH+＝402(100％).1H NMR(300MHz，DMSO-d6)，4∶1旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，δ0.63(t，J＝7.41Hz，7.42Hz，0.20×3H)，0.79(t，J＝7.37，7.40Hz，0.80×3H)，0.89(s，0.10×6H)，0.93(s，0.10×6H)，1.15(s，0.40×6H)，1.16(s，0.40×6H)，1.59-1.64(m，2H)，1.95-2.08(m，3H)，2.23-2.33(m，1H)，3.16(t，J＝6.30Hz，6.30Hz，2H)，3.40-3.57(m，2H)，4.36(t，J＝6.64，6.64Hz，2H)，5.30-5.37(m，1H)，7.29-7.41(m，3H)，8.16(d，J＝4.25Hz，1H)，8.26-8.29(m，1H).
化合物24方法A 向(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸(4.557g，18.89mmol，按照在WO 96/40633中描述的方法制得的)在四氫呋喃(130mL)內(nèi)的冷卻至約-15℃(MeOH/冰浴)的攪拌溶液中加入三乙胺(1.908g，2.63mL，18.89mmol)，然后加入氯甲酸乙酯(2.05g，1.806mL，18.86mmol)。在約-15℃-約-10℃攪拌約30分鐘后，通過過濾除去沉淀的固體，加入四氫呋喃將濾液和洗滌液的體積調(diào)節(jié)至約170mL。
在攪拌下于0℃向該混合酸酐溶液中(85mL，9.32mmol)加入肼一水合物(0.48mL，9.79mmol)。將該混合物攪拌，溫熱至約室溫并保持過夜。真空除去溶劑后，通過硅膠柱色譜純化殘余物，用50％乙酸乙酯/二氯甲烷洗脫，獲得了化合物24(0.64g，產(chǎn)率28.7％)，為無色固體，將其從乙醚/戊烷中重結(jié)晶，熔點為177-178℃。CIMS 479(MH+)，501(M+Na+)。1H NMR(300MHz，CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.06(br s，2H)，4.61(m，2H)，3.50-3.46(m，4H)，2.40-2.36(m，2H)，2.13-1.94(m，6H)，1.83-1.64(m，4H)，1.25和1.21(分別是s，分別是6H)，0.87(t，3H).IR(KBr)cm-13261，2970，1706，1684，1636.元素分析C24H38N4O6的計算值C，60.23；H，8.00；N，11.71。實測值C，60.30；H，8.03；N，11.58。
化合物24還可以按照方法B制得。方法B-化合物24 在室溫向(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸(2.4229g，10mmol，按照在WO 96/40633中描述的方法制得的)在四氫呋喃(50mL)內(nèi)的攪拌溶液中依次加入三乙胺(4.18mL，30mmol)、乙基二甲基氨基丙基碳化二亞胺鹽酸鹽“EDC.HCl’(1.917g，10mmol)和羥基苯并三唑水合物”HOBt.H2O“(1.53g，10mmol)。約5分鐘后，加入肼在四氫呋喃中的溶液(1M，5mL，5mmol)，并將該混合物攪拌約18小時。真空除去四氫呋喃(＜35℃)，將殘余物溶解在二氯甲烷中，并依次用水、1％鹽酸水溶液、和水洗滌，并干燥(Na2SO4)。過濾后，真空除去二氯甲烷，通過硅膠柱色譜純化殘余物，用1.5％甲醇在二氯甲烷中的混合物純化，獲得了化合物24(產(chǎn)率18％)，[α]25D-95.8°(c＝0.33，CHCl3)，該化合物在各方面與通過方法A獲得的化合物相同。
使用方法A來制備化合物25-29。
方法A-化合物25 使用(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-哌啶甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，分離到了化合物25，為無色固體(產(chǎn)率38％)，熔點為180-181℃(乙醚/戊烷)。CIMS 507(MH+)，529(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.07(br m，2H)，5.17(d，2H)，4.29-4.08(m，2H)，3.39(d，4H)，2.89(t，1H)，2.40-2.05(m，3H)，1.89-1.44(m，10H)，1.23和1.22(分別是s，分別是6H)，0.90(t，6H).IR(KBr)cm-13309，2969，1699，1646，1610.元素分析C26H42N4O6的計算值C，61.64；H，8.36；N，11.06。實測值C，61.45；H，8.58；N，10.76。
化合物26 使用(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-氮雜環(huán)丁烷甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，分離到了化合物26，為透明的粘性泡沫狀物(產(chǎn)率35％)，熔點＜58℃，[α]25D-93.4°(CHCl3)。CIMS 451(MH+)，473(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.70(br s，2H)，5.02(d，d，2H)，4.34-4.18(m，4H)，2.85-2.73(m，2H)，2.61-2.49(m，2H)，1.84-1.73(m，6H)，1.25和1.23(分別是s，分別是6H)，0.84(t，6H).IR(KBr)cm-13498，3247，2972，1703，1636.
化合物27 使用(3S)-2-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-1，2，3，4-四氫異喹啉甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，分離到了化合物27，為無色固體(產(chǎn)率41％，乙醚/戊烷)，熔點為108-110℃；[α]25D-55.12°(CHCl3)。CIMS 603(MH+)，625(M+Na)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.22-7.03(m，8H)，5.25-4.95(m，2H)，4.51-4.25(m，4H)，3.16-3.10(m，2H)，1.72-1.66(m，2H)，1.22和1.21(分別是s和分別是6H)，0.89(t，6H).IR(KBr)cm-13219，2969，1701，1639.元素分析C34H42N4O6的計算值C，67.75；H，7.02；N，9.30。實測值C，67.54；H，7.04；N，9.13。
化合物28 使用(4R)-3-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-4-噻唑烷甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，分離到了化合物28，為無色泡沫狀物(產(chǎn)率39.8％)，熔點為77-82℃(乙醚/戊烷)；[α]25D-15.6°(c＝0.276，CHCl3)。CIMS 515(MH+)，537(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.93(br s，2H)，5.05-4.98(m，2H)，4.54-4.43(m，4H)，3.59-3.54(m，2H)，3.25-3.21(9m，2H)，1.78-1.74(m，4H)，1.25和1.23(分別是s，分別是6H)，0.88(t，3H).IR(KBr)cm-13270，2970，1703，1642，1418.元素分析C22H34N4O6的計算值C，51.34；H，6.66；N，10.89。實測值C，51.52；H，6.67；N，11.06。
化合物29 使用(2S)-1-芐氧基羰基-2-吡咯烷甲酸，分離到了化合物29，為無色泡沫狀物，其熔點范圍不確定。[α]25D-56.1°(CHCl3)。CIMS495(MH+)，518(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.11(br s，2H)，7.36(br s，10H)，5.23-5.149m，4H)，4.41(br s，2H)，3.55-3.44(m，4H)，2.36-1.94(m，8H).IR(KBr)cm-13496，1704，1499，1420，1358.
還按照方法C制備化合物28和29。
方法C-化合物28 用約20分鐘向(4R)-3-(1，2-二-氧代-3，3-二甲基戊基)-4-噻唑烷甲酸(1.63g，6.29mmol)在二氯甲烷(100mL)內(nèi)的溶液(在冰浴中冷卻)中加入草酰氯(0.72mL，8.25mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。將該混合物在約室溫攪拌約2小時，通過在40℃以下真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物真空下充分干燥約1小時后，將其溶解在無水四氫呋喃(50mL)中。用約30分鐘在約0℃向該攪拌溶液中加入1M肼在四氫呋喃中的溶液(3.15mL，3.15mM)和三乙胺(1.32mL，9.47mM)；將該混合物在約室溫攪拌過夜。約24小時后，通過真空蒸發(fā)除去溶劑，將殘余物在1N鹽酸和二氯甲烷之間分配。將有機層干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)。通過閃式硅膠色譜法純化粗產(chǎn)物，用2％甲醇在二氯甲烷中的混合物洗脫，獲得了化合物28(1.18g，產(chǎn)率73％)，[α]25D-15.6°(c＝0.276，CHCl3)，其在各方面與在方法A中獲得的真實樣品相同。
化合物29 在氮氣氛下，用約20分鐘向Z-脯氨酸(10g，40.12mmol)在二氯甲烷(100mL)內(nèi)的冷卻至約0℃的溶液中滴加草酰氯(4.19mL，48mmol)，然后加入二甲基甲酰胺(3滴)。在約室溫攪拌約2小時后，將該混合物真空蒸發(fā)至干，并在高度真空下干燥約30分鐘。將殘余物溶解在無水四氫呋喃(THF，160mL)中；用約2分鐘將該溶液加到1M肼在四氫呋喃內(nèi)的溶液(40mL，40mM)中，然后在約室溫攪拌約18小時。將該混合物真空蒸發(fā)至干。把殘余物置于乙酸乙酯(300mL)中，依次用1％鹽酸和水洗滌，將有機層干燥(Na2SO4)，過濾并真空蒸發(fā)，獲得了無色油狀殘余物。通過閃式硅膠色譜純化粗產(chǎn)物，用2％甲醇/二氯甲烷洗脫，獲得了化合物29(8.8g，產(chǎn)率88.7％)，[α]25D-56.1°(c＝1.0，CHCl3)，為無色泡沫狀物，其與在方法A中獲得的真實樣品相同。
按照方法D、E、和F制備化合物30。
方法D-化合物30 在劇烈攪拌下，向化合物24(0.567g，1.185mmol)在無水乙醚(400mL)內(nèi)的冷溶液中加入吡啶(0.12mL，3.35mmol)，然后加入亞硫酰氯(0.120mL，1.66mmol)。將該混合物在約0℃攪拌約2小時后，通過過濾除去沉淀的固體，用無水乙醚迅速洗滌，將合并的濾液在低于40℃溫度下真空蒸發(fā)至干。將殘余物(0.6235g泡沫狀物)溶解在無水甲苯(25mL)中，并在氮氣氛下加熱回流約3小時。將甲苯真空蒸發(fā)，通過硅膠/CH2Cl2柱色譜純化殘余物，用1％甲醇/二氯甲烷洗脫，獲得了本標題化合物30(0.354g，產(chǎn)率63.6％)，為無色固體，從乙醚/戊烷中重結(jié)晶，熔點為123-124℃；[α]24D-74.6°(c＝0.8，CHCl3)。CIMS 461(MH+)，483(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式異構(gòu)體)
5.32(d，d，J＝3.0，7.6)，3.59(m，4H)，2.33-2.07(m，8H)，1.80-1.65(m，4H)，1，23和1.20(分別是s，分別是6H)，0.86(t，6H).IR(KBr)cm-12972，1704，1641.元素分析C24H38N4O5的計算值C，62.59；H，7.88；N，12.16。實測值C，62.68；H 7.75；N，12.14。
方法E-化合物30 向化合物24(0.112g，0.234mM)在氯苯(10mL)內(nèi)的溶液中加入六甲基二硅氮烷(0.123mL，0.585mM)、咪唑(10mg)和氟化四丁基銨(10mg)，并將該混合物在氮氣氛下加熱回流約72小時。通過色譜法純化粗產(chǎn)物，獲得了化合物30，薄層色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)表明其與在方法D中描述的真實樣本相同。
方法F-化合物30 向化合物24(0.2018g，0.42mmol)在四氫呋喃(10mL)內(nèi)的溶液中分三批加入(甲氧基羰基氨磺?；?三乙胺氫氧化物內(nèi)鹽(Burgess試劑，總共0.3014g，1.265mmol)，約每30分鐘加入一批。然后將該混合物在約室溫攪拌約72小時。真空除去溶劑后，通過閃式色譜法純化該反應(yīng)殘余物，獲得了化合物30，薄層色譜和質(zhì)譜數(shù)據(jù)表明其與在方法D中描述的真實樣本相同。
參考實施例18 將3-(3-吡啶基)丙腈(7.5g，56.75mM)、羥基胺鹽酸鹽(5.915g，85.12mM)和無水碳酸鉀(15.686g，113.5mM)在乙醇(200mL)中的混合物在氮氣氛下攪拌并加熱回流約64小時。冷卻后，通過過濾除去固體，并將濾液真空蒸發(fā)至干，獲得了粘稠的琥珀色油狀殘余物(8.95g)。在二氯甲烷(300mL)中研制，過濾，然后真空除去二氯甲烷，獲得了非常粘稠的油狀殘余物(5.84g)。將不溶于二氯甲烷的部分溶解在甲醇中，過濾，并真空蒸發(fā)，獲得了粘稠的半固體偕胺肟殘余物(3.09g)；CIMS 166(MH+)。
化合物31 向(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸(4.557g，18.89mmol，按照在WO 96/40633中描述的方法制得的；2.02g，8.37mmol)在二(乙二醇)一甲醚(二甘醇二甲醚，30mL)的溶液中依次加入?yún)⒖紝嵤├?8的偕胺肟(1.383g，8.37mM)和1-(二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽“EDC″(3.21g，16.743mmol)，將該混合物攪拌，并在油浴中于氮氣氛下在約50℃加熱約20小時，然后在約110℃加熱約5小時。冷卻后，將該反應(yīng)混合物在水與二氯甲烷之間分配，將有機相干燥(Na2SO4)，并真空蒸發(fā)，獲得了粘稠的殘余物(3.727g)。通過硅膠/二氯甲烷色譜純化，用1％甲醇/二氯甲烷洗脫，獲得了化合物31，為粘稠的油狀物(0.39g，產(chǎn)率12.5％)。CIMS 371(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.47(s，2H)，7.52(d，1H，J＝7.6)，7.24-7.20(m，1H)，5.32(d，d，1H)，3.64(t，2H)，3.06(M，4H)，2.42-2.33(m，1H)，2.19-2.06(m，3H)，1.82-1.61(m，2H)，1.24和1.22分別是s，分別是3h)，0,87(t，3H).IR(KBr)cm-1；2970，1704，1645，1580，1425.元素分析C20H26N4O3的計算值C，64.84；H，H，7.07；N，15.12。實測值C，64.43；H，6.95；N，14.89。
參考實施例19 將3-(3-吡啶基)丙酸乙酯(5.92g，33.08mM)、無水肼(20mL，大大過量)和乙醇(100mL)的混合物在氮氣氛下加熱回流約18小時。通過真空蒸發(fā)除去溶劑，用乙醚研制殘余物，并冷藏。收集結(jié)晶固體，用少量乙醚洗滌，獲得了酰肼，為無色固體結(jié)晶。熔點為87-90℃。
CIMS 166(MH+).1H NMR(DMSO)δ9.04(s，1H)，8.43-8.39(m，2H)，7.61(d，1H)，7.32-7.28(m，1H)，2.83(t，2H)，2.35(t，2H).IR(KBr)cm-13325，3231，3004，1667，1630.元素分析C8H11N3O的計算值；C，58.17；H，6.71；N，25.44。實測值C，57.94；H，6.49；N，25.28。
化合物32 使用方法A的操作，采用一當量參考實施例19的一?；乱源嫖慈〈碾?，獲得了化合物32(產(chǎn)率73％)，為無色固體，熔點為90-92℃(乙醚/戊烷)。CIMS 389(MH+)。1H NMR(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，CDCl3)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.3(s，1H)，8.83(s，1H)，8.44(s，2H)，7.54(d，1H)，7.27-7.18(m，1H)，4.59-4.56(m，1H)，3.48(t，2H)，2.99(2H)，2.57(t，2H)，2.09-1.92(m，4H)，1.80-1.63(m，2H)，1.23(s，3H)，1.20(s，3H)，0.86(t，3H).IR(KBr)cm-13258，2971，1703，1637.元素分析C20H28N4O4.0.5H2O的計算值C，60.44；H，7.35；N，14.10。實測值C，60.67；H，7.07；N，14.32。
化合物33 使用方法F的操作，采用化合物32作為反應(yīng)物，獲得了化合物33(產(chǎn)率71.6％)，為無色固體，CIMS 371(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
8.49(d，2H)，7.54(d，2H)，7.26-7.22(m，1H)，5.30(t，2H)，3.15(s，4H)，2.35-2.04(m，4H)，1.77-1.59(m，3H)，1.23(s，3H)，1.21(s，3H)，0.86(t，3H).元素分析C20H26N4O3的計算值C，64.84；H，7.07；N，15.12。實測值C，64.45；H，7.07；N，15.12。
化合物34 采用方法A的操作，但是使用一當量3-(3，4，5-三甲氧基苯基)丙?；乱源骐?，獲得了化合物34(產(chǎn)率81.4％)，為無色玻璃狀泡沫。CIMS 478(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.06(br s，1H)，7.99(br s，1H)，6.42(s，2H)，4.61(m，1H)，3.84(s，6H)，3.82(s，3H)，3.48(t，2H)，2.93(t，2H)，2.54(t，2H)，2.38-2.35(m，1H)，2.06-1.93(m，3H)，1.80-1.65(m，2H)，1.24(s，3H)，1.21(s，3H)，0.86(t，3H).IR(KBr)cm-13273，2970，1703，1639，1127.
化合物35
采用方法F的操作，使用化合物34作為反應(yīng)物，獲得了化合物35(產(chǎn)率99％)，為無色粘稠的油狀物。CIMS 460(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.31(d，d 1H)，3.85(s 6H)，3.82(s，3H)，3.61-3.59(m，1H)，3.25-3.00(m，4H)，2.40-2.25(m，1H)，2.25-1.90(m，4H)，1.80-1.60(m 2H)，1.23(s，3H)，1.21(s，3H)，0.86(t，3H).IR cm-12968，1702，1644，1590，1508，1459，1423，1127.元素分析C24H33N3O6.0.6H2O的計算值C，61.29；H，7.33；N，8.93。實測值C，61.29；H，7.17；N，8.93。
化合物36 使用方法A的操作和(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-哌啶甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，并使用參考實施例19的酰肼以代替肼，獲得了化合物36(產(chǎn)率71.5％)，為無色泡沫狀固體。熔點為48-52℃。CIMS 403(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.64(s，1H)，8.47-8.43(m，3H)，7.56-7.53(m，1H)，7.25-7.20(m.1H)，5.17(d，1H)，3.39(d，1H)，3.03-2.98(m，2H)，2.61-2.55(m，2H)，2.30-2.20(m，1H)，1.85-1.51(m，8H)，1.23(s，3H)，1.22(s，3H)，0.89(t，3H).IR(KBr)cm-13272，2969，1701，1638，1445.元素分析C21H3ON4O4.0.3H2O的計算值C，61.84；H，7.56；N，13.74。實測值C，61.88；H，7.40；N，13.70。
化合物37 使用方法A的操作和(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-哌啶甲酸(基本上按照在WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二-氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)，并使用3-(3，4，5-三甲氧基苯基)丙?；乱源骐?，獲得了化合物37(產(chǎn)率98％)，為無色玻璃狀固體，熔點為52-55℃。CIMS 492(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.25(br s，1H)，7.71(br s，1H)，6.43(d，2H)，5.17(d，1H)，3.85(s，6H)，3,83(s，3H)，3.38(m，1H)，3.0-2.90(m，2H)，2.50-2.40(m，2H)，2.33(br t，1H)，1.8-1.6(m，8H)，1.24(s，3H)，1.23(s，3H).IR(KBr)cm-13293，2967，2941，1701，1640，1591，1509，1459，1127.元素分析C25H37N3O7.0.75H2O的計算值C，59.45；H，7.68；N，8.32。實測值C，59.47；H，7.55；N，8.36。
化合物38
采用方法F的操作，使用化合物36作為反應(yīng)物，獲得了化合物38，為無色油狀物(產(chǎn)率96％)。CIMS 385(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.49(d，2H)，7.56(d，1H)，7.27-7.22(m 2H)，5.93(d，1H)，3.21-3.11(m，4H)，2.35(d，1H)，2.0-1.50(m，8H)，1.24(s，3H)，1.21(s，3H)，0.90(t，3H).IR(KBr)cm-12967，2942，2877，1700，1644，1585，1434.元素分析C21H28N4O3的計算值C，65.60；H，7.34；N，14.57。實測值C，65.37；H，7.43；N，14.41。
化合物39 采用方法F的操作，使用化合物37作為反應(yīng)物，獲得了化合物39(產(chǎn)率64.8％)，為無色粘稠的油狀物。CIMS 474(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)6.42(s，2H)，5.93(d，1H)，3.84(s，6H)，3.82(s，3H)，3.40(br d，1H)，3.25-3.00(m，4H)，2.36(br d，1H)，2.0-1.50(m，8H)，1.24(3H)，1.22(s，3H)，0.90(t，3H).IR(KBr)cm-13502，2966，2942，1772，1700，1644，1590，1509，1462，1240，1128.元素分析C25H35N3O6.2H2O的計算值C，58.92；H，7.71；N，8.25。實測值C，59.05；H，7.45；N，8.57。
參考實施例20 在約0℃、氮氣氛下，向N-芐氧羰基-L-脯氨酸(2.0g，8.0mmol)在無水二氯甲烷(20mL)內(nèi)的溶液中滴加草酰氯(1.22g，9.6mmol)，然后加入2滴DMF。將該溶液攪拌約3小時，溫熱至約25℃，然后濃縮。將所得酰氯溶解在THF∶乙腈(1∶1，20mL)中，并在約0℃、氮氣氛下用三乙胺(0.87g，8.6mmol)處理。將該溶液攪拌約10分鐘，并滴加三甲基甲硅烷基重氮甲烷(2.0M己烷溶液，7.8mL)。將該溶液在約0℃攪拌約2小時，溫熱至約25℃，并再攪拌約17小時。將該溶液用乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉和水洗滌，干燥(MgSO4)，并濃縮。通過硅膠柱色譜純化粗產(chǎn)物，用40％乙酸乙酯在戊烷中的混合物洗脫，獲得了該重氮酮(1.15g，產(chǎn)率53％)，為黃-橙色油狀物。1H NMR(CDCl3；順式-反式酰胺旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ1.88-2.09，2.17-2.38(2br m，4H)；3.58(m，2H)，3.81，4.03，4.17(s，AB四重峰，2H，J＝4.0)，4.61(m，1H)，5.13(m，2H)，7.32(m，5H).
參考實施例21 在氮氣氛下，向參考實施例20的N-芐氧羰基-L-脯氨酸α-重氮酮(1.0g，3.6mmol)在無水乙醚(10mL)內(nèi)的溶液中滴加飽和HBr乙醚溶液，直至停止釋放出氮氣。將該溶液在約25℃攪拌約1小時，然后用飽和NaHCO3、H2O和飽和NaCl洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。通過硅膠柱色譜純化粗產(chǎn)物，用40％乙酸乙酯在戊烷中的混合物洗脫，獲得了所示溴酮(0.49g，產(chǎn)率42％)，為澄清油狀物。1H NMR(CDCl3；順式-反式酰胺旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ1.84-2.30(br m，4H)；3.58(m，2H)；4.32(m，1H)；5.17(m，2H)；5.28(t，1H)；7.35(m，5H).
化合物40 向參考實施例8的硫代酰胺(0.40g，1.5mmol)在無水乙醇(15mL)內(nèi)的溶液中滴加在無水乙醇(2mL)中的參考實施例21的N-芐氧基羰基-L-脯氨酸α-溴甲基酮(0.49g，1.5mmol)。將所得溶液在氮氣氛下加熱回流約3小時。將該溶液冷卻至約25℃，并濃縮。將所得殘余物置于乙醚/飽和NaHCO3中。分離出水相，并用乙醚萃取數(shù)次。合并有機層，干燥(MgSO4)并濃縮。通過硅膠柱色譜純化粗產(chǎn)物，并用40％乙酸乙酯在戊烷中的混合物洗脫，獲得了化合物40(0.51g，產(chǎn)率69％)，為澄清的油狀物。1H NMR(CDCl3；順式-反式酰胺旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物)δ 1.93(m，4H)；2.20(br m，4H)；3.61(br m，4H)；5.18(br m，6H)；6.74，6.85(s，s，1H)；7.13(m，2H)；7.27(m，4H)；7.39(m，4H).
化合物41 在約0℃，向化合物40(0.48g，0.97mmol)在無水二氯甲烷(20mL)內(nèi)的溶液中滴加1.0M BBr3在二氯甲烷(5mL)中的溶液。將該溶液在約0℃攪拌約1小時，然后溫熱至約25℃，并攪拌約2小時。通過滴加H2O(25ml)來終止該反應(yīng)。分離各層，用水萃取有機相。通過滴加1N NaOH將合并的水相調(diào)節(jié)至約pH 11，然后濃縮。過濾出所得鹽，并用乙酸乙酯充分洗滌。將有機濾液干燥(MgSO4)并濃縮，獲得了化合物41(0.067g，產(chǎn)率31％)，為黃色油狀物。1H NMR(CDCl3)δ1.88(m，6H)；2.17(m，1H)；2.31(m，1H)；3.05(m，2H)；3.16(m，2H)；4.24(m，1H)；4.57(m，1H)；6.99(s，1H).
化合物42 在約0℃，向化合物41(0.067g，0.30mmol)在無水二氯甲烷(5mL)內(nèi)的溶液中加入三乙胺(0.13g，1.28mmol)。攪拌約15分鐘后，滴加甲基草酰氯(0.10g，0.84mmol)在二氯甲烷(2mL)中的溶液。將該溶液在約0℃攪拌約1.5小時，然后用H2O洗滌，干燥(MgSO4)，并濃縮，獲得了化合物42(0.115g，產(chǎn)率97％)，為黃色油狀物。1H NMR(CDCl3；4種順式-反式酰胺旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ1.96-2.48(系列重疊的br m’s，8H)；3.62-4.00(系列重疊的br m’s，4H)；3.67，3.72，3.76，3.91(2個重疊的s，s，s，系列重疊的s，6H)；5.44，5.71(br m，2H)；6.91，6.93，6.98，7.07(s，s，s，s，1H)。
化合物43 在約-78℃，向化合物42(0.115g，0.29mmol)在無水THF(5mL)內(nèi)的溶液中滴加二甲基丙基氯化鎂(1.0M乙醚溶液，0.754mL)。將該溶液在約-78℃攪拌約3小時，然后倒入飽和氯化銨(25mL)中，并用乙酸乙酯萃取。將有機相合并，干燥(MgSO4)，并濃縮。通過硅膠柱色譜純化粗的殘余物，用40％乙酸乙酯在戊烷中的混合物洗脫，獲得了化合物43(0.075g，產(chǎn)率55％)，為白色固體，熔點為127-129℃。1H NMR(CDCl3；順式-反式酰胺旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ0.60-1.02(系列重疊的s和m，10H)；1.12-1.21(系列重疊的s，8H)；1.66(m，4H)；1.88-2.29(重疊的br m’s，8H)；3.38-3.70(br m，4H)；5.15，5.29，5.37，5.42(m，m，m，m，2H)；6.81，6.84，6.91，6.96(s，s，s，s，1H)。元素分析C25H37N3O4S的計算值C，63.13；H，7.84；N，8.83。實測值C，62.94；H，7.80；N，8.67。
化合物44 采用方法F的操作，使用化合物25作為反應(yīng)物，獲得了化合物44(產(chǎn)率63％)，為無色固體，熔點為102-105℃(乙醚/戊烷)。CIMS489(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.98(d，2H)，3.46-3.17(m，4H)，2.33(d，2H)，1.94-1.40(m，12H)，1.25和1.21(分別是s，分別是6H)，0.87(t，6H).IR(KBr)cm-11702，1639，1578，1550，1441.元素分析C26H40N4O5.0.6H2OC，62.53；H，8.32；N，11.22。實測值C，62.52；H，8.09；N，11.14。
化合物45 采用方法D的操作，使用化合物29作為反應(yīng)物，獲得了化合物45(產(chǎn)率68％)，為粘稠的油狀物；[α]＝-87.4°(CHCl3)。CIMS 477(MH+)，499(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
7.35-7.19(m，10H)，5.20-5.0(m，6H)，3.80-3.40(m，4H)，2.40-1.85(m，8H).IR(KBr)cm-13584，2956，1705，1584，1498，1446，1410，1355.元素分析C26H28N4O5.0.25H2O的計算值C，64.92；H，5.97；N，11.65。實測值C，64.92；H，5.88；N，11.81。
化合物46方法G 將化合物45(3.06g，6.46mmol)在甲醇(125mL)中的溶液在10％Pd/C催化劑(580mg)存在下于15psi壓力下氫化約4小時。經(jīng)由硅藻土墊過濾以除去催化劑，將濾液真空蒸發(fā)至干，獲得了無色、非常粘稠的油狀物(1.28g，產(chǎn)率95％)。
CIMS209(MH+)，231(M+Na+).1H NMR(CDCl3)δ4.46(q，2H)，3.17-3.01(m，4H)，3.17-3.01(m，6H).IR(純品)cm-13313，2966，2875，1651，1584，1410，1337，1170，1084.
化合物47
采用方法D的操作，使用大大過量的吡啶和亞硫酰氯(分別是22和11當量)以及化合物27作為反應(yīng)物，獲得了化合物47(產(chǎn)率80％)，為無色泡沫狀物，[α]＝-55.12°(c＝0.254，CHCl3)。CIMS585(MH+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.22-6.91(m，8H)，6.15-6.10(m，2H)，4.41(m，2H)，3.45-3.20(m，4H)，1.81-1.69(m，4H)，1.25和1.22(分別是s，分別是6H)，0.90(t，6H).IR(KBr)cm-12969，2928，2879，1702，162，1586，1556，1499，1429.元素分析C34H42N4O5.0.5C5H12的計算值C，70.76；H，7.58；N，8.92。實測值C，70.93；H，7.38；N，8.92。
化合物48方法H 向化合物46(0.107g，0.514mmol)在二氯甲烷(10mL)內(nèi)的溶液中依次加入二異丙基乙基胺(2.87mL，1.65mmol)、二異丙基碳化二亞胺(0.323mL)、1-羥基-7-氮雜苯并三唑(0.280g，2.06mmol)和在二氯甲烷(5mL)中的噻吩-2-乙醛酸(0.320g，2.056mmol)。將該混合物在氬氣氛下于約室溫攪拌約20小時。將該混合物真空蒸發(fā)至干，把殘余物置于二氯甲烷(20mL)中，然后依次用5％鹽酸、水和飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。將有機層干燥(Na2SO4)，過濾并蒸發(fā)至干，獲得了殘余物。通過硅膠柱色譜純化粗產(chǎn)物，用1.5％甲醇在二氯甲烷中的混合物洗脫，獲得了化合物48(產(chǎn)率65％)，為泡沫狀固體，熔點為74-76℃。CIMS 485(MH+)，507(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.05-7.96(m，2H)，7.81-7.74(m，2H)，7.21-7.11(m，2H)，5.46-5.42(m，2H)，3.87-3.66(m，4H)，2.47-1.99(m，8H).IR(KBr)cm-13092，2955，2310，1658，1584，1561，1513，1441，1406，1353，1252，1167.元素分析C22H20N4O5S2的計算值C，54.53；H，4.16；N，11.56。實測值C，54.49；H，4.08；N，11.34。
化合物51方法I 在氬氣氛下，用約30分鐘向化合物46(0.431g，2.071mmol)和三乙胺(0.65mL，4.66mmol)在二氯甲烷(20mL)內(nèi)的冰冷攪拌溶液中加入在二氯甲烷(9mL)中的氯氧代乙酸甲酯(0.54mL，5.8mmol)。將該混合物在約0℃攪拌約2小時后，如下所述對該反應(yīng)混合物進行后處理用鹽水(3×50mL)洗滌，將有機層干燥(Na2SO4)，過濾，并真空蒸發(fā)至干，獲得了化合物51，為泡沫狀物(0.815g，產(chǎn)率95％)。CIMS 381(MH+)，403(M+Na+)。
化合物49
在氬氣氛下，用約15分鐘向化合物51(0.375g，0.986mmol)在四氫呋喃(7mL)內(nèi)的攪拌且于約-78℃冷卻的溶液中滴加溴化環(huán)己基鎂的乙醚溶液(1mL，2M，2mmol)。在約-78℃攪拌約3小時后，如下所述對該反應(yīng)混合物進行后處理倒入飽和氯化銨水溶液中，用乙酸乙酯萃取，將有機層干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮至。通過硅膠柱色譜純化所得粗產(chǎn)物，用0.75％甲醇在二氯甲烷中的混合物洗脫，獲得了化合物49(29mg，產(chǎn)率5.8％)，為無色固體，熔點為132-133℃。CIMS 485(MH+)，507(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.33-5.27(m，2H)，3.88-3.59(m，4H)，2.44-1.69(m，20H)，1.38-1.00(m，6H).IR(KBr)cm-12880，2927，2852，1706，1641，1582，1560，1445.元素分析C26H36N4O5.0.35H2O的計算值C，63.61；H，7.54；N，11.41。實測值C，63.96；H，7.59；N，11.08。
化合物50 采用方法A的操作，但是使用1當量N-芐氧羰基脯氨酸酰肼(CAS#53157-63-4)以代替肼。獲得了化合物50，為無色固體(產(chǎn)率56％)。熔點為145-146℃。CIMS 443(MH+-CO)，487(MH+)，485(M-H)。[α]＝-96.1°(c＝0.254，CHCl3)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
9.05(br s，1H)，8.98(br s，1H)，7.36(s，5H)，5.23-5.11(m，2H)，3.70-3.40(m，4H)，2.41(br s，2H)，2.30-1.80(m，6H)，1.79-1.42(m，2H)，1.25和1.22(分別是s，分別是3H)，0.87(t，3H).IR(KBr)cm-13307，3272，2966，2884，1731，1699，1651，1444.元素分析C25H34N4O6的計算值C，61.71；H，7.04；N，11.51。實測值C，62.09；H，7.20；N，11.28。
化合物52 采用方法D的操作，使用化合物26作為反應(yīng)物，獲得了化合物52，為無色粘稠的油膩物質(zhì)(產(chǎn)率75.8％)。CIMS 433(MH+)，455(M+Na+)。1H NMR(旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物，CDCl3)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.86-5.53(d，2H)，4.48-4.35(m，2H)，4.27-4.14(m，2H)，2.93-2.80(m，2H)，2.73-2.50(m，2H)，1.84-t.60(m，4H)，1.21(s，12H)，0.82(t，6H).IR(KBr)cm-12970，2880，1704，1651，1583，1564，1461，1423，1385.
化合物53
采用方法D的操作，使用化合物50作為反應(yīng)物，獲得了化合物53，為無色粘稠的油狀物(產(chǎn)率89％)。CIMS 469(MH+)，491(M+Na+)。[α]＝-92.7°(c＝0.246，CHCl3).1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.36-7.20(m，5H)，5.20-5.03(m，2H)，3.70-3.50(m，2H)，2.40-1.80(m，4H)，1.80-1.60(m，2H).IR(純品)cm-12968，2881，1702，1641，1584，1411，1356.元素分析C25H32N4O5的計算值C，64.09；H，6.88；N，11.96。實測值C，64.20；H，6.87；N，11.83。
化合物54 使用方法I的操作，但是使用α-甲苯磺酰氯來代替氯氧代乙酸甲酯，獲得了化合物54(產(chǎn)率59％)，為無色固體，熔點為144-145℃。CIMS 517(MH+)，539(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.49-7.46(m，4H)，7.40-7.37(m，6H)，5.04(q，2H)，4.41(q，4H)，3.39-3.31(9m，2H)，3.14-3.07(m，2H)，2.33-2.12(m，4H)，2.09-1.94(m，4H).IR(KBr)cm-11574，1554，1495，1455，1410，1332，1140.元素分析C24H28N4O5S2的計算值C，55.80；H，5.46；N，10.84。實測值C，55.73；H，5.42；N，10.76。化合物55 采用方法G的操作，使用化合物53作為反應(yīng)物，獲得了化合物55，為無色粘稠的油狀物(產(chǎn)率90％)。[α]＝-35.5°(c＝0.414，CHCl3)。CIMS 335(MH+)，357(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.32(dd，2H)，4.46(m，2H)，3.61(dt，4H)，3.36-3.03(m，4H)，2.40-1.60(m，6H)，1.24和1.21(分別是s，分別是3H)，0.86(t，3H).IR(純品)cm-13342，2969，2880，1703，1642，1586，1586，1428.元素分析C17H26N4O3的計算值C，61.06；H，7.84；N，16.75。實測值C，60.75；H，7.64；N，16.68。
化合物56 使用方法H的方法，但是使用3，4，5-三甲氧基苯基乙醛酸以代替噻吩-2-乙醛酸，獲得了化合物56，為無色固體，熔點為79-83℃(產(chǎn)率56％)。[α]＝-0.9°(c＝0.260，CHCl3)。CIMS 653(MH+)，675(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.34(s，4H)，5.41(d，d，2H)，3.95(s，6H)，3.93(s，12H)，3.68(t，4H)，3.48-2.20(m，8H).IR(KBr)cm-12944，2839，1770，1715，1677，1650，1583，1416，1330，1126.元素分析C32H36N4O11的計算值C，58.89；H，5.56；N，8.58。實測值C，58.64；H，5.75；N，8.35。
化合物57 使用方法I的操作，但是使用化合物55作為反應(yīng)物，并使用α-甲苯磺酰氯來代替氯氧代乙酸甲酯，獲得了化合物57，為粘稠的油狀物(產(chǎn)率72％)。[α]＝-28.6°(c＝0.49，CHCl3)。CIMS 489(MH+)，511(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)7.49-7.46(m，2H)，7.38-7.36(m，4H)，5.39-5.32(m，1H)，5.10-5.06(m，1H)，4.39(q，2H)，3.71-3.58(m，2H)，3.40-3.31(m，1H)，3.11-3.00(m，1H)，2.38-1.92(m，9H)，1.79-1.59(m，2H)，1.23和1.20(分別是s，分別是3H)，0.84(t，3H).IR(純品)cm-12971，2881，1703，1644，1584，1562，1427，1342.元素分析C24H32N4O5S的計算值C，59.00；H，6.60；N，11.47。實測值C，59.24；H，6.58；N，11.39?；衔?8 采用方法F的操作，使用化合物28作為反應(yīng)物，獲得了化合物58(產(chǎn)率44％)，為無色粘稠的油狀物。[α]＝-12°(c＝0.308，CHCl3)。CIMS 497(MH+)，519(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.90-5.83(m，2H)，4.64-4.48(m，4H)，3.53-3,34(m，4H)，1.74(m，4H)，1.26和1.23(分別是s，分別是6H)，0.88(t，6H)；IRcm-12966，1798，1651.元素分析C22H32N4O5S2的計算值C，53.20；H，6.49；N，11.28。實測值C，53.36；H，6.58；N，10.64。
化合物59 采用方法C的操作，但是使用(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸(按照WO 96/40633中描述的方法制得的)以替代(4R)-3-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-4-噻唑烷甲酸，用煙酰肼替代肼，獲得了化合物59，為無色固體，熔點為161-163℃(產(chǎn)率42％)。CIMS 361(MH+)，383(M+Na+).1H NMR(CDCl3)δ9.06(d，1H)，8.74(m，1H)，8.14(d，1H)，7.37(m，1H)，4.68(m，1H)，3.52(t，2H)，2.39(m，1H)，2.14(m，2H)，2.00(m，1H)，1.81-1.61(m，4H).IR(KBr)cm-13296，2965，2883，1702，1664，1640，1590，1518.元素分析C18H24N4O4的計算值C，59.99；H，6.71；N，15.55。實測值C，59.88；H，6.63；N，15.38。
化合物60 采用方法F的操作，使用化合物59作為反應(yīng)物，獲得了化合物60，為無色固體(產(chǎn)率79％)，熔點為96-97℃。CIMS 343(MH+)，365(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.25(d，1H)，8.78(m，1H)，8.34(dd，1H)，7.47(m，1H)，5.43(d，d，1H)，3.67(t，2H)，2.47-2.08(m，2H)，1.85-1.73(m，2H)，1.26和1.23(分別是s，分別是3H)，0.87(t，3H).IR(KBr)cm-12969，2883，1701，1638，1431.元素分析C18H22N4O3的計算值C，63.14；H，6.48；N，16.36。實測值C，62.91；H，6.37；N，16.27。
化合物61 采用方法A的操作，使用(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基丁基)-2-吡咯烷甲酸(基本上按照WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)作為反應(yīng)物，獲得了化合物61，為無色固體(產(chǎn)率28％)，熔點為108-110℃。CIMS 451(MH+)，473(M+Na+)，449(M-H)。[α]＝-116.1°(c＝0.274，CHCl3)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.11(s，2H)，4.62(m，2H)，3.47(t，4H)，2.50-2.37(m，2H)，2.15-1.85(m，4H)，1.29(s，18H).IR(KBr)cm-13279，2976，2879，1707，1639，1446.元素分析C22H34N4O6.0.35H2O的計算值C，57.84；H，7.66；N，12.26.實測值C，58.10；H，7.75；N，11.98。
化合物61 采用方法B的操作，使用(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基丁基)-2-吡咯烷甲酸(基本上按照WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)作為反應(yīng)物，并使用N-甲基嗎啉(NMM)作為堿以替代三乙胺“Et3N″，獲得了化合物61(產(chǎn)率73％)，其在各方面均與通過方法A獲得的化合物相同。
化合物62 采用方法D的操作，使用化合物61作為反應(yīng)物，獲得了化合物62(產(chǎn)率42.5％)，熔點為138-141℃。[α]＝-82.5°(c＝0.282，CHCl3)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.34-5.29(m，2H)，3.63-3.55(m，4H)，2.40-2.00(m，8H)，1.27(s，18H).IR(KBr)cm-12958，1705，1636，1582，1560，1438.元素分析C22H32N4O5的計算值C，61.09；H，7.46；N，12.95。實測值C，61.05；H，7.44；N，12.88。
化合物62
采用方法H的操作，但是使用二甲基丙酮酸以替代噻吩-2-乙醛酸，獲得了化合物62(0.030g，產(chǎn)率13.5％)，其在各方面均與通過方法D獲得的化合物相同。
化合物63 采用方法A的操作，但是使用(2R)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-哌啶甲酸(基本上按照WO 96/40633中描述的制備(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸的方法制得的)作為反應(yīng)物以替代(2S)-1-(1，2-二氧代-3，3-二甲基戊基)-2-吡咯烷甲酸，并使用氯甲酸異丁酯來替代氯甲酸乙酯，獲得了化合物63，為無色泡沫狀固體(產(chǎn)率37％)，熔點為179-180℃。[α]＝+101°(c＝0.474，CHCl3)。CIMS 479(MH+)，501(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)9.13(br s，2H)，4.61(dd，2H)，3.49(m，4H)，2.39-2.34(m，2H)，2.16-1.86(m，6H)，1.84-1.61(m，4H)，1.25和1.21(分別是s，分別是6H)，0.87(t，6H).IR(KBr)cm-13263，2970，2880，1705，1684，1636，1614，1567，1444.元素分析C24H38N4O5的計算值C，60.23；H，8.00；N，11.71。實測值C，59.96；H，7.92；N，11.55。
化合物64 采用方法D的操作，使用化合物63作為反應(yīng)物，獲得了化合物64，為乳白色固體(產(chǎn)率85％)，熔點為123-124℃。[α]＝+72.2°(c＝0.248，CHCl3)。CIMS 461(MH+)，483(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)5.32(dd，2H)，3.68-3.53(m，4H)，2.41-2.02(m，8H)，1.83-1.58(m，4H)，1.23和1.20(分別是s，分別是3H)，0,86(t，6H).IR(KBr)cm-12973，1705，1639，1574，1463，1432，1383，1096.元素分析C24H36N4O5的計算值C，62.59；H，7.88；N，12.16。實測值C，62.74；H，7.81；N，12.10。
化合物65 采用方法B的操作，但是使用吡啶甲基酰肼以替代肼，獲得了化合物65，為乳白色固體(產(chǎn)率71％)，熔點為182-185℃。[α]＝-67.0°(c＝0.26，CHCl3)。CIMS 361(MH+)，383(M+Na+)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)
10.00(br s，1H)，9.39(br s，1H)，8.57(d，1H)，8.15(d，1H)，7.86(dt，1H)，7.48-7.44(m，1H)，4.75-4.71(m，1H)，3.53-3.47(m，2H)，2.52-2.39(m，1H)，2.34-1.88(m，4H)，1.85-1.67(m，4H)，1.28和1.24(分別是s，分別是3H)，0.89(t，3H).IR(KBr)cm-13270，2972，2880，1703，1640.元素分析C18H24N4O4.0.5H2O的計算值C，58.52；H，6.82；N，15.17。實測值C，58.53；H，6.44；N，14.90。
化合物66 采用方法F的操作，使用化合物65作為反應(yīng)物，獲得了化合物66，為無色固體結(jié)晶(產(chǎn)率75％)，熔點為70-72℃。CIMS 343(MH+)，365(M+Na+)。[α]＝-36.8°(c＝0.280，CHCl3)。1H NMR(CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ(對于主要的反式旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)8.77(d，1H)，8.23(d，1H)，7.89(d，t 1H)，5.45(dd 1H)，3.76-3.62(m，2H)，2.44-2.05(m，4H)，1.86-1.63(m，2H)，1.27和1.23(分別是s，分別是3H)，0.87(t，3H).IR(KBr)cm-12973，1701，1636，1588，1562，1552，1463，1441.元素分析C18H22N4O3.0.25H2O的計算值C，62.32；H，6.54；N，16.15。實測值C，62.24；H，6.38；N，16.36。
IV.生物測定與活性實施例1和4的體外活性結(jié)果顯示在表2中。實施例2和3詳細描述了制備在實施例4中使用的細胞培養(yǎng)物的方法。實施例5的體外活性結(jié)果顯示在表3中。實施例6的體內(nèi)活性結(jié)果顯示在附圖1中。
A.體外生物活性實施例1脊神經(jīng)節(jié)(DRG)培養(yǎng)物從新生或1天大小的CD大鼠中切下來DRG，并置于放在冰上的PBS內(nèi)。用無菌鋪平板培養(yǎng)基洗滌2次后，用#7曲形鉗將DRG轉(zhuǎn)移到用聚鳥氨酸/昆布氨酸包被的6-孔平板(Becton Dickinson Labware)的空孔中。然后非常輕微地加入3ml/孔鋪平板培養(yǎng)基以不影響DRG。鋪平板培養(yǎng)基是Leibovitz’s L-15培養(yǎng)基(Gibco)加0.6％葡萄糖，33mM KCl，10％FCS，10mM Hepes和青霉素/鏈霉素/谷酰胺。在約37℃于5％CO2的培養(yǎng)過夜后，用3mL/孔含有載體(DMSO，1/200,000)、陽性對照(2-4ng/mL NGF)或測試化合物(50-250nM)的測定培養(yǎng)基[Leibovitz’s L-15培養(yǎng)基加0.6％葡萄糖，1％FCS，1％N-2補充物(Gibco)，10μM ara-C，10mM Hepes，和青霉素/鏈霉素/谷酰胺]來替換該培養(yǎng)基。所有培養(yǎng)基都是在當天新制備的。在第1-5天通過顯微鏡測定DRG的軸突分枝。在最適的條件下，載體處理沒有引起從DRG的軸突分枝。如果本發(fā)明化合物引起≥1個DRG直徑的軸突則認為實驗為陽性(+)。
B.細胞培養(yǎng)物測定實施例2原始大鼠海馬細胞從18天大小的大鼠胚胎腦中切下來海馬細胞，并用胰蛋白酶(1mg/mL)分離和研制。將細胞以30,000個細胞/孔的濃度接種到填充有100μL MEM和10％FBS的96-孔平板中。在培養(yǎng)的第7天，用4％低聚甲醛將細胞固定，并進行免疫熒光測定。
實施例3人M17成神經(jīng)細胞瘤細胞將M17人成神經(jīng)細胞瘤在具有1×NEAA和10％FBS的1∶1的EMEM和Ham’s F12中培養(yǎng)。培養(yǎng)基含有1×PSN抗生素，并每隔一天交換一次，使細胞經(jīng)過接近融合的對數(shù)期。
表2體外神經(jīng)營養(yǎng)活性化合物 DRG 大鼠海馬 M17細胞反應(yīng) 細胞反應(yīng)1 - NA 1033 - NA NA4 + 111，123 134，1118 NT NA NA9 NT NA NA10 NT NA NA11 + NA NA13 - NA 10214 NT 116 112，10815 NT NA NA19 NT 109 11024 +，+，+，+，- 119，104，10812325 NT 108 11126 NT 133 NA27 NT NA NA28 NT NA NT29 NT NA NA30 +，+，+，+，+ 161，118，130112，10331 +，+，+，+，+，+，-124 11132 NT NA 10333 NT 112 10434 NT 113 10635 NT 126 10636 NT NA 11037 NT 130 11138 NT 129 10539 NT NA 11243 NT 120 10844 NT NA11845 NT NANA46 NT NANA47 NT NANT48 NT 113 NT49 NT NANT50 NT 110 NT51 NT 107 NT52 NT 110 NT53 NT NANT54 NT 113 NT55 NT 116 NT56 NT 118，116 NT57 NT NANT58 NT 142 NT59 NT 116 NT60 NT 114 NT62 NT 120 NT63 NT 110 NT64 NT 122 NT+＝對每個實驗為陽性結(jié)果-＝對每個實驗為陰性結(jié)果NA＝?jīng)]有活性NT＝?jīng)]有測試實施例4軸突分枝測定將培養(yǎng)物與標準馬血清(1∶50；Vector Labs)一起培養(yǎng)約20分鐘，洗滌，然后與原始抗體、微管相關(guān)蛋白2(抗-鼠MAP-2；1∶1000；Chemicon)在約室溫培養(yǎng)約2小時。與原始抗體培養(yǎng)后，將培養(yǎng)物洗滌，并與熒光素抗-鼠IgG(吸收的大鼠；1∶50；Vector Labs)培養(yǎng)約1小時。與熒光素培養(yǎng)后，將培養(yǎng)物洗滌，并在PBS中在熒光平板讀數(shù)器上讀數(shù)(激發(fā)485nm；發(fā)射530nm)。如果軸突分枝反應(yīng)大于在同一平板上的平均DMSO處理對照反應(yīng)，則化合物視為有活性。測試化合物的反應(yīng)以占DMSO處理對照的百分比表示。信噪分離是一致的DMSO對照孔的熒光比空白孔大至少2倍。
實施例5煙堿性乙酰膽堿受體結(jié)合測定使用得自大鼠腦皮層、紋狀體和海馬的突觸膜粗制備物實現(xiàn)3H-野靛堿與神經(jīng)原煙堿性乙酰膽堿受體結(jié)合。將新鮮或冷凍的膜在50體積的10mM HEPES(N-2-羥基乙基哌嗪-N’-2-乙磺酸，pH 7.4)中均化，并以42,000g離心。將P2部分重懸在40體積的10mM HEPES中，并以42,000g離心。重復(fù)該步驟，并將P2部分重懸在25體積(例如1g組織懸浮在25mL中)的由下述組分構(gòu)成的培養(yǎng)基中Na+-HEPES緩沖液(10mM，pH 7.4)，5mM MgCl2，0.01％粉化的牛血清白蛋白(BSA)和100mM NaCl。為了開始結(jié)合反應(yīng)，用吸量管將本發(fā)明化合物(100μl)、Na-HEPES緩沖的培養(yǎng)基(400μL)、3H-野靛堿(250μL)和生物膜懸浮液(250μL)加到試管中，將其中的內(nèi)容物混合，然后在約23℃培養(yǎng)約40分鐘。通過使用Brandel Cell Harvester過濾來終止結(jié)合反應(yīng)；對于每份樣本，使用Wallac LKB 1205 Betaplate液體閃爍計數(shù)器定量測定結(jié)合的3H-野靛堿的量。所有化合物都是以一式四份以10μM篩選。使用10μM(+)-epibatidine阻斷所有3H-野靛堿與α-4，β-2煙堿性乙酰膽堿受體(α4β2nAChR)的結(jié)合來確定非特異性結(jié)合。如下所述計算各測試化合物的活性校正非特異性結(jié)合后，計算特異性結(jié)合(總結(jié)合減去非特異性結(jié)合)的抑制百分比。以5個濃度進一步測定各活性化合物以產(chǎn)生濃度-抑制曲線。通過使用標準回歸程序進行數(shù)據(jù)的非線性回歸分析來計算IC50值。
表3測試化合物對煙堿性乙酰膽堿受體的結(jié)合親和力(IC50nM)化合物IC50(nM)6 80117 63.8
本發(fā)明提供了使用化合物6和17以及包含相同化合物的藥物組合物來治療帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、焦慮、注意力不足活動過強癥、“ADHD”、Turret氏綜合征、吸煙成癮和疼痛。
C.體內(nèi)生物活性實施例6大鼠面神經(jīng)壓迫模型用氯胺酮(60mg/kg)/賽拉嗪(6mg/kg)將Long-Evans大鼠麻醉。暴露出面神經(jīng)，并用鉗子在單側(cè)莖突乳突孔機械壓迫面神經(jīng)，把相反的未損傷一側(cè)用作內(nèi)對照。神經(jīng)壓迫引起腮須肌肉麻痹，由此降低了在損傷一側(cè)的腮須動作(從麻醉恢復(fù)后即刻觀察到的)。手術(shù)后大鼠以約20mg/kg的劑量口服接受測試化合物，每天給藥2次，給藥15天。對照大鼠僅接受載體。每組測試3-8只大鼠。在不同手術(shù)后時間每天記錄腮須動作的恢復(fù)，記錄最長達2周時間，并且如附圖1所示。
權(quán)利要求
1.具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i)R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii)R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且(d)A選自COO(CH2)mAr、 (此處的R1與在(a)部分中描述的R1相同或不同)、CONR4(CH2)mAr、(CH2)mO(CH2)nAr和(CH2)nAr，(i) R4是H或C1-4烷基；(ii) Ar選自2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基和苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(iii)m是1-4；且(iv)n是0-4。
2.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
3.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
4.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
5.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
6.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
7.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
8.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
9.權(quán)利要求1的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu) 其中各個R1彼此相同或不同。
10.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
11.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
12.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
13.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
14.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
15.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
16.權(quán)利要求9的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
17.具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中R″是(C1-C4)-直鏈或支鏈烷基。
18.具有下述結(jié)構(gòu)的化合物 或其可藥用鹽，其中(a)R1選自H、COCOR2、COOR3和SO2R3，(i)R2選自O(shè)-C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈烷基、C1-6直鏈或支鏈鏈烯基、C5-7環(huán)烷基、2-噻吩基、3-噻吩基或苯基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素，且(ii)R3是苯基烷基，所述苯基具有1-3個獨立地選自下列的取代基H、低級烷基、低級烷氧基、羥基和鹵素；(b) 是4-6元雜環(huán)，其中在所述雜環(huán)中有不超過一個環(huán)原子是O或S；(c) 是5元雜環(huán)，其中所述雜環(huán)具有2-3個選自N、O和S的雜原子，至少一個這樣的雜原子是N；且(d)B是(CH2)nAr或 ，其中n為0-4。
19.權(quán)利要求18的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
20.權(quán)利要求18的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
21.權(quán)利要求18的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
22.權(quán)利要求18的化合物，它具有下述結(jié)構(gòu)
23.刺激神經(jīng)元生長的方法，包括使神經(jīng)元與有效量的 1、17或18的化合物接觸。
24.包含權(quán)利要求1、17或18的化合物與可藥用載體的藥物組合物。
25.治療患有其特征是疾病或創(chuàng)傷引起的神經(jīng)元損傷的病癥的個體的方法，包括給所述個體施用治療有效量的權(quán)利要求24的藥物組合物。
26.權(quán)利要求25的方法，其中所述病癥是由疾病引起的，并選自帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。
27.權(quán)利要求25的方法，其中所述病癥是由腦、脊髓、或外周神經(jīng)創(chuàng)傷引起的。
28.抑制個體中其特征是疾病引起的神經(jīng)元損傷的病癥發(fā)作的方法，包括給所述個體施用預(yù)防有效量的權(quán)利要求24的藥物組合物。
29.權(quán)利要求28的方法，其中所述病癥選自帕金森氏病、阿爾茨海默氏病、中風(fēng)、多發(fā)性硬化、肌萎縮性側(cè)索硬化、糖尿病性神經(jīng)病和貝爾麻痹。
全文摘要
本發(fā)明提供了具有通式結(jié)構(gòu)(I)、(II)、(III)的化合物。本發(fā)明還提供了包含所述化合物的藥物組合物,以及使用這些組合物來治療和預(yù)防其特征是神經(jīng)元損傷的病癥的方法。
文檔編號A61P25/00GK1382140SQ00812744
公開日2002年11月27日 申請日期2000年6月14日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月9日
發(fā)明者R·M·卡諾加, A·D·喬丹, A·B·雷茨, M·J·馬茨拉格, B·趙 申請人:奧索-麥克尼爾藥品公司