四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】。該檢測方法首先制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸；然后將淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內(nèi)切酶、不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶和酶反應(yīng)的緩沖溶液反應(yīng)，得到混合溶液；最后將得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應(yīng)，對甲基轉(zhuǎn)移酶的活性進(jìn)行檢測。本發(fā)明還提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用。本發(fā)明的檢測方法簡單、快速、靈敏度高。
【專利說明】四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制 劑濃度上的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性 和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 帶有電荷的熒光共軛聚合物，能與帶相反電荷的熒光淬滅分子發(fā)生相互作用。促 成淬滅的激發(fā)態(tài)能通過電荷（或能量）轉(zhuǎn)移在共軛聚合物的大量重復(fù)單元中連續(xù)傳遞， 從而少量的淬滅分子就可以使聚合物的熒光發(fā)生高效淬滅。研究者們基于這個原理，發(fā) 展出了許多相關(guān)的生物分析，生物傳感新方法。例如，將熒光共軛聚合物和淬滅分子共價 修飾到具有發(fā)卡（hairpin)結(jié)構(gòu)的核酸分子兩端，可以得到具有超淬滅性質(zhì)的分子信標(biāo) (molecularbeacon)。突光共軛聚合物的突光被淬滅分子高效淬滅，當(dāng)加入與之互補(bǔ)的核 酸鏈時，發(fā)卡結(jié)構(gòu)被打開，聚合物的熒光恢復(fù)。基于此實(shí)現(xiàn)對核酸分子的靈敏檢測（Angew. Chem. Int. Ed. 2005, 44, 2572 - 2576)。又如，帶有負(fù)電荷的熒光共軛聚合物因?yàn)殪o電吸引 和帶正電荷的淬滅分子相互接近，從而熒光淬滅。而淬滅分子修飾了乙酰膽堿酯（ACh)的 衍生物，可以被乙酰膽堿酯酶（AChE)水解而生成帶負(fù)電荷的分子。這樣一來，淬滅分子因 靜電排斥而遠(yuǎn)離熒光共軛聚合物，熒光恢復(fù)?；诖藢?shí)現(xiàn)對乙酰膽堿酯酶活性的靈敏檢測 (Angew. Chem. Int. Ed. 2007, 46, 7882 - 7886) 〇
[0003] 現(xiàn)有報道的超淬滅方法都是針對熒光共軛聚合物的，而熒光共軛聚合物的合成繁 瑣，費(fèi)時，成本高，其較差的水溶性和生物相容性也限制了在生物分析，生物傳感中的進(jìn)一 步應(yīng)用。
[0004] 與熒光共軛聚合物將重復(fù)的熒光單體共價連接不同，熒光小分子可以通過次極力 (如靜電作用等）形成非共價的聚集體，該聚集體的熒光同樣可以被淬滅分子高效淬滅。由 于熒光小分子合成容易，水溶性及生物相容性好，在生物分析和生物傳感發(fā)面具有更好的 應(yīng)用前景。四苯乙烯（TPE)是一種十分經(jīng)典的具有AIE性質(zhì)的有機(jī)小分子，它的AIE性質(zhì) 在此前的文獻(xiàn)里已有大量報道。唐本忠等人報道過帶有正電荷的四苯乙烯衍生物及其制備 方法（Chem. Eur. J. 2008, 14, 6428 - 6437 ;Chem. Eur. J. 2010, 16, 1232 - 1245)，現(xiàn)有技術(shù)中 還沒有將帶有正電荷的四苯乙烯衍生物用于檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑方 面的報道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性和甲基轉(zhuǎn)移酶抑制 劑濃度上的應(yīng)用，該四苯乙烯衍生物具有較高的水溶性和生物相容性，且檢測靈敏度高。
[0006] 本發(fā)明首先提供四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用。
[0007] 優(yōu)選的是，所述的四苯乙烯衍生物檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性的方法，包括：
[0008] 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸；
[0009] 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內(nèi) 切酶、不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶和酶反應(yīng)的緩沖溶液反應(yīng)，得到混合溶液；
[0010] 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應(yīng)，對甲基轉(zhuǎn)移酶 的活性進(jìn)行檢測。
[0011] 優(yōu)選的是，所述的甲基轉(zhuǎn)移酶為Dam、HpaII MTase或MSssI。
[0012] 優(yōu)選的是，所述的甲基轉(zhuǎn)移酶的濃度范圍為0_160U/mL。
[0013] 優(yōu)選的是，所述的步驟二的反應(yīng)是先在37°C反應(yīng)5h，然后再升溫至90°C反應(yīng) 10min〇
[0014] 優(yōu)選的是，所述的四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
[0015]

【權(quán)利要求】
1. 四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，其特征在 于，四苯乙烯衍生物檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性的方法，包括 ： 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸； 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內(nèi)切 酶、不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶和酶反應(yīng)的緩沖溶液反應(yīng)，得到混合溶液； 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應(yīng)，對甲基轉(zhuǎn)移酶的活 性進(jìn)行檢測。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，其特征在 于，所述的甲基轉(zhuǎn)移酶為Dam、Hpall MTase或M. SssI。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，其特征在 于，所述的甲基轉(zhuǎn)移酶的濃度范圍為0-160U/mL。
5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，其特征在 于，所述的步驟二的反應(yīng)是先在37°C反應(yīng)5h，然后再升溫至90°C反應(yīng)lOmin。
6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶活性上的應(yīng)用，其特征在 于，所述的四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
7. 四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用。
8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用，其 特征在于，四苯乙烯衍生物檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑的方法，包括 ： 步驟一：制備淬滅分子修飾的雙鏈核酸； 步驟二：將步驟一得到的淬滅分子修飾的雙鏈核酸與S-腺苷甲硫氨酸、限制性內(nèi)切 酶、甲基轉(zhuǎn)移酶、不同濃度的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑和酶反應(yīng)的緩沖溶液反應(yīng)，得到混合溶液； 步驟三：將步驟二得到的混合溶液與四苯乙烯衍生物水溶液反應(yīng)，對甲基轉(zhuǎn)移酶抑制 劑的濃度進(jìn)行檢測。
9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用，其 特征在于，所述的甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑為慶大霉素、5-氟尿嘧啶、卞青霉素或絲裂霉素。
10. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的四苯乙烯衍生物在檢測甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑濃度上的應(yīng)用， 其特征在于，所述的四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式為：
【文檔編號】C12Q1/68GK104195242SQ201410417947
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年8月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月20日
【發(fā)明者】于聰, 陳健, 王燕, 李文英, 周會鵬, 李永新 申請人:中國科學(xué)院長春應(yīng)用化學(xué)研究所