專利名稱：用于控制食品應(yīng)用中的革蘭氏陽(yáng)性菌的抗菌組合物的制作方法
背景技術(shù)：
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明公開(kāi)一種通過(guò)用組合物處理而抑制或阻止食品上的細(xì)菌過(guò)生長(zhǎng)的方法，所述組合物包含一種或多種啤酒花酸提取物或改性啤酒花酸提取物以及一種或多種來(lái)自羊毛硫抗生素、片球菌素、乳鏈球菌素類細(xì)菌素和/或分解酶類的安全和合適的革蘭氏陽(yáng)性制菌劑或殺菌制劑。更具體地說(shuō)，本方法包括，將一種包含乳鏈菌肽和/或溶菌酶和β啤酒花酸的組合物用作組分或應(yīng)用在食品表面以便減少或消除革蘭氏陽(yáng)性腐敗菌或病原菌，特別是有害病原體單核細(xì)胞增生利斯特氏菌(Listeria monocytogenes)的全部菌株。一個(gè)涉及公共衛(wèi)生的重要方面是病原性利斯特氏菌菌種(特別是單核細(xì)胞增生利斯特氏菌)在商業(yè)冷藏溫度(加工的食品通常在該溫度下長(zhǎng)期儲(chǔ)存)下生長(zhǎng)的能力。這種在配給品的標(biāo)準(zhǔn)條件下生長(zhǎng)的能力使單核細(xì)胞增生利斯特氏菌成為與當(dāng)今的原料食品和加工食品相關(guān)的最危害公共衛(wèi)生的因素之一。任何新型抗微生物體系都必須在商業(yè)食品系統(tǒng)中有效，配方和溫度條件反映實(shí)際應(yīng)用。本專利的新組合物對(duì)各種食品都有效，特別是在利斯特氏菌污染危害的食品典型的冷藏溫度和加工溫度下。
2.技術(shù)描述1994年的CAST報(bào)告(食物傳染病原體危險(xiǎn)和后果。Task ForceReport No.122，農(nóng)業(yè)科學(xué)和技術(shù)委員會(huì)(Council for AgriculturalScience and Technology)，Washington D.C.)定量地記載了美國(guó)的食物傳染和食物中毒的程度，在過(guò)去數(shù)年中由于更好的報(bào)告體系和程序而廣泛地說(shuō)明了食物傳染和食物中毒的程度(CDC.1988c.1997最后的FoodNet監(jiān)督報(bào)告。U.S.Department of Health and HumanServices，1998年10月)。為了減少李斯特菌病和其它食物傳染的流行，人們開(kāi)展了廣泛研究以開(kāi)發(fā)起食品級(jí)抗菌成分的作用的組合物。該研究中公開(kāi)了，單種化合物具有很小的(如果有的話)商業(yè)益處或用途，主要是由于單一的化合物通常缺乏效果或太貴而不適用于食品加工和制品中。此時(shí)，仍需要更好地控制革蘭氏陽(yáng)性病原體，例如，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、產(chǎn)氣莢膜梭菌(C.perfringens)等，它們嚴(yán)重危害消費(fèi)者的健康。此外，還已知其它革蘭氏陽(yáng)性腐敗菌[例如，乳桿菌(lactobacilli)、鏈球菌(streptococci)、芽孢桿菌(bacilli)、腸球菌(enterococci)和微球菌(micrococci)菌種]也引起腐敗(雖然通常不致病)，所以，常常是降低選定的食物儲(chǔ)藏期限和新鮮度的主要作用劑。
病原菌和腐敗菌都可能出現(xiàn)在原料食品中，但熱加工傾向于急劇減小細(xì)菌接種量。加工后，當(dāng)它們可能暴露于食品加工環(huán)境中的病原體時(shí)，大多數(shù)食品在包裝、分配和最后的消費(fèi)以前具有再次污染的危險(xiǎn)。甚至在最潔凈的加工設(shè)施中，選定的病原體也可能污染已加工的食物(通常以很低的水平)。至于耐寒冷的病原體(主要是各種利斯特氏菌菌種)，它們就可能在分配和儲(chǔ)存期間在食物上未受抑制地生長(zhǎng)直至最后消費(fèi)。這樣的病原體在食品中生長(zhǎng)愈多，所述食品的消費(fèi)者中感染的危險(xiǎn)性就愈高。這對(duì)于熟肉制品和乳制品來(lái)說(shuō)尤其嚴(yán)重，因?yàn)檫@樣的食物被消費(fèi)者消費(fèi)前不再被加熱或加工。在這些情況下，最可能的危害來(lái)自在冷藏時(shí)良好生長(zhǎng)的利斯特氏菌菌種。人們認(rèn)識(shí)到，任何病原體的高水平消費(fèi)增大感染的危害(特別是在幼兒、老年人、孕婦中)，從而增大任何免疫妥協(xié)個(gè)體的危險(xiǎn)性。
在1998年，估計(jì)美國(guó)有大約500人死于可能因食物引起的李斯特菌病。在大多數(shù)食物病原體中，李斯特菌病具有最高的死亡率，根據(jù)Meade等的報(bào)導(dǎo)超過(guò)20％(在美國(guó)食物相關(guān)的疾病和死亡，CDC 55，Sept-Oct 1999)。鑒于上述危害和大的社會(huì)費(fèi)用，美國(guó)公共衛(wèi)生署、食品與藥物管理局(FDA)和美國(guó)農(nóng)業(yè)部(USDA)都認(rèn)識(shí)到急需防止利斯特氏菌生長(zhǎng)的體系。本發(fā)明的主題是一種新型食品級(jí)(通常認(rèn)為是安全的)中性香味組合物，它針對(duì)實(shí)際食品體系(尤其是加工好的熟肉制品)中的利斯特氏菌。希望這樣的組合物的效果是殺死或減少食品中的利斯特氏菌水平，所述食品有受這類菌屬的后加工存活或感染的危險(xiǎn)。此外，還注意到食品中與其它革蘭氏陽(yáng)性菌[包括上述腐敗菌類，以及不常見(jiàn)的棒狀菌(Corynebacteria)屬、雙球菌(Diplococci)屬、分枝桿菌(Mycobacteria)屬、鏈球菌屬和鏈霉菌(Streptomyces)屬]相關(guān)的危害問(wèn)題，可能從這樣的方法或組合物受益。
在1992和1993年，美國(guó)專利Nos.5,096,718和5,260,061公開(kāi)了在某些食物中應(yīng)用丙酸桿菌(propionic acid bacteria)的代謝物以延長(zhǎng)處理的食品的儲(chǔ)藏期限。這些代謝物顯示增強(qiáng)的抗革蘭氏陰性菌的效果，但遺憾的是，不能有效抗革蘭氏陽(yáng)性菌。
美國(guó)專利No.5,217,950啟示了乳鏈菌肽組合物作為殺細(xì)菌劑的應(yīng)用。乳鏈菌肽是一種羊毛硫抗生素，更具體地說(shuō)，是一種在自然界通過(guò)細(xì)菌乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)的各種菌株生產(chǎn)的具有抗微生物性能的多肽。乳鏈菌肽確實(shí)主要是抗革蘭氏陽(yáng)性菌；然而，常見(jiàn)的革蘭氏陽(yáng)性病原體單核細(xì)胞增生利斯特氏菌比大多數(shù)其它革蘭氏陽(yáng)性菌屬更耐乳鏈菌肽。人們充分認(rèn)識(shí)到增強(qiáng)乳鏈菌肽抗單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的活性的需要，該需要也是由于乳鏈菌肽本身不能用作商用抗利斯特氏菌劑這一事實(shí)的緣故。所以，5,217,950專利啟示了，將螯合劑[例如，乙二胺四乙酸二鈉(EDTA)或其它乙酸鹽或檸檬酸鹽]與乳鏈菌肽組合而產(chǎn)生更寬范圍的抗利斯特氏菌屬和選定的革蘭氏陰性菌的活性。
美國(guó)專利Nos.5,573,797；5,593,800和5,573,801公開(kāi)了抗菌組合物，它們包含鏈球菌屬或片球菌屬(Pediococcus)產(chǎn)生的細(xì)菌素或者合成的等效抗菌劑與螯合劑的組合。或者通過(guò)直接涂布或者通過(guò)將組合物結(jié)合到與食品表面緊密接觸的柔性薄膜腸衣上而將組合物涂到待處理的食品的表面。所述螯合劑結(jié)合革蘭氏陰性細(xì)胞外膜中的自由二價(jià)陽(yáng)離子，改善抗菌劑的滲透性。至于5,573,801專利，公開(kāi)了將乳鏈菌肽單獨(dú)應(yīng)用到煮熟的肉表面，但是這種單組分的效果如此有限以致它還不能被商用。
美國(guó)專利5,458,876啟示了，將羊毛硫抗生素(例如乳鏈菌肽)與溶菌酶組合作為抗菌劑。在此情況下，溶菌酶分解細(xì)胞壁并破壞靶細(xì)胞的結(jié)構(gòu)規(guī)整性，于是，抗菌劑在破壞或殺傷細(xì)菌細(xì)胞中變得更有效。具體地說(shuō)，證明這種組合可有效改善乳鏈菌肽抗單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的抗菌效果，導(dǎo)致以安全的和應(yīng)用的合適水平顯著減少利斯特氏菌(雖然不是完全消滅)。
EP 0 466 244公開(kāi)了一種具有改良的抗菌性的組合物，它包含下列每組化合物的至少一組的混合物(I)細(xì)胞壁溶解物質(zhì)或其鹽，(II)抗菌化合物以及(III)輔助劑，它選自用于食品或化妝品或個(gè)人衛(wèi)生可接受的有機(jī)酸或者這些酸的鹽，磷酸鹽和縮聚磷酸鹽或相應(yīng)的酸，以及其它螯合劑。優(yōu)選的是，(I)是溶菌酶，(II)可以是細(xì)菌素(例如，乳鏈菌肽或片球菌素)，而(III)則可以是乙酸、二乙酸鈉、乳酸、檸檬酸、丙酸、酒石酸、正磷酸鹽、六偏磷酸鹽、三聚磷酸鹽、其它多磷酸鹽或者含取代的或未取代的氨基的螯合劑(例如EDTA)。
EP 0 453 860啟示了乳鏈菌肽與在5.5～6.5的pH范圍內(nèi)有效的磷酸鹽緩沖液的組合以消滅表面的革蘭氏陰性菌。
WO 97/23136啟示了一種細(xì)菌消毒方法，它包括，用低濃度堿金屬正磷酸鹽溶液與滲壓震擾和/或溶菌酶溶液和/或乳鏈菌肽溶液組合的處理。此文獻(xiàn)測(cè)試了低濃度正磷酸三鈉與溶菌酶組合而抗萵苣葉或雞皮膚上的某些細(xì)菌，以及低濃度正磷酸三鈉與乳鏈菌肽組合而抗雞皮膚上的某些細(xì)菌。
公布的澳大利亞專利申請(qǐng)AU-A-18604/88公開(kāi)了應(yīng)用含有N-乙酰胞壁質(zhì)酶(例如溶菌酶)與用于保藏食料的非酶防腐劑的細(xì)菌溶解酶產(chǎn)品。此出版物中提及的非酶防腐劑是絡(luò)合劑，例如，檸檬酸和EDTA，氨基酸，特別是氨基酸(例如，半胱氨酸、丙氨酸、酪氨酸和甘氨酸)，以及核苷和核苷酸(例如肌苷5′-肌苷一磷酸)或者磷酸鹽(例如，焦磷酸四鈉(二磷酸鹽)、三聚磷酸鈉(三磷酸鹽)和多磷酸鹽)或者變紅劑(例如堿金屬硝酸鹽)。
美國(guó)專利No.5,286,506公開(kāi)了啤酒花的脂溶性β酸提取物的應(yīng)用，即，應(yīng)用它們抗食品中單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的制菌效果(以食物重量的6～50ppm的含量)。此外，美國(guó)專利Nos.5,370,863和5,455,038啟示了，某些被化學(xué)氫化的啤酒花酸衍生物可能具有抗利斯特氏菌菌種的抗菌活性。然而，這些提取物不是食品級(jí)(GRAS)的，所以，不允許用于釀造以外的食品中。
最后，Johnson等在國(guó)際食品微生物學(xué)雜志(InternationalJournal of Food Microbiology)，33(1996)，195～207中公開(kāi)了，啤酒花酸和啤酒花酸衍生物在含脂肪的食品(例如，干酪、肉、調(diào)味汁和佐料)中具有有限的抗利斯特氏菌菌種的效果，可能是由于β酸遷移入或被包埋于脂肪乳液中，所以，它們不能抑制食品乳液水相中的細(xì)菌生長(zhǎng)。啤酒花β酸在含脂肪的食品中缺乏活性的問(wèn)題使它們不能被商用作為天然抗微生物劑而控制利斯特氏菌或其它革蘭氏陽(yáng)性病原體。
至完成本專利申請(qǐng)所需的程度，所有上述引用的文獻(xiàn)都特意并入作參考。
根據(jù)上述啟示，在本領(lǐng)域仍需要一種用殺菌組合物處理食品的方法，所述組合物在處于革蘭氏陽(yáng)性病原體的危險(xiǎn)中的常規(guī)食品應(yīng)用中在合理的用量水平下具有活性。更具體地說(shuō)，需要可被方便地結(jié)合入這些食品的現(xiàn)有加工方案的有效處理。最后，需要通過(guò)應(yīng)用安全、合適的和成本低的食品級(jí)抗微生物組分(例如乳鏈菌肽、溶菌酶和啤酒花酸)而更完全和有效的減少或者甚至消除有害的革蘭氏陽(yáng)性病原體。
發(fā)明簡(jiǎn)述現(xiàn)在很意外地發(fā)現(xiàn)了，一種這樣的組合物，即，它具有第一種組分，該組分包括一種或多種來(lái)自下類物質(zhì)的一種或多種的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素和/或乳鏈球菌素類細(xì)菌素，或者分解酶，以及第二種組分，該組分包括一種或多種天然啤酒花酸或啤酒花樹(shù)脂或其衍生物，所述組合物通過(guò)顯著勝過(guò)任何單組分的或以前公開(kāi)的組合物的效果而提供優(yōu)良的抗菌性能，特別是抗可能有害的利斯特氏菌屬細(xì)菌。
本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案包括一種抗菌組合物，它包含作為第一種組分的(a)一種或多種來(lái)自下類物質(zhì)的一種或多種的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素，和/或溶菌酶(一種來(lái)自蛋白的天然酶)；以及作為第二種組分的(b)一種或多種啤酒花酸或啤酒花酸衍生物或者啤酒花樹(shù)脂或啤酒花樹(shù)脂衍生物。特別優(yōu)選的是一種包含羊毛硫抗生素細(xì)菌素、溶菌酶和β啤酒花酸提取物的組合物。
在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種阻止生長(zhǎng)、減少存活數(shù)、或者全部消滅食品中的革蘭氏陽(yáng)性菌(特別是單核細(xì)胞增生利斯特氏菌)的方法，它包括用有效量的一種組合物處理所述食品表面的步驟，所述組合物包含作為第一種組分的(a)一種或多種來(lái)自下類物質(zhì)的一種或多種的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素，或者分解酶；以及作為第二種組分的(b)一種或多種啤酒花酸或啤酒花酸衍生物或者啤酒花樹(shù)脂或啤酒花樹(shù)脂衍生物。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種處理食品的方法，目的是為了保護(hù)食品以抗有害細(xì)菌，以及為了保持甚至在含脂肪的食品上或食品中的組合物的抗菌活性。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種新型組合物，它具有比以前觀察到的組合物單獨(dú)的組分大得多的抗菌性能。
本領(lǐng)域技術(shù)人員參照對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述將容易明白這些和其它目的。對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案的詳細(xì)描述在對(duì)優(yōu)選實(shí)施方案的描述中，為清楚起見(jiàn)而利用了一些術(shù)語(yǔ)。這樣的術(shù)語(yǔ)旨在包括敘述的實(shí)施方案，以及為了達(dá)到相似結(jié)果的相似目的而以類似方式操作的技術(shù)等同方案。
本發(fā)明提供了一種新型抗菌組合物及其在減少、阻止或全部消滅食品表面(甚至含脂肪的食品中)的有害細(xì)菌的方法中的應(yīng)用。
所述新型抗菌組合物包含(a)一種或多種來(lái)自下類物質(zhì)的一種或多種的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素，或者分解酶；以及(b)一種或多種啤酒花酸提取物或啤酒花酸衍生物或者啤酒花樹(shù)脂或啤酒花樹(shù)脂衍生物。
本發(fā)明組合物的第一種組分是具有抗革蘭氏陽(yáng)性菌的制菌或殺菌活性的一種或多種化合物。這樣的化合物優(yōu)選包括但不限于來(lái)自蛋白、貝類或其它天然源的羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素和/或溶菌酶。特別期望多于一種具有抗革蘭氏陽(yáng)性菌的制菌或殺菌活性的化合物的組合(例如，乳鏈菌肽和溶菌酶)屬于本發(fā)明第一種組分的更優(yōu)選范圍。
第一類革蘭氏陽(yáng)性制菌化合物包括羊毛硫抗生素。術(shù)語(yǔ)“羊毛硫抗生素”是Schnell等杜撰的[1988，自然(Nature)333276～278]，用于描述一組包括乳鏈菌肽的細(xì)菌素，它們包含氨基酸羊毛硫氨酸和其它“非蛋白質(zhì)”氨基酸。Kellner等綜述了這些細(xì)菌素的常見(jiàn)性能[1988，歐洲生物化學(xué)雜志(Eur.J.Biochem.)，17753～59]，其中，他們指出“...多環(huán)多肽抗生素具有高含量的不飽和氨基酸(脫氫丙氨酸、脫氫紫礦春(dehydrobutrine))和硫醚氨基酸(內(nèi)消旋羊毛硫氨酸、(2S，3S，6R)-3-甲基羊毛硫氨酸)。此外，在一些成員中見(jiàn)到了lysinoalanine、3-羥基天冬氨酸和S-(2-氨基乙烯基)-D-胱氨酸?！边@組物質(zhì)的成員包括乳鏈菌肽、枯草霉素、pep5、表皮素、gallidermin、肉桂霉素、Ro09-0198、耐久霉素和管張轉(zhuǎn)霉素。這些核蛋白體合成的肽抗生素包含19～34個(gè)氨基酸并且是通過(guò)各種微生物生產(chǎn)的，它們包括葡萄球菌、乳酸桿菌、芽孢桿菌和鏈霉菌菌種。除了它們的非蛋白質(zhì)氨基酸的獨(dú)特組成之外，還可以基于它們的特異性將它們與其它多肽抗生素區(qū)別開(kāi)來(lái)。細(xì)菌素(尤其是羊毛硫抗生素)通常的特征在于很窄的作用譜圖。所以，只有少數(shù)幾個(gè)種的細(xì)菌對(duì)實(shí)際、安全和合適濃度的特定細(xì)菌素敏感。在用于食品中的正常、合法的水平(食品體系中至多12.5ppm的純?nèi)殒溇?，這樣的細(xì)菌素傾向于至多僅僅具有制菌(即，生長(zhǎng)抑制)性能。這不同于其它廣譜多肽抗生素(例如，多粘菌素B1)，它們甚至在很低應(yīng)用水平下也有效地抗寬范圍的細(xì)菌，以及Jaynes等在公開(kāi)的國(guó)際專利申請(qǐng)WO 89/00194中討論的“裂解肽”，它們具有抗大多數(shù)細(xì)菌、酵母和甚至哺乳動(dòng)物細(xì)胞的活性。
乳鏈菌肽是一種核蛋白體編碼的肽，它有時(shí)以二聚體(具有約7000的分子量)出現(xiàn)。在它的總計(jì)34個(gè)氨基酸中包含數(shù)種不常見(jiàn)的氨基酸，包括β-甲基羊毛硫氨酸、脫氫丙氨酸和羊毛硫氨酸。在肽中有5個(gè)不尋常的硫醚鍵，這些鍵有助于它在酸溶液中的穩(wěn)定性。乳鏈菌肽是被最充分表征的細(xì)菌素之一，它享有與其它羊毛硫抗生素(例如枯草菌素和表皮素)顯著的結(jié)構(gòu)和作用的同源性[Buchman等，1988，生物化學(xué)雜志(J.Bio.Chem.)，263(31)16260～16266]。最近關(guān)于乳鏈菌肽、它的物理性能和應(yīng)用的綜述包括“乳酸桿菌的細(xì)菌素”，T.R.Klaenhammer，1988，生物化學(xué)(Biochimie)70337～349，“乳鏈菌肽”，A.Hurst，1981，應(yīng)用微生物學(xué)進(jìn)展(Adv.Appl.Microbiol.)，2785～121，以及美國(guó)專利No.4,740,593。乳鏈菌肽是一個(gè)描述幾種密切相關(guān)的物質(zhì)的集合名稱，這些物質(zhì)表現(xiàn)相似的氨基酸組成，以及一些有限的抗生活性范圍。E.Lipinska在“農(nóng)業(yè)中的抗生素和抗生作用(Antibiotics and Antibiosis in Agriculture)”(M.Woodbine編輯)，1988，pp.103～130中討論了這個(gè)現(xiàn)象。
M.Doyle；“環(huán)境和加工條件對(duì)單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的影響”，食品技術(shù)(Food Technology)，1988，42(4)169～171報(bào)導(dǎo)了乳鏈菌肽抗單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的應(yīng)用。該文獻(xiàn)描述了生物生長(zhǎng)的初始抑制(約12小時(shí))，并且報(bào)導(dǎo)了，單核細(xì)胞增生利斯特氏菌可在低到5.0的pH水平生長(zhǎng)而且抗堿性pH(能在pH9.6生長(zhǎng))。
乳鏈菌肽可從Rhodia Inc.以標(biāo)準(zhǔn)化2.5wt％的制劑商購(gòu)(商標(biāo)為NovasinTM)。還以下列形式提供含蛋白質(zhì)的羊毛硫抗生素，即，在賽達(dá)干酪或美國(guó)干酪的某些品種中以及在發(fā)酵的脫脂乳制品(被稱為MICROGARDMG300)中作為低水平發(fā)酵副產(chǎn)品。在實(shí)踐中，基于食品中的安全和合適的應(yīng)用，以約1～約100ppm(用于處理的溶液重量)活性組分(乳鏈菌肽)的量、優(yōu)選以1～12.5ppm的含量往食品中添加羊毛硫抗生素。
作為優(yōu)選的組合中應(yīng)用的羊毛硫抗生素的替代物，還已知應(yīng)用片球菌屬細(xì)菌的代謝物(特別是片球菌素)作為代用品可產(chǎn)生有效的結(jié)果。雖然片球菌素尚未獲準(zhǔn)用于食品中，但將來(lái)它們可能被接受商用。此外，新一類被稱為乳鏈球菌素的鏈球菌細(xì)菌素(特別是愛(ài)爾蘭專利申請(qǐng)No.980500中描述的乳鏈球菌素3147)應(yīng)當(dāng)產(chǎn)生相似的抗革蘭氏陽(yáng)性菌的活性。與羊毛硫抗生素一樣，已知片球菌素和乳鏈球菌素都具有主要抗有限范圍的革蘭氏陽(yáng)性菌的制菌活性。
第二類革蘭氏陽(yáng)性殺菌蛋白質(zhì)包括分解酶(特別是溶菌酶)，最常來(lái)自食品分級(jí)提取操作中的卵白蛋白，但也可得自北極扇貝、人乳、眼淚和其它天然源。當(dāng)溶菌酶被用作抗微生物劑時(shí)，將它以約20～約500ppm(用于處理的溶液重量)、更優(yōu)選約50～約200ppm的量加到食品中，主要抑制成熟干酪中的酪丁酸梭菌(Clostridiumtyrobutyricum)。在這些含量下，溶菌酶不是抗其它革蘭氏陽(yáng)性菌的殺菌劑，在更高含量(大于1000ppm，通常2000ppm或更高)下應(yīng)用它從寬范圍的革蘭氏陽(yáng)性菌除去細(xì)胞壁。
溶菌酶(胞壁質(zhì)酶；葡糖胺肽N-乙酰mucamoyl水解酶；1，4-β-N-乙酰己糖酰胺酶，E.C.3.2.1.17)都是從各種源分離的粘液溶解酶并且都是被良好地表征的酶。最先在1922年被W.Fleming發(fā)現(xiàn)的蛋白溶菌酶是最早被測(cè)序的蛋白質(zhì)之一，最早應(yīng)用X射線晶體學(xué)給出了它的三維結(jié)構(gòu)，而且最早提出了關(guān)于它的詳細(xì)作用機(jī)制。文獻(xiàn)中良好地記載了它抗革蘭氏陽(yáng)性菌的抗微生物活性，例如，V.N.Procter等在CRCCrit.Reviews in Food Science and Nutrition，1988，26(4)359～395中記載的。蛋白溶菌酶的分子量約為14,300～14,600，等電點(diǎn)是pH10.5～10.7。它由129個(gè)通過(guò)四個(gè)二硫鍵相互連接的氨基酸構(gòu)成。從其它源(包括例如大腸埃希氏菌(Escherichia coli)噬菌體T4和人眼淚這樣的不同生產(chǎn)者)分離和表征了類似的酶。盡管存在微小的差異(例如，人溶菌酶具有130個(gè)氨基酸)，水解乙酰己糖胺聚合物的能力仍然是基本相同的。因此，對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō)，術(shù)語(yǔ)溶菌酶旨在包括具有水解乙酰己糖胺和相關(guān)聚合物的能力的那些細(xì)胞壁或肽聚糖降解酶。
已知溶菌酶殺死或抑制細(xì)菌和真菌的生長(zhǎng)，在歐洲應(yīng)用它控制各種干酪中腐敗生物酪丁酸梭菌的生長(zhǎng)。還有人提議將它用于各種其它食品防腐應(yīng)用中，并且報(bào)導(dǎo)了用它抑制(在一些情況下殺死)單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的生長(zhǎng)[Hughey等，1987，應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)(Appl.Environ.Microbiol)，532165～2170]。來(lái)自卵白蛋白、具有約20,000 Shugar單位/mg活性的溶菌酶可從Rhodia商購(gòu)(商標(biāo)為NovaGARDTM)。
總之，所述新型組合物的第一種組分優(yōu)選是以前公開(kāi)的羊毛硫抗生素和分解酶的組合，尤其更優(yōu)選是乳鏈菌肽和蛋白溶菌酶的組合。
所述新型組合物的第二種組分是一種或多種啤酒花酸提取物或啤酒花酸衍生物或者啤酒花樹(shù)脂或啤酒花樹(shù)脂衍生物或者這些物質(zhì)的一些或全部的組合?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)了，用于啤酒制造中的啤酒花的苦成分(特別是β酸)適用作食品中的殺菌劑，尤其與上述制菌組分和/或殺菌組分組合時(shí)。含于啤酒花中的苦味酸的最普遍組是α酸和β酸(分別稱為葎草酮和蛇麻酮)。這二者都使啤酒呈苦味，但α酸比β酸苦得多，所以，不希望將它用于大多數(shù)食品中。啤酒花提取物的生產(chǎn)者在商業(yè)上通過(guò)各種色譜法分離α酸和β酸，最近開(kāi)發(fā)了一種分離這兩種酸級(jí)分的方法，即，應(yīng)用液態(tài)二氧化碳在超臨界條件下分離。該操作的一種副產(chǎn)品是一種這樣的產(chǎn)品它包含約61wt％β酸，余下的基本上是啤酒花樹(shù)脂?？捎名溠刻呛蚱渌称芳?jí)載體將該副產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)化，噴霧干燥，用作抗菌食品組分。一種優(yōu)選的β啤酒花酸組合物可作為天然風(fēng)味提取物(含1wt％β啤酒花酸)商購(gòu)。
含于啤酒花中的α酸通常被稱為葎草酮、輔葎草酮和加葎草酮，而含于啤酒花中的β酸則通常被稱為蛇麻酮、輔蛇麻酮和加蛇麻酮。尤其希望已證實(shí)有抗菌性能的啤酒花酸或啤酒花樹(shù)脂的化學(xué)改性衍生物(例如，六氫輔蛇麻酮和四氫異葎草酮，如美國(guó)專利No.5,455,038中公開(kāi)的)用于本發(fā)明。還認(rèn)為特別希望用于本發(fā)明的是啤酒花酸或啤酒花樹(shù)脂的酸鹽形式的應(yīng)用。
在實(shí)際操作中，加到食品中的啤酒花酸或樹(shù)脂或其衍生物的量是約0.1～約50ppm活性組分(用于處理的溶液重量)，更優(yōu)選約0.40～約20ppm。
本發(fā)明組合物中可存在的其它添加劑包括但不限于下列物質(zhì)其它抗菌劑(例如，脫乙酰殼多糖或其衍生物)，和/或螯合劑，天然的或合成的調(diào)味料，精油，和/或香料，染料和/或著色劑，維生素，礦物質(zhì)，營(yíng)養(yǎng)素，酶，粘合劑(例如，瓜耳膠和黃原酸膠)等。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明組合物中存在瓜耳膠以幫助將抗微生物組分粘合到被處理的食品表面。不認(rèn)為這些物質(zhì)的添加對(duì)本發(fā)明的成功是至關(guān)重要的并且應(yīng)當(dāng)認(rèn)為屬于技術(shù)人員的能力范圍。
可將本發(fā)明的抗微生物組合物和對(duì)微生物降解敏感的任何食品結(jié)合應(yīng)用。這些食品包括但不限于水果和蔬菜(包括得自它們的產(chǎn)品)，谷物和得自谷物的產(chǎn)品，乳制品，肉類，家禽，以及海產(chǎn)品。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，將所述組合物和肉類、家禽和/或海產(chǎn)品結(jié)合應(yīng)用，更特別與含脂肪的熟肉(例如，熱狗、香腸、烤牛排、火雞、咸牛肉和熟肉)結(jié)合應(yīng)用。
為了減少食品表面細(xì)菌的量，在蒸煮前或蒸煮后將所述新型組合物簡(jiǎn)單地涂布在食品表面。在實(shí)際操作中，組合物物質(zhì)在食品表面的應(yīng)用可以是直接應(yīng)用或間接應(yīng)用。用術(shù)語(yǔ)“食品表面”來(lái)定義包括受處理的食品的任意和全部?jī)?nèi)表面或外表面。
本發(fā)明的組合物最容易通過(guò)將它涂到混合食品(例如，熱狗或波洛尼亞香腸)或者固體食品(例如，烤牛排片)的外表面，以便將食品脂肪相中的活性損失減到最小。所述組合物也可被包含于蒸煮前或蒸煮后食品的乳液或原配料(例如，沙司或salsas)中，或者包含于固體產(chǎn)品(例如，火腿)的內(nèi)部，通過(guò)注射或鼓轉(zhuǎn)。在其它實(shí)施方案中，所述組合物可呈醋漬汁、滾面包屑、調(diào)味涂油(seasoning rub)、糖衣、著色混合物等涂布，關(guān)鍵準(zhǔn)則是所述抗微生物組合物可到達(dá)受細(xì)菌降解的表面。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物可間接與食品表面接觸，即，通過(guò)將組合物涂到食品包裝材料或薄膜包衣上，隨后用包裝材料包覆食品表面。表面處理策略的應(yīng)用(不管是直接的還是間接的)得益于含脂肪食品脂肪相中的損失最小化。應(yīng)用的制菌或殺菌最佳有效量將依賴于受處理的具體食品的組成和將組合物應(yīng)用到食品表面的方法，不過(guò)，可通過(guò)簡(jiǎn)單的試驗(yàn)確定。
在本發(fā)明一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，抗菌組合物包含約38.5～99.8重量份的第一種組分，它包括至少一種選自下組的制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素、乳鏈球菌素類細(xì)菌素，以及分解酶；約61.5～0.2重量份的第二種組分，它包括至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
在本發(fā)明一個(gè)更特別優(yōu)選的組合物實(shí)施方案中，其中，第一種組分包括兩種化合物，優(yōu)選的是，所述組合物包含作為第一種組分的約1.0～2.5重量份羊毛硫抗生素，還有約37.5～97.3重量份分解酶；以及作為第二種組分的約61.5～0.2重量份至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
如下非限制性的實(shí)施例闡述了寬范圍的抗微生物組合物(它們構(gòu)成本發(fā)明)。
實(shí)施例1如表1中所示，在30℃的胰胨豆胨培養(yǎng)液(pH6.0)中測(cè)試兩種革蘭氏陽(yáng)性菌株48小時(shí)以證明NovasinTM乳鏈菌肽制劑、溶菌酶和β啤酒花酸(單獨(dú)用或組合用)的抑制效果。試驗(yàn)闡明了NovasinTM、溶菌酶和β啤酒花酸(BHA)的意外的協(xié)同效果。表1示出了，在相同的濃度下，NovasinTM、溶菌酶和BHA的組合比每種單獨(dú)的組分或兩種組分的組合都具有顯著更好的抑制作用。三種組分的組合表明兩種菌株的5log減少，而任何單組分處理或雙組分處理都只有1～3log減少。
表1CFU/ml處理L.alimentarius單核細(xì)胞增生利斯特氏菌對(duì)比物3.1×10e8 1.4×10e8Novasin(NS)50ppm 5.3×10e6 7.1×10e7溶菌酶(LY)50ppm 6.3×10e6 2.5×10e7β啤酒花酸(BHA)*5ppm 1.2×10e8 6.2×10e6NS 50ppm+LY 50ppm 2.5×10e5 4.1×10e5LY 50ppm+BHA 5ppm 5.6×10e6 6.3×10e6NS 50ppm+BHA 5ppm 3.5×10e5 5.2×10e5NS 50ppm，LY 50ppm，BHA 5ppm 2.8×10e3 3.1×10e3*在該說(shuō)明中，BHA表示β啤酒花酸。
實(shí)施例2為了闡明本發(fā)明組合物的體內(nèi)效果，用單核細(xì)胞增生利斯特氏菌接種熱狗。將熱狗浸入含有或者(1)NovasinTM、溶菌酶和BHA；或者(2)NovasinTM和BHA的懸浮液中，再用單核細(xì)胞增生利斯特氏菌接種表面。然后，用無(wú)菌袋包裝熱狗并在10℃下保存13天。在每個(gè)取樣日，用無(wú)菌鹽水漂洗熱狗，將樹(shù)脂鋪于利斯特氏菌選擇瓊脂上而獲得利斯特氏菌數(shù)。這樣進(jìn)行對(duì)熱狗的富集將1ml漂洗液轉(zhuǎn)移到BHI培養(yǎng)液并保溫24hr，接著，鋪于利斯特氏菌選擇瓊脂上。富集后在利斯特氏菌選擇瓊脂上具有0數(shù)量的處理被認(rèn)為是陰性的并作為總處理樣品的一部分報(bào)導(dǎo)。
表2示出了，雖然NovasinTM和BHA浸漬顯著減小了熱狗上單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的初始水平，而三種組分組合則將單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的水平減小到實(shí)際測(cè)不出的水平(通過(guò)直接鋪平板，或者通過(guò)富集再生技術(shù))。在這個(gè)三種組分組合中，沒(méi)有觀察到存活的單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的生存，這通過(guò)敏感的富集技術(shù)(它被用于再生低水平的損傷細(xì)胞)后的陰性結(jié)果(3/3)證實(shí)了。這一發(fā)現(xiàn)(即，用新型三組分組合處理的全部樣品即使在富集后也對(duì)單核細(xì)胞增生利斯特氏菌是陰性的)是本申請(qǐng)最意外的發(fā)現(xiàn)。以前以本文描述的安全而合適的用量水平應(yīng)用這些抗微生物組分的任一種從未報(bào)導(dǎo)過(guò)這樣的發(fā)現(xiàn)。
表2CFU/熱狗處理 第0天 第2天 第13天 富集后呈陰性的對(duì)比物 5×10e41.1×10e59.2×10e6 NANovasinTM+BHA 5×10e430 25 1/3NovasinTM+BHA+溶菌酶 5×10e4＜10 ＜10 3/3實(shí)施例3如表3中所示，在30℃的胰胨豆胨培養(yǎng)液(pH6.0)中測(cè)試芽孢桿菌屬的兩種革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)孢菌48小時(shí)以證明Novasin、溶菌酶和β啤酒花酸(單獨(dú)用或組合用)的抑制效果。試驗(yàn)闡明了Novasin、溶菌酶和β啤酒花酸組合抗產(chǎn)孢菌的意外的協(xié)同效果。表3示出了，在相同的濃度下，Novasin、溶菌酶和BHA的組合比每種單獨(dú)的組分或三種組分中任何兩種組分的組合都表現(xiàn)出顯著更好的抑制作用。三種組分的組合全部殺死接種的所有孢子，而關(guān)于任何單組分處理或雙組分處理都觀察到顯著的但不是全部消滅。所以，本文確實(shí)證實(shí)了，Novasin、溶菌酶和BHA的組合顯示抗產(chǎn)孢菌的協(xié)同殺菌活性。
表3處理CFU/ml枯草芽孢桿菌蠟狀芽孢桿菌對(duì)比物 2.5×10e8 1.1×10e850ppm Novasin 3.2×10e4 6.4×10e61ppm BHA 360 5×10e3100ppm 溶菌酶 1.2×10e8 1.1×10e850ppm Novasin+1ppm BHA 40 95050ppm Novasin，1ppm BHA和50ppm 溶菌酶 ＜10＜10實(shí)施例4表4中闡明了本發(fā)明組合物對(duì)煮熟的火腿的效果。用單核細(xì)胞增生利斯特氏菌接種煮熟的火腿表面，然后，通過(guò)用NovasinTM、溶菌酶和BHA(處理A)；或者溶菌酶和BHA(處理B)的溶液噴灑表面而進(jìn)行局部處理。接著，用無(wú)菌袋將火腿收縮包裝和真空包裝，在40F(4℃)下儲(chǔ)存60天。在每個(gè)取樣日，用無(wú)菌緩沖液漂洗火腿，將樹(shù)脂鋪于利斯特氏菌選擇瓊脂上而測(cè)定存活的利斯特氏菌數(shù)。對(duì)利斯特氏菌數(shù)低于可檢測(cè)的平板數(shù)水平的樣品進(jìn)行富集法處理將1ml漂洗液轉(zhuǎn)移到腦心浸液(BHI)培養(yǎng)液并保溫24hr，接著，鋪于利斯特氏菌選擇瓊脂上。富集后在利斯特氏菌選擇瓊脂上具有陰性(小于1/ml)數(shù)的處理被認(rèn)為是陰性的并作為總處理樣品的一部分報(bào)導(dǎo)。
表4示出了，三種組分組合則將接種的單核細(xì)胞增生利斯特氏菌減少到測(cè)不出的水平(通過(guò)直接鋪平板，或者通過(guò)富集再生技術(shù))，而對(duì)比組增大了10,000倍(4logs)。二向“溶菌酶加BHA”組合顯示了抑制但不作為殺菌劑。在這個(gè)三種組分組合中，沒(méi)有觀察到存活的單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的生存，這由富集(一種用于再生很低水平的存活細(xì)胞或損傷的細(xì)胞的技術(shù))后的陰性結(jié)果證實(shí)了。因此，數(shù)據(jù)表明了，局部應(yīng)用優(yōu)選的三組分組合可以全部消滅高脂肪加工的食品(例如，煮熟的火腿)中的單核細(xì)胞增生利斯特氏菌。
表4利斯特氏菌數(shù)CFU/火腿包裝天 對(duì)比物處理A 處理B1 250 0507 280 020015290 01603061000200456600046006020000 05500實(shí)施例5表5中闡明了本發(fā)明組合物在保護(hù)維也納香腸以抗單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的效果。通過(guò)在蒸煮過(guò)程中將組合物摻入盛熱狗乳液的纖維素薄膜包衣而將Novasin和BHA的組合物遞送到維也納香腸表面。蒸煮后，剝?nèi)グ拢缓?，用單核?xì)胞增生利斯特氏菌接種成品維也納香腸表面并用無(wú)菌袋真空包裝。將包裝的、接種的維也納香腸在40°F(4℃)儲(chǔ)存60天，為每個(gè)取樣點(diǎn)開(kāi)啟新鮮的包裝。在每次取樣時(shí)，用無(wú)菌緩沖液漂洗維也納香腸和它們的包裝，然后，將緩沖液鋪于利斯特氏菌選擇瓊脂上而測(cè)定存活的利斯特氏菌數(shù)。
表5示出了，兩組分組合抑制單核細(xì)胞增生利斯特氏菌的生長(zhǎng)達(dá)61天以上，導(dǎo)致保溫結(jié)束時(shí)大于4log(10,000倍)利斯特氏菌減少(與對(duì)比物相比)。數(shù)據(jù)表明，包衣送遞的應(yīng)用優(yōu)選的兩組分組合物防止單核細(xì)胞增生利斯特氏菌在維也納香腸上的過(guò)生長(zhǎng)，所以，可成為送遞組合物的商業(yè)上可行的方法，從而改善維也納香腸和香腸的安全性。更重要的是，上述表面應(yīng)用方法使組分的活性充分實(shí)現(xiàn)(即使在典型的熱狗乳液的高脂肪環(huán)境中)。反之，當(dāng)將組合物用作蒸煮前熱狗乳液中的組分時(shí)，抗微生物活性急劇減小了(未示出數(shù)據(jù))，這與以前闡明在含大量脂肪的食品中乳鏈菌肽活性的損失[Muriana，P.M.和Kanach，L，“乳鏈菌素在抑制酪乳牧場(chǎng)包衣中的腐敗菌方面的應(yīng)用”，食品保護(hù)雜志(J.Food Protection)，Vol.58，No 10，1995]和啤酒花酸活性的損失(Johnson等，1996)的作者的觀察結(jié)果相符。所以，公開(kāi)的表面涂布方法揭示了一種使本發(fā)明的組合物在含高脂肪含量(大于4％w/w)的食品中的效率最大化的意外方法。
表5利斯特氏菌數(shù)logCFU/包裝天用對(duì)比包衣包裝的維也納香腸用處理包衣包裝的維也納香腸02.72 2.7272.51 1.827 3.66 1.9233 4.31.8440 4.34 2.2354 5.48 3.4361 6.83 2.08已參照其優(yōu)選的實(shí)施方案詳細(xì)描述了本發(fā)明，應(yīng)懂得，可進(jìn)行修飾和更改而不偏離附后權(quán)利要求書(shū)的范圍。
權(quán)利要求
1.一種抗菌組合物，它包含(a)第一種組分，它包括至少一種選自下組的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素，和/或分解酶；以及(b)第二種組分，它包括至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物。
2.一種抗菌組合物，它包含(a)第一種組分，它包括至少一種選自羊毛硫抗生素和分解酶的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物；以及(b)第二種組分，它包括至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物。
3.一種抗菌組合物，它包含a)乳鏈菌肽；b)溶菌酶；以及c)β啤酒花酸或β啤酒花酸衍生物。
4.權(quán)利要求1的抗菌組合物，其中，所述第一種組分占約38.5～99.8重量份，而第二種組分占約61.5～0.2重量份；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
5.權(quán)利要求1的抗菌組合物，其中，所述第一種組分包含約1.0～2.5重量份羊毛硫抗生素和約37.5～97.3重量份分解酶；而第二種組分則包含約61.5～0.2重量份至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
6.一種減少食品中的革蘭氏陽(yáng)性菌的方法，它包括用制菌或殺菌有效量的組合物處理所述食品的食品表面這一步驟，所述組合物包含(a)第一種組分，它包括至少一種選自下組的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物羊毛硫抗生素、片球菌素、乳鏈球菌素類細(xì)菌素和分解酶；以及(b)第二種組分，它包括至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物。
7.一種減少食品中的革蘭氏陽(yáng)性菌的方法，它包括用制菌或殺菌有效量的組合物處理所述食品的食品表面這一步驟，所述組合物包含(a)第一種組分，它包括至少一種選自羊毛硫抗生素和分解酶的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物；以及(b)第二種組分，它包括至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物。
8.權(quán)利要求7的方法，其中，所述組合物包含a)乳鏈菌肽；b)溶菌酶；以及c)β啤酒花酸或β啤酒花酸衍生物。
9.權(quán)利要求6的方法，其中，所述第一種組分占約38.5～99.8重量份，而第二種組分占約61.5～0.2重量份；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
10.權(quán)利要求6的方法，其中，所述第一種組分包含約1.0～2.5重量份羊毛硫抗生素和約37.5～97.3重量份分解酶；而第二種組分則包含約61.5～0.2重量份至少一種選自下組的化合物啤酒花酸、啤酒花酸衍生物；全部重量份都基于所述組合物的第一種組分和第二種組分的總重量。
11.權(quán)利要求6的方法，其中，所述食品是含大于4％脂肪含量的固體食品。
12.權(quán)利要求6的方法，其中，所述食品是加工的肉。
13.權(quán)利要求6的方法，其中，所述處理步驟包括a)將組合物涂布在包衣、膜或包裝材料的表面，以及b)隨后，使組合物涂布的表面與所述食品緊密接觸。
14.權(quán)利要求6的方法，其中，所述革蘭氏陽(yáng)性菌屬于利斯特氏菌屬。
15.權(quán)利要求14的方法，其中，所述利斯特氏菌是單核細(xì)胞增生利斯特氏菌或無(wú)害利斯特氏菌(Listeria inocua)。
16.權(quán)利要求6的方法，其中，所述革蘭氏陽(yáng)性菌是產(chǎn)孢菌。
17.權(quán)利要求16的方法，其中，所述產(chǎn)孢菌是芽孢桿菌屬菌種。
18.權(quán)利要求16的方法，其中，所述產(chǎn)孢菌是梭菌屬菌種。
全文摘要
一種抗菌組合物,它包含:(a)第一種組分,它包括至少一種選自下組的革蘭氏陽(yáng)性制菌或殺菌化合物:羊毛硫抗生素、片球菌素和乳鏈球菌素類細(xì)菌素,和分解酶;以及(b)第二種組分,它包括至少一種選自下組的化合物:啤酒花酸、或啤酒花酸衍生物、啤酒花樹(shù)脂和啤酒花樹(shù)脂衍生物;以及將所述組合物應(yīng)用到固體食品表面的方法。
文檔編號(hào)A23L3/3472GK1370055SQ00811889
公開(kāi)日2002年9月18日 申請(qǐng)日期2000年7月14日 優(yōu)先權(quán)日1999年7月14日
發(fā)明者W·金, 明新天 申請(qǐng)人:羅狄亞公司