一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法
【專利說明】一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及雙歧桿菌培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法。
【背景技術(shù)】
[0003]雙歧桿菌是1899年由法國學(xué)者Tissier從母乳營養(yǎng)兒的奠便中分離出的一種厭氧的革蘭氏陽性桿菌，末端常常分叉，故名雙歧桿菌。雙歧桿菌分布在胃腸的數(shù)量隨年齡階段的增長而減少，分布最多的是母乳營養(yǎng)兒。雙歧桿菌是個有益菌，它具有調(diào)整腸道功能紊亂作用，可以預(yù)防腹瀉，減少便秘，即雙向調(diào)節(jié)的作用，特別是能夠為嬰幼兒的腸道健康提供獨特的保護(hù)作用，有效地減少嬰幼兒腸道感染的發(fā)病率。
[0004]為了充分利用雙歧桿菌的效果，人們開始自行培養(yǎng)雙歧桿菌，但是現(xiàn)在的雙歧桿菌培養(yǎng)都是利用液體進(jìn)行培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)發(fā)生問題時，需要對整體進(jìn)行處理，造成原料浪費，導(dǎo)致培養(yǎng)成本過高?，F(xiàn)階段的培養(yǎng)方法比較簡單，培養(yǎng)出來成功率低，浪費培養(yǎng)原料。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]根據(jù)以上技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其具體流程為:
(1)原種液體培養(yǎng)
將雙歧桿菌菌種放入培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏 0.15%-0.28%、葡萄糖 0.35%-0.58%、鹽溶液 0.15%-0.28%、蒸餾水95%-98%組成，然后將放入菌種的培養(yǎng)基放在通風(fēng)處進(jìn)行培養(yǎng)；
(2)一級菌種培養(yǎng)
將土豆、麩皮放入蒸餾水中進(jìn)行蒸煮，然后提取溶液，將溶液中加入植物蛋白質(zhì)胨、牛肉膏、蔗糖、鹽溶液，再將菌種放入培養(yǎng)液中，將溶液放置到通風(fēng)處進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
(3)二級菌種培養(yǎng)
制取一級培養(yǎng)液，但培養(yǎng)皿換為無色透明試劑瓶，將試劑瓶繼續(xù)擰滅菌，滅菌后放入培養(yǎng)液，然后接種一級菌種10%后，每隔5小時晃動1分鐘，培養(yǎng)24-96小時，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.0億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫?br> (4)三級菌種培養(yǎng)
取植物蛋白胨、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培養(yǎng)基放入蒸餾水中進(jìn)行溶解，以此作為培養(yǎng)基，然后進(jìn)行二級菌種接種，接種20%后靜置，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.8億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫?br> (4)固體培養(yǎng)利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏進(jìn)行固體培養(yǎng)基制作，然后對培養(yǎng)基進(jìn)行冷卻滅菌，然后將三級液態(tài)菌種浸入到固體培養(yǎng)內(nèi)，然后將浸入菌種的固體培養(yǎng)基放入培養(yǎng)房內(nèi)進(jìn)行靜置發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到5億CFU\g時終止培養(yǎng)。
[0006]所述一級菌種培養(yǎng)中各原料質(zhì)量比為:土豆、麩皮溶液30%_70%，植物蛋白質(zhì)胨15-20%，牛肉膏 15-28%，蔗糖 5-10%，鹽溶液 10_15%。
[0007]所述三級菌種培養(yǎng)中各原料質(zhì)量比為:植物蛋白胨1_10%、海參蒸煮液7-10%、玉米漿2-8%、酵母膏8-13%、肉牛浸膏1_10%、番茄培養(yǎng)基2-8%、蒸餾水60_90%。
[0008]所述固體培養(yǎng)中，各原料質(zhì)量比為玉米粉10_19%、大米粉14_10%、大?粉4_10%、全脂乳粉5-20%、海參蒸煮液10-20%、玉米漿20-26%、酵母膏14_19%、肉牛浸膏10_20%。
[0009]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明將液態(tài)培養(yǎng)和固態(tài)培養(yǎng)相結(jié)合，將最后的液態(tài)培養(yǎng)改成液固結(jié)合，使菌種培養(yǎng)效果更好。最后一步培養(yǎng)為關(guān)鍵的培養(yǎng)步驟，現(xiàn)今的培養(yǎng)都是用液體培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)發(fā)生問題時，需要對整體進(jìn)行處理，造成原料浪費，導(dǎo)致培養(yǎng)成本過高，本發(fā)明經(jīng)最后一步改為固體培養(yǎng)，當(dāng)出現(xiàn)問題時，可以直接對問題部分進(jìn)行剔除，避免其他培養(yǎng)基和菌種的浪費，降低的培養(yǎng)成本，提高了培養(yǎng)成功率。本發(fā)明最后一步為固體培養(yǎng)，便于工作人員進(jìn)行觀察控制，當(dāng)出現(xiàn)問題時可以及時進(jìn)行解決，避免了損壞菌種對其他菌種產(chǎn)生污染，降低了失敗率，提高了成功率。本發(fā)明的三級菌種培養(yǎng)液中利用植物蛋白胨、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，促進(jìn)了菌種的成長，提高了菌種幾率。本發(fā)明的固體培養(yǎng)中利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏，該培養(yǎng)基中生長良好，在最佳發(fā)酵狀態(tài)下，最大生長量均可達(dá)到8.75X109cfu/mL以上，優(yōu)于經(jīng)典的雙歧桿菌選擇性培養(yǎng)基TPY培養(yǎng)基的液體深層培養(yǎng)效果。
【具體實施方式】
[0010]實施例所示，對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明:
一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其具體流程為:
(1)原種液體培養(yǎng)
將雙歧桿菌菌種放入培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏 0.15%-0.28%、葡萄糖 0.35%-0.58%、鹽溶液 0.15%-0.28%、蒸餾水95%-98%組成，然后將放入菌種的培養(yǎng)基放在通風(fēng)處進(jìn)行培養(yǎng)；
(2)一級菌種培養(yǎng)
將土豆、麩皮放入蒸餾水中進(jìn)行蒸煮，然后提取溶液，將溶液中加入植物蛋白質(zhì)胨、牛肉膏、蔗糖、鹽溶液，其中土豆、麩皮溶液40%，植物蛋白質(zhì)胨18%，牛肉膏22%，蔗糖8%，鹽溶液10%。再將菌種放入培養(yǎng)液中，將溶液放置到通風(fēng)處進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)；
(3)二級菌種培養(yǎng)
制取一級培養(yǎng)液，但培養(yǎng)皿換為無色透明試劑瓶，將試劑瓶繼續(xù)擰滅菌，滅菌后放入培養(yǎng)液，然后接種一級菌種10%后，每隔5小時晃動1分鐘，培養(yǎng)24-96小時，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.0億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫?br> (4)三級菌種培養(yǎng)
取植物蛋白胨、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培養(yǎng)基放入蒸餾水中進(jìn)行溶解，以此作為培養(yǎng)基，其中質(zhì)量比為:植物蛋白胨2%、海參蒸煮液7%、玉米漿5%、酵母膏12%、肉牛浸膏4%、番茄培養(yǎng)基5%、蒸餾水65%，然后進(jìn)行二級菌種接種，接種20%后靜置，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.8億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫?br> (5)固體培養(yǎng)
利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏進(jìn)行固體培養(yǎng)基制作，其中質(zhì)量比為:玉米粉12%、大米粉15%、大豆粉5%、全脂乳粉9%、海參蒸煮液12%、玉米漿20%、酵母膏16%、肉牛浸膏11%，然后對培養(yǎng)基進(jìn)行冷卻滅菌，然后將三級液態(tài)菌種浸入到固體培養(yǎng)內(nèi)，然后將浸入菌種的固體培養(yǎng)基放入培養(yǎng)房內(nèi)進(jìn)行靜置發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到5億CFU\g時終止培養(yǎng)。
[0011]以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實施方式，應(yīng)當(dāng)指出的是，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1.一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其具體流程為: 原種液體培養(yǎng) 將雙歧桿菌菌種放入培養(yǎng)基中，所述培養(yǎng)基由植物蛋白胨0.55%-0.78%、胰胨0.25%-0.48%、酵母浸膏 0.15%-0.28%、葡萄糖 0.35%-0.58%、鹽溶液 0.15%-0.28%、蒸餾水95%-98%組成，然后將放入菌種的培養(yǎng)基放在通風(fēng)處進(jìn)行培養(yǎng)； 一級菌種培養(yǎng) 將土豆、麩皮放入蒸餾水中進(jìn)行蒸煮，然后提取溶液，將溶液中加入植物蛋白質(zhì)胨、牛肉膏、蔗糖、鹽溶液，再將菌種放入培養(yǎng)液中，將溶液放置到通風(fēng)處進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)； 二級菌種培養(yǎng) 制取一級培養(yǎng)液，但培養(yǎng)皿換為無色透明試劑瓶，將試劑瓶繼續(xù)擰滅菌，滅菌后放入培養(yǎng)液，然后接種一級菌種10%后，每隔5小時晃動1分鐘，培養(yǎng)24-96小時，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.0億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫? 三級菌種培養(yǎng) 取植物蛋白胨、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏、番茄培養(yǎng)基放入蒸餾水中進(jìn)行溶解，以此作為培養(yǎng)基，然后進(jìn)行二級菌種接種，接種20%后靜置，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到1.8億CFU\g時終止培養(yǎng)，室溫下保存?zhèn)溆茫? (4)固體培養(yǎng) 利用玉米粉、大米粉、大豆粉、全脂乳粉、海參蒸煮液、玉米漿、酵母膏、肉牛浸膏進(jìn)行固體培養(yǎng)基制作，然后對培養(yǎng)基進(jìn)行冷卻滅菌，然后將三級液態(tài)菌種浸入到固體培養(yǎng)內(nèi)，然后將浸入菌種的固體培養(yǎng)基放入培養(yǎng)房內(nèi)進(jìn)行靜置發(fā)酵培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)胞達(dá)到5億CFU\g時終止培養(yǎng)。2.按照權(quán)利要求1所述的一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其特征在于所述一級菌種培養(yǎng)中各原料質(zhì)量比為:土豆、麩皮溶液30%-70%，植物蛋白質(zhì)胨15-20%，牛肉膏15-28%，蔗糖5-10%，鹽溶液10-15%。3.按照權(quán)利要求1所述的一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其特征在于所述三級菌種培養(yǎng)中各原料質(zhì)量比為:植物蛋白胨1_10%、海參蒸煮液7-10%、玉米漿2-8%、酵母膏8-13%、肉牛浸膏1_10%、番茄培養(yǎng)基2-8%、蒸餾水60-90%。4.按照權(quán)利要求1所述的一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其特征在于所述固體培養(yǎng)中，各原料質(zhì)量比為玉米粉10_19%、大米粉14_10%、大_&粉4_10%、全脂乳粉5-20%、海參蒸煮液10-20%、玉米漿20-26%、酵母膏14_19%、肉牛浸膏10_20%。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種利用固液結(jié)合發(fā)酵工藝生產(chǎn)雙歧桿菌的方法，其具體流程為：原種液體培養(yǎng)、一級菌種培養(yǎng)、二級菌種培養(yǎng)、三級菌種培養(yǎng)、固體培養(yǎng)。本發(fā)明將液態(tài)培養(yǎng)和固態(tài)培養(yǎng)相結(jié)合，將最后的液態(tài)培養(yǎng)改成液固結(jié)合，使菌種培養(yǎng)效果更好。最后一步培養(yǎng)為關(guān)鍵的培養(yǎng)步驟，現(xiàn)今的培養(yǎng)都是用液體培養(yǎng)，當(dāng)培養(yǎng)發(fā)生問題時，需要對整體進(jìn)行處理，造成原料浪費，導(dǎo)致培養(yǎng)成本過高，本發(fā)明經(jīng)最后一步改為固體培養(yǎng)，當(dāng)出現(xiàn)問題時，可以直接對問題部分進(jìn)行剔除，避免其他培養(yǎng)基和菌種的浪費，降低的培養(yǎng)成本，提高了培養(yǎng)成功率。
【IPC分類】C12R1/01, C12N1/20
【公開號】CN105316254
【申請?zhí)枴緾N201510382307
【發(fā)明人】王軍
【申請人】王軍
【公開日】2016年2月10日
【申請日】2015年7月3日