一種中藥水提物增強(qiáng)雙歧桿菌活菌數(shù)的方法及其產(chǎn)品的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及一種中藥水提物增強(qiáng)雙歧桿菌活菌數(shù)的方法 及其產(chǎn)品。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙歧桿菌作為人體內(nèi)的正常生理菌和最重要的益生菌，為人體腸道健康提供獨(dú)特 的保護(hù)作用。在迄今為止，已有大量的文獻(xiàn)表明，雙歧桿菌具有維持腸道微生態(tài)平衡、營(yíng)養(yǎng) 與促機(jī)體生長(zhǎng)作用、免疫增強(qiáng)抗衰老作用、降低血脂和膽固醇作用、改善糖尿病癥狀和抗腫 瘤作用等。雙歧桿菌是嚴(yán)格兼性厭氧菌，在生產(chǎn)上需要一定的厭氧條件，同時(shí)對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求非 ?？量蹋袝r(shí)候需要在培養(yǎng)基中加入牛肉湯，豬肝湯等才能進(jìn)一步提高活菌數(shù)或延長(zhǎng)活菌 存活時(shí)間，在一定意義上限制了雙歧桿菌活菌產(chǎn)品的保存和大規(guī)模的生產(chǎn)。且增加了產(chǎn)品 在膽藏過(guò)程中染菌的風(fēng)險(xiǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，提供一種利用中藥水提物增加雙歧桿 菌活菌數(shù)的中藥增強(qiáng)型TPY培養(yǎng)基。
[0004] 本發(fā)明的另一目的是提供一種中藥水提物增強(qiáng)雙歧桿菌活菌數(shù)的方法。
[0005] 本發(fā)明的又一目的是提供按照該方法制備的口服液產(chǎn)品或菌粉產(chǎn)品。
[0006] 本發(fā)明的目的可通過(guò)W下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] -種利用中藥水提物增加雙歧桿菌活菌數(shù)的中藥增強(qiáng)型TPY培養(yǎng)基，所述的中藥 增強(qiáng)型TPY培養(yǎng)基是在常規(guī)TPY雙歧桿菌培養(yǎng)基中加入相當(dāng)于常規(guī)TPY雙歧桿菌培養(yǎng)基體積 1%~5% (V/V)的中藥水提液混合而成;所述的中藥水提液選自北沙參、太子參、黃巧、蟲草 花、黨參、白術(shù)、百合中的一種的水提液或多種的水提液的混合物。
[000引作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的中藥水提液優(yōu)選北沙參、太子參、黃巧、蟲草花、黨 參、白術(shù)、百合中的任意一種的水提液。
[0009] 作為本發(fā)明的優(yōu)選方式，所述的中藥水提液選自北沙參水提液和太子參水提液的 混合物、北沙參水提液和黃巧水提液的混合物、太子參水提液和黃巧水提液的混合物、太子 參水提液、北沙參水提液和黃巧水提液的混合物、太子參水提液和蟲草花水提液的混合 物、北沙參水提液和和蟲草花水提液的混合物、黃巧水提液和蟲草花水提液的混合物、太子 參水提液、北沙參水提液、黃巧水提液和蟲草花水提液的混合物。
[0010] 作為本發(fā)明進(jìn)一步的優(yōu)選方式，所述的中藥水提液選自北沙參水提液和太子參水 提液1:1~2體積比混合的混合物、北沙參水提液和黃巧水提液1:1~3體積比混合的混合 物、太子參水提液和黃巧水提液1~2:1~3體積比混合的混合物、太子參水提液和蟲草花水 提液1~2:1~2體積比混合的混合物、北沙參水提液和和蟲草花水提液1:1~2體積比混合 的混合物、黃巧水提液和蟲草花水提液1~3:1~2體積比混合的混合物。
[0011] 作為本發(fā)明的更進(jìn)一步優(yōu)選方試，所述的中藥水提液為北沙參水提液、太子參水 提液、黃巧水提液按照1:1~2:1~3體積比混合而成，或者為北沙參水提液:太子參水提液： 黃巧水提液:蟲草花水提液體積比按照1:1~2:1~3:1~2混合而成。
[0012] 所述的北沙參、太子參、黃巧、蟲草花、黨參、白術(shù)或百合的水提液通過(guò)W下方法制 備得到：取藥材，按照l(shuí):l〇(g/ml)的料液比加入去離子水冷浸1~化，加熱回流1~化，取濾 液，向藥渣中按照1:5~10(g/ml)的料液比加入去離子水，加熱回流化~化，合并兩次濾液， 趁熱過(guò)濾，加熱濃縮，使藥材與濃縮液的質(zhì)量體積比為1:1，121°C高壓滅菌40~50min。
[0013] 所述的蟲草花水提液通過(guò)W下方法制備得到：取蟲草花藥材，按照l(shuí):30(g/ml)的 料液比加入去離子水，90°C熱浸25~30min，在水浴上90°C提取1~化，取濾液，加熱濃縮，使 藥材與濃縮液的質(zhì)量體積比為1:1，121°C高壓滅菌40~50min。
[0014] 雙歧桿菌常規(guī)TPY培養(yǎng)基組方:大豆蛋白腺5g、膜腺5g、酵母粉lOg、葡萄糖lOg、 吐溫-SOlmLa-半脫氨酸0.5g、無(wú)機(jī)鹽液40mL(每IL中CaCl2含量為0.2g，K2HP〇4為l.Og， MgS〇4 ? 7此0為0.48g，KH2P〇4為l.Og，化肥〇3為lO.Og，化Cl為2.0g)、此0加至lL，pH 7.0。121 °[高壓滅菌20min。
[0015] 本發(fā)明所述的中藥增強(qiáng)型TPY培養(yǎng)基在增加雙歧桿菌活菌數(shù)中的應(yīng)用。
[0016] -種利用中藥水提物增加雙歧桿菌活菌數(shù)的方法，取雙歧桿菌種子液按照0.5~ 5% (V/V)接種量，接入常規(guī)TPY培養(yǎng)基，35~38°C靜置培養(yǎng)8小時(shí)活化，活化后的雙歧桿菌W 0.1~1%體積比接入到中藥增強(qiáng)的TPY培養(yǎng)基中，35-38°C厭氧或兼性厭氧培養(yǎng)12-1化的發(fā) 酵產(chǎn)物。
[0017] 本發(fā)明所述的方法優(yōu)選將發(fā)酵產(chǎn)物無(wú)菌灌裝成口服液，或離屯、集菌后冷凍干燥成 菌粉。
[0018] 本發(fā)明所述的方法優(yōu)選將所述的發(fā)酵產(chǎn)物經(jīng)過(guò)8000~1000化pm離屯、濃縮，得菌 泥，按菌泥:凍干保護(hù)劑=10~20:1(VA)向菌泥中加入凍干保護(hù)劑，充分混合均勻后置于 真空冷凍干燥機(jī)中進(jìn)行真空冷凍干燥制得的菌粉，粉碎，過(guò)40目篩得中藥增強(qiáng)雙歧桿菌菌 粉;其中凍干保護(hù)劑保護(hù)劑配方為Vc 1~%，谷氨酸鋼1~%，脫脂乳12~20wt %，乳 糖8~15wt%，溶劑為去離子水。
[0019] 本發(fā)明所述的雙歧桿菌選自長(zhǎng)雙歧桿菌，青春雙歧桿菌，兩歧雙歧桿菌，嬰兒雙歧 桿菌中的任意一種。
[0020] 按照本發(fā)明所述的方法制備得到的中藥增強(qiáng)雙歧桿菌口服液或中藥增強(qiáng)雙歧桿 菌菌粉。
[0021] 有益效果：
[0022] 本發(fā)明加了中藥的TPY培養(yǎng)基能夠取代牛肉湯、豬肝湯等物質(zhì)，比一般TPY培養(yǎng)基 明顯增加雙歧桿菌的活菌數(shù)，并且有利于雙歧桿菌活菌的存活和提高穩(wěn)定性。其次牛肉湯 和豬肝湯操作麻煩，本身的營(yíng)養(yǎng)過(guò)于豐富，不利于發(fā)酵產(chǎn)品的膽存。而上述所加的中藥大部 分是藥食同源的物質(zhì)，本身具有一定的保健作用，具有補(bǔ)中益氣的作用，不僅能夠促進(jìn)雙歧 桿菌的生長(zhǎng)，提高活菌數(shù)，還能發(fā)揮中藥本身的藥效協(xié)同提高雙歧桿菌的益生保健和增強(qiáng) 免疫功能。
【附圖說(shuō)明】
[0023] 圖1、中藥增強(qiáng)培養(yǎng)雙歧桿菌電泳圖，從左到右分別為TPY培養(yǎng)基組，TPY培養(yǎng)基組 加牛肉湯和豬肝湯組，加太子參、北沙參和黃巧組，加黃巧組，加太子參組，加北沙參組。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 實(shí)施例1
[0025] (1)中藥水提液的制備:取太子參藥材或藥材粉末500g，加化去離子水冷浸化，加 熱回流化，取濾液，藥渣再加2.化去離子水加熱回流化，合并兩次濾液，趁熱過(guò)濾，加熱濃縮 至500ml(即相對(duì)于生藥量為lg/ml)，12rC高壓滅菌40min。北沙參、黃巧水提液的制備方法 同上述太子參。
[00%] (2)雙歧桿菌TPY常規(guī)培養(yǎng)基的制備方法:大豆蛋白腺5g、膜腺5g、酵母粉lOg、葡萄 糖lOg、吐溫-SOlmLa-半脫氨酸0.5g、無(wú)機(jī)鹽液40mL(每IL中CaCh含量為0.2g，K2HP〇4為 1.0g，MgS04?7H20為0.48g，K此P04為1.0g，化HC03為10.0g，化Cl為2.0g)、此0 1L，pH7.0。 12rC高壓滅菌20min。
[0027] (3)將太子參、北沙參、黃巧中藥水提液分別離屯、，離屯、轉(zhuǎn)速eOOOrpm，離屯、時(shí)間 lOmin。按體積比，分別取離屯、后的北沙參水提液20ml、太子參水提液20ml和黃巧水提液 20ml單獨(dú)或不同組合混合加入到IL高壓滅菌的TPY常規(guī)培養(yǎng)基中，混勻。按照接種量0.5% 體積比接入長(zhǎng)雙歧桿菌于TPY常規(guī)培養(yǎng)基，37°C靜置培養(yǎng)8小時(shí)活化，活化后的青春雙歧桿 菌將WO. 1%體積比接入到中藥增強(qiáng)的TPY培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)1地，培養(yǎng)液盡量充滿培 養(yǎng)瓶，減少氧氣含量。培養(yǎng)時(shí)間按照不同體積通過(guò)測(cè)定OD值確定培養(yǎng)終點(diǎn)。
[0028] (4)在酶標(biāo)儀或分光光度計(jì)上測(cè)得0D600數(shù)值，測(cè)定單獨(dú)、不同組合中藥增強(qiáng)培養(yǎng) 基培養(yǎng)的雙歧桿菌的0D600數(shù)值，并且活菌采用不同稀釋度，在TPY常規(guī)培養(yǎng)基加牛肉湯和 豬肝湯及瓊脂的平板上厭氧培養(yǎng)，計(jì)算同步0D600測(cè)量值與活菌數(shù)的線性關(guān)系，從而通過(guò)OD 值直接換算出活菌數(shù)。結(jié)果，TPY培養(yǎng)基中添加了單味中藥、兩兩組合或者S者混合的中藥 組方的雙歧桿菌OD值和活菌數(shù)見(jiàn)表1。
[0029] 表1添加太子參、北沙參、黃巧培養(yǎng)的雙歧桿菌活菌數(shù)
[0030]
[0031] (5)將已經(jīng)測(cè)定確定最佳組合的中藥增強(qiáng)雙歧桿菌大批培養(yǎng)發(fā)酵，發(fā)酵液自動(dòng)灌 裝成100mL，250ml，500ml等不同體積的口服液，或者經(jīng)過(guò)8000巧m離屯、濃縮發(fā)酵液，得菌泥。 冷凍干燥，按菌泥:凍干保護(hù)劑=15:1 (V/V)加入凍干保護(hù)劑，充分混合均勻。凍干保護(hù)劑配 方為￥。1.5巧*%，谷氨酸鋼1.5巧*%，脫脂乳16巧*%，乳糖10巧*%，溶劑為去離子水.然后將 上述樣品置于真空冷凍干燥機(jī)中，預(yù)凍至一40°C，啟動(dòng)真空，在0.1 mmHg的真空條件下進(jìn)行 真空冷凍干燥。待樣品完全干燥后，釋放真空，取出制得的菌粉，粉碎，過(guò)40目篩得中藥增強(qiáng) 雙歧桿菌菌粉?？诜夯蚓劭蒞直接口服使用，或加入牛奶中口服使用。
[0032] 實(shí)施例2
[0033] (1)中藥水提液的制備:取蟲草花500g，W料液比1:30(g/ml)加入90°C熱水，在水 浴上90°C提取化，過(guò)濾除渣，加熱濃縮至500ml(即相對(duì)于生藥量為lg/ml)，12rC高壓滅菌 40min〇
[0034] (2)雙歧桿菌TPY常規(guī)培養(yǎng)基的配制同實(shí)例1所述。
[00巧](3)將上述濃縮的中藥水提液離屯、，離屯、轉(zhuǎn)速6000巧m，離屯、時(shí)間lOmin。按體積比， 取蟲草花濃縮液20ml單獨(dú)加入到IL高壓過(guò)的TPY常規(guī)培養(yǎng)基中，混勻。按照接種量0.5%體 積比接入青春雙歧桿菌于TPY常規(guī)培養(yǎng)基，37°C靜置培養(yǎng)8小時(shí)活化，活化后的長(zhǎng)雙歧桿菌 將WO. 1%體積比接入到蟲草花增強(qiáng)的TPY培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)1地，培養(yǎng)液盡量充滿培 養(yǎng)瓶，減少氧氣含量。培養(yǎng)時(shí)間