白蓮蒿提取物不同活性部位的制備及其作為殺螨活性物質(zhì)的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于植物源農(nóng)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種殺螨活性物質(zhì)的制備，尤其涉及白蓮 蒿不同活性部位的制備；本發(fā)明同時(shí)還涉及白蓮蒿不同活性部位的殺螨活性及其制備殺螨 劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 螨類（mites)隸屬于蛛形綱（Arachnida)，蜱螨亞綱（Acari)，種類繁多，全球約有 30-50萬種，是動(dòng)物界中僅次于昆蟲綱的第二大生物類群。依據(jù)其經(jīng)濟(jì)學(xué)意義，可分為醫(yī)牧 蜱螨和農(nóng)業(yè)害螨2大類。農(nóng)業(yè)害螨破壞植物的正常生理機(jī)能，引起落葉、落蕾、落果，輕則造 成減產(chǎn)，重則整株死亡，其中不少螨類還能傳播植物病害，是公認(rèn)的最難防治的農(nóng)業(yè)害蟲之 〇
[0003] 目前農(nóng)業(yè)上防治害螨的，化學(xué)殺螨劑仍占現(xiàn)行殺螨劑品種的絕大部分；僅有的植 物源、礦物油殺螨劑均還屬于第一代殺螨劑，殺螨效能較低，且易產(chǎn)生藥害。面對(duì)日益嚴(yán)重 的環(huán)境和食品安全問題，使用高效、低毒、低殘留、對(duì)環(huán)境安全的生物農(nóng)藥，已成為農(nóng)藥開發(fā) 研宄的新方向。
[0004] 蒿屬（Artemisia)是菊科（Compositae)春黃菊族（Anthemideae)的一個(gè)大 屬，全世界約300余種。我國(guó)有186種，44變種，分布全國(guó)各地，為我國(guó)種子植物中少有 的大屬，是民間廣泛使用的一大類藥物，其中1/3種已藥用，有消炎、清熱、解毒、活血、止血 之效，也被報(bào)道具有殺蟲、殺螨、殺菌、除草、殺線蟲和殺軟體動(dòng)物活性(周利娟，桑曉清，孫 永艷，楊文杰.蒿屬植物的農(nóng)藥活性及其有效成分.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，34(4): 699-705.)。白蓮蒿（sacrorttT? Ledeb.)是草原區(qū)山地草原亞類中分布的1 種重要的蒿類植物，分布面積較廣，有清熱解毒、涼血止血等功效。但是利用白蓮蒿防治病 蟲害的功能卻未見研宄報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供白蓮蒿提取物不同活性部位的制備方法； 本發(fā)明的另一目的在于提供利用白蓮蒿提取物不同活性部位為殺螨活性物質(zhì)制備殺 螨劑的應(yīng)用。
[0006] 一、白蓮蒿不同活性部位的制備 1、白蓮高提取物的制備 采集成熟期新鮮白蓮蒿植物地上部位，陰干粉碎后，加入其10-50倍體積的50-100%乙 醇水溶液，超聲或加熱回流提取10-90分鐘，提取液減壓濃縮得浸膏，然后在通風(fēng)避光處晾 干，得白蓮蒿提取物。
[0007] 2、白蓮蒿不同活性部位的制備 將白蓮蒿提取物用其100-2000倍體積的蒸餾水溶解，再加入白蓮蒿提取物2-10倍體 積的石油醚，劇烈振蕩，靜置分層，上清液為石油醚層，下層水溶液用石油醚重復(fù)萃取2-5 次，合并石油醚層，減壓濃縮，制得白蓮蒿石油醚相。
[0008] 石油醚萃取后的水溶液中加入水溶液2-10倍體積的乙酸乙酯，劇烈振蕩，靜置分 層，上清液為乙酸乙酯層，下層水溶液用乙酸乙酯重復(fù)萃取2-5次，合并乙酸乙酯層，減壓 濃縮，制得白蓮蒿乙酸乙酯相。
[0009] 乙酸乙酯萃取后剩余水溶液中加入水溶液2-10倍體積的正丁醇，劇烈振蕩，靜置 分層，上清液為正丁醇層；下層水溶液用正丁醇重復(fù)萃取2-5次，合并正丁醇層，減壓濃縮， 制得白蓮蒿正丁醇相。
[0010] 將正丁醇萃取后剩余水溶液，減壓濃縮，制得白蓮蒿水相。
[0011] 二、白蓮蒿不同活性部位(萃取相）的殺螨活性 1、供試葉螨：葉螨是最重要的農(nóng)業(yè)害螨，也是農(nóng)業(yè)害螨中最大的類群。本發(fā)明測(cè)試的是 采自田間未施藥黃豆苗上的朱砂葉螨ci/zaaAari/ws (Boiduval)]，選用雌 成螨。該螨為世界植食性害螨，因其個(gè)體小、繁殖快、種群密度大、發(fā)育歷期短、行動(dòng)范圍小、 適應(yīng)性強(qiáng)、突變率高且易發(fā)生抗藥性等特點(diǎn)，是公認(rèn)的最難防治的有害生物類群之一（何林 等，植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2004, 31 (4)，395-400)。
[0012] 2、不同濃度測(cè)試樣品的配制：選取上述制備的白蓮蒿不同萃取相，分別用含10% 蒸餾水的丙酮液配制成2 mg/mL濃度的母液，在預(yù)試的基礎(chǔ)上用蒸餾水將母液稀釋成不同 梯度濃度的溶液待測(cè)。生物測(cè)定前加入1%的表面活性劑JFC (C7-C9烷醇聚氧乙烯醚)。
[0013] 3、生物活性測(cè)定方法：參照FAO (聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織）推薦的測(cè)定螨類的標(biāo)準(zhǔn) 方法--玻片浸漬法，并加以改進(jìn)（Wang Y. J.，ei a/· Agrochemical Research Application. 2006，10，20 - 23.)。將雙面膠帶剪成2~3 cm長(zhǎng)，貼在顯微鏡載玻片的一 端，用鑷子揭去膠帶上的紙片，用零號(hào)毛筆挑選大小一致、體色鮮艷、行動(dòng)活潑的雌成螨，將 其背部粘在雙面膠帶上(注意：不要粘住螨足、螨須和口器)，每片粘3行，每行粘10頭。在 溫度（25±1) °C、相對(duì)濕度85%左右的生化培養(yǎng)箱中放置4 h后，用雙目鏡觀察，剔除死亡 或不活潑個(gè)體。藥液配好后將帶螨玻片的一端浸入藥液中，輕輕搖動(dòng)5 s后取出，迅速用吸 水紙吸干螨體及其周圍多余的藥液。置于上述生化培養(yǎng)箱中，24 h后用雙目鏡檢查死亡數(shù)， 計(jì)算死亡率。用毛筆輕觸螨體，以螨足不動(dòng)者為死亡。以含10%蒸餾水的丙酮液稀釋同樣 的倍數(shù)+JFC浸漬處理作為溶劑對(duì)照。對(duì)照組死亡率在10%以下為有效測(cè)定，用Abbott公 式對(duì)處理組死亡率進(jìn)行校正。5個(gè)濃度測(cè)定平行進(jìn)行3次，取其平均值。試驗(yàn)結(jié)果分析采用 SPSS統(tǒng)計(jì)軟件(版本13. 0)進(jìn)行。
[0014] 4、測(cè)試結(jié)果：見表1。表1的結(jié)果表明，本發(fā)明制備的白蓮蒿不同萃取部位均對(duì)農(nóng) 業(yè)害螨具有明顯的觸殺活性，其中以水相和正丁醇相為最高，特別是水相部位。水相部位在 0. 25 mg/mL的低濃度下，就可以對(duì)朱砂葉螨產(chǎn)生90%以上的觸殺活性，具有很好的應(yīng)用價(jià) 值和開發(fā)前景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 白蓮蒿提取物不同活性部位的制備方法，包括以下步驟： (1) 白蓮高提取物的制備 采集成熟期新鮮白蓮蒿植物的地上部位，陰干粉碎后，加入其10-50倍體積的50-100% 乙醇水溶液，超聲或加熱回流提取10-90分鐘，提取液減壓濃縮得浸膏，然后在通風(fēng)避光處 晚干，得白蓮高提取物； (2) 不同活性部位的制備 將白蓮蒿提取物用其100-2000倍體積的蒸餾水溶解后，加入白蓮蒿提取物2-10倍體 積的石油醚，劇烈振蕩，靜置分層，上清液為石油醚層，下層水溶液用石油醚重復(fù)萃取2-5 次，合并石油醚層，減壓濃縮，制得白蓮蒿石油醚相活性部位； 石油醚萃取后的水溶液中加入水溶液2-10倍體積的乙酸乙酯，劇烈振蕩，靜置分層， 上清液為乙酸乙酯層，下層水溶液用乙酸乙酯重復(fù)萃取2-5次，合并乙酸乙酯層，減壓濃 縮，制得白蓮蒿乙酸乙酯相活性部位； 乙酸乙酯萃取后的水溶液中加入水溶液2-10倍體積的正丁醇，劇烈振蕩，靜置分層， 上清液為正丁醇層；下層水溶液用正丁醇重復(fù)萃取2-5次，合并正丁醇層，減壓濃縮，制得 白蓮蒿正丁醇相活性部位； 將正丁醇萃取后剩余水溶液減壓濃縮，制得白蓮蒿水相活性部位。
2. 如權(quán)利要求1所述方法制備的白蓮蒿提取物不同活性部位作為殺螨活性物質(zhì)用于 制備殺蝴劑。
3. 如權(quán)利要求2所述白蓮蒿提取物不同活性部位作為殺螨活性物質(zhì)用于制備殺螨劑， 其特征在于：將制備的白蓮蒿不同活性部位分別用含蒸餾水的丙酮液配制成濃度0. 5~10 mg/mL的母液，再用蒸餾水將母液稀釋成白蓮蒿活性部位濃度為0. 05~5. 0 mg/mL的溶液； 然后加入表面活性劑混合均勻，即得不同活性殺螨劑。
4. 如權(quán)利要求3所述白蓮蒿提取物不同活性部位作為殺螨活性物質(zhì)用于制備殺螨劑， 其特征在于：含蒸餾水的丙酮液中，蒸餾水的體積百分?jǐn)?shù)為0~20%。
5. 如權(quán)利要求書3所述白蓮蒿提取物不同活性部位作為殺螨活性物質(zhì)用于制備殺螨 劑，其特征在于：表面活性劑為C7-C9烷醇聚氧乙烯醚。
6. 如權(quán)利要求書5所述白蓮蒿提取物不同活性部位作為殺螨活性物質(zhì)用于制備殺螨 劑，其特征在于：表面活性劑的加入量為藥液體積的0. 5~10%。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種白蓮蒿提取物不同活性部位的制備，是將成熟期新鮮白蓮蒿植物的地上部位陰干粉碎后進(jìn)行醇提，減壓濃縮，晾干，得白蓮蒿提取物；再將白蓮蒿提取物用蒸餾水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇及水相四種不同活性部位。以白蓮蒿為植物源制備的殺螨劑，對(duì)農(nóng)業(yè)害螨具有非常明顯的觸殺活性，并且對(duì)農(nóng)作物有促生作用，在毒殺害螨的過程中提高了農(nóng)作物的生產(chǎn)力和抗逆性，保證了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的增產(chǎn)增收。作為安全無毒，綠色環(huán)保的植物源農(nóng)藥，對(duì)環(huán)境友好，對(duì)害蟲天敵和人畜安全，對(duì)于建立新型的綠色生態(tài)農(nóng)業(yè)具有重要意義。
【IPC分類】A01P7-02, A01P21-00, A01N65-12
【公開號(hào)】CN104705349
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510163022
【發(fā)明人】劉權(quán), 李曉蓓, 賀原花
【申請(qǐng)人】蘭州大學(xué)
【公開日】2015年6月17日
【申請(qǐng)日】2015年4月8日