專利名稱：多功能生防菌劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是一種用于防治土傳病害的生物農(nóng)藥及其制備方法。
背景技術(shù)：
隨著保護地種植面積的快速發(fā)展，土壤中植物病原菌含量逐年增多，致使病害發(fā)生越來越重。以瓜類枯萎病為例，過去一般發(fā)病率僅在10％左右，現(xiàn)在已上升到15％-20％，嚴(yán)重的地塊達50％以上，甚至毀種，給農(nóng)民造成極大的經(jīng)濟損失。目前生產(chǎn)上對土傳病害的防治還是以化學(xué)農(nóng)藥為主，如氯化苦、溴甲烷及其它化學(xué)殺菌劑等處理土壤。長期頻繁、大劑量地使用化學(xué)農(nóng)藥，使植物病原菌的抗藥性逐漸提高，迫使用藥量不斷加大，不僅增加了防治成本，也造成環(huán)境污染，降低了果菜的食用安全性。對此，國際上早已采取措施，逐漸限制某些劇毒、高毒農(nóng)藥的使用。我國近年已公布了幾批禁止使用的化學(xué)農(nóng)藥，并大力提倡研制、開發(fā)對人、畜無毒對環(huán)境無污染的生物農(nóng)藥?，F(xiàn)在，世界各國都在加大生物農(nóng)藥的研究開發(fā)力度。目前國際上已開發(fā)注冊的產(chǎn)品有綠粘帚霉(Gliocladium virens)黃絲曲霉(Talaromycesfavus)、熒光假單孢菌(Pseudomonas fluorescense)、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)及哈氏木霉Trichodex等。我國也有一些木霉菌生物農(nóng)藥的專利，但真正進入大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)品種只有山東省民豐實業(yè)有限公司生產(chǎn)的特立克(Trichoderma sp)可濕性粉劑。由于各種技術(shù)原因，如產(chǎn)品性能不穩(wěn)定，有效含量低，施入土壤后不能在作物根部很快定植形成有效群體，使整體防效不佳，這在很大程度上制約了生物農(nóng)藥的發(fā)展。
本發(fā)明的目的是提供一種用于防治植物土傳病害的多功能生防菌劑及其制備方法，克服已有技術(shù)的不足，根據(jù)土傳病害的發(fā)生特點，從作物根表分離出木霉菌，加入多種礦質(zhì)營養(yǎng)元素作為增效劑和以輕質(zhì)碳酸鈣為吸附劑，可提高防治效果達75％以上，增產(chǎn)15％以上。
本發(fā)明的技術(shù)方案內(nèi)容是本發(fā)明所采用的生防菌是取自于作物根際的木霉菌，將其純化后轉(zhuǎn)移至試管斜面內(nèi)作母菌劑，并在三角瓶內(nèi)振蕩培養(yǎng)為液體菌種，再經(jīng)生產(chǎn)罐發(fā)酵制成孢子懸浮液，所采用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基成分為馬鈴薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸二氫鉀1-2克，硫酸鎂0.5-1克，加水至1000毫升；上述液體培養(yǎng)基調(diào)pH值為6-7，滅菌時間121℃下30分鐘，菌種發(fā)酵用250毫升三角瓶，發(fā)酵溫度28-30℃，發(fā)酵時間為3-5天；生產(chǎn)罐發(fā)酵溫度為25-30℃，發(fā)酵時間為5-9天，制得木霉菌孢子懸浮液。
多功能生防菌劑組成成分按重量百分比為木霉菌孢子懸浮液(厚垣孢子含量1×108個/ml)15-20，輕質(zhì)碳酸鈣20-30，硅藻土40-53，磷酸二氫鉀3-5， 硫酸鈣1-2，硫酸鎂0.5-1，鉬酸 0.5-1，硼酸 0.1-0.4， 硫酸鋅0.1-0.4，硫酸錳0.1-0.4， 硫酸亞鐵 0.1-0.4；先將載體輕質(zhì)碳酸鈣和硅藻土按組分重量百分比混合均勻，再將木霉菌孢子懸浮液用載體充分吸附，再先后加入礦質(zhì)營養(yǎng)元素磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸鈣、鉬酸、硼酸、硫酸錳、硫酸亞鐵、硫酸鋅，充分混合均勻，制成多功能生防菌劑。
多功能生防菌劑的生產(chǎn)加工工藝流程見說明書附圖1。
本發(fā)明的優(yōu)點是從作物根表分離的拮抗菌株木霉菌(Trichodermaharzianum)是土壤腐生菌，施用后，可在作物根表迅速定植，通過與病原菌競爭養(yǎng)分及重寄生作用在短時間內(nèi)造成病原菌菌絲體崩解。其厚垣孢子具有抵抗高溫、干燥及營養(yǎng)缺乏等不良環(huán)境的能力，通過人工培養(yǎng)后又放歸于自然，并使之在自然微生物區(qū)系中進一步繁衍，形成有益微生物在土壤中的良性循環(huán)，有利于保持根際微生態(tài)的自然平衡，達到對病害的持續(xù)控制，對作物無殘留，對環(huán)境無污染，對人畜安全。
本發(fā)明利用作物、病源菌和木霉菌對不同營養(yǎng)元素的生理反應(yīng)差異，加入適量的營養(yǎng)元素作為增效因子，這些礦質(zhì)營養(yǎng)元素都是植物生長所必須的，一方面可提高植物抗性，強化生防效果，另一方面可促進植物生長，提高產(chǎn)品的產(chǎn)量和質(zhì)量，具有防病增產(chǎn)的雙重功能。成本低，效益高，施用方便，利用本發(fā)明的制劑防治土傳病害，可得到高于化學(xué)農(nóng)藥的防治效果。


圖1是本發(fā)明的生產(chǎn)工藝流程示意圖。
具體實施例方式
實施例1取作物根表土壤10克，加無菌水100毫升，經(jīng)振蕩后稀釋至10000倍液，取1毫升稀釋液與9毫升加入硫酸鏈霉素的PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培養(yǎng)48小時，經(jīng)分離獲得木霉菌(Trichoderma harzianum)，經(jīng)純化后轉(zhuǎn)移至試管斜面內(nèi)作母菌劑。
二級菌種發(fā)酵所采用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200克、葡萄糖20克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克、加水至000毫升。
制作方法是將馬鈴薯去皮后切成1厘米見方的小塊，加1000毫升水煮沸30分鐘，用紗布濾去馬鈴薯，再加水補到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氫鉀2克、硫酸鎂1克并使之完全溶化，該液體培養(yǎng)基調(diào)pH值為6.5，滅菌時間121℃下30分鐘，菌種發(fā)酵用250毫升三角瓶，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時間為5天。生產(chǎn)罐發(fā)酵所采用的培養(yǎng)基及其滅菌方法與二級菌種發(fā)酵方法相同，接菌量為5％，發(fā)酵溫度為26℃，發(fā)酵時間9天。制得木霉菌孢子懸浮液。
按組分重量百分比將載體硅藻土42克和輕質(zhì)碳酸鈣30克混合均勻，然后將制得的木霉菌孢子懸浮液(厚垣孢子含量1×108個/ml)20毫升與載體硅藻土和輕質(zhì)碳酸鈣充分吸附，再與礦質(zhì)營養(yǎng)元素磷酸二氫鉀5克、硫酸鈣1克、硫酸鎂0.5克、鉬酸1克、硼酸0.2克、硫酸錳0.1克、硫酸亞鐵0.1克、硫酸鋅0.1克，充分混合均勻，制成多功能生防菌劑。
將多功能生防菌劑與500-600倍營養(yǎng)土混合均勻，裝營養(yǎng)缽育苗，防治蔬菜土傳病害，防治效果達75％以上。
實施例2取作物根表土壤10克，加無菌水100毫升，經(jīng)振蕩后稀釋至10000倍液，取1毫升稀釋液與9毫升加入硫酸鏈霉素的PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200克、葡萄糖20克、瓊脂20克、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培養(yǎng)48小時，經(jīng)分離獲得木霉菌(Trichoderma harzianum)，經(jīng)純化后轉(zhuǎn)移至試管斜面內(nèi)作母菌劑。
二級菌種發(fā)酵所采用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為馬鈴薯200克、葡萄糖20克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克、加水至1000毫升。
制作方法是將馬鈴薯去皮后切成1厘米見方的小塊，加1000毫升水煮沸30分鐘，用紗布濾去馬鈴薯，加水補到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克并使之完全溶化，該液體培養(yǎng)基調(diào)pH值為7，滅菌時間121℃下30分鐘，菌種發(fā)酵用250毫升三角瓶，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時間為5天。生產(chǎn)罐發(fā)酵所采用的培養(yǎng)基及其滅菌方法與二級菌種發(fā)酵方法相同，接菌量為5％，發(fā)酵溫度為28℃，發(fā)酵時間為7天。制得木霉菌孢子懸浮液按組分重量百分比將載體硅藻土48克和輕質(zhì)碳酸鈣25克混合均勻，然后將制得的木霉菌孢子懸浮液(厚垣孢子含量1×108個/ml)20克與載體硅藻土和輕質(zhì)碳酸鈣充分吸附，再與礦質(zhì)營養(yǎng)元素磷酸二氫鉀3.5克、硫酸鎂1克、硫酸鈣1克、鉬酸0.6克、硼酸0.3克、硫酸錳0.2克、硫酸亞鐵0.2克、硫酸鋅0.2克，充分混合均勻，制成多功能生防菌劑。
將多功能生防菌劑與500-600倍營養(yǎng)土混合均勻，裝營養(yǎng)缽育苗，防治瓜類土傳病害，防治效果達70％以上。
實施例3取作物根表土壤10克，加無菌水100毫升，經(jīng)振蕩后稀釋至10000倍液，取1毫升稀釋液與9毫升加入硫酸鏈霉素的PDA培養(yǎng)基(馬鈴薯200克、葡萄糖20g、瓊脂20g、水1000毫升)一起制成平板，在26℃下培養(yǎng)48小時，經(jīng)分離獲得木霉菌(Trichoderma harzianum)，經(jīng)純化后轉(zhuǎn)移至試管斜面內(nèi)作母菌劑。
二級菌種發(fā)酵所采用的液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方為馬鈴薯150克、葡萄糖15克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克、加水至1000毫升制作方法是將馬鈴薯去皮后切成1厘米見方的小塊，加1000毫升水煮沸30分鐘，用紗布濾去馬鈴薯，加水補到1000毫升，然后加入葡萄糖20克、磷酸二氫鉀1克、硫酸鎂0.5克并使之完全溶化，該液體培養(yǎng)基調(diào)pH值為6，滅菌時間121℃下30分鐘，菌種發(fā)酵用250毫升三角瓶，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時間為5天。生產(chǎn)罐發(fā)酵所采用的培養(yǎng)基及其滅菌方法與二級菌種發(fā)酵方法相同，接菌量為5％，發(fā)酵溫度為30℃，發(fā)酵時間5天。
按組分重量百分比將載體硅藻土51克和輕質(zhì)碳酸鈣20克混合均勻，然后將制得的木霉菌孢子懸浮液(厚垣孢子含量1×108個/ml)20毫升與載體硅藻土和輕質(zhì)碳酸鈣充分吸附，再與礦質(zhì)營養(yǎng)元素磷酸二氫鉀4克、硫酸鎂0.5克、硫酸鈣2克、鉬酸0.5克、硼酸0.3克、硫酸錳0.2克、硫酸亞鐵0.2克、硫酸鋅0.3克，充分混合均勻，制成多功能生防菌劑。
將多功能生防菌劑與500-600倍營養(yǎng)土混合均勻，穴施50克，防治玉米土傳病害，防治效果達80％以上。
權(quán)利要求
1.一種多功能生防菌劑，其特征是所含各種成分及重量百分比如下木霉菌孢子懸浮液(厚垣孢子含量1×108個/ml)15-20，輕質(zhì)碳酸鈣20-30， 硅藻土40-53，磷酸二氫鉀3-5， 硫酸鈣1-2，硫酸鎂0.5-1， 鉬酸0.5-1，硼酸0.1-0.4， 硫酸鋅0.1-0.4，硫酸錳0.1-0.4， 硫酸亞鐵0.1-0.4；
2.一種多功能生防菌劑的制備方法，其特征是利用從作物根表分離到的木霉菌，采用液體發(fā)酵方法制得孢子懸浮液為主要成分，先將載體輕質(zhì)碳酸鈣和硅藻土按組分重量百分比混合均勻，再將木霉菌孢子懸浮液用載體充分吸附，再先后加入礦質(zhì)營養(yǎng)元素磷酸二氫鉀、硫酸鎂、硫酸鈣、鉬酸、硼酸、硫酸錳、硫酸亞鐵、硫酸鋅，充分混合均勻，制成；其中液體發(fā)酵所用的培養(yǎng)基成分為馬鈴薯150-200克，葡萄糖15-20克，磷酸二氫鉀1-2克，硫酸鎂0.5-1克，加水成1000毫升溶液。培養(yǎng)液的pH值為6-7，滅菌時間121℃下30分鐘，發(fā)酵溫度25-30℃，發(fā)酵時間為5-9天，以檢測90％以上的菌絲形成厚垣孢子即可。
全文摘要
本發(fā)明是一種以作物根際土壤中分離出的木霉菌(Trichodermaharzianum)厚垣孢子為主要成分，以少量礦質(zhì)營養(yǎng)元素為增效劑，以輕質(zhì)碳酸鈣及硅藻土為載體的多功能生防菌劑及其制備方法。該菌劑主要用于防治由鐮孢菌、腐霉菌、輪枝菌、絲核菌等病原真菌引起的多種作物土傳病害，同時具有提高植物自身抗性、增加產(chǎn)量的多重功能。生產(chǎn)周期短，防治效果穩(wěn)定持久，對作物無殘留，對環(huán)境無污染，對人畜安全。
文檔編號A01N59/26GK1557164SQ200410021080
公開日2004年12月29日 申請日期2004年1月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月18日
發(fā)明者莊敬華, 陳捷, 高增貴 申請人:沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)