合率是藥物與血漿蛋白結(jié)合的量占藥物總濃度的百分率，是藥物代謝動(dòng)力學(xué)的重要參數(shù)之一。它影響藥物在體內(nèi)的分布、代謝與排泄，從而影響其作用強(qiáng)度和時(shí)間，并往往與藥物的相互作用及作用機(jī)制等密切相關(guān)。因此，藥物血漿蛋白結(jié)合率的研究對(duì)于指導(dǎo)臨床合理用藥都具有重要意義。
[0028]在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，該應(yīng)用還包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理Caco-2細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值、頭孢唑肟鈉的通透性和堿性磷酸酶活性，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的透膜性和細(xì)胞吸收能力。
[0029]在一種優(yōu)選的實(shí)施方式中，該應(yīng)用還包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理整體動(dòng)物、S9、人腸微粒體及單克隆純化酶檢測(cè)頭孢唑肟鈉體外代謝穩(wěn)定性及代謝產(chǎn)物的鑒定，通過(guò)結(jié)合LC-MS/MS，WR技術(shù)，在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)頭孢唑肟鈉可能的I相及II相代謝產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。體外代謝穩(wěn)定性是預(yù)測(cè)化合物生物半衰期的重要手段?；谀c微粒體技術(shù)以及重組單克隆P450酶技術(shù)建立了體外快速代謝酶鑒定及藥物代謝相互作用平臺(tái)。根據(jù)藥物在腸微粒體中的消除速率以及在各種與藥物代謝密切相關(guān)的P450酶亞型如CYPIA2、2A6、286、2C8、2C9、2C19、2D6、3A4等特異性抑制劑存在下的消除速率差異研究，判斷何種酶亞型可能參與了該藥的代謝。根據(jù)微粒體研究結(jié)果，進(jìn)一步應(yīng)用單克隆酶進(jìn)行確證，并進(jìn)行深入的酶動(dòng)力學(xué)參數(shù)與代謝途徑研究。
[0030]應(yīng)用各種與藥物代謝密切相關(guān)的CYP450酶亞型的特異性抑制劑，在體外腸微粒體體系中進(jìn)行藥物代謝表型的初步確證，而后根據(jù)初步結(jié)果選擇相應(yīng)的CYP450酶亞型單克隆酶進(jìn)行確證。通過(guò)二種方法的結(jié)合研究，可以大降低研究成本，相比于國(guó)外直接應(yīng)用單克隆酶進(jìn)行研究，本項(xiàng)技術(shù)具有更為通用、簡(jiǎn)便及低成本的特點(diǎn)。
[0031]代謝產(chǎn)物與藥物在體內(nèi)的藥效活性及毒性作用密切相關(guān)，通過(guò)結(jié)合LC-MS/MS，NMR等結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)，在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)該藥物可能的I相及II相代謝產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。
[0032]藥物的II相代謝通常是其最終消除和解毒的過(guò)程，因此II相代謝研究對(duì)于深入了解藥物的體內(nèi)處置機(jī)制，尤其是有毒藥物的解毒過(guò)程與機(jī)制具有十分重要的意義。本發(fā)明采用了動(dòng)物小腸黏膜胞質(zhì)液和微粒體及其混合液(S9)對(duì)化合物的II相代謝進(jìn)行了系列研究。本發(fā)明采用以葡萄糖醛酸酶、硫酸酶水解后測(cè)定相應(yīng)的I相代謝物或原形藥的方法進(jìn)行II相結(jié)合產(chǎn)生定量研究。
[0033]本發(fā)明還提供了臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一定時(shí)間后，收集血液，采用高效親和色譜法測(cè)定頭孢唑肟鈉與血漿蛋白的結(jié)合率。
[0034]本發(fā)明還提供了臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理Caco-2細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值、頭孢唑肟鈉的通透性和堿性磷酸酶活性，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的透膜性和細(xì)胞吸收能力。
[0035]本發(fā)明還提供了臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理整體動(dòng)物、S9、人腸微粒體及單克隆純化酶，檢測(cè)頭孢唑肟鈉體外代謝穩(wěn)定性及代謝產(chǎn)物的鑒定，通過(guò)結(jié)合LC-MS/MS，NMR技術(shù)，在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)該藥物可能的I相及II相代謝產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。
[0036]本發(fā)明提供的臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括采用高通量、高靈敏度定量分析技術(shù);運(yùn)用新的高效親和色譜法測(cè)定頭孢唑肟鈉在注射后的血漿蛋白結(jié)合率;采用原代培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，測(cè)定檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的血腦屏障通透性;運(yùn)用Caco-2細(xì)胞模型，對(duì)其透膜性和細(xì)胞吸收能力進(jìn)行了評(píng)價(jià)的綜合運(yùn)用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括: (1)將一定濃度的頭孢挫H虧鈉給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一定時(shí)間后，收集血液、尿液和奠便中的一種或多種生物樣品； (2)將步驟(I)中獲得的生物樣品采用液液萃取、蛋白沉淀、固相萃取技術(shù)進(jìn)行處理，制成相應(yīng)的溶液； (3)采用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析步驟(2)中制備的溶液。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，在步驟(2)中，所述液液萃取采用乙酸乙酯和氨水的混合物以及乙酸乙酯和氫氧化鈉的混合物，所述蛋白沉淀采用甲醇沉淀、乙腈沉淀、甲醇和乙腈混合物沉淀。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，在步驟(3)中，通過(guò)系統(tǒng)優(yōu)化流動(dòng)相組成、流動(dòng)相梯度流速、質(zhì)譜離子化條件，以提高對(duì)頭孢唑肟鈉定量分析的靈敏度。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其中，該應(yīng)用還包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理原代培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，測(cè)定檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的血腦屏障通透性。5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，該應(yīng)用還包括采用高效親和色譜法測(cè)定頭孢唑肟鈉在注射一定時(shí)間后與血漿蛋白的結(jié)合率。6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，該應(yīng)用還包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理Caco-2細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值、頭孢唑肟鈉的通透性和堿性磷酸酶活性，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的透膜性和細(xì)胞吸收能力。7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其中，該應(yīng)用還包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理整體動(dòng)物、S9、人腸微粒體及單克隆純化酶檢測(cè)頭孢唑肟鈉體外代謝穩(wěn)定性及代謝產(chǎn)物的鑒定，通過(guò)結(jié)合LC-MS/MS，NMR技術(shù)，在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)該藥物可能的I相及11相代謝產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。8.臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一定時(shí)間后，收集血液，采用高效親和色譜法測(cè)定頭孢唑肟鈉與血漿蛋白的結(jié)合率。9.臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理Caco-2細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞形態(tài)、電阻值、頭孢唑肟鈉的通透性和堿性磷酸酶活性，以檢測(cè)頭孢唑肟鈉的透膜性和細(xì)胞吸收能力。10.臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括將一定濃度的頭孢唑肟鈉處理整體動(dòng)物、S9、人腸微粒體及單克隆純化酶，檢測(cè)頭孢唑肟鈉體外代謝穩(wěn)定性及代謝產(chǎn)物的鑒定，通過(guò)結(jié)合LC-MS/MS，WR技術(shù)，在定量分析的基礎(chǔ)上對(duì)該藥物可能的I相及11相代謝產(chǎn)物進(jìn)行了鑒定。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了臨床前藥物代謝動(dòng)力學(xué)關(guān)鍵技術(shù)與研究體系在頭孢唑肟鈉的應(yīng)用，其包括：(1)將一定濃度的頭孢唑肟鈉給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一定時(shí)間后，收集血液、尿液和糞便中的一種或多種生物樣品；(2)將步驟(1)中獲得的生物樣品采用液液萃取、蛋白沉淀、固相萃取技術(shù)進(jìn)行處理，制成相應(yīng)的溶液；(3)采用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)、液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(LC-MS/MS)分析步驟(2)中制備的溶液。本發(fā)的應(yīng)用，其還可采用Caco-2細(xì)胞檢測(cè)該藥的透膜性和細(xì)胞吸收能力；或包括將一定濃度的該藥處理原代培養(yǎng)腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞，以檢測(cè)該藥的血腦屏障通透性；或采用整體動(dòng)物、S9、人腸微粒體及單克隆純化酶，檢測(cè)該藥體外代謝穩(wěn)定性及代謝產(chǎn)物的鑒定。
【IPC分類(lèi)】A61P31/04, G01N30/02, A61K31/546, G01N33/50
【公開(kāi)號(hào)】CN105510467
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510924555
【發(fā)明人】盧婷, 劉曉東
【申請(qǐng)人】劉曉東, 山西振東泰盛制藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2015年12月14日