專利名稱：：一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及功能相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)
技術(shù)領(lǐng)域：
，更具體地，涉及藥物代謝能力相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是指一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法。
背景技術(shù)：
：細(xì)胞色素P450酶(cytochromeP450，CYP)，又稱混合功能氧化酶(mixedfunctionoxidase)和單加氧酶(monooxygenase)，主要存在于肝微粒體中，在外源性化合物(包括藥物和毒物)的生物轉(zhuǎn)化中起著十分重要的作用，它的活性決定藥物的代謝速率，與藥物的清除率有著直接關(guān)系，是藥物代謝的第一相酶，因而又稱為藥物代謝酶。它能代謝和/或活化許多種藥物，以及前致癌物、前毒物和致變劑。P450酶系的基因主要有CYPl，CYP2，CYP3三個(gè)家族，相關(guān)的有以下幾種重要的P450酶CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP2E1、CYP3A4。人類許多藥物代謝CYP450酶具有遺傳變異，研究表明，CYP450酶的許多亞型如CYP1A1、CYP1A2、CYP2A6、CYP2C9、CYP2D6和CYP2E1等酶的活性在人群分布呈遺傳多態(tài)性。細(xì)胞色素P450酶的多態(tài)性是引起個(gè)體對(duì)藥物代謝能力差異的重要因素，根據(jù)受檢者的基因型我們將肝臟代謝能力分為不良型代謝者(PM)、中間型代謝者(IM)、廣泛型代謝者(EM)和超級(jí)型代謝者(UM)四種類型，肝臟代謝能力越弱，各類藥物對(duì)肝臟毒性越大，肝臟藥物代謝能力的強(qiáng)弱由細(xì)胞色素P450酶各亞型基因型所決定。細(xì)胞色素P450酶的不同位點(diǎn)對(duì)應(yīng)不同的藥物，如CYP2C9基因的相關(guān)代謝藥物包括抗炎鎮(zhèn)痛藥(雙氯芬酸、替羅昔康、布洛芬、萘普生、吡羅昔康、甲芬那酸、氟比洛芬、噴哚美辛)、抗癲癇藥(苯妥英、卡馬西平)、抗凝血藥(華法林、雙香豆素)、降血糖藥(甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲)、其它(氯沙坦、托拉塞米、他莫昔芬、屈大麻酚、阿米替林)等，而CYP2C9變異的酶清除率只有野生型的15%20%，易產(chǎn)生底物藥物的副作用，尤其是華法林、苯妥英和一些降糖藥藥物(如格列本脲、格列美脲)，如S-華發(fā)林引起出血，甲苯磺丁脲引起低血糖性休克。因此，如遇到不良型代謝者(PM)和中間型代謝者(IM)的情況下，用藥請(qǐng)咨詢專業(yè)醫(yī)生建議。因此，為了更早地了解藥物代謝能力，進(jìn)而在服用某些藥物時(shí)做到有的放矢，避免某些藥物導(dǎo)致副作用，需要提前通過(guò)基因檢測(cè)準(zhǔn)確篩查出上述藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)的情況，從而了解個(gè)人的基因體質(zhì)與肝臟代謝能力對(duì)藥物的代謝強(qiáng)度，協(xié)助預(yù)測(cè)可能的藥物反應(yīng)，經(jīng)由專業(yè)醫(yī)生的判斷，提供最適合您的藥物清單，避免可能不適應(yīng)的藥物所導(dǎo)致的不良反應(yīng)發(fā)生。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的主要目的就是針對(duì)以上存在的問(wèn)題與不足，提供一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，該檢測(cè)方法設(shè)計(jì)巧妙、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為服用某些藥物時(shí)是否需要咨詢專業(yè)醫(yī)生以確定是否服用及服用劑量等提供參考依據(jù)。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下該藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特點(diǎn)是，包括步驟a.提取來(lái)自人的樣本的基因組DNA;b.根據(jù)至少2個(gè)藥物代謝相關(guān)基因分別設(shè)計(jì)一對(duì)T叫man探針對(duì)和一對(duì)引物對(duì)，所述T叫man探針對(duì)的5'端和3'端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)，分別對(duì)所述基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；c.根據(jù)熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果來(lái)判斷所述藥物代謝相關(guān)基因是否發(fā)生突變。較佳地，所述藥物代謝相關(guān)基因的數(shù)目是4個(gè)。更佳地，所述藥物代謝相關(guān)基因是CYP2C9基因、CYP2C19基因、CYP2D6基因和CYP3A4基因。更進(jìn)一步地，所述Taqman探針對(duì)和所述弓|物對(duì)用于檢測(cè)CYP2C9基因的rs1057910位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4244285位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4986893位點(diǎn)，CYP2D6基因的rsl065852位點(diǎn)，CYP3A4基因的rs28371759位點(diǎn)。較佳地，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。較佳地，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示的核苷酸序列。較佳地，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示的核苷酸序列。較佳地，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:13和SEQIDN0:14所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:15和SEQIDNO:16所示的核苷酸序列。較佳地，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:17和SEQIDN0:18所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和TET標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:19和SEQIDNO:20所示的核苷酸序列。本發(fā)明的創(chuàng)新點(diǎn)在于幾個(gè)藥物代謝有關(guān)的侯檢位點(diǎn)的整合，通過(guò)選取多個(gè)藥物代謝的侯檢位點(diǎn)，根據(jù)CYP2C9基因、CYP2C19基因、CYP2D6基因和CYP3A4基因設(shè)計(jì)特異性引物和Taqman探針對(duì)來(lái)自人的樣本的基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增，根據(jù)產(chǎn)生的熒光的量和熒光的種類可以知道侯檢位點(diǎn)的基因型，設(shè)計(jì)巧妙、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，從而盡早了解個(gè)人的基因體質(zhì)與肝臟代謝能力對(duì)藥物的代謝強(qiáng)度，協(xié)助預(yù)測(cè)可能的藥物反應(yīng)，從而在需要服用某些藥物時(shí)，在遇到不良型代謝者(PM)和中間型代謝者(IM)的情況下，用藥咨詢專業(yè)醫(yī)生建議，經(jīng)由專業(yè)醫(yī)生的判斷，提供最適合的藥物清單，避免可能不適應(yīng)的藥物所導(dǎo)致的不良反應(yīng)發(fā)生。一般而言，如果基因檢測(cè)結(jié)果顯示受檢者是某種藥物的中間型或不良型代謝者，該受檢者使用這種藥物時(shí)應(yīng)減量服用；如果受檢者是廣泛型代謝者，該受檢者使用這種藥物時(shí)請(qǐng)按醫(yī)囑服用；如果受檢者是超級(jí)型代謝者，該受檢者使用這種藥物時(shí)請(qǐng)加量使用。具體實(shí)施例方式為更好的理解本發(fā)明的內(nèi)容，下面結(jié)合具體實(shí)施例作進(jìn)一步說(shuō)明。1.基因組DNA提取1.1試劑和儀器1.1.1試劑和耗材基因組DNA抽提試劑盒(TIANampBLOODDNAkit,DP318-03;TIANampMicro微量樣品基因組DNA提取試劑盒，DP316;TIANamp口腔拭子基因組DNA提取試劑盒，DP322-03)含細(xì)胞裂解液CL;緩沖液GA;緩沖液GS;緩沖液GB;緩沖液GD;漂洗液PW;洗脫緩沖液TB;CarrierRNA;RNase-freeddH20;蛋白酶K(20mg/ml);吸附柱；收集管(2ML);1.5ML無(wú)菌收集管；無(wú)水乙醇。1.1.2儀器DENVILLE260離心機(jī)，XW-80A旋渦混合器，H.H.S指針式電熱恒溫水浴鍋。1.2提取步驟從全血中提取基因組DNA1.2.1取200iil的抗凝全血至1.5ml的E卯endorf管中，如果樣本的量少于200iil，則加入緩沖液GS補(bǔ)充至200ia。如果樣本量多于200iil，需要用細(xì)胞裂解液CL處理，具體步驟如下在樣品中加入1-2.5倍體積的細(xì)胞裂解液CL，顛倒混勻，10，OOOrpm離心1分鐘，吸取上清，留下細(xì)胞核沉淀(如果裂解不徹底，可重復(fù)以上步驟一次)，向離心收集到的細(xì)胞核沉淀中加200iU緩沖液GS，振蕩至徹底混勻。1.2.2加入20iil的蛋白酶K溶液，混勻，再加入200y1的緩沖液GB，立刻充分顛倒混勻。56t:水浴樣本10分鐘，水浴過(guò)程中請(qǐng)每隔3分鐘上下輕柔顛倒混勻樣本，溶液應(yīng)變清亮。(如溶液未徹底變清亮，可延長(zhǎng)裂解時(shí)間至溶液變清亮為止)。1.2.3加入200y1無(wú)水乙醇，充分顛倒混勻，這時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀沉淀。1.2.4將上一步所得溶液和絮狀沉淀都加入一個(gè)吸附柱中(吸附柱放入收集管中)，12，OOOrpm(13，400Xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。1.2.5向吸附柱中加入500iU緩沖液GD(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12，000rpm(13，400Xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。1.2.6向吸附柱中加入700y1漂洗液PW(使用前請(qǐng)先檢查是否已加入無(wú)水乙醇)，12，000rpm(13，400Xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱放入收集管中。1.2.7向吸附柱中加入500iil漂洗液PW，12，000rpm(13，400Xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液。1.2.8將吸附柱放回收集管中，12，OOOrpm(13，400Xg)離心2分鐘，倒掉廢液。吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。1.2.9將吸附柱轉(zhuǎn)入一個(gè)干凈的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加50-200ii1洗脫緩沖液TB，室溫放置2-5分鐘，12，OOOrpm(13，400Xg)離心2分鐘，將溶液收集到離心管中。注意洗脫緩沖液體積不應(yīng)少于50iU，體積過(guò)小影響回收效率。為增加基因組DNA的得率，可將離心得到的溶液再加入吸附柱中，室溫放置2分鐘，12，OOOrpm(13，400Xg)離心2分鐘。洗脫液的pH對(duì)于洗脫效率有很大影響。5若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5范圍內(nèi)(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍)，pH值低于7.0會(huì)降低洗脫效率；且DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在_20°C，以防DNA降解。[OO37]2.Taqman探針?lè)z測(cè)侯檢位點(diǎn)2.1實(shí)驗(yàn)試劑及儀器2.1.1實(shí)驗(yàn)試劑熒光定量試劑:ABITaqMan2XPCRMastermix(P/N:4326614，Lot:G15502)。[OO41]普通PCR試劑寶生物工程(大連)有限公司的ExTaqDNA聚合酶(P/N:DRRIOOB，Lot:CKA1801A)。2.1.2實(shí)驗(yàn)儀器ABI9700型PCR儀和ABI7900HT型熒光定量PCR儀。2.1.3檢測(cè)位點(diǎn)探針及引物表檢測(cè)基因候檢基因位點(diǎn)檢測(cè)探針及引物序列CYP2C9rsl057910A>CSEQIDNO:l，其中5，端標(biāo)記FAM，3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:2，其中5'端標(biāo)記HEX,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:3SEQIDNO:4CYP2C19rs4244285G>ASEQIDNO:5，其中5，端標(biāo)記FAM,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:6，其中5，端標(biāo)記HEX,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:8CYP2C19rs4986893G>ASEQIDNO:9，其中5'端標(biāo)記FAM,3，端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:10,其中5，端標(biāo)記HEX,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:11SEQIDNO:12CYP2D6rsl065852T>CSEQIDNO:13，其中5，端標(biāo)記FAM，3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:14,其中5，端標(biāo)記HEX，3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:15SEQIDNO:16CYP3A4rs28371759T>CSEQIDNO:17，其中5，端標(biāo)記FAM,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:18，其中5'端標(biāo)記TET,3'端標(biāo)記TAMRASEQIDNO:19SEQIDNO:202.2實(shí)驗(yàn)步驟2.2.1將所有樣本DNA的濃度調(diào)整到20ng/ul50ng/ul。2.2.2位點(diǎn)檢測(cè)a.PCR反應(yīng)體系6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>2.2.3根據(jù)反應(yīng)過(guò)程中釋放的熒光的量和熒光的種類來(lái)判斷對(duì)應(yīng)候選位點(diǎn)的基因型。3.結(jié)果分析根據(jù)最終終點(diǎn)讀板結(jié)果分型圖進(jìn)行分析，結(jié)果如下反應(yīng)1:用于檢測(cè)CYP2C9基因的rsl057910位點(diǎn)，相關(guān)代謝藥物包括抗炎鎮(zhèn)痛藥(雙氯芬酸、替羅昔康、布洛芬、萘普生、吡羅昔康、甲芬那酸、氟比洛芬、噴哚美辛)、抗癲癇藥(苯妥英、卡馬西平)、抗凝血藥(華法林、雙香豆素)、降血糖藥(甲苯磺丁脲、格列吡嗪、格列本脲、格列美脲)、其它(氯沙坦、托拉塞米、他莫昔芬、屈大麻酚、阿米替林等)。該候檢位點(diǎn)在人群中有三種基因型AA，AC和CC，其中攜帶AA基因型為正常人群即廣泛型代謝者用EM表示，攜帶AC的人群較攜帶AA基因型的人群的肝臟代謝能力要弱用IM表示，攜帶CC的人群較攜帶前兩種基因型人群的肝臟代謝能力最弱用PM表示，肝臟代謝能力強(qiáng)弱的大小為AA型>AC型>CC型，分型圖分析結(jié)果表明rsl057910位點(diǎn)為AA，為廣泛型代謝者EM;反應(yīng)2:用于檢測(cè)CYP2C19基因的rs4244285位點(diǎn)，相關(guān)代謝藥物包括抗瘧藥(氯胍)、抗抑郁藥(阿米替林、氯米帕明、丙米嗪、西酞普蘭)、抗驚厥藥(美芬妥英、苯妥英、乙苯妥英、地西泮、苯巴比妥、甲苯比妥)、抗?jié)兯?奧美拉唑、蘭索拉唑)、其它(海索比妥、普萘洛爾、卡立普多、硫利噠嗪、華法林等)。該候檢位點(diǎn)在人群中有三種基因型GG，AG和AA，其中攜帶GG基因型為正常人群即廣泛型代謝者用EM表示，攜帶AG基因型的人群較攜帶GG基因型的人群的肝臟代謝能力要弱用IM表示，攜帶AA的人群較攜帶前兩種基因型人群的肝臟代謝能力最弱用PM表示，肝臟代謝能力強(qiáng)弱的大小為GG型>AG型>AA型，分型圖分析結(jié)果表明rs4244285位點(diǎn)為GA，為中間型代謝者IM;反應(yīng)3:用于檢測(cè)CYP2C19基因的rs4986893位點(diǎn)，相關(guān)代謝藥物包括抗瘧藥(氯胍)、抗抑郁藥(阿米替林、氯米帕明、丙米嗪、西酞普蘭)、抗驚厥藥(美芬妥英、苯妥英、乙苯妥英、地西泮、苯巴比妥、甲苯比妥)、抗?jié)兯?奧美拉唑、蘭索拉唑)、其它(海索比妥、普萘洛爾、卡立普多、硫利噠嗪、華法林等)。該候檢位點(diǎn)在人群中有三種基因型GG，AG和AA，其中攜帶GG基因型為正常人群即廣泛型代謝者用EM表示，攜帶AG基因型的人群較攜帶GG基因型的人群的肝臟代謝能力要弱用IM表示，攜帶AA的人群較攜帶前兩種基因型人群的肝臟代謝能力最弱用PM表示，肝臟代謝能力強(qiáng)弱的大小為GG型>AG型>AA型，分型圖分析結(jié)果表明rs4986893位點(diǎn)為GG，為廣泛型代謝者EM;反應(yīng)4:用于檢測(cè)CYP2D6基因的rsl065852位點(diǎn)，相關(guān)代謝藥物包括鎮(zhèn)痛藥(羥考酮、雙氫可待因、可待因、曲馬多)、抗精神病藥(利培酮、硫利噠嗪、奮乃靜、氯氮平、三氟哌多、氟奮乃靜、氯丙嗪、氟哌啶醇)、抗抑郁藥(氯米帕明、去甲替林、阿米替林、丙米嗪、曲米帕明、去甲丙米嗪、唑吡坦、阿米夫胺、氟西汀、帕羅西汀、氟伏沙明、托莫西汀(治療小兒多動(dòng)癥)、曲唑酮、文拉法辛)、抗心律夫常藥(普羅帕酮、美西律、氟卡尼、恩尼卡、司巴丁、阿義馬林、安搏律定)、P受體阻滯劑(美托洛爾、吲哚洛爾、噻嗎洛爾、卡維地洛、丁呋洛爾、普萘洛爾、布非洛爾、波吲洛爾、阿普洛爾)、抗高血壓藥(異喹胍、吲哚拉明、胍生、烏拉地爾、尼麥角林)、其他(右美沙芬、乙基嗎啡、吲哚普利、他克林、哌克西林、苯乙雙胍、氯雷他定、昂丹司瓊、異丙嗪等)。該候檢位點(diǎn)在人群中有三種基因型CC，CT和TT，攜帶CC和CT基因型的為正常人群即廣泛型代謝者用EM表示，攜帶TT基因型的人群較攜帶CC和CT基因型的人群的肝臟代謝能力要弱用IM表示，肝臟代謝能力強(qiáng)弱的大小為CC型和CT型〉TT型，分型圖分析結(jié)果表明rsl065852位點(diǎn)為CT，為廣泛型代謝者EM;反應(yīng)5:用于檢測(cè)CYP3A4基因的rs28371759位點(diǎn)，相關(guān)代謝藥物抗生素(紅霉素、克拉霉素、醋竹桃霉素、阿奇霉素、利福平)、抗真菌藥(依曲康唑、酮康唑)、抗病毒藥(茚地那韋、利托那韋、沙奎那韋、齊多夫定)、鎮(zhèn)痛藥(阿芬太尼芬太尼、可待因、可卡因、雙氫可待因、羥考酮、美散痛、對(duì)乙酰氨基酚、曲馬多)、抗精神病藥(氟哌啶醇、匹莫齊特、氯氮平)、抗抑郁藥(阿米替林、丙米嗪、氯米帕明、奈法唑酮、舍曲林、曲唑酮、西酞普蘭、環(huán)苯扎林)、抗驚厥藥(卡馬西平、三甲雙酮、非爾氨酯)、鎮(zhèn)靜催眠藥(三唑侖、地西泮、唑吡坦)、抗心律夫常藥(胺碘酮、丙吡胺、利多卡因、奎尼丁、普羅帕酮)、鈣拮抗劑(非洛地平、硝苯地平、尼群地平、氨氯地平、尼卡地平、伊拉地平、維拉帕米、地爾硫卓、米貝拉地爾)、調(diào)血脂藥(辛伐他汀、洛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀、苯扎貝特、非諾貝特、吉非貝齊)、抗組胺藥(阿司咪唑、特非那定、氯雷他定、依巴斯汀、氮卓斯汀)、激素類(睪酮、雄酮、可的松、孕二烯酮、雌二醇、地塞米松、米非司酮、甲潑尼龍、黃體酮、潑尼松龍)、抗腫瘤藥(環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺、長(zhǎng)春堿、他莫昔芬、長(zhǎng)春新堿、紫彬醇)、免疫抑制劑(環(huán)孢素、他克莫司)、其它(氯胍、秋水仙堿、葡萄柚汁(飲料，與多種藥物有相互作用)、西地那非(偉哥、萬(wàn)艾可)、格列本脲、R—華法林、齊留通、昂丹司瓊、西沙比禾U、非那雄胺、氟他胺、硫噴妥鈉、沙托司瓊、氯沙坦、奎寧、羅哌卡因、奧美拉唑、氨苯砜、右美沙芬、乙基嗎啡等)。該候檢位點(diǎn)在人群中有三種基因型TT，CT和CC，攜帶TT和CT基因型的為正常人群即廣泛型代謝者用EM表示，攜帶CC基因型的人群較攜帶CT和TT基因型的人群的肝臟代謝能力要強(qiáng)用UM表示，肝臟代謝能力強(qiáng)弱的大小為CC型>TT型和CT型，分型圖分析結(jié)果表明rs28371759位點(diǎn)為T(mén)T，為廣泛型代謝者EM;根據(jù)上述檢測(cè)結(jié)果，可以判斷上述受檢的CYP2C9基因的rsl057910位點(diǎn)、CYP2C19基因的rs4986893位點(diǎn)、CYP2D6基因的rsl065852位點(diǎn)和CYP3A4基因的rs28371759位點(diǎn)正常，為廣泛型代謝者EM，僅CYP2C19基因的rs4244285位點(diǎn)異常，屬于中間型代謝者IM，受檢者需要適當(dāng)注意抗瘧藥(氯胍)、抗抑郁藥(阿米替林、氯米帕明、丙米嗪、西酞普蘭)、抗驚厥藥(美芬妥英、苯妥英、乙苯妥英、地西泮、苯巴比妥、甲苯比妥)、抗?jié)兯?奧美拉唑、蘭索拉唑)、其它(海索比妥、普萘洛爾、卡立普多、硫利噠嗪、華法林)等藥物的服用，最好用藥時(shí)咨詢專業(yè)醫(yī)生，經(jīng)由專業(yè)醫(yī)生的判斷，提供最適合的藥物清單，避免可能不適應(yīng)的藥物所導(dǎo)致的不良反應(yīng)發(fā)生。綜上所述，本發(fā)明的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法設(shè)計(jì)巧妙、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為服用某些藥物時(shí)是否需要咨詢專業(yè)醫(yī)生以確定是否服用及服用劑量等提供參考依據(jù)。需要說(shuō)明的是，在本發(fā)明中提及的所有文獻(xiàn)在本申請(qǐng)中引用作為參考，就如同每一篇文獻(xiàn)被單獨(dú)引用作為參考那樣。此外應(yīng)理解，以上所述的是本發(fā)明的具體實(shí)施例及所運(yùn)用的技術(shù)原理，在閱讀了本發(fā)明的上述內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改而不背離本發(fā)明的精神與范圍，這些等價(jià)形式同樣落在本發(fā)明的范圍內(nèi)。序列表〈110〉上?；瞪锛夹g(shù)有限公司〈120〉一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法〈160>20〈210>1〈211>18〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈221>misc_feature〈222〉(1).(18)〈223〉根據(jù)人CYP2C9基因序列設(shè)計(jì)的T叫man探針〈400>1agagatacattgaccttc〈210>2〈211>17〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈221>misc_feature〈222〉(1).(17)〈223〉根據(jù)人CYP2C9基因序列設(shè)計(jì)的T叫man探針〈400〉2agataccttgaccttct<210>3〈211>22〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_feature〈222〉(1).(22)〈223〉根據(jù)人CYP2C9基因序列設(shè)計(jì)的上游引物〈400〉3ccaggaagagattgaacgtgtg<210>4〈211>25〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_feature〈222〉(1).(25)〈223〉根據(jù)人CYP2C9基因序列設(shè)計(jì)的下游引物〈400〉4cggtgatggtagaggtttaaaaatg<210>5〈211>16〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_feature〈222〉(1).(16)〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400〉5ttatttcccgggaacc<210>6〈211>17〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_feature〈222〉(1).(17):0125]<223>根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針:0126]〈400>6:0127]tttcccaggaacccata17:0128]〈210〉7:0129]〈211〉28:0130]〈212>DNA:0131]〈213>人工序列:0132]〈220〉:0133]〈221〉misc_feature:0134]〈222〉(1).(28):0135]〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的上游引物:0136]〈400>7:0137]ttctcttagatatgcaataattttccca28:0138]〈210〉8:0139]<211>28:0140]〈212>DNA:0141]〈213〉人工序列:0142]〈220〉:0143]〈221〉misc_feature:0144]〈222〉(1).(28):0145]〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的下游引物:0146]〈400〉8:0147]ccaaaatatc;actttccataaaagcaag28:0148]<210〉9:0149]〈211>22:0150]〈212>DNA:0151]〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_feature〈222〉(1).(22)〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400〉9accccctggatccaggtaaggc22〈210>10〈211>23〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉〈221>misc_feature:0164]:0165]:0166]〈222〉(1).(23)<223>根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400〉10:0167]accccctgaatccaggtaaggcc:0168]〈210>11:0169]〈211>28:0170]〈212>DNA:0171]〈213〉人工序列:0172]〈220〉:0173]〈221>misc_feature:0174]〈222〉(1).(28):0175]〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的上游引物:0176]〈400〉11:0177]朋aattg朋tg朋aacatcaggattgta28:0178]<210>12:0179]〈211>25:0180]〈212>DNA:0181]〈213〉人工序列:0182]〈220〉:0183]〈221>misc_feature:0184]〈222〉(1).(25):0185]〈223〉根據(jù)人CYP2C19基因序列設(shè)計(jì)的下游引物:0186]〈400〉12:0187]aatgtacttcagggcttggtcaata25:0188]<210>13:0189]<211>20:0190]〈212〉DNA:0191]〈213〉人工序列:0192]〈220〉:0193]<221>misc_feature:0194]<222>(1)..(20):0195]〈223〉根據(jù)人CYP2D6基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400〉13tgcacgctacccaccaggcc20〈210>14〈211>22〈212〉DNA〈213〉人工序列〈220〉12〈221>misc_feature〈222〉(1).(22)〈223〉根據(jù)人CYP2D6基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400>14ctgcacgctactcaccaggccc22〈210〉15〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列<220>〈221〉misc_feature〈222〉(1).(21)〈223〉根據(jù)人CYP2D6基因序列設(shè)計(jì)的上游引物〈400>15ccat.ttggtagtgaggcaggt21〈210>16〈211〉20〈212>DNA〈213>人工序列<220><221>misc_feature〈222〉(1).(20)〈223〉根據(jù)人CYP2D6基因序列設(shè)計(jì)的下游引物〈400>16tgg朋gtccacatgcagc3g20〈210>17〈211>21〈212>DNA〈213〉人工序列〈220>〈22l>misc—feature<222>(1)...(21)〈223〉根據(jù)人CYP3A4基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400>17cacgagctccggatcggacag21〈210>18〈211>24〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈221>misc_feature〈222〉(1).(24)〈223〉根據(jù)人CYP3A4基因序列設(shè)計(jì)的Taqman探針〈400〉18acgagctccagatcggacagagct24〈210>19〈211>25〈212>DNA〈213>人工序列〈220〉〈221>misc—feature〈222〉(1)...(25)〈223〉根據(jù)人CYP3A4基因序列設(shè)計(jì)的上游引物〈400>19atgccctacattgatctgatttacc25<210>20〈211>20〈212>DNA〈213〉人工序列〈220〉〈22l>misc—feature〈222>(1)...(20)<223>根據(jù)人CYP3A4序列設(shè)計(jì)的下游引物〈400>20cgtggtttcatagccagcaa20權(quán)利要求一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，包括步驟a.提取來(lái)自人的樣本的基因組DNA；b.根據(jù)至少2個(gè)藥物代謝相關(guān)基因分別設(shè)計(jì)一對(duì)Taqman探針對(duì)和一對(duì)引物對(duì)，所述Taqman探針對(duì)的5’端和3’端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)，分別對(duì)所述基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；c.根據(jù)熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果來(lái)判斷所述藥物代謝相關(guān)基因是否發(fā)生突變。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述藥物代謝相關(guān)基因的數(shù)目是4個(gè)。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述藥物代謝相關(guān)基因是CYP2C9基因、CYP2C19基因、CYP2D6基因和CYP3A4基因。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)和所述引物對(duì)用于檢測(cè)CYP2C9基因的rsl057910位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4244285位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4986893位點(diǎn)，CYP2D6基因的rsl065852位點(diǎn)，CYP3A4基因的rs28371759位點(diǎn)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記禾口HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:3和SEQIDNO:4所示的核苷酸序列。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:5和SEQIDNO:6所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記禾口HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:7和SEQIDNO:8所示的核苷酸序列。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:9和SEQIDNO:10所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:11和SEQIDNO:12所示的核苷酸序列。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:13和SEQIDNO:14所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記和HEX標(biāo)記，3'端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述引物對(duì)是SEQIDNO:15禾PSEQIDNO:16所示的核苷酸序列。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，其特征在于，所述Taqman探針對(duì)是SEQIDNO:17和SEQIDNO:18所示的核苷酸序列，所述Taqman探針對(duì)的5'端分別標(biāo)記FAM標(biāo)記禾口TET標(biāo)記，3，端均標(biāo)記TAMRA標(biāo)記，所述弓|物對(duì)是SEQIDNO:19禾口SEQIDNO:20所示的核苷酸序列。全文摘要本發(fā)明涉及一種藥物代謝相關(guān)位點(diǎn)檢測(cè)方法，包括步驟提取來(lái)自人的樣本的基因組DNA；根據(jù)至少2個(gè)藥物代謝相關(guān)基因分別設(shè)計(jì)一對(duì)Taqman探針對(duì)和一對(duì)引物對(duì)，Taqman探針對(duì)的5’端和3’端分別標(biāo)記熒光報(bào)告基團(tuán)和熒光淬滅基團(tuán)，對(duì)所述基因組DNA進(jìn)行熒光定量PCR擴(kuò)增；根據(jù)熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果來(lái)判斷藥物代謝相關(guān)基因是否發(fā)生突變，較佳地，藥物代謝相關(guān)基因的數(shù)目是4個(gè)，Taqman探針對(duì)和引物對(duì)用于檢測(cè)CYP2C9基因的rs1057910位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4244285位點(diǎn)，CYP2C19基因的rs4986893位點(diǎn)，CYP2D6基因的rs1065852位點(diǎn)，CYP3A4基因的rs28371759位點(diǎn)，本發(fā)明設(shè)計(jì)巧妙、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，為服用某些藥物時(shí)是否需要咨詢專業(yè)醫(yī)生以確定是否服用及服用劑量等提供參考依據(jù)。文檔編號(hào)C12Q1/68GK101760528SQ200810208219公開(kāi)日2010年6月30日申請(qǐng)日期2008年12月26日優(yōu)先權(quán)日2008年12月26日發(fā)明者趙翊均,陳奕雄申請(qǐng)人:上海基康生物技術(shù)有限公司