一種脂質(zhì)體包封體積的快速測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種脂質(zhì)體包封體積的快速測定方法，具體涉及藥物制造領(lǐng)域中脂質(zhì)體制劑的包封體積的快速測定及制備工藝優(yōu)化。
【背景技術(shù)】
[0002]脂質(zhì)體藥物已經(jīng)成為當(dāng)前藥物劑型改造的重要方向，因其具有良好的生物相容性，以及可改變被包封藥物體內(nèi)分布和提高藥物治療指數(shù)而備受關(guān)注，利用脂質(zhì)體進(jìn)行劑型改造不僅可以提高藥物的溶解性、利用效率、降低藥物不良反應(yīng)，還能進(jìn)行靶向給藥，有效將藥物輸送到病灶位置專一性地殺傷腫瘤或病灶細(xì)胞，同時(shí)避免全身用藥對身體造成的損傷。
[0003]包封體積是指脂質(zhì)體內(nèi)包裹水相的體積占溶液總體積的百分比，當(dāng)脂質(zhì)體包封水溶性藥物時(shí)，包封體積影響載藥量及藥物在體內(nèi)的釋放速度、生物分布、藥物代謝動力學(xué)特征等，是脂質(zhì)體藥物藥效評價(jià)的重要指標(biāo)，也是評價(jià)與改造脂質(zhì)體藥物制造工藝的重要依據(jù)。目前，包封體積的測定方法主要有:溶質(zhì)包封法、電子自旋共振法、電導(dǎo)率法、核磁共振法等。溶質(zhì)包封法是將膜非滲透性標(biāo)記物加入水化介質(zhì)，使標(biāo)記物進(jìn)入脂質(zhì)體內(nèi)，通過測定內(nèi)外水相標(biāo)記物信號強(qiáng)度及脂質(zhì)濃度得包封體積，但非滲透性標(biāo)記物會存在整個(gè)測定過程，影響測定結(jié)果；電子自旋共振法，需要分離脂質(zhì)體與外水相探針或?qū)φ箤拕┤芤旱臐B透壓及PH有嚴(yán)格要求，因此適用范圍窄；電導(dǎo)率法要求選擇標(biāo)記物必須是電中性、膜不滲透性且不干擾電導(dǎo)率測定的物質(zhì);核磁共振法，溫度對結(jié)果影響較大，溫度越高，膜滲透性增加，內(nèi)外水相水德擴(kuò)散系數(shù)逐漸接近，使測定的包封體積值減?。煌瑫r(shí)上述測定方法有的需要特殊的儀器設(shè)備、有的需要進(jìn)行脂質(zhì)體與脂質(zhì)體外溶液的有效分離，因此，現(xiàn)有方法存在步驟復(fù)雜、限制性強(qiáng)、成本高等缺陷，缺少直接測量脂質(zhì)體包封體積的快速測定方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明為解決現(xiàn)有技術(shù)中脂質(zhì)體包封體積測定方法復(fù)雜、限制性強(qiáng)的問題，提供了一種脂質(zhì)體包封體積的快速測定方法，該測定方法不需要進(jìn)行離心、透析、凝膠過濾等復(fù)雜操作，直接通過最簡便的酸堿滴定技術(shù)快速測定脂質(zhì)體包封體積。
[0005]本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思是:根據(jù)脂質(zhì)體的結(jié)構(gòu)分為脂質(zhì)體外部與內(nèi)部兩個(gè)獨(dú)立空間的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，先測定脂質(zhì)體外部空間體積(設(shè)為V.)，再利用表面活性劑將脂質(zhì)體膜打開使脂質(zhì)體內(nèi)部空間與外部空間合并，可以測定溶液的總體積(設(shè)為Vt)，原脂質(zhì)體包封空間的體積即為Vt與Vqut的差值(Vt-Vqut)。
[0006]本發(fā)明的技術(shù)要點(diǎn)是:一種脂質(zhì)體包封體積的快速測定方法，包括以下步驟:在脂質(zhì)體溶液中加入酸堿指示劑，用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行酸堿滴定，記錄滴定平衡點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量Vl，再取等量的脂質(zhì)體溶液，加入表面活性劑，再次用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行酸堿滴定，記錄滴定平衡點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量V2，按公式(I)計(jì)算脂質(zhì)體的包封體積:
[0007]脂質(zhì)體的包封體積百分?jǐn)?shù)PIN(%)= (V2_V1)/V2 (I)。
[0008]進(jìn)一步的，向脂質(zhì)體溶液中加入酸堿指示劑，利用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行酸堿滴定，記錄滴定平衡點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量Vl;取相同量的脂質(zhì)體溶液，先加入表面活性劑將脂質(zhì)體膜破壞，再加入酸堿指示劑，利用標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行酸堿滴定，記錄滴定平衡點(diǎn)標(biāo)準(zhǔn)溶液的用量V2 ；設(shè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為C標(biāo)，則脂質(zhì)體外的酸(或堿)總量為C標(biāo)X Vl，脂質(zhì)體內(nèi)外酸(或堿)的總量為C標(biāo)XV2，由于溶液中溶質(zhì)分子是均勻分布的，脂質(zhì)體外部空間體積(V.)與脂質(zhì)體溶液的體積(Vt)的比值(Vout/Vt)等于脂質(zhì)體外的酸(或堿)總量(C標(biāo)XVI)與脂質(zhì)體內(nèi)外的酸(或堿)總量(QSXV2)之比，即:
[0009]Vout/Vt = (C? X Vl) / (C? X V2) = Vl /V2 (2)
[0010]脂質(zhì)體外水相體積占總體積百分?jǐn)?shù)Pqut( % ) =Vout/Vt=V1/V2
[0011](3)
[0012]脂質(zhì)體的包封體積百分?jǐn)?shù)ΡιΝ(% ) = 1-Pout= 1-V1/V2= (V2-V1 )/V2
[0013](4)。
[0014]進(jìn)一步的，所述的酸堿指示劑為甲基橙、甲基紅、溴百里酚藍(lán)、溴甲酚綠、酚酞、紫色石蕊中一種或多種復(fù)配。酸堿指示劑要具體根據(jù)脂質(zhì)體溶液的酸堿性來選擇，如脂質(zhì)體溶液呈弱堿性則選擇溴甲酚綠-甲基紅混合指示劑。
[0015]進(jìn)一步的，所述的表面活性劑為非離子表面活性劑。
[0016]優(yōu)選的，所述的非離子表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、高碳脂肪醇聚氧乙烯醚、脂肪酸聚氧乙烯酯、脂肪酸甲酯乙氧基化物中一種或多種復(fù)配。作為優(yōu)選，本發(fā)明采用十二烷基聚乙二醇醚非離子表面活性劑。
[0017]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明利用酸堿滴定分別測定脂質(zhì)體膜破壞前后的標(biāo)準(zhǔn)溶液(酸或堿)用量，可以直接計(jì)算脂質(zhì)體的包封體積。本發(fā)明測定方法簡便、無需分離、透析、凝膠過濾等復(fù)雜操作，測試成本低，測定迅速，該方法測定結(jié)果準(zhǔn)確性高，設(shè)備簡單，適用范圍廣，可以用于脂質(zhì)體產(chǎn)品檢測與制備工藝優(yōu)化，為脂質(zhì)體包封水溶性藥物的實(shí)際應(yīng)用起到關(guān)鍵作用。
【附圖說明】
[0018]圖1DOPC脂質(zhì)體的滴定結(jié)果；
[0019]圖2DOPC脂質(zhì)體的滴定平衡點(diǎn)確定；
[0020]圖3DOTAP脂質(zhì)體的滴定結(jié)果；
[0021]圖4DOTAP脂質(zhì)體的滴定平衡點(diǎn)確定；
[0022]圖5脂質(zhì)體溶液(加表面活性劑)的滴定結(jié)果；
[0023]圖6脂質(zhì)體溶液(加表面活性劑)的滴定平衡點(diǎn)確定；
[0024]圖7無脂質(zhì)體溶液(加表面活性劑)的滴定結(jié)果；
[0025]圖8無脂質(zhì)體溶液(加表面活性劑)的滴定平衡點(diǎn)確定。
【具體實(shí)施方式】
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[0026]下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實(shí)施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下述實(shí)施例中如無特殊說明，所采用的實(shí)驗(yàn)方法均為常規(guī)方法，所用材料、試劑等均可從化學(xué)公司購買。
[0027]實(shí)施例1:使用磷脂酰膽堿(DOPC)制備脂質(zhì)體并測定脂質(zhì)體包封體積
[0028]1.1脂質(zhì)體的制備
[0029]采用薄膜分散法進(jìn)行脂質(zhì)體制備。稱取DOPC磷脂0.0063克置于適宜容器中，用5mL氯仿完全溶解，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上緩慢蒸干并使磷脂均勻分布于容器內(nèi)表面，放在真空干燥機(jī)中真空干燥5小時(shí)以上去除氯仿。將4mL制備脂