本發(fā)明涉及一種檢測方法，具體涉及一種左磷霉素右苯乙胺鹽及其對映異構體的檢測方法，屬于藥物分析領域。

背景技術：

磷霉素（Fosfomycin,phosphonomycin）是1969年美國MERCK公司和西班牙CEP公司從西班牙土壤中分離出的鏈絲菌所產生的一種新類型的廣譜抗生素，國外應用十分廣泛。 1993年列為我國國家基本藥物。 磷霉素具有獨特的化學結構與抗菌作用機制，廣譜、耐酶、高效、低毒。其分子量小，組織滲透性好，分布廣泛，血藥，尿藥濃度高；過敏反應少；對視聽神經及腎臟無毒性；與其它抗生素不產生拮抗作用亦無交叉耐藥性。此外，磷霉素能抑制細菌細胞壁的早期合成，破壞細菌外層結構，改變并用藥物進入菌體的途徑，使藥物在菌體內易于富集，表現出良好的協(xié)同作用。

磷霉素為一種游離酸，藥用品主要以其鹽的形式，如磷霉素鈣，磷霉素鈉等存在，各種磷霉素鹽通常由左旋磷霉素右旋苯乙胺鹽轉化生成，而左旋磷霉素右旋苯乙胺鹽是通過順丙稀磷酸的環(huán)氧化步驟合成得到，但從該步驟獲得的產物為磷霉素消旋體。其中，左旋磷霉素有療效，從消旋體中被拆分出來后，進一步精制成為產品；而右旋磷霉素[(+)-順-(1S，2R)-1，2-環(huán)氧丙基磷酸]無療效，其前體物質右旋磷霉素左旋苯乙胺鹽，即（1S,2R）-(+)-1,2-環(huán)氧丙基磷酸-S-(-)-α-苯乙胺，該雜質會通過后續(xù)反應使右旋磷霉素殘留在藥物中，影響藥物質量。因此，控制左磷霉素右苯乙胺鹽對映異構體的含量，對提高磷霉素的質量，保證廣大患者用藥的安全性具有重大意義。

技術實現要素：

對于左磷霉素右苯乙胺鹽對映異構體雜質，在藥物合成過程中是需要進行質量控制的。含手性碳原子的光學異構體的分離一直是手性藥物合成和制劑過程中質量控制的難點。因為對映異構體理化性質相近，尚無左旋磷霉素右旋苯乙胺及其對映異構體有效的檢測方法報道。本發(fā)明旨在提供一種簡單、快速、準確地分析左磷霉素右苯乙胺及其對映異構體的方法。本發(fā)明所述方法主要通過高效液相色譜儀分析左磷霉素右苯乙胺鹽及其對映異構體，采用陰離子交換手性柱及特定的成份和比例的流動相進行樣品的分析。高效液相色譜儀的檢測條件為：流動相甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨或甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺或甲醇-乙腈-醋酸-氨水，甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨體積質量百分比或甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺體積百分比或甲醇-乙腈-醋酸-氨水體積百分比為80：20：1~2：0.2~0.6，色譜柱為CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱，流速：0.8~1.0ml/min，柱溫：30~35℃，示差檢測器，檢測器溫度30~35℃，進樣體積：5~10μl。該方法的分離度能達到1.5以上，分離效果好。本方法能實現左磷霉素右苯乙胺及其對映異構體的簡單、快速、準確分析，該方法具有再現性好，分離度高，檢測樣品穩(wěn)定等優(yōu)勢。

附圖說明

圖1為實施例1中以甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：2：0.5（V：V：V:M）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖2為實施例2中以甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：1：0.2（V：V：V:M）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖3為實施例3中以甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺=80：20：2：0.6（V：V：V:V）作為流動相的HPLC檢測圖譜

圖4為實施例4中以甲醇-乙腈-醋酸-氨水=80：20：1：0.5（V：V：V:V）作為流動相的HPLC檢測圖譜

實施例1

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：2：0.5（V：V：V:M）

柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

檢測器溫度：35℃

進樣體積：10μl

實施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果見附圖1，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.3。

實施例2

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-醋酸銨=80：20：1：0.2 （V：V：V:M）

柱溫：30℃

流速：1.0 ml/min

檢測器溫度：30℃

進樣體積： 8μl

實施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液8μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液8μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算，結果見附圖2，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.0。

實施例3

色譜條件：

高效液相色譜儀：安捷倫高效液相色譜儀1260

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-三乙胺=80：20：2：0.6（V：V：V:V）

柱溫：32℃

流速：0.8ml/min

檢測器溫度：32℃

進樣體積：5μl

實施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液5μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算，結果見附圖3，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.2。

實施例4

儀器與條件

色譜柱：CHIRALPAK-QNAX(150mm×4.6mm，5μm)陰離子交換手性柱

流動相：甲醇-乙腈-醋酸-氨水=80：20：1：0.5（V：V：V:V）

柱溫：35℃

流速：1.0ml/min

檢測器溫度：35℃

進樣體積：10μl

實施步驟：稱取磷霉素苯乙胺鹽消旋體適量，用流動相溶解，制成每1ml中約含40mg磷霉素苯乙胺鹽消旋體的溶液作為系統(tǒng)適用性溶液。取左磷霉素右苯乙胺鹽800mg，精密稱定，置于10 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為供試品溶液。取右磷霉素左苯乙胺鹽16mg，精密稱定，置于20 ml量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，作為對照品溶液。量取系統(tǒng)適用性溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，左磷霉素右苯乙胺鹽與右磷霉素左苯乙胺鹽分離度應大于1.5。分別取供試品溶液和對照品溶液10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法計算，結果見附圖4，1號峰為左磷霉素右苯乙胺鹽，2號峰為右磷霉素左苯乙胺鹽，分離度3.0。