一種使用四苯乙烯衍生物檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種使用四苯乙烯衍生物檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，具體為四苯乙烯衍生物制備用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式如下述結(jié)構(gòu)式Ⅰ所示；所述方法為：制備標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)；沉淀乳制品中的酪蛋白；再將沉淀的酪蛋白溶解；將溶解的酪蛋白與上述所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合，測(cè)定熒光值；再將測(cè)得的熒光值與標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比，得出酪蛋白的含量。本發(fā)明使用可聚集發(fā)光的四苯乙烯衍生物，在遇到乳制品中的酪蛋白時(shí)，會(huì)進(jìn)入蛋白結(jié)構(gòu)中成為聚集態(tài)，發(fā)出熒光，可以防止干擾，從而可以有效地測(cè)定乳制品如牛奶和奶粉中酪蛋白的含量。式（Ⅰ）
【專(zhuān)利說(shuō)明】—種使用四苯乙烯衍生物檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物工程和食品安全領(lǐng)域。具體涉及一種酪蛋白的檢測(cè)方法，尤其涉及一種使用四苯乙烯衍生物檢測(cè)乳制品中酪蛋白的檢測(cè)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前牛奶中蛋白質(zhì)的定量檢測(cè)方法的原理比較單一，許多年來(lái)并沒(méi)有新的檢測(cè)方法出現(xiàn)，基本只有凱氏定氮法，雙縮脲法，考馬斯亮藍(lán)檢測(cè)等幾種標(biāo)準(zhǔn)方法，凱氏定氮是通過(guò)測(cè)定蛋白樣品含量中的氮含量來(lái)推算蛋白質(zhì)的含量。雙縮脲蛋白定量是通過(guò)蛋白質(zhì)含的特殊肽鍵結(jié)構(gòu)與銅離子發(fā)生絡(luò)合反應(yīng)變色來(lái)定量。考馬斯亮藍(lán)法是通過(guò)考馬斯亮藍(lán)分子與蛋白特異性結(jié)合變色來(lái)定量。這些方法很容易被添加的偽蛋白物質(zhì)干擾，如氨基酸，明膠，三聚氰胺，尿素等。
[0003]而且，現(xiàn)有牛奶蛋白的測(cè)定方法容易受到干擾，比如國(guó)標(biāo)中規(guī)定的雙縮脲蛋白定量方法會(huì)受到氨基酸的干擾，凱氏定氮法容易受到三聚氰胺和尿素的干擾，無(wú)法得到準(zhǔn)確的定量數(shù)值。這些檢測(cè)方法的靈敏度、特異性比較差。靈敏度差無(wú)法進(jìn)行低蛋白含量牛奶和奶制品、乳飲料的檢測(cè)。特異性差指對(duì)所有的蛋白反應(yīng)相同，無(wú)法分別出牛奶中的蛋白與添加的劣質(zhì)蛋白。
[0004]因而，需要一種方法，使用新的原理避免常規(guī)干擾物質(zhì)，與現(xiàn)有方法互補(bǔ)；同時(shí)需要更高的靈敏度和特異性來(lái)完成比較特殊樣品如乳制品的檢測(cè)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]因此，本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)牛奶蛋白的測(cè)定方法易受干擾，靈敏度低，特異性差的不足，提供一種使用四苯乙烯衍生物檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，從而能夠有效地測(cè)定乳制品中酪蛋白的含量，并且靈敏度高，特異性強(qiáng)。
[0006]除非特別指明，本文中的“乳制品”是指“奶粉、牛奶或乳飲料”。
[0007]針對(duì)上述目的，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
[0008]一方面，本發(fā)明提供一種四苯乙烯衍生物在制備用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式如下述結(jié)構(gòu)式I所示:
[0009]
[0010]式(I)[0011]其中，R或 R1 選自-H、-XYH、-B (OH) 2、-XYCOOR'、-XYCOOH、-XYNH2、-XYNHR'、-XYNHR' 2、-XYN+R' 3Br\ -XYOH、-XYSH、-XYSO3If ；
[0012]R,選自-(CH2) nCH3 和-CH2-C6H5 ；
[0013]X為NH，O或沒(méi)有；
[0014]Y 為(CH2)n;
[0015]或XY選自-(OCH2CH2)n和-(OCH2CH2CH2)n，其中0與四苯乙烯環(huán)一側(cè)相連；
[0016]M+為堿金屬離子；
[0017]n=(T20。
[0018]優(yōu)選地，n=l~10。
[0019]優(yōu)選地，n=l。
[0020]優(yōu)選地，M+為Na+或K+，還優(yōu)選地，M+為Na+。
[0021]優(yōu)選地，所述四苯乙烯衍生物如下述式II所示，其簡(jiǎn)寫(xiě)為BSP0TPE:
[0022]
【權(quán)利要求】
1.一種四苯乙烯衍生物在制備用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的產(chǎn)品中的應(yīng)用，所述四苯乙烯衍生物的結(jié)構(gòu)式如下述結(jié)構(gòu)式I所示:
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，n=f10，優(yōu)選地，n=l，更優(yōu)選地，M+為Na+或K+,還優(yōu)選地，M+為Na+。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述四苯乙烯衍生物如下述式II所示:

4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品為試劑盒、試劑或藥物。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于，所述乳制品選自奶粉、牛奶和乳飲料，優(yōu)選地，所述奶粉選自全脂奶粉和脫脂奶粉，或優(yōu)選地，所述牛奶選自脫脂牛奶和全脂牛奶，或優(yōu)選地，所述乳飲料為無(wú)脂乳飲料。
6.一種用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，所述方法是通過(guò)使用權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)中所述的四苯乙烯衍生物進(jìn)行的。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，具體包括如下步驟:1)將酪蛋白溶液與權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)中所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合為混合液，制成標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)； 2)通過(guò)乙酸或鹽酸調(diào)節(jié)溶液的pH值，使乳制品中的酪蛋白沉淀，優(yōu)選地，調(diào)節(jié)溶液的pH值至4.7，優(yōu)選地，乙酸或鹽酸的濃度為0.1M^lOM,乙酸或鹽酸的濃度優(yōu)選為2M，更優(yōu)選地，于5000rpnTl5000rpm離心5~20分鐘沉淀酪蛋白，還優(yōu)選地，于5000rpm離心10分鐘； 3)再將步驟I)中制得的酪蛋白沉淀溶于水中，制得酪蛋白溶液； 4)將步驟3)制得的酪蛋白溶液與權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)中所述的四苯乙烯衍生物的溶液混合為混合液，測(cè)定熒光值，優(yōu)選地，酪蛋白溶液與四苯乙烯衍生物的溶液的體積比為I: 10~10:1，體積比優(yōu)選1:1; 5)將步驟4)測(cè)得的熒光值與步驟I)的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)比，得出酪蛋白的含量。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步驟2)中，當(dāng)乳制品中含有脂肪時(shí)，在用乙酸或鹽酸將酪蛋白沉淀前，還包括脫脂處理的步驟。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，所述脫脂處理包括以下步驟: 將乳制品加水溶解或稀釋成溶液，再將所述溶液離心，去除溶液表面的脂肪，優(yōu)選地，將溶液于2000rpm離心10~20分鐘，離心優(yōu)選10分鐘。
10.根據(jù)權(quán)利 要求7至9中任一項(xiàng)所述的用于乳制品中檢測(cè)酪蛋白的方法，其特征在于，在步驟I)中，所述酪蛋白溶液的濃度為(T5mg/ml。
11.根據(jù)權(quán)利要求7至10中任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步驟4)中，于370nm的激發(fā)光，450nm的發(fā)射光測(cè)定熒光值。
12.根據(jù)權(quán)利要求7至11中任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，所述混合液中的四苯乙烯衍生物的溶液的濃度為0.1 μ M^lOO μ Μ，濃度優(yōu)選0.5 μ Μ。
13.根據(jù)權(quán)利要求7至12中任一項(xiàng)所述的用于檢測(cè)乳制品中酪蛋白的方法，其特征在于，在步驟2)沉淀酪蛋白后，還包括通過(guò)乙醇-乙醚洗滌沉淀的步驟，優(yōu)選地，所述乙醇-乙醚中乙醇和乙醚的體積比為I '2~2:1，體積比優(yōu)選1:1。
【文檔編號(hào)】G01N21/76GK103630529SQ201210306050
【公開(kāi)日】2014年3月12日 申請(qǐng)日期:2012年8月24日 優(yōu)先權(quán)日:2012年8月24日
【發(fā)明者】蔣興宇, 王卓, 劉穎昳, 張偉, 張德清 申請(qǐng)人:國(guó)家納米科學(xué)中心