)將包含陽離子多膚和水性膚稀釋劑的無菌膚溶液加入到步驟b的所述賦形劑溶 液中。
[0417] 在另一個實施方案中，本發(fā)明設及制備離子配合物的方法，所述離子配合物包含 陽離子多膚和選自如下的陰離子賦形劑:PEG-簇酸;具有10或W上個碳原子的脂肪;憐脂； 及其組合，該方法包含：
[0418] a)制備包含所述陰離子賦形劑、水性賦形劑稀釋劑和陽離子多膚的溶液；
[0419] b)降通過0.2微米濾器過濾得到的的溶液滅菌。
[0420] 適合的賦形劑和陽離子多膚賦形劑的實例包括多元醇(例如丙二醇、Ξ丙二醇、甘 油、乙醇、節(jié)醇、DMS0、NMP、DMF、水、pH穩(wěn)定緩沖溶液及其混合物。
[0421 ]
[0422] 膚合成
[0423] 通過常規(guī)的固相膚合成制備適用于本發(fā)明的陽離子多膚類。例如，可W根據(jù)美國 專利US8,349,797中所述的方法制備本文所述的膚1和其它MC4R類似物，將該文獻的全部內 容引入本文作為參考。W逐步的方式使膚鏈從其C-末端氨基酸衍生物開始延伸，所述C-末 端氨基酸衍生物偶聯(lián)在適當選擇的已知適合于膚合成的固相支持物樹脂上。為了合成具有 C-末端酷胺官能團的膚，將Rink酷胺MBHA樹脂用作固相支持物。為了合成具有C-末端游離 簇基官能團的膚類，使用例如2-氯Ξ苯甲基氯樹脂、Wang或Merrifield樹脂運樣的樹脂，它 們與Fmoc-氨基酸形成醋鍵。大部分運些醋連接的Fmoc-氨基酸-樹脂類型購自不同來源且 一般在切實可行時使用。
[0424] 二硫化物-環(huán)化膚類的合成
[042引使用固相膚合成儀上的Fmoc化學組裝二硫化物環(huán)膚類的線性衍生物。將Fmoc-Rink酷胺樹脂放入反應容器，用醒P溶脹。然后用20%贓晚的NMP溶液處理15分鐘，然后用 MVIP洗涂3次。對樹脂進行陽性Kaiser測試化aiser，E.，Colescot、R.L.，Bossinge，C.D.& Cook，P. I. Anal. Biochem.，1990，34:595-598)。將其重新混懸于NMP，與所需的第一種C-末 端Fmoc-氨基酸衍生物和冊化混合。通過添加皿TU試劑和DI陽A啟動偶合反應。在混合2-3小 時后，通過在從該反應混合物中抽取的樹脂的小等分部分上的陰性KaiseH式驗證實偶合完 成。然后用NM巧尋樹脂洗涂3次。此后，如上所述除去Fmoc基團，用所述的第二種C-末端Fmoc-氨基酸衍生物重復整個循環(huán)。用新到來的氨基酸各自依次重復同一反應循環(huán)。使用氯釀顯 色試驗（Vojkovsky，T.Pept.Res.，1995，8:236-237)替代KaiseH式驗，用于的Fmoc從膚序列 上的脯氨酸殘基上脫保護的陽性測試，也用于測試氨基酸與脯氨酸完全偶合（陰性氯釀試 驗）。在具有N-末端乙酷基的膚類的情況中，用乙酢和化晚將Fmoc脫保護的膚樹脂處理10分 鐘。用NMP、二氯甲燒洗涂KaiseH式驗測試陰性后的樹脂，真空干燥。Fmoc-氨基酸衍生物用 于合成運些膚類。所用的Ξ官能團氨基酸衍生物如下:Fmoc-切S (化t)-0H，F(xiàn)moc-hp(Boc)-OH，F(xiàn)moc-Arg(Pbf )-0H，F(xiàn)moc-His(T;rt)-0H，F(xiàn)moc-Asn(T;rt)-0H，F(xiàn)moc-Gln(T;rt)-0H，F(xiàn)moc- 11切3(化1：)-0山尸1]1〇(3斗6]1(1'1'1：)-(^，尸1]1〇(3-了71'(13111：)-0山尸1]1〇(3-化3(1-]\16)-0山尸1]1〇(3-化3(3-Me)-〇H和Fmoc-Glu(0But)-OH。
[0426] 為了從樹脂上裂解掉膚和使側鏈官能團脫保護，將膚樹脂溶于：2%TIS/5 %水/ 5% (w/v)DTT/88%TFA。將該溶液混合3.5小時，然后過濾。將濾液與冷無水乙酸混合。通過 離屯、采集沉淀。謹析溶劑，將膚沉淀重新混懸于新鮮乙酸。將乙酸后處理重復2次W上。真空 干燥膚。將粗的線性膚產(chǎn)物稀釋至在5%乙酸中2mg/mL濃度，在劇烈攬拌下滴加0.5M艦/甲 醇，直到得到持續(xù)的淡黃色溶液。將該溶液再攬拌10分鐘。然后通過添加1M硫代硫酸鋼在混 合中使過量的艦巧滅，直到該混合物變成無色為止。凍干環(huán)化的膚溶液，通過制備型HPLC、 使用反相C-18柱純化粗粉末。收集純化的產(chǎn)物級分，凍干。通過質譜法，使用電噴霧電離技 術分析膚類，鑒定為正確質量。
[0427] 內酷胺(Lac tm)-環(huán)化膚類的合成
[0428] 還通過標準固相膚合成方法合成環(huán)內酷胺膚類。對于具有C-末端化r的膚類，將 Fmoc-化;r(Mtt)-BHA樹脂轉入固相膚合成儀反應器。如上所述除去Fmoc基團，接下來使 Fmoc-保護的氨基酸、例如Fmoc-T巧(Boc)-OH與所述樹脂通過偶合方法偶合。除去Fmoc保護 基，按照正確的順序，通過重復偶合和脫保護操作各自添加其余的氨基酸，直到氨基酸序列 完成。對于谷氨酸，使用偶合Fmoc-Glu(OPip)。然后同樣地如上述二硫化物系列膚類所述， 在N-末端上使組裝完全的膚乙酷化。然后除去正交保護的側鏈。例如，通過用1%TFA的二氯 甲燒溶液處理裂解具有正交保護的Glu側鏈為2-苯基異丙基醋(OPip)或化r保護為4-甲基 Ξ苯甲基（Mtt)的膚。將脫保護的膚樹脂混懸于應P，用HBTU/DIPEA處理。環(huán)化后（陰性 Kai seH式驗），用DCM洗涂膚-樹脂，干燥。使用Ξ氣乙酸(TFA)在水和1，2-乙二硫醇化DT)的 存在下從樹脂上裂解環(huán)膚與任何其余的保護基。在添加冷無水乙酸時通過沉淀采集產(chǎn)物， 通過離屯、采集。最終純化通過反相HPLC、使用反相C-18柱進行。通過凍干采集純化的膚，通 過質譜、使用電噴霧方法分析其質量。
[0429] 表1:式I的陽離子膚類的實施例
[0430]
[0431]
[0432]
[0433]
[0434] 測試表1的一些陽離子多膚類W便在下屬測定法中評價活性。數(shù)據(jù)如表2中所示。 [043引膚測試:
[0436] 放射配體結合測定：
[0437] 用于測定從本發(fā)明環(huán)膚的受體上置換放射性標記的配體的結合常數(shù)化d)或抑制 濃度(IC50)的受體結合測定可W通過本領域公知的任意方式進行。
[0438] 作為實例，由為穩(wěn)定表達hMC受體亞型1、3、4或5而轉染的CH0-K1細胞制備用于結 合測定的細胞膜制品。[1叫](Tyr 2)-(Nle4-D-Phe7)-a-MSH([i25I]-NDP-a-MSH結合的競爭性 抑制在聚丙締96孔板中進行。簡言之，在37°C將如上所述制備的細胞膜(l-l〇yg蛋白/孔)在 pH7.4的包含0.2%BSA、5mMMgCl2、lmMCaCl2和0.1mg/mL桿菌膚的50mMTris-肥l中與遞 增濃度的測試化合物和0.1-0.3nM[i 25I ]-NDP-a-M甜一起溫育約120分鐘。通過經(jīng)預先浸潰 0.1 % (w/v)聚乙稀亞胺(PEI)的GF/C玻璃纖維濾板(Unifilter?,Meriden，CT，USA)過濾從 游離[usi]-NDP-a-M甜中分離結合的[usi]-NDP-a-M甜配體。在約0-4°C溫度下用pH 7.4的 50mM化is-HCl將濾器洗涂3次，然后測定放射性。通過計算機輔助的非線性回歸分析分析 結合數(shù)據(jù)。
[0439] 環(huán)AMP刺激測定：
[0440] 用于測定本發(fā)明的環(huán)膚的激動劑或激動劑狀態(tài)的功能性測定可W通過本領域公 知的任意方式進行。
[0441 ]電化發(fā)光化化)測定
[0442] W劑量依賴性方式，通過電化發(fā)光巧化)測定法測定所述膚類對胞內環(huán)AMPkAMP) 水平的刺激(Meso Scale DiscoveiT，Gaithersburg，MD，USA;下文稱作"MSD")。簡言之，將 穩(wěn)定表達hMC受體亞型的C冊-K1細胞混懸于RMPI1640敏測定緩沖液(RMPI 1640緩沖液包 含0.5mM IBMX和0.2 %蛋白質混合物(MSD阻滯劑A))。將穩(wěn)定表達hMC受體亞型1、3、4或5的 約7,000細胞/孔的轉基因邸0-1(1細胞調配在包含集成碳電極的384-孔多陣列板(150)中， 用抗-cAMP抗體包被。加入遞增濃度的測試化合物，將細胞在37°C溫育約40分鐘。加入包含 0.2 %蛋白質混合物和2.5nM TAG?釘標記的cAMP(MSD)的細胞裂解緩沖液（具有MgCb和 Triton X-100?的肥陽S-緩沖的鹽水溶液，pH 7.3)，將細胞在室溫溫育約90分鐘。在第二 個溫育期結束時，加入讀取緩沖液(包含E化共反應劑和化iton X-100的化is-緩沖溶液，pH 7.8)，通過使用Sector Imager6000reade說)(MSD化CL檢測即刻測定細胞裂解液中的cAMP 水平。使用計算機輔助的非線性回歸分析UL擬合；IDBS)分析數(shù)據(jù)，報道為EC50值。撕50表 示得到最大反應響應的50%、例如如使用上述測定法測定的cAMP最高水平的50%所需的激 動劑化合物濃度。
[044引 cAMP測量試驗：
[0444] 使人MC4-R轉染的細胞生長至在96孔板中匯合約250,000細胞/孔鋪板）。用 0.2mM異下基甲基黃嚷嶺（IBMX)和分等級濃度的膚或在20nM NDP-M細存在下的膚處理細 胞，一式Ξ份的組。類似地，僅用20nM NDP-M細處理的細胞用作陽性對照，體積為20化L。還 包括用作陰性對照的緩沖液空白。在37°C溫育1小時后，通過添加50化細胞裂解緩沖液裂解 細胞。使用商購低抑cAMP測定試劑盒(Amersham BioSciences)，按照試劑盒供應商指定的 方法對25化L運種溫育培養(yǎng)基中蓄積的總cAMP進行定量。將顯示在相同或高于作為陽性對 照的a-M細的范圍內的cAMP蓄積的膚視為激動劑。將激動劑數(shù)據(jù)繪圖，使曲線擬合，W測定 EC50值。顯示在與陰性對照（在沒有a-M細的存在下的緩沖液空白）相同范圍內蓄積的膚在 測試濃度下無效。如果當測定中也存在a-MS邸寸存在cAMP抑制，則將顯示減弱的蓄積的膚視 為括抗劑。類似的測定可W使用hMC-Ι R、hMC-3R和hMC-5R細胞進行。
[0445] 使用β-半乳糖巧酶(β-Gal)報道系統(tǒng)的cAMP蓄積測量：
[0446] 應用使用具有β-半乳糖巧酶(β-Gal)作為功能報道系統(tǒng)的酶片段互補化FC)系統(tǒng) 的化學發(fā)光讀出系統(tǒng)。用于不同黑皮質素受體系統(tǒng)的運種測定系統(tǒng)是商購的（cAMP Hunter GPCR測定系統(tǒng)，Discovers Corp，Rremont，CA)。該測定法使用分裂成兩個互補部分的β-Gal 酶；用于酶受體的EA和用于酶供體的ED。在該測定法中，形成與cAMP融合的邸部分W便與由 細胞生成的cAMP競爭性結合cAMP-特異性抗體。然后添加 EAW便與任何未結合的邸-cAMP形 成活性β-Gal。然后運種活性酶將化學發(fā)光底物轉化成輸出信號，其被記錄在標準微量培養(yǎng) 板讀出器上。
[0447] 簡言之，將每個孔10000個細胞鋪板過夜，然后在37°C將每個孔(與10μ1測定緩沖 液一起溫育的細胞)與在細胞測定緩沖液(5化）中的4Χ順序濃度的測試化合物和cAMP抗體 試劑（5化)一起溫育30min。然后加入包含抓-cAMP偶合的酶片段和報道底物化口日拘1(111-Galacton Star，5:1)的細胞裂解緩沖液（20μ〇，在室溫溫育60min。接下來加入20^ΕΑβ-Gal片段試劑。在室溫再溫育120min后，通過平板讀出器化nvision)測定化學發(fā)光，將數(shù)據(jù) 用于計算測試膚的EC50值。
[0448] 結果如表2中所示。
[0449] 表2:用于本發(fā)明的實施例陽離子多膚類的EC50(nM)值
[0450]
[0452] 本發(fā)明的離子配合物和藥物組合物的制備
[0453] 實施例1:制劑2A(膚1和mPEG-10,000--簇酸)的制備
[0454] 將mPEG-10，000--簇酸(5.4g)在8.4g水中的混合物加入小瓶。塞住小瓶，密封，在 12rC高壓滅菌15min，得到均勻澄清粘性溶液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶， 將通過0.2WI1濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在ImL中l(wèi)OOmg)與之混合。得到配制的膚， 為均勻澄清粘性溶液。HPLC分析測定膚1的濃度為9.9mg/mL。
[0455] 實施例2:制劑2B (膚1和PEG-10，000-二簇酸)的制備
[0456] 將mPEG-10，000-二簇酸(2.7g)在2 .Og水中的混合物加入小瓶。塞住小瓶，密封，在 12rC高壓滅菌15min，得到均勻澄清粘性溶液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶， 將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在0.5mL中50mg)與之混合。得到配制的膚， 為均勻澄清粘性溶液。HPLC分析測定膚1的濃度為10.8mg/mL。
[0457] 實施例3:制劑2C (膚1和mPEG-20，000--簇酸)的制備
[045引將陽G-m20,000-簇酸（1.8g)在3.5g丙二醇-乙醇-水混合物(40:15:45之比乂八）中 的混合物加入小瓶。塞住小瓶，密封，在121°C高壓滅菌15min，得到均勻澄清粘性溶液。冷卻 時，將小瓶轉入無茵通風楓。打開小瓶，將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在 0.5mL中30mg)與之混合。得到配制的膚，為均勻澄清粘性溶液。HPLC分析測定膚1的濃度為 6mg/mL。
[0459 ] 實施例4:制劑2D (膚1和DPPA鋼)的制備
[0460] 將DPPA鋼(302mg)在8.6g 1:1丙二醇-水混合物中的混合物加入小瓶。塞住小瓶， 密封，在121°C高壓滅菌15min，得到均勻脂質分散體。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開 小瓶，將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在ImL中l(wèi)OOmg)與之混合。得到配制 的膚，為均勻非粘性分散體。HPLC分析測定制劑中膚1的濃度為9.6mg/mL。
[0461] 實施例5:制劑沈(膚1和硬脂酸鋼)的制備
[0462] 將甘露糖醇（300mg)和硬脂酸鋼（165mg)的混合物在小瓶中溶于8.3g水。塞住小 瓶，在75°C加熱0.5小時，得到澄清溶液。冷卻時，加入約4(K)yLl .ON乙酸W便將pH調整為在 6-7范圍內。塞住小瓶，密封，在121°C高壓滅菌15min。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開 小瓶，將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在l.Og水溶液中l(wèi)OOmg)與之混合。得 到配制的膚，為均勻光亮乳白色不透明的非粘性混懸液。HPLC分析測定膚1的濃度為9.7mg/ rnL ο
[0463] 實施例6:制劑#3Β(膚1與硬脂酸鋼和mPEG-2,000-DSPE)的制備
[0464] 將mPEG-2000-DSPE( 1.85g)和硬脂酸鋼（100.1 mg)的混合物在小瓶中溶于10.8mL 水。塞住小瓶，在75°C加熱1小時。冷卻時，加入約24化L乙酸W便將抑調整為在6-7范圍內。 塞住小瓶，密封，在12 rc高壓滅菌15min。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通 過0.2μπι濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合。得到配制的膚，為均 勻光亮乳白色不透明的非粘性混懸液。HPLC分析測定膚1的濃度為10.1 mg/mL。
[046引實施例7:制劑#3C(膚1和DPPA鋼和PEG-10,000-二簇酸)的制備
[0466] 將陽G-10，000-二簇酸（1.68g)和sodium DPPA鋼（362.4mg)的混合物在小瓶中溶 于9. ImL水。塞住小瓶，密封，在12rc高壓滅菌15min，得到均勻乳白色不透明混懸液。冷卻 時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在 1.2g中120mg)與之混合。得到配制的膚，為均勻乳白色不透明的混懸液。HPLC分析測定膚1 的濃度為10.6mg/mL。
[0467] 實施例8:制劑#3D(膚1和DPPA鋼和PEG-3，350)的制備
[046引將陽G-3,350(l0.8mL水溶液中包含1.8g)和DPPA鋼（363mg)的混合物加入到小瓶 中。塞住小瓶，密封，在121°C高壓滅菌15min，得到均勻乳白色不透明混懸液。冷卻時，將小 瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.化m濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在1.2g中 120mg)與之混合。得到配制的膚，為均勻乳白色不透明的混懸液。HPLC分析測定膚1的濃度 為10.Img/mL。
[0469] 實施例9:制劑#3E(膚1和DPPA鋼、PEG-3，350和CMC鋼)的制備
[0470] 將CMC鋼(Αν MW 90,000)水溶液（9.0mL中72mg)與PEG-3,350(1.8g)混合。向得到 的澄清溶液中加入DPPA鋼(216mg)。塞住小瓶，密封，在12rC高壓滅菌15min，得到均勻乳白 色不透明混懸液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過〇.2μπι濾器預先過濾的 膚1的無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合。得到配制的膚，為均勻乳白色不透明的混懸 液。HPLC分析測定膚1的濃度為10.9mg/mL。
[0471] 實施例10:制劑#3F(膚1和mPEG-2，000-DS陽和CMC鋼)的制備
[0472] 將CMC鋼（Αν MW 90,000)水溶液（在lO.SmL中72mg或6.7mg/mL)與mPEG-SiOOO-DS陽 （ 1.85g) 混合 。塞住小瓶 ，密封 ，在 121 °C 高壓滅菌 15min ， 得到均勻澄清溶液。 冷卻時 ，將 小瓶轉入無菌通風楓。或者，將包含CMC鋼和mPEG-2,000-DS陽混合物的小瓶內容物混合過 夜，得到澄清溶液，通過0.2皿濾器過濾。在無菌通風楓中打開小瓶，將通過0.2皿濾器預先 過濾的膚1的無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合。得到配制的膚，為均勻澄清溶液。HPLC 分析測定膚1的濃度為10.5mg/mL。
[0473] 實施例11:制劑#4B(膚1和mPEG-2，000-DSPE)的制備
[0474] 將mPEG-2，000-DSPE( 1.855g)和甘露糖醇（181mg)的混合物在小瓶中溶于8.8血注 射用水(充氮氣lOmin)。塞住小瓶，緩慢地旋轉W便用水完全濕潤所有的固體成分。然后在 121°C高壓滅菌15min。在該階段的小瓶內容物為澄清溶液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風 楓。打開小瓶，將通過0.2皿濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合 化。得到配制的膚，為均勻澄清溶液。HPLC分析測定膚1的濃度為8.7mg/mL。
[04巧]實施例12:制劑#4C(膚1和mPEG-2，000-DS陽和CMC)的制備
[0476] 用沖氮氣的注射用水制備8.9mg/mL濃度的CMC鋼(Αν麗90,000)水溶液。向在小 瓶中的9.8mL該溶液中加入PEG-2，000-DSPE( 1.853g)和甘露糖醇（182mg)。塞住小瓶，緩慢 地旋轉W便用溶劑完全濕潤所有的固體成分。然后在121°C高壓滅菌15min。在該階段小瓶 的內容物為澄清溶液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.2WI1濾器預先過 濾的膚1的無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合化。得到配制的膚，為均勻澄清溶液。HPLC 分析測定膚1的濃度為8. Omg/mL。
[0477] 實施例13:制劑#4D(膚1和mPEG-2，000-DS陽和DPPA)的制備
[047引將mPEG-2，000-DSPE( 1.86g)、DPPA鋼(363mg)和甘露糖醇(60.2mg)的混合物在小 瓶中溶于9mL注射用水(充氮氣lOmin)。塞住小瓶，緩慢地旋轉W便用水完全濕潤所有的固 體成分。然后在121°C高壓滅菌15min。在該階段的小瓶內容物為光亮乳白色均勻混懸液。冷 卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.化m濾器預先過濾的膚1的無菌水溶液 (在1.2g中120mg)與之混合比，得到均勻的光亮乳白色不透明非粘性混懸液。HPLC分析測定 膚1的濃度為9.2mg/mL。
[0479] 實施例14:制劑#4E(膚1和mPEG-2，000-DS陽和CMC)的制備
[0480] 用沖氮氣的注射用水制備7.2mg/mL濃度的CMC鋼水溶液。向在小瓶中的lOmL該溶 液中加入mPEG-2，000-DSPE(0.94g)和甘露糖醇（181.7mg)。塞住小瓶，緩慢地旋轉W便用溶 劑完全濕潤所有的固體成分。然后在121°C高壓滅菌15min。在該階段小瓶的內容物為澄清 無色溶液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.2WI1濾器預先過濾的膚1的 無菌水溶液(在1.2g中120mg)與之混合化。得到配制的膚，為均勻澄清溶液。HPLC分析測定 膚1的濃度為9.6mg/mL。
[0481 ] 實施例15:制劑#4F(膚1和mPEG-2，000-DS陽和DPPA)的制備
[0482] 將 mPEG-2,000-DSPE(0.954g)、DPPA 鋼（183.7mg)和甘露糖醇(61.7mg)的混合物在 小瓶中溶于9.6mL注射用水(充氮氣lOmin)。塞住小瓶，緩慢地旋轉W便用水完全濕潤所有 的固體成分。然后在121°C高壓滅菌15min。在該階段的小瓶內容物為光亮乳白色均勻混懸 液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將通過0.2WI1濾器預先過濾的膚1的無菌水 溶液(在1.2g中120mg)與之混合化，得到均勻的光亮乳白色不透明非粘性混懸液。HPLC分析 測定膚1的濃度為9.9mg/mL。
[0483] 實施例16:具有膚1、mPEG-2，000-DSPE、CMA和D-甘露糖醇的制劑的制備
[0484]
[0485] ~~*基于膚含量
[0486] 如下制劑基于1 OmL制劑且易于按比例縮小至得到上表中的ImL終體積。
[0487] 將CMC鋼(Αν MW 90,000)(80111旨)和0-甘露糖醇（220111旨）的水溶液在帶有攬棒和塞 子的預稱重的小瓶中溶于7ml注射用水。向該溶液中加入固體mPEG-2，000-DSPE鋼（1 g)。塞 住小瓶，密封。將其放入設定在60°C的水浴，攬拌內容物?；蛘撸瑢⑿∑糠湃刖S持在60°C的烘 箱中。最初小瓶內容物可能渾濁，但化-2小時內轉變成澄清均勻溶液。使小瓶達到室溫。然 后打開，將膚1的水溶液（ImL中l(wèi)OOmg，基于其凈膚含量)與之混合。內容物可W即刻變渾濁， 但在混合時變成澄清均勻溶液。稱重小瓶，通過添加所需量的注射用水將總內容物的重量 調整至10.1 gm。然后混合得到的制劑，在無菌通風楓中通過0.2皿濾器過濾。得到配制的制 劑，為均勻澄清溶液，通過HPLC測定確認膚-1的濃度為lOmg/ml。
[048引實施例17:具有膚UDPPA鋼和PEG-3,350的制劑的制備 「04891
[0490] *基于膚含量
[0491] 如下制劑基于lOmL制劑且易于按比例縮小至得到上表中的ImL終體積。
[0492] 在預先稱重的帶塞的小瓶中加入1.2gm PEG-3350和8mL注射用水。通過混合溶解 內容物，加入302mg DPPA鋼。塞住小瓶，密封，將其在121°C放入高壓滅菌器中高壓滅菌 15min，得到均勻乳白色不透明混懸液。冷卻時，將小瓶轉入無菌通風楓。打開小瓶，將預先 通過0.2皿濾器過濾的膚1的無菌水溶液（ImL中l(wèi)OOmg，基于其凈膚含量）與之混合。通過添 加適量的注射用水將小瓶的總內容物調整至10.1 gm?；旌蠒r，得到配制的膚，為均勻乳白色 不透明混懸液。通過HPLC測定配制的膚，確認膚-1的濃度為lOmg/ml。
[0493] 實施例18:將制劑施用于雜猴W評價藥代動力學
[0494] 將一組雜猴(平均體重范圍在3-化g)隨機分入上述每種制劑和制劑3A的6只的組。 給組中的每只猴子在肩域經(jīng)皮下施用快速濃注單劑量的W〇.5m