黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，具體屬于植物提取技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 黃蜀葵花為錦葵科植物黃蜀葵(Abelmoschusmanihot(L. )Medic.)的干燥花冠。始 載于《嘉佑本草》。黃蜀葵花具有清熱利濕，消腫解毒的功效，主治濕熱壅遏，淋濁水腫，外治 癰疽腫毒，水火燙傷。被收載于《中國(guó)藥典》（2010版一部）中。黃蜀葵花中富含黃酮類(lèi)化合 物，如金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素、楊梅素、蘆丁等。目前，對(duì)于黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的 活性研究比較多，有研究表明金絲桃苷具有抗病毒活性、保肝、保護(hù)心腦血管、保護(hù)神經(jīng)系 統(tǒng)、治療原發(fā)性腎小球疾病等，張利斌等研究表明低劑量異槲皮苷對(duì)抑郁癥模型小鼠抗抑 郁有一定活性，另有研究表明槲皮素具有抗氧化活性、抗炎、抗癌，抗纖維化等作用。
[0003]現(xiàn)有技術(shù)中對(duì)于黃酮的提取有直接回流法、溫浸法、超聲等方法。傳統(tǒng)提取方法存 在耗時(shí)較長(zhǎng)，過(guò)程繁瑣、提取效率不高以及得率不高等問(wèn)題，因此，提供一種能夠有效解決 上述問(wèn)題的黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，顯得尤為必要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]為解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的 提取工藝，能夠簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、高效的對(duì)黃蜀葵花中金絲桃苷、異槲皮苷和槲皮素進(jìn)行提取，為 其進(jìn)一步分離純化和開(kāi)發(fā)利用奠定了基礎(chǔ)。
[0005]為了實(shí)現(xiàn)上述目標(biāo)，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案：
[0006]黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，所述黃酮類(lèi)化合物為金絲桃苷、異槲皮苷 和槲皮素。
[0007]前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，具體包括以下步驟:將黃蜀葵花干燥 后粉碎，過(guò)篩，取黃蜀葵花粉末，加入乙醇后，超聲提取，隨后進(jìn)行離心，取上清液過(guò)濾即得。
[0008]進(jìn)一步地，前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，包括以下步驟:將黃蜀葵花 干燥后粉碎，過(guò)藥典4號(hào)篩，取黃蜀葵花粉末，加入40%~90%乙醇，稱(chēng)重后，在200W~400W 條件下超聲提取40min~60min，冷卻至室溫后加入乙醇補(bǔ)重，隨后進(jìn)行離心，取上清液過(guò) 0.45μηι微孔濾膜即得。
[0009]優(yōu)選地，前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝，包括以下步驟:將黃蜀葵花干 燥后粉碎，過(guò)藥典4號(hào)篩，取黃蜀葵花粉末，加入60%乙醇，稱(chēng)重后，在340W條件下超聲提取 60min，冷卻至室溫后加入乙醇補(bǔ)重，隨后進(jìn)行離心，取上清液過(guò)0.45μπι微孔濾膜即得。
[0010]前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝中，超聲提取在30°c~60°C條件下進(jìn) 行;優(yōu)選在50°C條件下進(jìn)行。
[0011] 前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝中，離心操作是以3500r/min~5000r/min的速度離心lOmin~20min;優(yōu)選以4000r/min的速度離心15min。
[0012] 前述黃蜀葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取工藝中，黃蜀葵花粉末與乙醇的料液比為： 黃蜀葵花粉末的質(zhì)量:乙醇的體積=〇. 1:5~25g/mL;優(yōu)選為:黃蜀葵花粉末的質(zhì)量:乙醇的 體積=〇· 1:15g/mL。
[0013]為了確保本發(fā)明提取方法科學(xué)、合理，發(fā)明人進(jìn)行了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)研究和篩選，才得 以確定本發(fā)明的技術(shù)方案。具體實(shí)驗(yàn)內(nèi)容如下：
[0014] 黃蜀葵花中富含黃酮類(lèi)化合物，如金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素等。本發(fā)明對(duì)黃蜀 葵花中黃酮類(lèi)化合物的提取主要是針對(duì)金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的提取。因此，本發(fā)明 以黃蜀葵花中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的提取為研究對(duì)象。
[0015] 1、材料與儀器
[0016]黃蜀葵花樣品貴州省遵義市軒瑞生物科技有限公司提供；金絲桃苷對(duì)照品 (93.3 % )、異槲皮苷對(duì)照品（92.9 % )和槲皮素對(duì)照品（96.5 % )由中國(guó)藥品生物制品檢定所 提供；乙腈(色譜純）：美國(guó)TEDIA公司；無(wú)水乙醇（分析純）：重慶川東化工(集團(tuán)）有限公司； 磷酸(分析純）：天津市進(jìn)豐化工有限公司；水:市售娃哈哈礦泉水。
[0017] 高效液相色譜儀:AllianCeWaterSe2695(配有自動(dòng)進(jìn)樣器和PDA二極管陣列檢測(cè) 器）；工作站Empower3 · 0色譜數(shù)據(jù)工作站;分析天平:StartoriusCP22f5D型十萬(wàn)分之一天平； TDZ5-WS型醫(yī)用離心機(jī):長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司;FW135型中草藥粉碎機(jī):天津市泰斯特 儀器有限公司;KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗器:昆山市超聲儀器有限公司。
[0018] 2、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0019] 2.1黃蜀葵花中金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的提取
[0020] 將黃蜀葵花干燥后粉碎，過(guò)藥典4號(hào)篩，稱(chēng)取黃蜀葵花粉末約0 .lg，置于25mL磨口 錐形瓶中，加入50%乙醇15mL，稱(chēng)重，在50°C下300W超聲提取50min，冷卻至室溫后補(bǔ)重，搖 勾取適量離心(4000r/min，15min)，取上清液過(guò)0.45μηι微孔濾膜即得供試液。
[0021] 2.2單因素實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0022]以金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素得率為評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇超聲功率、提取時(shí)間、乙醇濃 度、提取溫度和料液比五個(gè)單因素，以2.1項(xiàng)下供試液制備條件，采用單一變量原則，分別取 3個(gè)平行樣進(jìn)行試驗(yàn)。具體考察條件如下：
[0023] 超聲功率考察:選擇超聲功率100、200、300、400、500W;其他條件:提取時(shí)間50min、 乙醇濃度50%、料液比0.lg: 15mL、提取溫度50°C;
[0024]提取時(shí)間考察:選擇提取時(shí)間10、20、30、40、50、60min，其他條件：乙醇濃度50%、 料液比0.lg: 15mL、提取溫度50°C、超聲功率300W;
[0025] 乙醇濃度考察:選擇乙醇濃度10 %、30 %、50 %、70 %、90 %、100 %，其他條件:提取 時(shí)間50min、料液比0.1g: 15mL、提取溫度50°C、超聲功率300W;
[0026] 提取溫度考察:選擇提取溫度20、30、40、50、60、70°C，其他條件：提取時(shí)間50min、 乙醇濃度50%、料液比0.lg: 15mL、超聲功率300W;
[0027]料液比考察:選擇料液比 0.1:5、0.1:10、0.1:15、0.1:20、0.1: 25g/mL，其他條件： 提取時(shí)間50min、乙醇濃度50%、超聲功率300W、提取溫度50°C。
[0028] 2.3金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素得率的測(cè)定
[0029] 2.3.1HPLC測(cè)定實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)
[0030]本發(fā)明采用HPLC法測(cè)定金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的含量。
[0031]色譜柱：PhenomenexLuna5μCi8(2)100A(250mmX4.60mm);流動(dòng)相：乙腈為流動(dòng)相 八，0.1%磷酸水溶液為流動(dòng)相8;流速：1.0111171^11;梯度洗脫:0~401^11^ :8 = 15:85,40~ 60111；!_11:六：8=15~30:85~70,60~65111；!_11:六:8 = 30~15:70~85,65~70111；!_11，六：8=15:85;檢 測(cè)波長(zhǎng):360nm;柱溫:30°C;進(jìn)樣量:10μL^用標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算金絲桃苷、異槲皮苷、槲皮素的 侍率〇
[0032]分別精密稱(chēng)金絲桃苷對(duì)照品、異槲皮苷對(duì)照品、槲皮素對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇分 別制成金絲桃苷對(duì)照品溶液(〇.〇497mg/mL)、異槲皮苷對(duì)照品溶液(0.4400mg/mL)以及槲皮 素對(duì)照品溶液(0.3710mg/mL)。分別精密吸取金絲桃苷對(duì)照品溶液0.80、1.00、1.20、1.40、 1·60、1·80mL，異槲皮苷對(duì)照品溶液0.06、0.08、0.10、0.12、0.14、0.16mL，槲皮素對(duì)照品溶 液0.02、0.04、0.06、0.08、0.10、0.12mL分別置于2mL容量瓶中，無(wú)水乙醇稀釋至刻度，進(jìn)樣， 分別計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)曲線。
[0033] 得率計(jì)算公式:得率（％ )=黃酮提取量/樣品稱(chēng)樣量X100%
[0034] 采用Empower3 · 0色譜數(shù)據(jù)工作站、DesignExpert8 · 0 · 6和Origin8 · 5對(duì)采集到的數(shù) 據(jù)進(jìn)行線性回歸處理。
[0035] 2.3.2HPLC結(jié)果與分析
[0036] 對(duì)HPLC數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸處理建立回歸方程：金絲桃苷的回歸方程為：Y!=2.38X 104Χι-22100，R2 = 0·9980，線性范圍：0·0199~0·0447mg/mL;異槲皮苷的回歸方程為:Y2=1·86Χ104Χ2 -4120，R2 = 0.9969,線性范圍：0.0132~0.0352mg/mL;槲皮素的回歸方程為： Υ3 = 3·77Χ104Χ3 -6210，R2 = 0.9998,線性范圍：0.0037~0.0223mg/mL。取2.1項(xiàng)下供試液 進(jìn)樣，在上述色譜條件下，各