毛蓮蒿中香豆素類化合物的提取方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及毛蓮蒿中香豆素類化合物的提取方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 毛蓮蒿A.vestitaWall.為菊科蒿屬植物，藏藥名普爾那，是西藏自治區(qū)藏藥廠生 產(chǎn)的結(jié)血蒿膏的主要組成藥材[1， 2]，具有極高的藥用價(jià)值[M；]，是作為防治瘟疫、止血以及抗 炎消腫等的常用藏藥材之一 [7]。
[0003] 發(fā)明人前期研宄表明，毛蓮蒿中含有黃酮類、有機(jī)酸、香豆素、生物堿、揮發(fā)油及油 月旨、甾體或三萜類等化學(xué)成分 [8]。其中，香豆素類化合物具有抗艾滋病、抗癌、抗氧化、抗炎 及平滑肌松弛等多方面的生物活性[9， 1(1]。
[0004]目前還未見對(duì)毛蓮蒿香豆素類成分的研宄。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供毛蓮蒿中香豆素類化合物的提取方法。
[0006] 具體地，本發(fā)明提供了一種毛蓮蒿中香豆素類化合物的提取方法，它包括如下工 藝條件：
[0007] 取毛蓮蒿藥材，粉碎后，以60~80% (v/v)乙醇為溶劑，在60~80°C下浸漬提取 45~75min，料液比1 :40~60 (mg/mL)，浸漬提取完成后再超聲提取20~30min，即完成提 取。
[0008] 根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，采用上述方法即能夠較為有效地對(duì)毛蓮蒿中的香豆素類成 分進(jìn)行提取。
[0009] 在單因素試驗(yàn)結(jié)果的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還采用了響應(yīng)面法對(duì)各工藝條件之間的配合 情況進(jìn)行了研宄，根據(jù)響應(yīng)面計(jì)算得到的最佳理論工藝條件為：
[0010] 取毛蓮蒿藥材，粉碎后，以72.29% (v/v)乙醇為溶劑，在68.46 °C下浸漬提取 70. 73min，料液比1 :57. 71 (mg/mL)，浸漬提取完成后再超聲提取25~30min，即完成提取。
[0011] 進(jìn)一步地，所述超聲時(shí)間為30min。
[0012] 實(shí)際操作過程中，難免會(huì)存在誤差，因此，本發(fā)明確定毛蓮蒿的提取工藝條件為：
[0013] 以72.29%±1%(￥八）乙醇為溶劑，在68.46±1°〇下浸漬提取70.73±1!^11，料 液比 1 :57. 71±l(mg/mL)。
[0014] 通過驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)如下條件中的總香豆素提取率與響應(yīng)面計(jì)算得到的最 佳理論工藝條件基本相同，得率僅相差0.29%:所述乙醇體積分?jǐn)?shù)為72% (v/v);所述浸漬 提取溫度為68°C;所述浸漬提取時(shí)間為71min;所述料液比為1 :58(mg/mL);上述條件亦在 理論條件的誤差范圍以內(nèi)，說明本發(fā)明選定的誤差范圍是合理的。
[0015] 其中，粉碎后的藥粉需過3號(hào)篩。
[0016] 其中，所述毛蓮蒿藥材為菊科蒿屬植物毛蓮蒿A.vestitaWall.的地上部分。
[0017] 本發(fā)明還提供了上述提取方法制備的毛蓮蒿提取物。
[0018] 本發(fā)明采用單因素和響應(yīng)面法對(duì)毛蓮蒿的總香豆素提取工藝進(jìn)行研宄，最終發(fā) 現(xiàn)，響應(yīng)面法得到的最佳工藝條件與單因素法所得啟示相差較大，且響應(yīng)面法得到的最佳 工藝條件中總香豆素的得率也顯著優(yōu)于單因素法，這一結(jié)果表明，本發(fā)明找到了各因素條 件之間最佳的契合點(diǎn)，實(shí)現(xiàn)了對(duì)毛蓮蒿香豆素類成分的有效提取。
[0019] 本發(fā)明采用熱浸-超聲輔助方法，對(duì)毛蓮蒿香豆素類成分進(jìn)行提取方法研宄，找 到了能夠有效將毛蓮蒿中的總香豆素類成分提取完全的工藝條件，為毛蓮蒿香豆素類成分 的進(jìn)一步研宄提供了基礎(chǔ)。
【附圖說明】
[0020] 圖1乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0021] 圖2浸提時(shí)間對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0022] 圖3浸提溫度對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0023] 圖4料液比對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0024] 圖5超聲時(shí)間對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0025] 圖6、圖6續(xù)各因素兩兩交互作用對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率影響的響應(yīng)面圖
【具體實(shí)施方式】
[0026] 實(shí)施例1本發(fā)明提取方法
[0027]1儀器與材料
[0028] TU-1950型雙光束紫外可見分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）； KQ-250B超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；ESJ200-4電子天平（沈陽龍騰電子 有限公司）；HH-2數(shù)顯恒溫水浴鍋（國(guó)華電器有限公司）；HX-200型高速中藥粉碎機(jī)（浙江 永康溪岸五金藥具廠）。
[0029] 毛蓮蒿藥材于2013年11月6日購于西藏藏藥廠，經(jīng)西南民族大學(xué)劉圓教授鑒定 為菊科蒿屬植物毛蓮蒿A.vestitaWall.的地上部分。粉碎，過3號(hào)篩，備用；傘形花內(nèi)酯 對(duì)照品（批號(hào)：MUST-14031012,成都曼斯特生物有限公司）；水為純凈水；無水乙醇為分析 純。
[0030] 2方法與結(jié)果
[0031] 2. 1毛蓮蒿總香豆素含量測(cè)定
[0032] 2. 1. 1對(duì)照品溶液的制備
[0033] 精密稱取3. 3mg的傘形花內(nèi)醋對(duì)照品，用無水乙醇定容至25mL，搖勾，即得 0. 132mg/mL的傘形花內(nèi)醋對(duì)照品溶液。
[0034] 2. 1.2線性關(guān)系的考察
[0035]精確量取0?15、0. 2、0. 25、0. 3、0. 35、0. 4、0. 45、0. 5、0. 55mL對(duì)照品溶液，精確加 入無水乙醇至9mL，搖勾，以無水乙醇作對(duì)照，于325nm處測(cè)定其吸光度。以傘形花內(nèi)醋 質(zhì)量濃度（C)為橫坐標(biāo)，吸光度（A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為A= 91. 636C+0. 0437,R2= 0. 9997,表明傘形花內(nèi)酯對(duì)照品溶液在2. 20~8. 07yg/mL范圍內(nèi) 與吸光度呈較好的線性關(guān)系。
[0036] 2. 1. 3毛蓮蒿總香豆素的提取及含量測(cè)定
[0037] 稱取0.5g毛蓮蒿藥材粉末，精密稱定，加入一定體積分?jǐn)?shù)的乙醇，在設(shè)定的試驗(yàn) 條件下按一定的浸提時(shí)間、浸提溫度、料液比和超聲時(shí)間，超聲輔助提取。過濾，并用少量提 取液洗滌，定容至50mL容量瓶中，搖勻，即得毛蓮蒿總香豆素提取液。取0. 2mL于10mL比色 管中，精確加入無水乙醇至9mL，混勾，以無水乙醇做空白對(duì)照，于325nm處測(cè)定其吸光度， 由回歸方程計(jì)算總香豆素的含量，以下稱為"得率"。
[0038] 2. 2單因素試驗(yàn)
[0039] 以乙醇體積分?jǐn)?shù)、浸提時(shí)間、浸提溫度、料液比及超聲時(shí)間5個(gè)因素進(jìn)行單因素試 驗(yàn)，確定影響毛蓮蒿總香豆素得率的適宜單因素條件。
[0040] 2. 2. 1乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0041] 稱取5份0.5g毛蓮蒿藥材粉末，精密稱定，分別加入的不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇20mL， 60°C水浴加熱30min，再超聲提取20min。過濾，并用少量提取液洗滌，定容至50mL容量瓶 中，搖勻，按"2. 1. 3"項(xiàng)下測(cè)定總香豆素得率，結(jié)果見圖1。
[0042] 如圖1可知，總香豆素提取率隨乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大呈先升高后降低的趨勢(shì)。當(dāng) 乙醇體積分?jǐn)?shù)為60% (v/v)時(shí)，得率達(dá)到最大，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，總香豆素得率反 而降低，可能是乙醇體積分?jǐn)?shù)的增大，增加了脂溶性物質(zhì)的溶出量，同時(shí)溶劑極性的降低， 導(dǎo)致香豆素類化合物的溶解度降低等的原因。因此，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果確定適宜乙醇體 積分?jǐn)?shù)為60 %。
[0043] 2. 2. 2浸提時(shí)間對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0044] 稱取6份0. 5g毛蓮蒿藥材粉末，精密稱定，分別加入60% (v/v)乙醇20mL，60°C 水浴加熱15、30、45、60、75、901^11，再超聲提取201^11。過濾，并用少量提取液洗滌，定容至 50mL容量瓶中，搖勻，按"2. 1. 3"項(xiàng)下測(cè)定總香豆素得率。結(jié)果見圖2。
[0045] 由圖2可以看出，隨著浸提時(shí)間的增加，總香豆素得率逐漸增大。浸提60min時(shí)， 總香豆素得率最大，超過60min后，總香豆素得率呈下降趨勢(shì)。因此，根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果 確定適宜浸提時(shí)間為60min。
[0046] 2. 2. 3浸提溫度對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0047] 稱取5份0. 5g毛蓮蒿藥材粉末，精密稱定，分別加入60 % (v/v)乙醇20mL，于 50、60、70、80、90°〇水浴加熱601^11，再超聲提取201^11。過濾，并用少量提取液洗滌，定容至 50mL容量瓶中，搖勻，按"2. 1. 3"項(xiàng)下測(cè)定總香豆素得率。結(jié)果見圖3。
[0048] 由圖3可知，浸提溫度為60°C時(shí)，總香豆素得率最高，隨著溫度的增加，總香豆素 得率反而降低，可能是由于溫度過高，使部分香豆素升華或分解，從而使得率降低。因此，根 據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果確定適宜浸提溫度為60°C。
[0049] 2. 2. 4料液比對(duì)毛蓮蒿總香豆素得率的影響
[0050]稱取5份0.5g毛蓮蒿藥材粉末，精密稱定，分別加入不同體積的60 %乙醇，于 60°C水浴加熱60min，再超聲提取20min。過濾，并用少量提取