當(dāng)歸藤在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物方面的新用圖
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及當(dāng)歸藤的新用途，特別是當(dāng)歸藤提取物及當(dāng)歸藤總黃酮的新用途，即 在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物方面的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 現(xiàn)代免疫學(xué)研宄和環(huán)境污染調(diào)查表明，人類活動(dòng)所產(chǎn)生的食物鏈污染、飲用水源 污染、工業(yè)大氣污染、放射性污染等有害因子進(jìn)入環(huán)境中，引起環(huán)境系統(tǒng)結(jié)構(gòu)和功能發(fā)生變 化，致使人類在日常飲食、呼吸、皮膚接觸和使用化學(xué)藥物時(shí)，自身不可避免地暴露于各種 細(xì)胞致畸變環(huán)境中，導(dǎo)致生命體細(xì)胞畸變，更大大增加了腫瘤出現(xiàn)的概率，降低了人類動(dòng)植 物各生物物種繁殖的成功率。眾多研宄表明細(xì)胞畸變?cè)谀[瘤形成過(guò)程中起著決定性作用， 已經(jīng)成為人類潛在的最大健康危害。放化療是目前治療和輔助手術(shù)治療腫瘤癌癥最常規(guī)、 有效的方法，但放化療的毒副作用幾乎不可避免?；熕幬锏倪x擇性不強(qiáng)，在殺滅癌細(xì)胞的 同時(shí)也會(huì)不可避免地?fù)p傷人體正常的細(xì)胞，從而出現(xiàn)致突變、致畸形和致癌的效應(yīng)。放療中 射線使人體組織間液發(fā)生電離，產(chǎn)生自由基，這些自由基再與生物大分子發(fā)生作用，形成不 可逆損傷，導(dǎo)致細(xì)胞死亡，這樣在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也使腫瘤周圍的正常組織細(xì)胞受到 損傷。常見(jiàn)的放化療毒副作用有以下幾種：身體衰弱、免疫功能下降、骨髓抑制、消化障礙、 炎癥反應(yīng)、心臟、腎臟、肝臟、神經(jīng)系統(tǒng)毒性，及肺纖維化等。通過(guò)改變給藥途徑、劑量，成分 輸血，骨髓移植，中藥調(diào)節(jié)，生物免疫療法等可以減輕放化療的毒副作用。
[0003] 大量臨床觀察證實(shí)，中藥在提高機(jī)體機(jī)能狀態(tài)、減輕放化療的副作用、促進(jìn)骨髓功 能、提高食欲、增加體力、改善睡眠、促進(jìn)手術(shù)康復(fù)、增加放化療效果方面都有比較好的作 用。隨著中醫(yī)腫瘤學(xué)的發(fā)展，中藥在癌癥的綜合治療中發(fā)揮著越來(lái)越重要的作用，突出表 現(xiàn)在中藥與常規(guī)手術(shù)、放化療的結(jié)合方面。
[0004] 當(dāng)歸藤（EmbeliaparvifloraWall)系紫金?？苹ㄋ崽僮訉僦参?，又稱小花酸藤 子、大力王、篩其強(qiáng)，為常綠木質(zhì)藤本，以其干燥的藤或根入藥，主要分布廣西（龍州、大新、 天等、百色、河池）、廣東、貴州、云南等地。其性味苦、澀、平。壯醫(yī)認(rèn)為當(dāng)歸藤具有通龍路火 路、補(bǔ)血調(diào)經(jīng)、益精壯陽(yáng)、強(qiáng)腰膝的功能，是常用壯藥品種，用于勒內(nèi)（貧血）、京瑟（閉經(jīng)）、 月經(jīng)不調(diào)、隆白呆（帶下）、發(fā)旺（風(fēng)濕骨痛）、腰腿痛、胸肋痛、胃痛、慢性腸炎、產(chǎn)后腹痛、 卟艮襠（不孕癥）等，屬抗風(fēng)濕要藥。廣西特產(chǎn)中成藥"桂龍藥膏"以該藥材為原料。
[0005] "當(dāng)歸藤化學(xué)成分的預(yù)試驗(yàn)研宄"《廣西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)》發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸藤中可能含有糖 類、苷類、酚類、鞣質(zhì)、皂苷、有機(jī)酸類、黃酮類、三萜類、留體類、揮發(fā)油及油脂等成分。
[0006] 據(jù)盧森華等人研宄報(bào)道（"當(dāng)歸藤不同部位揮發(fā)油成分GC-MS分析"《安徽農(nóng)業(yè)科 學(xué)》），當(dāng)歸藤根、莖、葉揮發(fā)油中均含有2-正戊基呋喃、肉豆蔻酸、棕櫚酸和亞油酸，根中含 量最高為亞油酸，莖中含量最高為棕櫚酸。
[0007] "當(dāng)歸藤中總皂苷的提取工藝研宄"《時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥》劉靜等人在對(duì)當(dāng)歸藤化學(xué) 成分的研宄中，分離得到大量皂苷類化合物，其主要成分為百兩金皂苷B。皂苷類化合物 常具有較好的抗腫瘤活性，而百兩金皂苷B作為中藥百兩金的重要成分之一，對(duì)腫瘤細(xì)胞 MCF-7、NCI-H460和SF-268具有很強(qiáng)的細(xì)胞毒活性。
[0008] "紫外分光光度法測(cè)定當(dāng)歸藤中兒茶素含量"《安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)》管海波等在對(duì)當(dāng)歸 藤化學(xué)成分的研宄過(guò)程中，分離得到大量的兒茶素。兒茶素具有抑菌、消炎、抑制腫瘤、抗氧 化、抗衰老、抗畸變、降血壓、降血脂、降血糖、防輻射等多種保健功能。
[0009] "當(dāng)歸藤中總黃酮提取工藝研宄"（《食品工業(yè)科技》）報(bào)道針對(duì)當(dāng)歸藤中總黃酮提 取工藝研宄，但僅僅按總黃酮得率為指標(biāo)。
[0010] 目前沒(méi)有文獻(xiàn)資料提到當(dāng)歸藤、當(dāng)歸藤提取物或當(dāng)歸藤總黃酮可用于治療和/或 預(yù)防細(xì)胞畸變。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011] 本發(fā)明的目的是提供當(dāng)歸藤在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物方面的新用途；
[0012] 本發(fā)明的另一目的是提供當(dāng)歸藤提取物在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物方 面的新用途；
[0013]本發(fā)明的另一目的是提供當(dāng)歸藤總黃酮在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物方 面的新用途；
[0014]本發(fā)明的另一目的是提供當(dāng)歸藤提取物的制備方法；
[0015]本發(fā)明的另一目的是提供當(dāng)歸藤總黃酮的制備方法。
[0016] 本發(fā)明的目的是通過(guò)下列的技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：
[0017]本發(fā)明原料來(lái)源：
[0018] 當(dāng)歸藤：系紫金?？苹ㄋ崽僮訉僦参顴mbeliaparvifloraWall，又稱小花酸藤 子、大力王、篩其強(qiáng)，為常綠木質(zhì)藤本，以其干燥的藤或根入藥，主要分布廣西（龍州、大新、 天等、百色、河池）、廣東、貴州、云南等地。性味苦、澀、平。
[0019] 發(fā)明人在研宄細(xì)胞畸變的治療過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，紫金?？苹ㄋ崽僮訉僦参锾貏e是當(dāng)歸 藤所含總黃酮對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核有明顯抑制作用和小鼠骨髓 細(xì)胞染色體畸變有顯著降低效果，實(shí)現(xiàn)了對(duì)細(xì)胞畸變病理進(jìn)程的干預(yù)和病理癥狀的顯著改 善，從而有效治療細(xì)胞畸變。
[0020] 黃酮類化合物廣泛存在于植物界，是目前倍受關(guān)注的天然活性產(chǎn)物之一。黃酮體 抗油脂過(guò)氧化活性已經(jīng)被證實(shí)，認(rèn)為它是作為優(yōu)良抗氧化劑而起作用。大量研宄證明，黃酮 類化合物具有抗自由基、抗氧化、抗癌、抗菌、抗過(guò)敏、抗炎癥等多種生理活性及藥理作用， 且無(wú)毒，對(duì)人類的腫瘤、衰老、心血管疾病的防治有重要意義。研宄結(jié)果顯示，當(dāng)歸藤總黃酮 對(duì)環(huán)磷酰胺誘導(dǎo)的小鼠骨髓細(xì)胞微核有明顯抑制作用，說(shuō)明當(dāng)歸藤總黃酮對(duì)致突變劑誘 導(dǎo)的小鼠體細(xì)胞突變有拮抗作用。而且當(dāng)歸藤提取物和當(dāng)歸藤總黃酮能顯著抑制CP誘發(fā) 的染色體畸變，且存在一定的量效關(guān)系。統(tǒng)計(jì)分析各組不同類型的染色體畸變結(jié)果顯示，當(dāng) 歸藤總黃酮主要是通過(guò)降低染色體末端缺失和染色體碎片的形成，對(duì)環(huán)磷酰胺引發(fā)的小鼠 骨髓細(xì)胞的染色體損傷進(jìn)行修復(fù)，其機(jī)制可能是由于當(dāng)歸藤總黃酮能激活DNA和蛋白質(zhì)合 成酶系統(tǒng)，從而幫助機(jī)體快速修復(fù)誘變劑引起的染色體損傷。已知CP進(jìn)入體內(nèi)主要是在肝 臟酶作用下生成中間產(chǎn)物醛磷酰胺，然后進(jìn)入靶細(xì)胞后將其烷化基加到DNA分子的核苷酸 順序中，引起DNA損傷，其損傷的實(shí)質(zhì)是CP的代謝產(chǎn)物對(duì)DNA分子的氧化作用。CP這種作 用與? 0H自由基對(duì)DNA的損傷作用相類似。羥自由基被認(rèn)為是毒性很強(qiáng)的自由基，能誘導(dǎo) 膜系統(tǒng)脂質(zhì)過(guò)氧化，引起各種重要酶的氧化損傷，尤其是?〇!!能與DNA上的胸腺嘧啶等堿基 加成，生成的堿基自由基可相互結(jié)合或再通過(guò)02、02^ ?等反應(yīng)生成過(guò)氧化物，導(dǎo)致堿基破壞 從而產(chǎn)生遺傳突變。黃酮類化合物具有廣泛的生物活性，，包括抗氧化，抗衰老，抗菌，抗腫 瘤等。最主要的是它的抗氧化活性。有研宄證明黃酮類化合物抗氧化作用是通過(guò)酚羥基與 自由基反應(yīng)形成穩(wěn)定的半醌式自由基結(jié)構(gòu)，具有強(qiáng)力清除? 0H和02_ ?的作用。另外，與自 由基發(fā)生反應(yīng)后，清除劑本身變成了自由基，這個(gè)新自由基的毒性或活潑性小于原來(lái)自由 基的毒性或活潑性從而起防護(hù)作用。由此推測(cè)當(dāng)歸藤總黃酮抗CP誘變作用可能與其抗氧 化作用有關(guān)。
[0021] 本發(fā)明專利臨床應(yīng)用的安全性較高，在細(xì)胞畸變的藥物治療中不失為一種好藥， 其拓寬了細(xì)胞畸變的新方法，同時(shí)為患者解決了現(xiàn)有技術(shù)治療細(xì)胞畸變時(shí)出現(xiàn)的不良反 應(yīng)。
[0022] 因此，申請(qǐng)人提供當(dāng)歸藤、當(dāng)歸藤提取物、當(dāng)歸藤總黃酮能夠用于治療細(xì)胞畸變藥 物方面的新用途。
[0023] 本發(fā)明還公開了當(dāng)歸藤提取物在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物的應(yīng)用，所述 當(dāng)歸藤提取物的制備包括以下步驟：
[0024] 當(dāng)歸藤粉碎，加入濃度為60-80 %乙醇50-70°C水浴提取2-3次，每次乙醇用量為 藥材總重量8-12倍，每次提取時(shí)間為40-60min，合并提取液，濃縮，過(guò)濾，濃縮，干燥，得當(dāng) 歸藤提取物。
[0025] 本發(fā)明公開的當(dāng)歸藤總黃酮在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物的應(yīng)用，所述當(dāng) 歸藤總黃酮通過(guò)以下步驟制備：
[0026] 當(dāng)歸藤粉碎，加入濃度為50-80%乙醇微波提取2-3次，每次乙醇用量為藥材總重 量8-15倍，每次提取時(shí)間為10-20min，合并提取液，濃縮，過(guò)濾，濾液過(guò)弱酸性陽(yáng)離子交換 樹脂吸附后，用濃度為60-80%乙醇洗脫，洗脫液濃縮、真空干燥，得當(dāng)歸藤總黃酮。
[0027] 本發(fā)明公開的當(dāng)歸藤總黃酮在制備治療和/或預(yù)防細(xì)胞畸變藥物的應(yīng)用，所述當(dāng) 歸藤總黃酮還可以通過(guò)以下步驟制備：
[0028] 當(dāng)歸藤粉碎，加入濃度為60%乙醇，用780W微波提取2-3次，每次乙醇用量為藥材 總重量12倍，每次提取時(shí)間為15min，合并提取液，減壓濃縮，加硅藻土過(guò)濾，濾液過(guò)ADS17 樹脂吸附，用70%乙醇洗脫，洗脫液濃縮、真空干燥，得當(dāng)歸藤總黃酮。
[0029] 本發(fā)明提供的當(dāng)歸藤、當(dāng)歸藤提取物、當(dāng)歸藤總黃酮用于治療細(xì)胞畸變藥物方面 的新用途具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0030] 1、當(dāng)歸藤、當(dāng)歸藤提取物、當(dāng)歸藤總黃酮從紫金?？苹ㄋ崽僮訉佼?dāng)歸藤中而得，安 全無(wú)毒，可長(zhǎng)期服用。
[0031] 2、小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核（MN)顯示，當(dāng)歸藤提取物及當(dāng)歸藤總黃酮組小鼠 分別在不同程度上降低了CP誘發(fā)的微核率，這些數(shù)據(jù)表明當(dāng)歸藤提取物、當(dāng)歸藤總黃酮可 抑制CP對(duì)小鼠骨髓細(xì)胞的致突變作用并且存在著明顯的量效關(guān)系。
[0032] 3、小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變（CA)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸藤提取物、當(dāng)歸藤總黃酮主要 是通過(guò)降低染色體末端缺失和染色體碎片（P〈〇. 05,P〈0. 01)的形成，對(duì)環(huán)磷酰胺引發(fā)的小 鼠骨髓細(xì)胞的染色體損傷進(jìn)行修復(fù)，從而幫助機(jī)體快速修復(fù)誘變劑引起的染色體損傷。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。應(yīng)該理解的是，本發(fā)明的實(shí)施例是用于說(shuō)明 本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行的簡(jiǎn)單改進(jìn)都屬于本發(fā)明 要求保護(hù)的范圍。除非另有說(shuō)明，本發(fā)明中的乙醇量的百分?jǐn)?shù)是體積百分?jǐn)?shù)，v/v表示溶液 的體積比。
[0034] 實(shí)施例1:當(dāng)歸藤提取物的制備
[0035] 取10kg當(dāng)歸藤粉碎，加入濃度為80%的乙醇水浴提取3次，每次的乙醇用量分別 為藥材總重量的12倍、10倍、8倍，水浴溫度為70°C，每次提取時(shí)間分別為60min、50min、 40min，合并提取液，濃縮，過(guò)濾，干燥，得當(dāng)歸藤提取物。
[0036] 實(shí)施例2 :當(dāng)歸藤總黃酮的制備
[0037] 取10kg當(dāng)歸藤粉碎，加入濃度為60%的乙醇微波提取3次，每次乙醇用量分別為 藥材總重量的15倍、10倍、8倍，每次提取時(shí)間分別為2〇1^11、15111111、1〇111111，合并提取液，濃 縮，過(guò)濾，濾液過(guò)ADS17樹脂吸附，用濃度為80 %的乙醇洗脫，洗脫液濃縮、真空干燥，得當(dāng) 歸藤總黃酮。
[0038] 以蘆丁作對(duì)照品，