一種異吲哚類化合物及其制備方法和應用
【專利說明】一種異吲哚類化合物及其制備方法和應用 【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種異吲哚類化合物及其制備方法和應用，屬于植物有效成分提取技 術領域。 【【背景技術】】
[0002] 賽北紫堇：無毛草本，高20- 65厘米。主根明顯，細長，具少數(shù)纖維狀分枝；根莖 短，被少數(shù)葉殘基。莖直立，具棱，自基部多分枝，略帶紫色?；~數(shù)枚，葉柄長4一 6厘 米，基部擴大成鞘，葉片輪廓卵形，二至三回三出分裂，第一回全裂片具柄，第二回近無柄或 無柄，2- 3深裂或淺裂，小裂片倒卵形至倒披針形，先端圓或鈍，具短尖，背面具白粉；莖生 葉數(shù)枚，疏離，互生，均具葉柄且基部擴大成鞘，葉片同基生葉?？偁罨ㄐ蛏谇o和分枝先 端，長2. 5-8厘米，果時延長達14厘米，多花，先密后疏；苞片最下部者二回羽狀分裂，中部 者深裂至缺刻，最上部者披針形至鉆形全緣；花梗纖細，與苞片近等長或稍短。萼片鱗片狀， 邊緣撕裂狀，早落；花瓣黃色，上花瓣長7- 8毫米，花瓣片舟狀卵形，先端具短尖，邊緣微波 狀，背部具矮雞冠狀突起，距圓筒形，短于花瓣片，下花瓣舟狀倒披針形，長約5毫米，先端 鈍，具短尖，背部雞冠狀突起矮，內(nèi)花瓣長3-4毫米，花瓣片倒卵形，具1側生囊，爪線形，與 花瓣片近等長；雄蕊束長3-4毫米，花藥極小，花絲披針形，蜜腺體貫穿距的1/2 ;子房線狀 長圓形，長約2毫米，具1列胚珠，花柱比子房短，柱頭2裂，具4個長乳突。蒴果狹圓柱形， 長1一 1. 2厘米，粗約2毫米，有3- 7枚種子，排成1列，成熟時自果?；糠凑?。種子近圓 形，直徑約1.5毫米，黑色，具光澤?；ü? -10月。賽北紫堇是一種常用中藥，據(jù)《藏藥 大典》記載：其花、葉、根均可入藥，具有清熱解毒、鎮(zhèn)靜、活血化淤、收斂止癢、祛風利氣等功 效。賽北紫堇是滇南地區(qū)傣族人民常用的植物藥，是一種盡人皆知的解毒良藥。
[0003] 產(chǎn)內(nèi)蒙古（烏拉山）和山西（大五臺山），生于海拔1700米附近的林下、山坡灌叢 下、草叢中或地邊路旁。蒙古和俄羅斯的西伯利亞廣布。在云南主要分布在滇南。本種在 內(nèi)蒙古和山西的分布是其分布區(qū)以南的零星分布，這可能與第四紀冰期的影響有關。
[0004] 研究表明大部分異吲哚類生物堿具有抗腫瘤作用，相關成分在誘導腫瘤細胞分 化、促進腫瘤細胞凋亡以及提高機體免疫力方面亦表現(xiàn)出一定的作用，國內(nèi)外對該領域的 研究十分活躍，無論是天然存在的，還是人工合成得到的異吲哚類化合物，都引起了化學家 的廣泛關注。 【
【發(fā)明內(nèi)容】
】
[0005] 本發(fā)明目的是針對現(xiàn)有技術中的需求，提供一種從塞北紫堇中提取到的新的異吲 哚類化合物。
[0006] 本發(fā)明的另一目的是提供一種該化合物的制備方法。
[0007] 本發(fā)明的第三個目的在于提供一種該化合物的應用。
[0008] 本發(fā)明為實現(xiàn)上述目的，采用以下技術方案：
[0009] -種異吲哚類化合物，其特征在于其結構式為：
[0010]
[0011] 本發(fā)明異吲哚類化合物的分子式為C21H19NO 5，命名為Isoindole LYS。
[0012] 本發(fā)明異吲哚類化合物是以干燥的紫堇根為原料，經(jīng)浸膏提取、浸膏萃取、硅膠柱 層析、高壓液相色譜分離獲得的。
[0013] 本發(fā)明異吲哚類化合物的制備方法，其特征在于具體包括以下步驟：
[0014] a、浸膏提?。簩⒆陷栏址鬯楹笥糜袡C溶劑超聲提取3次，每次lOOmin，過濾，合 并提取液，旋蒸干其中的有機溶劑，得浸膏A ;
[0015] b、浸膏萃?。涸诮郃中加入2% HCl進行多次研磨，至生物堿反應較弱為止，合 并酸提取液，用等體積的氯仿萃取酸提取液，保留酸水層，萃取3次，合并酸水層，用氨水堿 化至pH 9-10,靜置，將堿化后的酸提取液抽濾，濾液用氯仿萃取多遍直至氯仿層無色，合并 萃取物，并靜置揮干氯仿，得浸膏B ;
[0016] c、硅膠柱分離：將浸膏B用1倍重量的氯仿溶解，然后用浸膏B重量0. 8~1. 2倍 的80~100目硅膠拌樣，上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏B重量的 5~10倍量，用體積比為1:0~1 :2的有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān) 測，合并相同洗脫液部分，再將洗脫液上C-18反相柱進一步分離，用體積濃度10~100 %的 甲醇水溶液梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同洗脫液部分；
[0017] d、高效液相色譜分離：將反相柱分離后的洗脫液經(jīng)高效液相色譜進一步分離純 化，根據(jù)紫外線檢測器譜峰收集目標洗脫部分；
[0018] e、將目標洗脫部分經(jīng)濃縮干燥后，即得。
[0019] 本發(fā)明中紫堇粗粉碎到30~40目。
[0020] 本發(fā)明步驟a和步驟c中的有機溶劑為醇、乙醇、丙酮、氯仿、石油醚、乙酸乙酯中 的一種或幾種。
[0021] 本發(fā)明步驟b中反應至生物堿反應較弱，表示所測pH值接近中性。
[0022] 本發(fā)明在制備過程中要注意回收有機溶劑和氯仿。
[0023] 本發(fā)明步驟c中收集的洗脫液為80:20部分。
[0024] 本發(fā)明步驟d中高效液相色譜分離是以20~80 %的甲醇為流動相，流速10~ 16ml/min，21. 2 X 250mm，5 ym的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測 波長為254nm，每次進樣50 y L，收集15. 2~16. 4min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述 的異吲哚類化合物。
[0025] 本發(fā)明對得到的異吲哚類化合物的結構鑒定方法，包括以下步驟：
[0026](1)本發(fā)明制備得到白色柱狀結晶（氯仿-甲醇），旋光值[a]24. 8D-5. 45(溶劑 為甲醇C 0.25)，ESI~MS顯示離子峰（[M+l])366,表明其分子量為365, HRES頂S(實測 值 388. 1159[M+Na]+，計算值 388. 1160)，在 IR 譜中有明顯的羰基 1686cm1，在 1624,1542， 1498cm 1顯示有苯環(huán)存在，還有2932,1470,1038,920cm 1 (次甲二氧基），結合其氫譜、碳譜 數(shù)據(jù)，可推得分子式為C21H19NO5，不飽和度為13。
[0027] (2) 1HMNR低場區(qū)有八個質(zhì)子信號，其中四個為芳香質(zhì)子信號，有兩個相互偶合 (7. 20,6. 86, J = 8. 1)，表明為芳香苯上相臨氫；有兩個呈單峰7. 28和6. 65 (各為1個H)， 另外兩組質(zhì)子信號，6. 03 (為-OCH2O-中兩個H)，5. 54,4. 42 (為-CH2上兩個H)，高場區(qū)有二 組甲基峰3.89 (3H，s)，3.73 (3H，s)，還有一個單峰2.82 (3H，s)為氮原子上甲基峰，及一組 多重峰3.30 (2H，m)為一個亞甲基峰.結合13CNMR、HSQC譜，HMBC譜，表明該化合物中應含 有兩個苯環(huán)。
[0028] (3)在HSQC譜及HMBC譜中，可知S 7. 28的氫與S 105.8的碳直接相關，并與 S 151. 5,155. 1，123. 3,170. 5,146. 2,104. 5 遠程相關，S 6. 65 的氫與 S 104. 5 的碳直接 相關，并與 S 151. 5,155.1，123. 3,146. 2,105. 8, 75.1 遠程相關，S 3. 89 的氫與 S 56. 6 的 碳直接相關，并與S 105. 8,151. 5遠程相關；S 3. 73的氫與S 56. 6的碳直接相關，并與 S 155. 1，104. 5的碳遠程相關；S 2. 82的氫與S 25. 2的碳直接相關，并與S 75. 1，170. 5 的碳遠程相關；S 5. 54,4. 42的氫與S 104. 9的碳直接相關，并與S 149. 8, 75. 1，135. 8， 116. 0,146. 2的碳遠程相關；S 7. 21的氫與S 116. 0的碳直接相關，并與S 145. 0,109. 5， 150. 3,123. 2的碳遠程相關；S 6. 86的氫與S 109. 5的碳直接相關，并與S 123. 3,135. 8， 145. 0,150. 3的碳遠程相關；S 6. 03的氫與S 103. 1的碳直接相關，并與S 145. 3,150. 3的 碳遠程相關；S 3. 31的氫與S 36. 7的碳直接相關，并與S 75. 1，123. 3,145. 0,135. 8,149. 8 的碳遠程相關。
[0029] (4)其碳譜氫譜如表1:
[0030] 表1 THE NMR (300Hz) DATA OF UCD3OD，S ppm，J IN Hz)
[0031]
[0032] 綜上分析，確定了新化合物的結構式為式1，經(jīng)文獻檢索證實該化合物為一種新化 合物。
[0033] -種上述異吲哚類化合物在制備抗艾滋病藥物中的應用。
[0034] 該異吲哚類化合物的抗艾滋病活性實驗如下：
[0035] 對本發(fā)明異吲哚類化合物做HIV感染細胞的保護作用試驗
[0036] (1)樣品對C8166宿主細胞的細胞毒性檢測：4X IO5AiL C8166細胞懸液100 y L與 不同的待測化合物溶液混合，設三個重復孔。同時設置不含化合物的對照孔，37°C，5% C02 培養(yǎng)3天，采用MTT比色法檢測細胞毒性。ELx800ELISA儀測定OD值，測定波長為595nm， 參考波長為630nm。計算得到CC50值（50% Cytotoxic Concentration)，即對50%的正常 T淋巴細胞系C8166產(chǎn)生毒性時的化合物濃度。
[0037] (2)樣品對HIV-IIIIB誘導C8166細胞病變（CPE)的抑制試驗：將8X 105/mL C8166細胞50 y L/孔接種到含有100 y L/孔倍比稀釋化合物的96孔細胞培養(yǎng)板上，然后 加入50 y L的HIV-1IIIB稀釋上清（M. 0.1 . 0