利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組大腸桿菌及重組方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物工程技術(shù)領(lǐng)域，具體地涉及一種利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組 大腸桿菌及重組方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 羥基酪醇（hydroxytyrosol)，中文名稱：3, 4-二羥基苯乙醇，英文名稱： 3, 4-Dihydroxyphenylethanol。中文別名：2-(3, 4-二羥基苯基）乙醇；羥基酪醇；3, 4-二 羥基苯乙基醇。CAS號(hào)：10597-60-1。分子式！C8HltlO3。結(jié)構(gòu)式：
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組大腸桿菌構(gòu)建方法，其特征是包括如下步驟，以序 列表SEQ ID NO. 1、SEQ ID NO. 2為PCR引物，以大腸桿菌BW25113基因組DNA為模板，PCR擴(kuò) 增HpaBC基因的開(kāi)放閱讀框架，利用SacI和KpnI雙酶切將HpaBC基因連入載體pTrcHisB， 得到中間質(zhì)粒pTrcHisB-HpaBC，以pTrcHisB-HpaBC為模板，利用 SEQ ID No. 3、SEQ ID NO. 2 為PCR引物，PCR擴(kuò)增獲得帶有Trc啟動(dòng)子的HpaBC基因片段Trc-HpaBC，KpnI單酶切連入 質(zhì)粒pTrcHisB-AROlO,得到表達(dá)載體pTrcHisB-AROlO-HpaBC ;將pTrcHisB-AROlO-HpaBC與 質(zhì)粒pBb3共轉(zhuǎn)入大腸桿菌菌株BMGA，得到重組大腸桿菌菌株BMGA (pTrcHisB-AROlO-HpaBC &PbB3)。
2. 權(quán)利要求1的方法構(gòu)建的利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組大腸桿菌。
3. 權(quán)利要求2的利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)羥基酪醇的用途。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了利用葡萄糖生產(chǎn)羥基酪醇的重組大腸桿菌及構(gòu)建方法及應(yīng)用，方法為，以SEQ ID NO.1、2為引物，以大腸桿菌BW25113基因組DNA為模板，PCR擴(kuò)增HpaBC基因，連入載體pTrcHisB，得到中間質(zhì)粒，以中間質(zhì)粒為模板，以SEQ ID No.3、2為引物，PCR擴(kuò)增，連入質(zhì)粒pTrcHisB-ARO10，得到表達(dá)載體pTrcHisB-ARO10-HpaBC并將該載體與質(zhì)粒pBb3共轉(zhuǎn)入大腸桿菌菌株BMGA，得到重組大腸桿菌。本發(fā)明的重組大腸桿菌含有來(lái)自釀酒酵母的ARO10基因及來(lái)自大腸桿菌內(nèi)源的HpaBC基因。能夠顯著提高羥基酪醇的產(chǎn)量。
【IPC分類】C12N15-70, C12R1-19, C12N1-21, C12P7-22
【公開(kāi)號(hào)】CN104805110
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510242626
【發(fā)明人】劉濤, 李曉林, 白艷芬, 畢慧萍, 莊以彬, 馬延和
【申請(qǐng)人】中國(guó)科學(xué)院天津工業(yè)生物技術(shù)研究所
【公開(kāi)日】2015年7月29日
【申請(qǐng)日】2015年5月13日