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BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體、BANCR慢病毒及構(gòu)建方法和應(yīng)用與流程

文檔序號(hào):12584509閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體,其特征在于,以表達(dá)綠色熒光蛋白的LV5慢病毒過表達(dá)載體為基礎(chǔ)進(jìn)行構(gòu)建,并整合有BANCR基因,得到BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體。

2.權(quán)利要求1所述的BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建方法,其特征在于,該方法包括:

將利用PCR擴(kuò)增合成的BANCR基因,插入到基因轉(zhuǎn)移載體中,得到重組連接產(chǎn)物,用重組連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞,并進(jìn)行鑒定,鑒定為陽性且序列無誤的即為構(gòu)建成功的BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述BANCR基因的上下游引物序列分別為:

BANCR-F:AGGGTTCCAAGCTTAAGCGGCCGCATTCCCTTACTTTCTTAATAAAC(SEQ ID NO.2)

BANCR-R:GATCCATCCCTAGGTAGATGCATTTTTTTTTTTTTTAGGATTTTTTA(SEQ ID NO.3)。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述BANCR基因的上下游引物分別設(shè)有NotI和NsiI兩側(cè)同源序列,用于慢病毒載體的亞克隆。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述插入到基因轉(zhuǎn)移載體中使用的試劑盒為Entry One Step Cloning Kit試劑盒。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述基因轉(zhuǎn)移載體為經(jīng)過Not I和Nsi I雙酶切的表達(dá)綠色熒光蛋白的LV5。

7.一種BANCR慢病毒的構(gòu)建方法,其特征在于,使用包裝質(zhì)粒對(duì)權(quán)利要求1所述的BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體進(jìn)行包裝,通過轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,得到BANCR慢病毒。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的構(gòu)建方法,其特征在于,所述包裝質(zhì)粒為pGag/Pol、pRev和pVSV-G。

9.一種BANCR慢病毒,其特征在于,應(yīng)用權(quán)利要求8所述的BANCR慢病毒的構(gòu)建方法構(gòu)建得到。

10.權(quán)利要求1所述的BANCR基因過表達(dá)慢病毒載體和/或權(quán)利要求9所述的BANCR慢病毒在制備BANCR基因過表達(dá)細(xì)胞中的應(yīng)用。

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