本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種具有DNMT和HDAC抑制活性的核苷堿基異羥肟酸衍生物及其制備方法與應(yīng)用。

背景技術(shù)：

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展既與基因異常密切相關(guān)，也與表觀遺傳改變有著緊密的關(guān)系?；虍惓０ò┗蚧蛞职┗虻臄U(kuò)增、易位、刪除及點突變等。表觀遺傳修飾主要包括DNA的修飾和組蛋白的修飾，如DNA甲基化、組蛋白乙?；⑷ヒ阴；?、泛素化等。表觀遺傳的改變不涉及DNA序列的變化，能在細(xì)胞分裂中保持親本的遺傳信息，但一定條件下可以發(fā)生逆轉(zhuǎn)，使惡性細(xì)胞群體轉(zhuǎn)變?yōu)檎５募?xì)胞。因此在表觀遺傳中起調(diào)控作用的酶被認(rèn)為是抗腫瘤藥物研發(fā)的新一代靶點。

研究表明，腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)和組蛋白去乙?；?HDAC)分別催化DNA CpG島的甲基化和組蛋白的去乙酰化，促使染色質(zhì)收縮形成核小體，使抑癌基因不能正常表達(dá)，促進(jìn)了腫瘤的發(fā)生和發(fā)展。當(dāng)前，許多以DNMT或HDAC為靶點的小分子抑制劑被研發(fā)出來。

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT)在哺乳動物體內(nèi)主要有3個亞型。其中DNMT1主要在復(fù)制過程中發(fā)揮維持親本甲基化狀態(tài)的作用；DNMT3A和DNMT3B則發(fā)揮從頭甲基化的作用，即能使子代DNA獲得新的甲基化模式。以DNMTs為靶點研發(fā)的小分子抑制劑根據(jù)其結(jié)構(gòu)以及作用機(jī)制的不同，可以分為核苷類DNMT抑制劑和非核苷類DNMT抑制劑。核苷類DNMT抑制劑主要是胞嘧啶核苷類似物以及s-腺苷甲硫氨酸(SAM)類似物，比如已經(jīng)上市的阿扎胞苷和地西他濱。核苷類DNMT抑制劑需要并入DNA后與DNMT的半胱氨酸殘基形成不可逆的共價鍵發(fā)揮作用，毒副作用比較大。為此，越來越多的非核苷類DNMT抑制劑被研發(fā)出來。這一類抑制劑獲得的方式包括虛擬篩選(如RG108，NSC319745，SGI-1027)、天然產(chǎn)物(如EGCG)、老藥新用(如普魯卡因和普魯卡因胺)以及優(yōu)化改造已知抑制劑。它們通過競爭性地結(jié)合DNMT的活性結(jié)構(gòu)位點或阻礙DNMT與DNA的結(jié)合抑制DNMT發(fā)揮作用。雖然非核苷類DNMT抑制劑可能能減少因并入DNA而產(chǎn)生的毒副作用，但目前該類抑制劑抑制活性還有待提高，目前也還沒有這一類DNMT抑制劑進(jìn)入臨床研究。我們推測，能與DNMT活性位點產(chǎn)生不可逆共價鍵的非核苷類抑制劑或許既能具有良好的DNMT抑制活性，且可以避免核苷類DNMT抑制劑并入DNA所產(chǎn)生的毒副作用。

組蛋白上的賴氨酸殘基具有多種表觀修飾方式，如甲基化、乙?；⒚撘阴；?、泛素化、巴豆?；取Ｆ渲?，組蛋白去乙?；?HDAC)催化乙?；馁嚢彼崦撊ヒ阴；箮д姾傻馁嚢彼釟埢c帶負(fù)電荷的DNA磷酸骨架緊密纏繞，因而抑制抑癌基因表達(dá)。在哺乳動物體內(nèi)已發(fā)現(xiàn)HDAC共18種，根據(jù)其與酵母的同源性分為四個亞型，其中I型(HDAC1，HDAC2，HDAC3，HDAC8)、II A型(HDAC4，HDAC5，HDAC7，HDAC9)、II B型(HDAC6，HDAC10)和IV型(HDAC11)屬于Zn²⁺離子依賴型HDAC；III型HDAC包含去乙?；窼IRT1-SIRT7，屬NAD⁺依賴的酶。作為抗腫瘤藥物研發(fā)成熟的靶點，已有許多HDAC抑制劑進(jìn)入臨床研究，且五個HDACs抑制劑(Vorinostat,Romidepsin,Belinostat,Panobinostat,Chidamide)已經(jīng)上市。根據(jù)結(jié)構(gòu)不同，HDAC抑制劑通常可以分為四類：短鏈脂肪酸類，包括丁酸、丙戊酸等；異羥肟酸類，包括Vorinostat(SAHA)和曲古霉素A(TSA)、Belinostat等；環(huán)四肽類，包括Apicidin和羅咪肽酯等；苯甲酰胺類，包括Chidamide和MS-275等。當(dāng)前，根據(jù)HDAC蛋白的亞型差異研發(fā)HDAC亞型選擇性抑制劑以及基于HDAC與其他靶點(如EGFR、Her2、拓?fù)洚悩?gòu)酶等)抑制劑的協(xié)同效應(yīng)研發(fā)多靶點抑制劑是HDAC抑制劑研發(fā)的兩個主要方向。

研究表明表觀遺傳酶的抑制劑能使腫瘤細(xì)胞對某些化療藥物更加敏感。在一些報道中，DNMT抑制劑、HDAC抑制劑分別與一些化療藥物聯(lián)合使用顯示出明顯的協(xié)同效應(yīng)。

DNMT和HDAC在生理功能上具有緊密的聯(lián)系，一起影響抑癌基因的表達(dá)。一方面，研究表明低劑量的DNMT抑制劑和HDAC抑制劑聯(lián)合使用具有協(xié)同效應(yīng)。另一方面，研究發(fā)現(xiàn)單用DNMTs或HDACs的抑制劑時，另一個酶的高表達(dá)仍能導(dǎo)致腫瘤抑癌基因的沉默，這樣的代償機(jī)制使得腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性，降低了治療效果。聯(lián)合使用雖然具有協(xié)同效應(yīng)的優(yōu)勢，但也存在一些缺點，如使藥代動力學(xué)更加復(fù)雜、產(chǎn)生藥物相互作用、引發(fā)更多毒副作用等。而具有多靶點抑制活性的單個小分子能有效避免這些問題，研發(fā)多靶點抑制劑已成為一個常用的藥物研發(fā)策略。

綜上所述，同時靶向DNMT和HDAC的抑制劑可能能更有效地使沉默的抑癌基因重新表達(dá)，且使腫瘤細(xì)胞更難以產(chǎn)生耐藥性，從而發(fā)揮更好的抗腫瘤效果。為此我們致力于開發(fā)同時具有DNMT和HDAC抑制活性的多靶點抑制劑。在核苷類DNMT抑制劑和異羥肟酸類HDAC抑制劑的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上，我們采用藥物分子片段組合的方法，開發(fā)了一類具有DNMT和HDAC抑制活性的核苷堿基異羥肟酸類多靶點抑制劑。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的之一是提供一類具有DNMT和HDAC抑制活性的核苷堿基異羥肟酸類多靶點抑制劑及其制備方法。

本發(fā)明提供了式Ⅰ所示的異羥肟酸類化合物：

上述式I中，R為DNA和/或RNA里的核苷堿基、帶取代基團(tuán)的核苷堿基或核苷堿基類似物。

其中，所述核苷堿基選自下述任意一種：腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、尿嘧啶、胸腺嘧啶；

所述帶取代基團(tuán)的核苷堿基中，取代基團(tuán)選自下述任意一種：鹵素(氟，氯，溴，碘等)、烷基(甲基、乙基等)、硝基、乙?；?、丙烯?；?、巴豆?；?/p>

所述核苷堿基類似物選自下述任意一種：5-氮雜胞嘧啶、2-羥基嘧啶、6-甲基腺嘌呤；

優(yōu)選地，R選自

上述式I中，Linker為連接R與異羥肟酸官能團(tuán)的連接鏈。連接鏈包括但不限于C1-C20直鏈烷基鏈、C1-C20帶支鏈的烷基鏈、帶雜原子的烷基鏈、帶芳香環(huán)的烷基鏈、帶雜環(huán)的烷基鏈。

上述式I中，當(dāng)R為胞嘧啶、尿嘧啶或它們的衍生物或類似物時，Linker連接在R的1號位氮原子上；當(dāng)R為腺嘌呤、鳥嘌呤或它們的衍生物或類似物時，Linker連接在R的9號位氮原子上。

本發(fā)明也提供了上述式I所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

其中，所述鹽為無機(jī)酸鹽或有機(jī)酸鹽。

所述無機(jī)酸鹽選自下述任意一種無機(jī)酸形成的鹽：鹽酸、硫酸或磷酸。

所述有機(jī)酸鹽選自下述任意一種有機(jī)酸形成的鹽：乙酸、三氟乙酸、丙二酸、檸檬酸和對甲苯磺酸。

本發(fā)明也提供了式II所示的異羥肟酸類化合物：

其中，R如上所述；

t是0、1、2或3；

m是2、3、4、5、6、7或8；

n是0、1、2或3；

在一些實施例中，t是1；

在一些實施例中，m是5或6；

在一些實施例中，n是0；

在一些實施例中，m、n和t的和是2～10的值；

本發(fā)明也提供了上述式II所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

本發(fā)明也提供了式III所示的異羥肟酸類化合物：

其中，R和t如上所述；

m是2、3、4、5或6；

在一些實施例中，t是1；

在一些實施例中，m是3、4、5或6；

在一些實施例中，m和t的和是3～8的值；

本發(fā)明也提供了上述式II所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

本發(fā)明也提供了式IV所示的異羥肟酸類化合物：

其中，R如上所述；

y是0、1、2或3；

z是1、2或3；

g是2、3、4、5、6、7或8；

X是氮或碳；

在一些實施例中，y是1；

在一些實施例中，z是2；

在一些實施例中，X是氮；

在一些實施例中，g是4、5或6；

在一些實施例中，y、z和g的和是3～8的值；

本發(fā)明也提供了上述式IV所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

本發(fā)明也提供了式V所示的異羥肟酸類化合物：

其中，R、y、z、X如上所述；

s是0、1、2或3；

Y是鏈接苯環(huán)與異羥肟酸官能團(tuán)的連接鏈，包括但不限于化學(xué)鍵、烷基、亞甲基、乙撐基、乙烯基、烷氧基、鹵代烷基；

在一些實施例中，y是1；

在一些實施例中，z是2；

在一些實施例中，X是氮；

在一些實施例中，s是1；

在一些實施例中，Y是亞甲基、乙撐基或乙烯基；

本發(fā)明也提供了上述式V所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

本發(fā)明也提供了上述式VI所示化合物藥學(xué)上可接受的鹽或互變異構(gòu)體。

化合物可以以不同的多晶型物形式存在。

上述式I所示的異羥肟酸類化合物優(yōu)選為下述任意一種：

本發(fā)明也提供了式I所示化合物的制備方法。

上述式I所示的異羥肟酸類化合物可以通過式IA所示化合物與羥胺或鹽酸羥胺反應(yīng)來制備；

其中R和Linker如上所述。反應(yīng)一般是在縮合劑如苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸(HBTU)以及堿如三乙胺存在下、在溶劑如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、在大約0℃至80℃溫度下進(jìn)行的。

或者，式I所示化合物可以通過式IA所示化合物與羥基帶保護(hù)基團(tuán)的羥胺如O-(四氫-2H-吡喃-2-基)羥基胺在縮合劑作用下先反應(yīng)生成式IB所示化合物，再由式IB所示化合物脫除保護(hù)基團(tuán)后得到；

其中，R和Linker如上所述；P為羥胺中羥基的保護(hù)基團(tuán)。制備式IB的反應(yīng)一般是在縮合劑如苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸(HBTU)存在下、在溶劑如N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中、在大約0℃至80℃溫度下進(jìn)行的。式IB脫除保護(hù)基團(tuán)一般是在酸性條件下如加入鹽酸、三氟乙酸或在堿性條件下如加入氫氧化鈉、在溶劑如四氫呋喃中、在大約0℃至80℃溫度下進(jìn)行的。

或者，式I所示化合物可以通過式IC所示化合物與羥胺或鹽酸羥胺在堿性溶液中反應(yīng)來制備；

其中，R和Linker如上所述；A為烷基如甲基、乙基或異丙基。反應(yīng)在水溶液或有機(jī)溶劑中進(jìn)行，所述有機(jī)溶劑選自下述至少一種：二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、氯仿、二氯甲烷、丙酮、四氫呋喃、乙腈等。所述堿選自下述至少一種：氨水、三乙胺、二異丙基乙基胺、氫氧化鈉、氫氧化鉀、甲醇鈉、乙醇鈉、叔丁醇鈉、叔丁醇鉀等。所述反應(yīng)的反應(yīng)溫度可為20-80℃，反應(yīng)時間可為0.5-10小時。

在不描述中間體和起始原料合成的情況下，這些化合物是可商業(yè)購買的，或可以利用標(biāo)準(zhǔn)方法或利用本文實施例的擴(kuò)展方法、由可商業(yè)化購買的化合物來制備。

本發(fā)明制備的化合物經(jīng)過高分辨質(zhì)譜，核磁共振，熔點等測試，證明所制備的化合物正確無誤，為通式Ⅰ所示化合物。

本發(fā)明的再一個目的是提供式Ⅰ所示化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽的應(yīng)用。

本發(fā)明式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽的用途是其在下述方面的應(yīng)用：

1)在制備DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和/或組蛋白去乙?；敢种苿┲械膽?yīng)用；

2)在制備真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用；

3)在制備預(yù)防和/或治療腫瘤藥物中的應(yīng)用。

所述DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMTs)包括在哺乳動物細(xì)胞中已知的亞型(DNMT1，DNMT3A，DNMT3B)；所述組蛋白去乙酰化酶(HDACs)包括在哺乳動物細(xì)胞中已知的亞型，主要包括但不限于HDAC1，HDAC2，HDAC3，HDAC8，HDAC4，HDAC5，HDAC7，HDAC9，HDAC6，HDAC10，HDAC11。

所述真核生物為哺乳動物；所述腫瘤細(xì)胞為癌細(xì)胞；所述癌細(xì)胞為白血病癌細(xì)胞、乳腺癌細(xì)胞、肝癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞、肺癌細(xì)胞、腦癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、子宮癌細(xì)胞、睪丸癌細(xì)胞、皮膚癌細(xì)胞、胃癌細(xì)胞、鼻咽癌細(xì)胞、結(jié)腸癌細(xì)胞、膀胱癌細(xì)胞或直腸癌細(xì)胞；優(yōu)選為為人慢性髓原白血病細(xì)胞和人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞。

所述白血病癌細(xì)胞具體為人慢性粒細(xì)胞白血病(CML)細(xì)胞系K562，所述淋巴瘤細(xì)胞具體為人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞U937，所述肺癌細(xì)胞具體為人肺癌細(xì)胞NCI-H520，所述人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞具體為U251，所述黑色素癌細(xì)胞具體為A375，所述膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞具體為人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞A172和人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U-118MG，所述宮頸癌細(xì)胞具體為人宮頸癌細(xì)胞系Hela，所述鼻咽癌細(xì)胞具體為鼻咽癌細(xì)胞株CNE-2，所述肝癌細(xì)胞具體為人肝癌細(xì)胞株HepG2，所述乳腺癌細(xì)胞具體為人乳腺癌細(xì)胞MCF-7和MDA-MB-231。

所述腫瘤為癌；所述癌為白血病、淋巴瘤、肺癌、黑色素癌、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、宮頸癌、鼻咽癌、肝癌、乳腺癌、腦癌、胰腺癌、卵巢癌、子宮癌、睪丸癌、皮膚癌、胃癌、結(jié)腸癌、膀胱癌或直腸癌。

本發(fā)明式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽也可用于制備預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物。

以式Ⅰ所示的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽為有效成分制備的預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。

用式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和/或組蛋白去乙酰化酶抑制劑、真核生物腫瘤細(xì)胞增殖抑制劑以及預(yù)防和/或治療腫瘤的藥物可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。

需要的時候，在上述藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等。

用式Ⅰ所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽制備的預(yù)防和/或治療腫瘤藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜劑等多種形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。

本發(fā)明提供的化合物經(jīng)過多種腫瘤細(xì)胞系測試(包括白血病細(xì)胞、淋巴瘤細(xì)胞等)以及DNA甲基轉(zhuǎn)移酶，組蛋白去乙?；敢种苹钚詼y試，證明式Ⅰ所示化合物是一種潛在的對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶和組蛋白去乙?；赣幸种苹钚缘目鼓[瘤藥物。本發(fā)明提供的化合物原料易得，制備方法簡單，實驗證明其有良好的抗癌效果，在抗腫瘤藥物設(shè)計研發(fā)領(lǐng)域有著良好的應(yīng)用前景。

具體實施方式

下面通過具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行說明，但本發(fā)明的范圍并不限定于此。

下述實施例中所述實驗方法，如無特殊說明，均為有機(jī)合成的常規(guī)方法；所述試劑和生物材料，如無特殊說明，均從商業(yè)途徑獲得。

實施例1

6-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例1A

6-疊氮己酸乙酯

將6-溴己酸乙酯(1eq)溶于DMF中，加入疊氮化鈉(3eq)，由室溫緩慢升溫至80℃并在此溫度下反應(yīng)過夜。之后加入乙酸乙酯，過濾除去過量的疊氮化鈉，加入水并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)水、飽和食鹽水洗滌后用無水硫酸鈉干燥。過濾并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀旋除溶劑得到標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ4.05(q,J＝7.1Hz,2H),3.31(t,J＝6.8Hz,2H),2.29(t,J＝7.3Hz,2H),1.60–1.47(m,4H),1.38–1.27(m,2H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ173.26,60.18,51.05,33.91,28.46,26.16,24.52,14.64.

實施例1B

4-氨基-1-(丙-2-炔-1-烷)嘧啶-2(1H)-酮

將胞嘧啶(1eq)、3-溴丙炔(3eq)溶于無水DMF中，加入無水碳酸銫(2eq)，加熱至80℃并反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后加入水并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)水、飽和食鹽水洗滌后以無水硫酸鎂干燥。除去有機(jī)相的溶劑后以色譜柱分離得標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.52(d,J＝7.7Hz,1H),6.64(d,J＝7.8Hz,1H),4.77(d,J＝2.5Hz,2H),3.49(t,J＝2.5Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.55,155.61,145.26,94.61,79.96,75.79,37.84.

實施例1C

6-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

將實施例1B(1eq)、實施例1A(1.2eq)溶于水和叔丁醇的混合溶液(體積比1:1)中，加入抗壞血酸鈉(0.1eq)和五水硫酸銅(0.02eq)，在氮氣保護(hù)下于60℃反應(yīng)4h。經(jīng)薄層色譜法(TLC)確認(rèn)1B反應(yīng)完全后加入適量的水，過濾得標(biāo)題化合物。以水洗滌進(jìn)一步純化化合物或以柱色譜分離純化化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.99(s,1H),7.67(d,J＝7.1Hz,1H),7.08(br,2H),5.68(s,1H),4.87(s,2H),4.30(t,J＝7.1Hz,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.26(t,J＝7.3Hz,2H),1.84–1.70(m,2H),1.59–1.46(m,2H),1.32–1.20(m,2H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ173.25,146.27,123.98,60.19,49.66,33.83,29.86,25.84,24.34,14.65.

實施例1D

6-(4-((4-氨基-2-氧絡(luò)嘧啶-1(2H)-烷基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-烷基)-N-羥基己酰胺

將實施例1C(1eq)溶于甲醇或DMF中，加入鹽酸羥胺(5eq)和叔丁醇鈉(10eq)，室溫下反應(yīng)8h。經(jīng)TLC確認(rèn)1C反應(yīng)完全后旋除溶劑。以柱色譜分離或于鹽酸水溶液中結(jié)晶(pH值＝3)得到標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.38(s,1H),10.12(s,1H),9.59(s,1H),8.56(s,1H),8.14(s,1H),8.08(d,J＝7.5Hz,1H),6.12(d,J＝7.5Hz,1H),5.03(s,2H),4.33(t,J＝7.1Hz,2H),2.19(t,J＝7.3Hz,2H),1.89–1.69(m,2H),1.63–1.43(m,2H),1.39–1.10(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ174.80,149.75,141.92,124.28,94.22,49.84,44.22,34.00,29.92,25.94,24.38.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺322.1628,實測值322.1622.

實施例2

6-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例2A

4-氨基-5-氟-1-(丙-2-炔-1-基)嘧啶-2(1H)-酮

合成方法同實施例1B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.99(d,J＝6.6Hz,1H),7.64(br,2H),4.44(d,J＝2.5Hz,2H),3.36(d,J＝2.5Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ158.31,158.18,153.91,137.54,135.14,129.87,129.57,79.62,76.02,38.14.

實施例2B

6-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

合成方法同實施例1C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13–7.98(m,2H),7.67(s,1H),7.45(s,1H),4.85(s,2H),4.30(t,J＝7.1Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.79–1.75(m,2H),1.52(p,J＝7.4Hz,2H),1.26–1.18(m,2H),1.15(t,J＝7.2Hz,3H).

實施例2C

6-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.47(s,1H),10.33(s,1H),10.27(s,1H),9.56(s,1H),8.67(d,J＝1.7Hz,1H),7.88(s,1H),4.95(s,2H),4.26(t,J＝7.2Hz,2H),1.92(t,J＝7.3Hz,2H),1.85–1.68(m,2H),1.57–1.43(m,2H),1.26–1.13(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ171.92,169.45,149.24,146.82,144.11,144.11,139.33,122.98,49.67,37.96,32.55,29.94,26.02,25.01,0.63.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺340.1533,實測值322.1529.

實施例3

6-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例3A

4-氨基-5-甲基-1-(丙-2-炔-1-基)嘧啶-2(1H)-酮

合成方法同實施例1B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.47(s,1H),7.02(br,2H),4.45(d,J＝2.5Hz,2H),3.31(t,J＝2.5Hz,1H),1.83(s,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.22,155.61,142.51,101.92,80.16,75.59,37.53,13.50.

實施例3B

6-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

合成方法同實施例1C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.98(s,1H),7.53(s,1H),4.87(s,2H),4.29(t,J＝7.1Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(t,J＝7.4Hz,2H),1.81(s,3H),1.77–1.69(m,2H),1.52(p,J＝7.5Hz,2H),1.33–1.18(m,2H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).

實施例3C

6-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.05(s,1H),7.93(br,2H),7.81(s,1H),4.94(s,2H),4.31(t,J＝7.0Hz,2H),1.92(t,J＝7.3Hz,2H),1.88(s,3H),1.82–1.72(m,2H),1.56–1.44(m,2H),1.27–1.16(m,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺336.1784,實測值336.1782.

實施例4

6-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例4A

9-(丙-2-炔-1-基)-9H-嘌呤-6-胺

合成方法同實施例1B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.20(s,1H),8.17(s,1H),7.32(s,2H),5.03(d,J＝2.5Hz,2H),3.49(t,J＝2.5Hz,1H).

實施例4B

6-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

合成方法同實施例1C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.22(br,2H),8.11(s,1H),7.24(br,2H),5.42(s,2H),4.30(t,J＝7.1Hz,2H),4.01(q,J＝7.1Hz,2H),2.24(t,J＝7.3Hz,2H),1.88–1.68(m,2H),1.62–1.41(m,2H),1.33–1.02(m,5H).

實施例4C

6-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.19(s,1H),8.14(s,1H),8.09(s,1H),7.24(s,2H),5.42(s,2H),4.30(t,J＝7.1Hz,2H),2.17(t,J＝7.3Hz,2H),1.85–1.70(m,2H),1.58–1.42(m,2H),1.26–1.13(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ174.85,156.50,153.08,149.85,142.96,141.16,123.95,119.11,49.79,38.58,33.98,29.91,25.92,24.37.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺346.1740,實測值346.1750.

實施例5

6-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例5A

1-(丙-2-炔-1-基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

合成方法同實施例1B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.41(s,1H),7.70(d,J＝7.9Hz,1H),5.63(d,J＝7.8Hz,1H),4.51(d,J＝2.5Hz,2H),3.45(t,J＝2.5Hz,1H).

實施例5B

6-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

合成方法同實施例1C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.31(s,1H),8.07(s,1H),7.73(d,J＝7.8Hz,1H),5.58(dd,J＝7.9,2.2Hz,1H),4.92(s,2H),4.32(t,J＝7.1Hz,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.26(t,J＝7.4Hz,2H),1.88–1.72(m,2H),1.59–1.45(m,2H),1.30–1.18(m,2H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ173.24,164.18,151.26,145.95,142.78,123.93,101.78,60.19,49.75,42.90,33.82,29.82,25.82,24.33,14.65.

實施例5C

6-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.32(s,1H),8.08(s,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),5.59(dd,J＝7.8,2.1Hz,1H),4.92(s,2H),4.32(t,J＝7.1Hz,2H),2.19(t,J＝7.4Hz,2H),1.90–1.70(m,2H),1.61–1.41(m,2H),1.33–1.18(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ174.83,164.20,151.26,145.97,142.77,123.93,101.78,49.79,42.91,33.98,29.92,25.95,24.38.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺323.1468,實測值323.1461.

實施例6

4-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基丁酰胺

實施例6A

甲基磺酸-4-乙炔基芐甲基酯

步驟1：將對碘苯甲酸甲酯(1eq)溶于適量THF中，加入催化量的二三苯基磷二氯化鈀和碘化亞銅，以及三乙胺(2eq)和三甲基硅乙炔(2eq)，以氮氣置換的方法除去溶劑中的氧氣后，在氮氣保護(hù)下于70℃反應(yīng)過夜。以硅藻土過濾除去反應(yīng)生成的沉淀物，往濾液中加入1M的四叔丁基氟化銨的THF溶液(2eq)并在室溫下反應(yīng)約1h。旋除THF并以水和乙酸乙酯萃取，保留有機(jī)相，旋除乙酸乙酯后得4-乙炔基苯甲酸甲酯。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.99(d,J＝8.7Hz,2H),7.55(d,J＝8.4Hz,2H),3.92(s,3H),3.23(s,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.45,132.12,130.22,129.50,126.81,82.85,80.05,52.30.

步驟2：將4-乙炔基苯甲酸甲酯(1eq)溶于THF中，冰浴下緩慢加入2.5M的氫化鋁鋰的THF溶液(2eq)，氮氣保護(hù)下室溫反應(yīng)2h。反應(yīng)結(jié)束后往反應(yīng)體系中緩慢加入冰水以除去過量的氫化鋁鋰，之后以3M的鹽酸水溶液將反應(yīng)體系調(diào)至弱酸性。以乙醚萃取得到4-乙炔基苯甲醇。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.49(d,J＝8.1Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),4.70(s,2H),3.07(s,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ141.65,132.36,126.77,121.38,83.52,64.91,50.90.

步驟3：將4-乙炔基苯甲醇溶于DCM中，在-5℃下緩慢加入三乙胺(2eq)和甲基磺酰氯(1.2eq)并于此溫度下反應(yīng)30分鐘，之后緩慢升溫至室溫反應(yīng)2h。以飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應(yīng)，并以DCM萃取產(chǎn)物。有機(jī)相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后除去有機(jī)溶劑得標(biāo)題化合物。不需進(jìn)一步純化而直接用于后續(xù)反應(yīng)。

實施例6B

4-氨基-1-(4-乙炔基芐基)嘧啶-2(1H)-酮

將胞嘧啶(1eq)、實施例6A(1.2eq)、無水碳酸銫(1.5eq)溶于無水DMF中，室溫下反應(yīng)過夜。TLC確認(rèn)胞嘧啶反應(yīng)完全后加入水，并以DCM萃取。除去有機(jī)相中溶劑后得標(biāo)題化合物?？赏ㄟ^在乙醚中重結(jié)晶或通過柱色譜分離進(jìn)一步純化。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.69(d,J＝7.2Hz,1H),7.44(d,J＝8.2Hz,2H),7.24(d,J＝8.1Hz,2H),7.09(d,J＝31.1Hz,2H),5.67(d,J＝7.2Hz,1H),4.85(s,2H),4.18(s,1H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ166.50,156.23,146.51,139.49,132.31,128.20,121.15,94.24,83.78,81.28,51.62.

實施例6C

4-疊氮基丁酸乙酯

合成方法同實施例1A。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.15(q,J＝7.1Hz,2H),3.36(t,J＝6.7Hz,2H),2.41(t,J＝7.2Hz,2H),2.00–1.82(m,2H),1.27(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ172.73,60.61,50.69,31.23,24.31,14.25.

實施例6D

4-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)丁酸乙酯

由實施例6B和實施例6C合成。反應(yīng)條件為有機(jī)合成工藝中常用的Click反應(yīng)所采用的反應(yīng)條件。具體地，合成方法可參考實施例1C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.57(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.71(d,J＝7.1Hz,1H),7.33(d,J＝7.9Hz,2H),7.10(br,2H),5.71(br,1H),4.88(s,2H),4.42(t,J＝7.0Hz,2H),4.04(q,J＝7.1Hz,2H),2.34(t,J＝7.3Hz,2H),2.21–2.01(m,2H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ171.89,145.98,145.82,137.45,129.84,127.99,125.13,121.25,59.86,48.65,48.49,30.32,24.96,13.95.

實施例6E

4-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基丁酰胺

以實施例6D為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.43(s,1H),8.75(s,1H),8.59(s,1H),8.11(s,1H),7.89(d,J＝7.3Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,2H),7.60(s,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),5.87(s,1H),4.93(s,2H),4.40(t,J＝6.8Hz,2H),2.16–2.04(m,2H),1.99(t,J＝7.3Hz,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ173.54,167.95,164.14,146.91,145.90,136.70,130.08,128.07,125.18,121.26,51.14,48.97,28.91,25.66.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺370.1628,實測值368.1471.

實施例7

5-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-N-羥基戊酰胺

實施例7A

5-疊氮戊酸乙酯

合成方法同實施例1A。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.06(q,J＝7.1Hz,2H),3.22(t,J＝6.6Hz,2H),2.26(t,J＝7.2Hz,2H),1.68–1.48(m,4H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H).

實施例7B

5-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)戊酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.79(d,J＝7.3Hz,2H),7.74(s,1H),7.34(d,J＝7.7Hz,2H),7.10(s,1H),4.94(s,2H),4.39(t,J＝6.9Hz,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.33(t,J＝7.4Hz,2H),1.95–1.73(m,2H),1.54–1.42(m,2H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.44,145.89,137.39,129.89,128.03,125.10,121.16,59.64,49.07,32.66,28.85,21.33,13.99.

實施例7C

5-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基戊酰胺

以實施例7B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.39(s,1H),8.70(s,1H),8.55(s,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,2H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(s,1H),7.03(s,1H),5.68(d,J＝7.1Hz,1H),4.87(s,2H),4.39(t,J＝7.0Hz,2H),1.99(t,J＝7.3Hz,2H),1.93–1.76(m,2H),1.58–1.40(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.56,165.86,155.72,145.87,145.83,137.43,129.87,127.99,125.10,121.15,93.55,50.99,49.12,31.46,29.10,22.02.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺384.1784,實測值384.1779.

實施例8

6-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例8A

6-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)己酸乙酯

以實施例1A和實施例6B為原料，合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),7.79(d,J＝7.9Hz,2H),7.71(d,J＝7.1Hz,1H),7.33(d,J＝7.9Hz,2H),7.09(br,2H),5.78(br,1H),4.88(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.28(t,J＝7.4Hz,2H),1.97–1.78(m,2H),1.69–1.50(m,2H),1.31–1.21(m,2H),1.14(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.61,145.88,145.81,137.40,129.91,127.99,125.09,121.11,59.55,49.24,33.18,29.13,25.20,23.73,13.99.

實施例8B

6-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基己酰胺

以實施例8A為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.35(s,1H),8.70(s,1H),8.56(s,1H),7.80(d,J＝7.8Hz,2H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,2H),7.11(s,1H),7.03(s,1H),5.68(d,J＝7.2Hz,1H),4.87(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),1.93(t,J＝7.3Hz,2H),1.89–1.72(m,2H),1.60–1.45(m,2H),1.32–1.16(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.77,165.87,155.72,145.88,145.83,137.42,129.90,127.99,125.09,121.12,93.55,51.00,49.28,31.93,29.21,25.36,24.37.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺398.1941,實測值398.1940.

實施例9

7-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

實施例9A

7-疊氮庚酸乙酯

合成方法同實施例1A。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ4.11(q,J＝7.1Hz,2H),3.25(t,J＝6.9Hz,2H),2.29(t,J＝7.5Hz,2H),1.72–1.50(m,4H),1.47–1.29(m,4H),1.24(t,J＝7.2Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ173.70,60.29,51.41,34.24,28.72,28.68,26.44,24.82,14.30.

實施例9B

7-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.56(s,1H),7.79(d,J＝7.4Hz,2H),7.75(s,1H),7.34(d,J＝7.7Hz,2H),7.12(s,1H),4.93(s,2H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.84(t,J＝7.1Hz,2H),1.50(t,J＝7.2Hz,2H),1.37–1.20(m,4H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.68,145.87,137.35,129.94,128.02,125.10,121.10,59.52,49.33,33.28,29.29,27.66,25.39,24.11,14.01.

實施例9C

7-(4-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

以實施例9B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.34(s,1H),8.69(s,1H),8.57(s,1H),7.80(d,J＝8.1Hz,2H),7.71(d,J＝7.2Hz,1H),7.33(d,J＝8.0Hz,2H),7.11(s,1H),7.03(s,1H),5.68(d,J＝7.2Hz,1H),4.86(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),1.92(t,J＝7.3Hz,2H),1.88–1.76(m,2H),1.54–1.38(m,2H),1.37–1.13(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.89,165.86,155.72,145.88,145.83,137.41,129.90,127.99,125.10,121.09,93.55,50.99,49.36,32.05,29.37,27.85,25.47,24.80.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺412.2097,實測值412.2090.

實施例10

7-(4-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

實施例10A

4-氨基-1-(4-乙炔基芐基)-5-氟代嘧啶-2(1H)-酮

合成方法同實施例6B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.10(d,J＝6.7Hz,1H),7.45(d,J＝8.2Hz,2H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),4.81(s,2H),4.18(s,1H).

實施例10B

7-(4-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.57(s,1H),8.11(d,J＝6.6Hz,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.67(s,1H),7.44(s,1H),7.37(d,J＝8.1Hz,2H),4.83(s,2H),4.38(t,J＝7.0Hz,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.26(t,J＝7.3Hz,2H),1.92–1.74(m,2H),1.61–1.42(m,2H),1.36–1.20(m,4H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ173.30,158.12,157.99,154.60,146.46,137.56,131.06,130.75,130.62,128.70,125.71,121.74,60.13,51.82,49.94,33.88,29.89,28.27,25.99,24.72,14.62.¹⁹F NMR(376MHz,DMSO)δ-169.55.

實施例10C

7-(4-(4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

以實施例10B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.57(s,1H),8.11(d,J＝6.7Hz,1H),7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.67(s,1H),7.44(s,1H),7.36(d,J＝8.2Hz,2H),4.83(s,2H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),1.92(t,J＝7.4Hz,2H),1.88–1.76(m,2H),1.57–1.39(m,2H),1.33–1.19(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ169.56,158.14,158.02,154.62,146.50,137.58,137.44,135.04,131.08,130.78,130.65,128.72,125.74,121.73,51.85,49.99,32.68,30.00,28.48,26.10,25.43.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺430.2003,實測值430.2010.

實施例11

7-(4-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

實施例11A

4-氨基-1-(4-乙炔基芐基)-5-甲基嘧啶-2(1H)-酮

合成方法同實施例6B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.55(s,1H),7.44(d,J＝8.1Hz,2H),7.25(d,J＝8.1Hz,2H),4.83(s,2H),4.17(s,1H),1.81(s,3H).

實施例11B

7-(4-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.56(s,1H),7.79(d,J＝7.9Hz,2H),7.58(s,1H),7.34(d,J＝8.0Hz,2H),4.86(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),4.03(q,J＝7.1Hz,2H),2.26(t,J＝7.3Hz,2H),1.95–1.69(m,5H),1.56–1.45(m,2H),1.32–1.21(m,4H),1.16(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.68,165.38,155.56,145.89,143.16,137.48,129.90,128.02,125.09,121.08,59.52,50.81,49.33,33.28,29.29,27.66,25.39,24.11,14.00,12.89.

實施例11C

7-(4-(4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

以實施例11B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.56(s,1H),7.79(d,J＝7.8Hz,2H),7.56(s,1H),7.33(d,J＝7.9Hz,2H),7.21(s,1H),6.72(s,1H),4.85(s,2H),4.37(t,J＝7.1Hz,2H),1.92(t,J＝7.3Hz,2H),1.90–1.74(m,5H),1.54–1.41(m,2H),1.35–1.19(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ169.56,166.17,156.28,146.53,143.72,138.17,130.51,128.65,125.72,121.69,51.45,49.99,32.68,30.00,28.48,26.10,25.43,13.56.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺426.2254,實測值426.2254.

實施例12

7-(4-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

實施例12A

9-(4-乙炔基芐基)-9H-嘌呤-6-胺

合成方法同實施例6B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.26(s,1H),8.13(s,1H),7.45(d,J＝8.0Hz,2H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),7.26(br,2H),5.39(s,2H),4.19(s,1H).

實施例12B

7-(4-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.55(s,1H),8.29(s,1H),8.16(s,1H),7.80(d,J＝8.0Hz,2H),7.39(d,J＝8.0Hz,2H),7.29(s,2H),5.39(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(t,J＝7.3Hz,2H),1.94–1.74(m,2H),1.59–1.43(m,2H),1.31–1.21(m,4H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.68,155.79,152.39,149.40,145.73,140.75,136.40,130.29,128.04,125.28,121.20,59.52,49.34,45.88,33.27,29.27,27.65,25.36,24.10,14.00.

實施例12C

7-(4-(4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

以實施例12B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.32(s,1H),8.65(s,1H),8.55(s,1H),8.28(s,1H),8.15(s,1H),7.80(d,J＝7.9Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),7.25(s,2H),5.39(s,2H),4.36(t,J＝7.1Hz,2H),1.91(t,J＝7.2Hz,2H),1.88–1.72(m,2H),1.58–1.39(m,2H),1.38–1.09(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.90,155.91,152.54,149.41,145.74,140.67,136.43,130.29,128.04,125.28,121.18,118.61,49.36,45.87,32.04,29.36,27.84,25.46,24.79.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺436.2209,實測值436.2203

實施例13

7-(4-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

實施例13A

1-(4-乙炔基芐基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮

合成方法同實施例6B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.36(s,1H),7.77(d,J＝7.8Hz,1H),7.47(d,J＝7.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.0Hz,2H),5.61(d,J＝7.9Hz,1H),4.88(s,2H),4.20(s,1H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ163.51,150.89,145.45,137.66,131.87,127.55,120.91,101.35,83.03,80.87,49.96.

實施例13B

7-(4-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)庚酸乙酯

合成方法同實施例6D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.35(s,1H),8.57(s,1H),7.82(d,J＝7.9Hz,2H),7.79(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(d,J＝7.9Hz,2H),5.61(d,J＝7.9Hz,1H),4.89(s,2H),4.37(t,J＝7.0Hz,2H),4.02(q,J＝7.1Hz,2H),2.25(t,J＝7.2Hz,2H),1.94–1.76(m,2H),1.56–1.45(m,2H),1.34–1.22(m,4H),1.15(t,J＝7.1Hz,3H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ172.67,163.52,150.93,145.77,145.44,136.19,130.27,127.97,125.27,121.20,101.28,59.52,49.99,49.35,33.27,29.29,27.66,25.38,24.11,14.01.

實施例13C

7-(4-(4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)苯基)-1H-1,2,3-三唑-1-基)-N-羥基庚酰胺

以實施例13B為反應(yīng)原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.35(s,1H),10.33(s,1H),8.66(s,1H),8.58(s,1H),7.83(d,J＝8.1Hz,2H),7.79(d,J＝7.8Hz,1H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),5.61(d,J＝7.8Hz,1H),4.89(s,2H),4.38(t,J＝7.0Hz,2H),1.92(t,J＝7.3Hz,2H),1.89–1.75(m,2H),1.56–1.40(m,2H),1.38–1.16(m,4H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ168.92,163.53,150.93,145.78,145.46,136.20,130.26,127.97,125.28,121.19,101.29,49.99,49.38,32.05,29.37,27.85,25.47,24.80.高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺413.1937,實測值413.1945.

實施例14

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

實施例14A

4-((對甲苯磺酸酯)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

將4-(羥甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(1eq)溶于無水吡啶中，在0℃條件下緩慢加入對甲基苯磺酰氯(1.1eq)。之后升溫至室溫并在此溫度下攪拌反應(yīng)16h。反應(yīng)結(jié)束后往反應(yīng)體系中加入水，并以乙酸乙酯萃取。有機(jī)相依次以5％的鹽酸水溶液、水、飽和食鹽水洗滌。之后以無水硫酸鈉干燥有機(jī)相。過濾除去干燥劑后，除去有機(jī)相的溶劑得到標(biāo)題化合物。無需純化而直接用于后續(xù)反應(yīng)。

實施例14B

4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶1-甲酸叔丁酯

將胞嘧啶(1eq)、實施例14A(1.1eq)、無水碳酸銫(1.1eq)溶于無水DMF中，80°下反應(yīng)過夜。反應(yīng)結(jié)束后過濾除去碳酸銫，并旋除DMF。加入水和乙酸乙酯萃取。有機(jī)相經(jīng)除去溶劑后得到標(biāo)題化合物。于乙醚中重結(jié)晶或以柱色譜分離進(jìn)一步純化目標(biāo)化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.51(d,J＝4.4Hz,1H),6.97(d,J＝32.6Hz,2H),5.60(d,J＝7.1Hz,1H),3.97–3.82(m,2H),3.53–3.47(m,2H),2.64(br,2H),1.93–1.81(m,1H),1.53–1.20(m,11H),1.12–0.94(m,2H).

實施例14C

4-氨基-1-(哌啶-4-亞甲基)嘧啶-2(1H)-酮鹽酸鹽

將實施例14B(1eq)溶于THF中，加入3M的鹽酸水溶液(10eq)并于室溫反應(yīng)3h。反應(yīng)結(jié)束后旋除反應(yīng)體系中的溶劑。重新加入甲醇溶解產(chǎn)品，之后將甲醇旋除。重復(fù)2～3此后得到標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.72(s,1H),9.02(br,1H),8.82(br,1H),8.63(s,1H),8.01(d,J＝7.6Hz,1H),6.10(d,J＝7.6Hz,1H),3.68(d,J＝7.2Hz,2H),3.24(d,J＝12.5Hz,2H),2.79(q,J＝11.9Hz,2H),2.07–1.87(m,1H),1.74(d,J＝13.4Hz,2H),1.38(q,J＝10.9Hz,2H).

實施例14D

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯

將實施例14C(1eq)溶于DMF或乙腈中，加入三乙胺(3eq)和對溴甲基肉桂酸甲酯(1.1eq)。室溫反應(yīng)過夜。旋除溶劑后柱色譜分離得到標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.89–7.55(m,3H),7.51(d,J＝7.1Hz,1H),7.33(d,J＝7.8Hz,2H),6.95(br,2H),6.61(d,J＝16.0Hz,1H),5.59(d,J＝7.1Hz,1H),3.72(s,3H),3.50(d,J＝7.1Hz,2H),3.46(s,2H),2.77(d,J＝10.9Hz,2H),1.86(t,J＝11.3Hz,2H),1.77–1.57(m,1H),1.46(d,J＝12.6Hz,2H),1.31–1.09(m,2H).¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.22,166.36,156.40,146.99,144.91,129.59,128.75,117.78,93.19,62.39,54.52,53.28,51.94,35.29,29.76.

實施例14E

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

以實施例14D為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.75(s,1H),9.04(s,1H),7.80–7.46(m,3H),7.43(d,J＝15.7Hz,1H),7.39–7.12(m,2H),7.00(s,1H),6.91(s,1H),6.44(d,J＝15.7Hz,1H),5.59(d,J＝7.1Hz,1H),3.50(d,J＝7.0Hz,2H),3.44(br,2H),2.78(br,2H),1.86(br,2H),1.69(br,1H),1.46(br,2H),1.22(br,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺384.2036,實測值384.2028。

實施例15

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

實施例15A

4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶1-甲酸叔丁酯

合成方法同實施例14B。¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.40(d,J＝5.2Hz,1H),4.11(s,2H),3.74–3.57(m,2H),2.76–2.54(m,2H),2.11–1.90(m,1H),1.68–1.55(m,2H),1.43(s,9H),1.25–1.06(m,2H).

實施例15B

4-氨基-5-氟-1-(哌啶-4-亞甲基)嘧啶-2(1H)-酮鹽酸鹽

合成方法同實施例14C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.18(s,1H),9.04(br,1H),8.94–8.62(m,2H),8.41(d,J＝6.6Hz,1H),3.60(d,J＝7.2Hz,2H),3.28–3.15(m,2H),2.91–2.70(m,2H),2.09–1.90(m,1H),1.83–1.65(m,2H),1.49–1.30(m,2H).

實施例15C

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯

合成方法同實施例14D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.92(d,J＝6.7Hz,1H),7.81–7.47(m,4H),7.34(s,2H),6.62(d,J＝16.1Hz,1H),3.72(s,3H),3.62–3.35(m,4H),2.96–2.63(m,2H),1.96–1.78(m,2H),1.77–1.61(m,1H),1.57–1.39(m,2H),1.36–1.06(m,2H).

實施例15D

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-氟-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

以實施例15C為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.74(s,1H),9.04(s,1H),7.91(d,J＝6.8Hz,1H),7.74–7.47(m,3H),7.43(d,J＝15.8Hz,1H),7.40–7.11(m,3H),6.43(d,J＝15.8Hz,1H),3.63–3.37(m,4H),2.88–2.68(m,2H),1.97–1.73(m,2H),1.73–1.58(m,1H),1.58–1.33(m,2H),1.33–1.06(m,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺402.1941,實測值402.1942.

實施例16

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

實施例16A

4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶1-甲酸叔丁酯

合成方法同實施例14B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.39(s,1H),7.11(br,1H),6.65(br,1H),3.91(d,J＝13.1Hz,2H),3.48(d,J＝7.2Hz,2H),2.70–2.56(m,2H),1.90–1.83(m,1H),1.80(s,3H),1.49–1.42(m,2H),1.39(s,9H),1.11–0.92(m,2H).

實施例16B

4-氨基-5-甲基-1-(哌啶-4-亞甲基)嘧啶-2(1H)-酮鹽酸鹽

合成方法同實施例14C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.01(s,1H),8.81(s,1H),8.65(s,2H),7.87(s,1H),3.62(d,J＝7.2Hz,2H),3.24(d,J＝12.6Hz,2H),2.79(q,J＝11.7Hz,2H),2.05–1.96(m,1H),1.90(s,3H),1.72(dd,J＝13.7,3.4Hz,2H),1.50–1.31(m,2H).

實施例16C

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯

合成方法同實施例14D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.84–7.58(m,3H),7.46–7.26(m,3H),7.08(s,1H),6.62(d,J＝16.0Hz,2H),3.72(s,3H),3.57–3.37(m,4H),2.88–2.69(m,2H),2.04–1.82(m,2H),1.79(s,3H),1.75–1.59(m,1H),1.56–1.38(m,2H),1.31–1.12(m,2H).

實施例16D

(E)-3-(4-((4-((4-氨基-5-甲基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

以實施例16C為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.76(s,1H),9.04(s,1H),7.83–7.17(m,6H),7.09(s,1H),6.65(s,1H),6.44(d,J＝15.7Hz,1H),3.73–3.36(m,4H),2.91–2.68(m,2H),2.06–1.72(m,5H),1.72–1.61(m,1H),1.56–1.35(m,2H),1.31–1.05(m,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺398.2192,實測值398.2193.

實施例17

(E)-3-(4-((4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

實施例17A

4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

合成方法同實施例14B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.13(s,1H),8.10(s,1H),7.21(s,2H),4.04(d,J＝7.1Hz,2H),3.91(d,J＝13.0Hz,2H),2.78–2.55(m,2H),2.15–1.96(m,1H),1.45(d,J＝12.8Hz,2H),1.38(s,9H),1.17–0.99(m,2H).

實施例17B

9-(哌啶-4-亞甲基)-9H-嘌呤-6-胺鹽酸鹽

合成方法同實施例14C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.69(s,1H),9.20(s,1H),9.15–8.86(m,2H),8.58(s,1H),8.57(s,1H),4.20(d,J＝7.1Hz,2H),3.38–3.09(m,2H),2.86–2.66(m,2H),2.23–2.03(m,1H),1.76–1.58(m,2H),1.54–1.35(m,2H).

實施例17C

(E)-3-(4-((4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯

合成方法同實施例14D。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.19(s,1H),8.11(s,1H),7.68(d,J＝16.1Hz,1H),7.58(d,J＝8.0Hz,2H),7.38(d,J＝8.0Hz,2H),6.53(d,J＝16.0Hz,1H),4.14(d,J＝7.1Hz,2H),3.78(s,3H),3.61(br,2H),3.08–2.86(m,2H),2.24–2.03(m,2H),2.03–1.89(m,1H),1.70–1.53(m,2H),1.50–1.35(m,2H).

實施例17D

(E)-3-(4-((4-((6-氨基-9H-嘌呤-9-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

以實施例17C為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,Methanol-d₄)δ8.19(s,1H),8.10(s,1H),7.55(d,J＝15.9Hz,1H),7.51(d,J＝7.8Hz,2H),7.35(d,J＝7.9Hz,2H),6.45(d,J＝15.7Hz,1H),4.13(d,J＝7.1Hz,2H),3.56(s,2H),2.93(d,J＝11.5Hz,2H),2.05(t,J＝11.7Hz,2H),2.01–1.89(m,1H),1.64–1.50(m,2H),1.48–1.31(m,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺408.2148,實測值408.2146.

實施例18

(E)-3-(4-((4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

實施例18A

4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯

合成方法同實施例14B。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.25(s,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),5.53(d,J＝7.8Hz,1H),3.93(d,J＝13.0Hz,2H),3.54(d,J＝7.3Hz,2H),2.66(br,2H),1.96–1.77(m,1H),1.52(d,J＝12.9Hz,2H),1.39(s,9H),1.17–0.89(m,2H).

實施例18B

1-(哌啶-4-亞甲基)嘧啶-2,4(1H,3H)-二酮鹽酸鹽

合成方法同實施例14C。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.29(s,1H),8.84(s,1H),8.56(s,1H),7.65(d,J＝7.8Hz,1H),5.57(dd,J＝7.8,2.3Hz,1H),3.59(d,J＝7.1Hz,2H),3.24(d,J＝12.8Hz,2H),2.93–2.68(m,2H),2.10–1.83(m,1H),1.70(d,J＝13.1Hz,2H),1.47–1.20(m,2H).

實施例18C

(E)-3-(4-((4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)丙烯酸甲酯

合成方法同實施例14D。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.17(s,1H),7.73–7.56(m,4H),7.33(d,J＝7.9Hz,2H),6.61(d,J＝16.1Hz,1H),5.52(d,J＝7.8Hz,1H),3.72(s,3H),3.54(d,J＝7.1Hz,2H),3.46(s,2H),2.87–2.69(m,2H),1.97–1.81(m,2H),1.75–1.58(m,1H),1.58–1.43(m,2H),1.29–1.12(m,2H).

實施例18D

(E)-3-(4-((4-((2,4-二氧代-3,4-二氫嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)甲基)苯基)-N-羥基丙烯酰胺

以實施例18C為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.24(s,1H),10.76(s,1H),9.04(s,1H),7.61(d,J＝7.8Hz,1H),7.52(d,J＝7.6Hz,2H),7.44(d,J＝15.8Hz,1H),7.35(s,2H),6.44(d,J＝15.9Hz,1H),5.53(dd,J＝7.8,2.2Hz,1H),3.84–3.36(m,4H),3.03–2.69(m,2H),2.13–1.78(m,2H),1.78–1.63(m,1H),1.62–1.37(m,2H),1.37–1.02(m,2H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺385.1876實測值385.1871.

實施例19

6-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)-N-羥基己酰胺

實施例19A

6-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)己酸乙酯

將實施例14C(1eq)、6-溴己酸乙酯(2eq)、碘化鉀(0.5eq)溶于無水乙醇中，回流反應(yīng)過夜。TLC確認(rèn)14C反應(yīng)完全后旋除有機(jī)溶劑并柱色譜分離得標(biāo)題化合物。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.56(d,J＝7.1Hz,1H),7.05(br,2H),5.64(d,J＝7.1Hz,1H),4.06(q,J＝7.1Hz,2H),3.54(d,J＝6.9Hz,2H),3.51–3.40(m,2H),3.07–2.91(m,2H),2.90–2.71(m,2H),2.34(t,J＝7.1Hz,2H),2.01–1.86(m,1H),1.80–1.59(m,4H),1.60–1.36(m,4H),1.18(t,J＝7.1Hz,3H).

實施例19B

6-(4-((4-氨基-2-氧代嘧啶-1(2H)-基)甲基)哌啶-1-基)-N-羥基己酰胺

以實施例19A為原料，合成方法同實施例1。¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ7.52(d,J＝7.1Hz,1H),7.08(s,1H),6.90(s,1H),5.62(d,J＝7.0Hz,1H),3.49(d,J＝7.2Hz,2H),2.80(d,J＝10.9Hz,2H),2.18(t,J＝7.3Hz,2H),1.88(t,J＝7.4Hz,2H),1.73(t,J＝10.9Hz,2H),1.69–1.59(m,1H),1.56–1.28(m,6H),1.28–0.99(m,4H).高分辨質(zhì)譜(HRMS)(ESI)m/z計算值[M+H]⁺338.2192,實測值338.2190.

實施例20、MTT法細(xì)胞增殖抑制活性測試

體外細(xì)胞增殖抑制實驗采用MTT法，采用以下兩種細(xì)胞系：人慢性粒細(xì)胞白血病(CML)細(xì)胞系K562，人組織細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞U937。

K562和U937為懸浮細(xì)胞，用含體積分?jǐn)?shù)為10％胎牛血清的RPIM-1640培養(yǎng)液，在37℃、體積分?jǐn)?shù)為5％的CO₂條件下常規(guī)培養(yǎng)。

具體操作如下：

首先，將實施例1-19制備獲得的化合物(即樣品)分別配制成化合物濃度為5mM/L的DMSO(二甲基亞砜)溶液，然后將獲得的溶液經(jīng)梯度稀釋，得到一系列濃度梯度的樣品溶液。

接著，取對數(shù)生長期的K562細(xì)胞或者U937細(xì)胞，以1.5×10⁵個/mL的的細(xì)胞密度接種于96孔板中，99μL/孔，接著每孔加入樣品溶液1μL，使樣品作用終濃度分別為0.01，0.05，0.1，0.5，1，5，10，25，50μM。每種樣品、每個濃度設(shè)三個復(fù)孔，并且設(shè)置陽性對照組、陰性對照組和空白對照組，其中，陽性對照組分別加入陽性對照藥物組蛋白去乙酰化酶抑制劑SAHA和DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑SGI-027，陰性對照組加入與樣品溶液同濃度的DMSO，空白對照組不加細(xì)胞。作用72h后加入MTT溶液，10μL/孔，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后，于2000rpm、4℃下離心5分鐘，吸去上清后加入二甲基亞砜(DMSO)，100μL/孔，于37℃保溫約10分鐘，然后用微量振蕩器振蕩約5分鐘，使結(jié)晶溶解完全，用酶標(biāo)儀于490nm處測量OD值。

細(xì)胞增殖抑制率(Inhibition Rate，IR％)按如下公式計算：

IR％＝(陰性對照OD－樣品OD)/(陰性對照OD-空白對照OD)×100％，

經(jīng)過計算，得到本發(fā)明所制備的化合物的體外細(xì)胞增殖抑制活性，結(jié)果見表1。其中，IC₅₀大于50μM以“-”表示，IC₅₀大于10μM并小于50μM以“+”表示，IC₅₀大于5μM并小于10μM以“++”表示，IC₅₀大于1μM小于5以“+++”表示，小于1以“++++”表示。結(jié)果表明大部分化合物對U937增殖的抑制作用好于對K562的增殖抑制作用。其中化合物10、11、13和15對U937的IC₅₀小于5μM，化合物12和17對U937的IC₅₀小于1μM，表現(xiàn)出良好的抗腫瘤增殖效果。

表1實施例1～19制備的化合物的體外腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性

注：IC₅₀表示半數(shù)抑制濃度。

實施例21、DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性試驗

使用同位素標(biāo)記的S-腺苷甲硫氨酸(³H-SAM)測試化合物在50μM時對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNMT1，DNMT3A，DNMT3B)的抑制活性,并以S-腺苷高半胱氨酸(SAH)做對照。預(yù)先將化合物和相應(yīng)的一定量的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶亞型混合，室溫下孵育15min后，加入人工合成的生物素標(biāo)記的寡核苷酸底物和³H-SAM并于室溫下反應(yīng)4h。接著將反應(yīng)體系轉(zhuǎn)移到鏈霉親和素包被的高通量孔板中，室溫反應(yīng)1h。放射性活性通過液體閃爍計數(shù)法得到。通過和陰性對照組(無抑制劑組)比較得到化合物對酶的抑制活性?；衔镌?0μM條件下對DNMT的抑制率如表2所示。其中抑制率小于20％以“-”表示，抑制率大于20％且小于50％以“+”表示，抑制率大于50％小于80％以“++”表示，抑制率大于80％以“+++”表示。測試結(jié)果表明大部分化合物對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶具有抑制作用，且對DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的不同亞型抑制率不同。其中，化合物6、7、8、9和11對DNMT1的抑制作用大于對DNMT3A/3B的抑制作用，而化合物16和17對DNMT3A/B的抑制活性則強于對DNMT1的抑制活性。

表2實施例1～19制備的化合物的DNA甲基轉(zhuǎn)移酶抑制活性

實施例22、組蛋白去乙?；敢种苹钚栽囼?/p>

以組蛋白去乙?；讣易宓膬蓚€亞型HDAC1和HDAC6為研究對象，測試化合物對組蛋白去乙酰化酶的抑制活性，每個化合物設(shè)十個濃度梯度，三個復(fù)孔，并以已上市的HDAC抑制劑SAHA做對照。首先將化合物溶解到反應(yīng)緩沖液中，之后加入一定體積的含組蛋白去乙?；傅木彌_溶液，室溫孵育15分鐘后加入胰蛋白酶和乙?；碾木彌_溶液作為反應(yīng)底物以啟動脫乙?；磻?yīng)，同時使化合物濃度和酶含量達(dá)到設(shè)定值，輕輕混合60秒后室溫孵育，記錄1個小時內(nèi)一定激發(fā)光和發(fā)射光波長下反應(yīng)的動力參數(shù)。通過和陰性對照組(無抑制劑組)比較得到化合物對酶的抑制活性，并計算得到化合物對組蛋白去乙?；傅陌霐?shù)抑制濃度(IC₅₀)。結(jié)果如表3所示，其中，IC₅₀大于1000nM以“-”表示，IC₅₀大于100nM且小于1000nM以“+”表示，IC₅₀大于50小于100nM以“++”表示，IC₅₀大于10小于50nM以“+++”表示，IC₅₀小于10nM以“++++”表示。由測試結(jié)果可知大部分化合物抑制HDAC1/6的IC₅₀值小于100nM，其中化合物9、10、11、12和13具有個位數(shù)納摩爾級別活性，與已上市藥物SAHA活性相當(dāng)。

表3實施例1～19制備的化合物的組蛋白去乙酰化酶抑制活性

注：IC₅₀表示半數(shù)抑制濃度。