本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物加工科學(xué)領(lǐng)域，特別是一種從香蕉皮提取原花青素的方法。
背景技術(shù)：
原花青素(Procyanidins，簡稱OPC) 又被稱為低聚黃烷酮類，是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強效的自由基清除劑，具有非常強的體內(nèi)活性。實驗證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分鐘即可達到最高血液濃度，代謝半衰期達7小時之久。
原花青素是植物中廣泛存在的一類多酚類化合物的總稱，具有清除自由基、抗氧化的活性，并且在抗炎癥、抑制腫瘤、保護血管等方面發(fā)揮著重要的作用，其在功能性食品、醫(yī)藥、化妝品行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。
原花青素是自然界酚類化合物中最豐富的種類，原花青素因在酸介質(zhì)下發(fā)生典型氧化降解反應(yīng)產(chǎn)生有色的花青素而得名。在各類原花青素中二聚體是分布最廣、研究最多的一類原花青素。國內(nèi)外已經(jīng)報道了很多關(guān)于原花青素的藥理學(xué)作用，例如清除自由基、強抗氧化性、抗腫瘤以及抗動脈硬化等功能；原花青素也已經(jīng)用來防止糖尿病患者白內(nèi)障手術(shù)后的并發(fā)癥；此外原花青素在植物防御捕食者和微生物機理方面也起到了重要作用。鑒于原花青素具有如此廣泛的作用，其提取方法也受到了國內(nèi)外研究人員的極大關(guān)注。
香蕉與荔枝、菠蘿、椰子稱為熱帶和亞熱帶“四大果品”，是世界上栽培最為廣泛的熱帶水果之一，而且香蕉資源豐富，產(chǎn)量巨大。隨著農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)化結(jié)構(gòu)的調(diào)整，深加工產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，青香蕉果肉用量大增，與此同時產(chǎn)生了大量的廢棄青香蕉皮。香蕉皮約占香蕉果實重量的30%，含有酚類、油脂類、有機酸、縮合鞣質(zhì)、蛋白質(zhì)和糖類，還有多種維生素和無機鹽等營養(yǎng)成分，Ca、Mg、P、K 的含量也非常豐富，因此香蕉皮具有很大的開發(fā)和利用價值。
香蕉皮含有原花青素，本發(fā)明建立香蕉皮中原花青素的提取純化工藝，分離出具有生物活性的原花青素，這不但在醫(yī)藥和食品行業(yè)有廣闊的應(yīng)用前景，而且也為當(dāng)?shù)刎S富的香蕉的資源開發(fā)和利用提供一條新途徑，提高香蕉的利用率和經(jīng)濟效益。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有提取方法的不足，提出一種利用酶制劑結(jié)合溶劑從香蕉皮中提取原花青素的方法。此方法所得到的原花青素產(chǎn)品可用于醫(yī)藥保健及化妝品等行業(yè)。
本發(fā)明的一種從香蕉皮提取原花青素的方法，原料為香蕉皮，試劑有果膠酶(30000IU)，纖維素酶(15000IU)，95%乙醇（食品級），檸檬酸（食品級），磷酸氫二鈉（食品級）。
本發(fā)明的一種從香蕉皮提取原花青素的方法，由以下步驟組成：
(1) 備料：取剛采摘的青香蕉去莖，去除香蕉果肉，將青香蕉皮切成1cm2 的青香蕉皮塊；
(2)護色、打漿：將青香蕉皮塊浸沒于護色液中浸泡10-15 分鐘，然后將青香蕉皮塊與護色液按1:1 重量份混合打漿，形成香蕉皮漿；
(2)配制緩沖溶液：將0.1mol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1：1.5～2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液；
(3)配制酶液：混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按香蕉皮漿重量(kg)：緩沖溶液體積(L)=1：5～10的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0. 1～0.3g果膠酶與0.1～0. 3g纖維素酶；
(4)投料：按香蕉皮漿重量(kg)：緩沖溶液體積(L)=1：5～10的比例，將香蕉皮漿加入酶液中；
(5)酶解：將香蕉皮漿與酶液攪拌均勻后，在50～55℃的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘渣的混合物；
(6)提取：按每kg香蕉皮漿加入5～10L的75～95%乙醇的方法，將75～95%乙醇加入上述酶解液和殘渣混合物中，在60～65℃條件下提取2～3h，經(jīng)過濾，得到提取液；
(7)純化：采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速1～3 mL/min、解吸流速0.5～1..5 mL/min、解吸劑體積分數(shù)45～55%，得洗脫液；
(8)真空干燥：將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。
步驟（2）所述護色液的組成是：亞硫酸氫鈉2-4 份、氯化鈉2-4 份、檸檬酸 1-3份，蒸餾水990-980 份充分混合。
本發(fā)明的一種從香蕉皮提取原花青素的方法，以香蕉皮為主要原料，采用酶制劑結(jié)合溶劑提取原花青素，其優(yōu)點是原青花素產(chǎn)品安全性好、質(zhì)量佳，原青花素提取率較醇提取法高30～40%，酶制劑的用量少，而且工藝簡單，操作方便，效率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。使用果膠酶和纖維素酶可以破壞植物原料中以纖維素為主的細胞壁結(jié)構(gòu)及其細胞間相連的果膠物質(zhì)，使提取傳質(zhì)阻力減小，使內(nèi)容物原青花素成分易于溶出。乙醇溶液作為醇溶性原青花素的提取溶劑。檸檬酸·磷酸緩沖溶液起到調(diào)節(jié)溶液pH值的作用。按本發(fā)明的方法配制的緩沖溶液，經(jīng)檢測其pH=6，可以保證酶制劑作用的最佳效果。純化采用AB-8樹脂，最佳工藝為上樣流速2 mL/min、解吸流速1 mL/min、解吸劑體積分數(shù)50%，在此條件下，得到香蕉皮原花青素精制品并通過原花青素反應(yīng)與HPLC-MS定性分析，證實該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為95%以上。
具體實施例：為了充分公開本發(fā)明的一種從香蕉皮提取原花青素的方法，下面結(jié)合實施例加以說明。
實施例：一種從香蕉皮提取原花青素的方法，提取方法包括以下步驟：
(1) 備料：取剛采摘的青香蕉去莖，去除香蕉果肉，將青香蕉皮切成1cm2 的青香蕉皮塊；
(2) 護色、打漿：將青香蕉皮塊浸沒于護色液中浸泡15 分鐘，然后將青香蕉皮塊與護色液按1:1 重量份混合打漿，形成香蕉皮漿；
(2)配制緩沖溶液：將0.1mol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1：1.5的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液；
(3)配制酶液：混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分攪拌使其完全溶解，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按香蕉皮漿重量(kg)：緩沖溶液體積(L)=1：10的比例計算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.3g果膠酶與0.1g纖維素酶；
(4)投料：按香蕉皮漿重量(kg)：緩沖溶液體積(L)=1：10的比例，將香蕉皮漿加入酶液中；
(5)酶解：將香蕉皮漿1000g與10L酶液攪拌均勻后，在53℃的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動一次，酶解3.5h，生成酶解液和殘渣的混合物；
(6)提取：將步驟（5）酶解液加入10L的85%乙醇的方法，在65℃條件下提取2h，經(jīng)過濾，得到提取液；
(7)純化：采用AB-8樹脂對提取液純化，上樣流速1～3 mL/min、解吸流速0.5～1..5 mL/min、解吸劑體積分數(shù)45～55%，得洗脫液；
(8)真空干燥：將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。
步驟（2）所述護色液的組成是：亞硫酸氫鈉3份、氯化鈉3份、檸檬酸2份，蒸餾水992 份充分混合。
上述得到的制得原花青素精制品通過原花青素反應(yīng)與HPLC-MS定性分析，證實該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為95.8%。