一種從火龍果皮提取原花青素的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于天然產(chǎn)物加工科學(xué)領(lǐng)域，特別是一種從火龍果皮提取原花青素的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]原花青素(Procyanidins，簡稱0PC)又被稱為低聚黃燒酮類，是一種新型高效抗氧化劑，是目前為止所發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)效的自由基清除劑，具有非常強(qiáng)的體內(nèi)活性。實(shí)驗(yàn)證明，OPC的抗自由基氧化能力是維生素E的50倍，維生素C的20倍，并吸收迅速完全，口服20分鐘即可達(dá)到最高血液濃度，代謝半衰期達(dá)7小時(shí)之久。
[0003]原花青素是植物中廣泛存在的一類多酚類化合物的總稱，具有清除自由基、抗氧化的活性，并且在抗炎癥、抑制腫瘤、保護(hù)血管等方面發(fā)揮著重要的作用，其在功能性食品、醫(yī)藥、化妝品行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。
[0004]原花青素是自然界酚類化合物中最豐富的種類，原花青素因在酸介質(zhì)下發(fā)生典型氧化降解反應(yīng)產(chǎn)生有色的花青素而得名。在各類原花青素中二聚體是分布最廣、研究最多的一類原花青素。國內(nèi)外已經(jīng)報(bào)道了很多關(guān)于原花青素的藥理學(xué)作用，例如清除自由基、強(qiáng)抗氧化性、抗腫瘤以及抗動(dòng)脈硬化等功能；原花青素也已經(jīng)用來防止糖尿病患者白內(nèi)障手術(shù)后的并發(fā)癥；此外原花青素在植物防御捕食者和微生物機(jī)理方面也起到了重要作用。鑒于原花青素具有如此廣泛的作用，其提取方法也受到了國內(nèi)外研究人員的極大關(guān)注。
[0005]火龍果(Hylocereusundatus)，屬仙人掌科(Cactaceae)量天尺屬(Hylocereus)和蛇鞭柱屬(Selenicereus)植物。原產(chǎn)于巴西、墨西哥等中美洲熱帶沙漠地區(qū)，現(xiàn)人工栽培遍及泰國、越南、中國臺(tái)灣、哥倫比亞等20多個(gè)國家和地區(qū)。近10年來，我國廣西、貴州、廣東、海南等地火龍果種植面積迅速擴(kuò)大?；瘕埞诟星逑?，甜而不膩，富含糖、有機(jī)酸、蛋白質(zhì)，其中膳食纖維含量2.33%，高于蘋果纖維含量(1.2%)ο常食用可具有降低血糖、膽固醇、血壓、尿酸等功效。
[0006]火龍果皮含有原花青素，本發(fā)明建立火果皮中原花青素的提取純化工藝，分離出具有生物活性的原花青素，這不但在醫(yī)藥和食品行業(yè)有廣闊的應(yīng)用前景，而且也為當(dāng)?shù)刎S富的火龍果的資源開發(fā)和利用提供一條新途徑，提高火龍果的利用率和經(jīng)濟(jì)效益。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有提取方法的不足，提出一種利用酶制劑結(jié)合溶劑從火龍果皮中提取原花青素的方法。此方法所得到的原花青素產(chǎn)品可用于醫(yī)藥保健及化妝品等行業(yè)。
[0008]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，原料為火龍果皮，試劑有果膠酶(30000IU)，纖維素酶(I5000IU)，95%乙醇(食品級(jí))，檸檬酸(食品級(jí))，磷酸氫二鈉(食品級(jí))。
[0009]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，由以下步驟組成: (1)備料:將火龍果皮進(jìn)行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用；
(2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液:
(3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計(jì)算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶；
(4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中；
(5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動(dòng)一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘?jiān)幕旌衔铮?br> (6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘?jiān)旌衔镏?，?0?65°C條件下提取2?3h，經(jīng)過濾，得到提取液；
(7)純化:采用AB-8樹脂對(duì)提取液純化，上樣流速I?3mL/min、解吸流速0.5?1..5mL/min、解吸劑體積分?jǐn)?shù)45?55%，得洗脫液；
(8)真空干燥:將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。
[0010]本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，以火龍果皮為主要原料，采用酶制劑結(jié)合溶劑提取原花青素，其優(yōu)點(diǎn)是原青花素產(chǎn)品安全性好、質(zhì)量佳，原青花素提取率較醇提取法高30?40%，酶制劑的用量少，而且工藝簡單，操作方便，效率高，適合工業(yè)化生產(chǎn)。使用果膠酶和纖維素酶可以破壞植物原料中以纖維素為主的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)及其細(xì)胞間相連的果膠物質(zhì)，使提取傳質(zhì)阻力減小，使內(nèi)容物原青花素成分易于溶出。乙醇溶液作為醇溶性原青花素的提取溶劑。檸檬酸?磷酸緩沖溶液起到調(diào)節(jié)溶液PH值的作用。按本發(fā)明的方法配制的緩沖溶液，經(jīng)檢測其pH=6，可以保證酶制劑作用的最佳效果。純化采用AB-8樹月旨，最佳工藝為上樣流速2 mL/min、解吸流速I mL/min、解吸劑體積分?jǐn)?shù)50%，在此條件下，得到火龍果皮原花青素精制品并通過原花青素反應(yīng)與HPLC-MS定性分析，證實(shí)該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
[0011]具體實(shí)施例:為了充分公開本發(fā)明的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，下面結(jié)合實(shí)施例加以說明。
[0012]實(shí)施例:一種從火龍果皮提取原花青素的方法取采收期的火龍果皮為原料，提取方法包括以下步驟:
(I)置新鮮的火龍果皮于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機(jī)粉碎，40日過篩，得到原料干粉備用。
[0013](2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液。
[0014](3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液。
[0015](4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉。
[0016](5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動(dòng)一次，酶解3h，生成酶解液和殘?jiān)幕旌衔铩?br>[0017](6)在酶解液和殘?jiān)幕旌衔镏屑尤?50ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經(jīng)過濾得提取液。
[0018](7)采用AB-8樹脂對(duì)提取液純化，上樣流速2 mL/min、解吸流速2 mL/min、解吸劑體積分?jǐn)?shù)50%，得洗脫液；
(8)將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末。
[0019]上述得到的原花青素精制品通過原花青素反應(yīng)與HPLC-MS定性分析，證實(shí)該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種從火龍果皮提取原花青素的方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)備料:將火龍果皮進(jìn)行恒溫減壓干燥，粉碎稱量后，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)配制緩沖溶液:將0.lmol/L檸檬酸溶液與0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液按1:1.5?2的體積比混合，再加水稀釋2倍，配制成緩沖溶液； (3)配制酶液:混合緩沖溶液、果膠酶和纖維素酶，并充分?jǐn)嚢枋蛊渫耆芙?，從而形成均勻的酶液；緩沖溶液的用量按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例計(jì)算果膠酶和纖維素酶的用量為每L的緩沖溶液加入0.1?O: 3g果膠酶與0.1?0.3g纖維素酶； (4)投料:按原料干粉重量(kg):緩沖溶液體積(L)=1: 15?30的比例，將原料干粉加入酶液中； (5)酶解:將原料干粉與酶液攪拌均勻后，在50?55°C的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動(dòng)一次，酶解3-4h，生成酶解液和殘?jiān)幕旌衔铮? (6)提取:按每kg原料干粉加入15?30L的75?95%乙醇的方法，將75?95%乙醇加入上述酶解液和殘?jiān)旌衔镏?，?0?65°C條件下提取2?3h，經(jīng)過濾，得到提取液； (7)純化:采用AB-8樹脂對(duì)提取液純化，上樣流速I?3mL/min、解吸流速0.5?1..5mL/min、解吸劑體積分?jǐn)?shù)45?55%，得洗脫液； (8)真空干燥:將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末，冷藏保存。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從火龍果皮提取原花青素的方法，其特征在于由以下步驟組成: (1)置新鮮的火龍果皮于65°C烘箱中烘干，用高速組織搗碎機(jī)粉碎，40目過篩，得到原料干粉備用； (2)取0.lmol/L檸檬酸溶液160ml，0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液320ml，混合并稀釋定容至1000ml，配制成緩沖溶液； (3)取250ml的緩沖溶液，加入0.05g果膠酶與0.075g纖維素酶，攪拌使其完全溶解，形成均勻的酶液； (4)在上述的酶液中加入1g的原料干粉； (5)攪拌均勻后于50°C的恒溫水浴鍋內(nèi)避光保溫，每30min攪動(dòng)一次，酶解3h，生成酶解液和殘?jiān)幕旌衔铮? (6)在酶解液和殘?jiān)幕旌衔镏屑尤?50ml95%乙醇，于60°C條件下提取2h，經(jīng)過濾得提取液； (7)采用AB-8樹脂對(duì)提取液純化，上樣流速2mL/min、解吸流速2 mL/min、解吸劑體積分?jǐn)?shù)50%，得洗脫液； (8)將洗脫液于冷凍真空干燥后，制得原花青素精制品粉末。
【專利摘要】一種從火龍果皮提取原花青素的方法，以火龍果皮為主要原料，采用酶制劑結(jié)合溶劑提取原花青素。制備方法包括以下步驟：備料、配制緩沖溶濃、配制酶液、投料、酶解、提取、純化和真空干燥。利用本發(fā)明的方法制備的原花青素，產(chǎn)品安全性好、質(zhì)量佳，酶制劑的用量少，該精制品中含有的原花青素為兒茶素、表兒茶素和二聚體，且原花青素純度為96.7%。
【IPC分類】C07D311/62
【公開號(hào)】CN105153099
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510668408
【發(fā)明人】寧發(fā)子, 鄧小玲, 張娜
【申請(qǐng)人】重慶都好生物科技有限公司
【公開日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年10月17日