1.本發(fā)明涉及一種可以有效提高CRISPR/Cas9技術(shù)在敲除基因應(yīng)用的方法，其特征在于：轉(zhuǎn)染CRISPR/Cas9載體的同時(shí)，共轉(zhuǎn)染本發(fā)明中涉及的小分子干擾RNA，可以有效提高CRISPR/Cas9系統(tǒng)靶位點(diǎn)形成的NHEJ的效率，具體包括如下步驟：
（1）設(shè)計(jì)pten基因的gRNA，每個(gè)基因3個(gè)靶位點(diǎn)，合成對(duì)應(yīng)的oligo和用BbsI酶切過(guò)的PX458 載體進(jìn)行連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化到大腸桿菌DH5a中，涂布于帶有氨芐青霉素抗性的LB平板上，篩選陽(yáng)性菌落，提取陽(yáng)性菌落質(zhì)粒進(jìn)行分析及測(cè)序，確認(rèn)gRNA表達(dá)載體構(gòu)建正確；
（2）將步驟（1）構(gòu)建的gRNA載體與小干擾RNA共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，另取構(gòu)建的gRNA載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞（作為對(duì)照組）；
（3）將步驟（2）轉(zhuǎn)染24~48小時(shí)，細(xì)胞經(jīng)流式分選，篩選出GFP標(biāo)記的轉(zhuǎn)染陽(yáng)性細(xì)胞；
（4）提取基因組，PCR擴(kuò)增靶位點(diǎn)區(qū)域片段，將PCR產(chǎn)物退火，并用T7E1酶切，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，并進(jìn)行灰度分析（indel）檢測(cè)NHEJ效率，檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)共轉(zhuǎn)染小干擾RNA可以有效提高CRISPR/Cas9在靶位點(diǎn)形成NHEJ效率為3.39~7.8倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小分子干擾RNA，其特征在于：該小分子RNA具有有效下調(diào)人pten基因的表達(dá)功能。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小分子干擾RNA，其對(duì)應(yīng)的RNA序列如序列表SEQ ID NO. 3-4、SEQ ID NO. 7-8和SEQ ID NO. 9-10所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的小分子干擾RNA，為權(quán)利要求3所述的3條小分子RNA序列的等比混合物。
5.本發(fā)明涉及的小干擾RNA可以有效提高CRISPR/Cas9系統(tǒng)在293T細(xì)胞中靶向敲除人pten基因的NEHJ效率。
6.一種CRISPR/Cas9高效靶向敲除人pten基因的技術(shù)方法。