可用于靶向、檢測(cè)、成像和治療的組合物以及其生產(chǎn)和使用方法
【專(zhuān)利摘要】本文公開(kāi)了可用于靶向檢測(cè)、成像和治療的組合物，以及其生產(chǎn)和使用方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】可用于靶向、檢測(cè)、成像和治療的組合物以及其生產(chǎn)和使用方法
[0001]相關(guān)申請(qǐng)的交叉引用
按照35 U.S.C.119(e)，本申請(qǐng)要求2010年9月28日提交的US序列號(hào)61/387，137的權(quán)益。上述申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容明確地通過(guò)引用并入本文。
[0002]關(guān)于由聯(lián)邦政府贊助的研究或開(kāi)發(fā)的聲明 不適用。
[0003]發(fā)明構(gòu)思背景 1.發(fā)明構(gòu)思領(lǐng)域 此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思一般涉及可用于靶向檢測(cè)和/或治療的組合物，以及其生產(chǎn)和使用方法。
[0004]2.【背景技術(shù)】描述
靶向的微氣泡(miciObubble)是重要的且新出現(xiàn)的超聲分子成像和治療工具。許多疾病狀態(tài)諸如(但不限于)癌、炎癥和血栓形成具有獨(dú)特的血管腔表面上的蛋白的表達(dá)。
[0005]Lanza等人(1996)描述了生物素化的生物標(biāo)志物、抗生物素蛋白和全氟化碳乳液的序貫遞送。在US專(zhuān)利7，186，399中，Lanza等人描述了活體內(nèi)或活體外基于配體進(jìn)行的脂質(zhì)包封粒子與表面上分子表位結(jié)合方法。這是通過(guò)用生物素活化試劑活化的位點(diǎn)特異性配體、抗生物素蛋白活化試劑和用生物素活化試劑活化的脂質(zhì)包封粒子的序貫遞送來(lái)完成的。
[0006]文獻(xiàn)中還描述了靶向的造影劑的更高階聚集體的同時(shí)遞送。這些更高階聚集體采用不同組合形式的微氣泡、脂質(zhì)體、納米粒、泡泡脂質(zhì)體、脂質(zhì)體微泡、納米結(jié)構(gòu)材料、超分子聚集體、量子點(diǎn)、納米管和膠束。這些粒子中有許多是多模態(tài)的并具有治療特性。例如參見(jiàn)，Lentacker 等人(2010) ；Suzuki 等人(2007 和 2008) ；Myhr 等人(2006) ；Tinkov 等人(2009) ;Kheirolomoom 等人(2007) ；Huang (2008) ;Kim 等人(2009) ；Cai 等人(2008)；Accardo 等人(2009) ；Ghaleb 等人(2008) ；Husseini 等人(2008) ；Schroeder 等人(2009)；McCarthy等人(2008);US專(zhuān)利7，078，015。上面引用的每一專(zhuān)利和公開(kāi)文件的全部?jī)?nèi)容據(jù)此明確地通過(guò)引用并入本文。
[0007]令人遺憾的是，靶位點(diǎn)處所保留的微氣泡的典型粘著率低(數(shù)量級(jí)為10個(gè)微氣泡/微升組織(Dayton,2009)),即使在加了聽(tīng)福射力的情況下。特別是，Dayton (2009)列出了靶向的造影劑技術(shù)的以下限制:(1)粘著于靶位點(diǎn)的造影劑數(shù)量少；(2)缺乏對(duì)少量造影劑的靈敏度；和(3)來(lái)自循環(huán)性未靶向的造影劑的高背景。這些限制在下文中進(jìn)行更詳細(xì)的討論。
[0008]盡管靶向的超聲造影劑表現(xiàn)出良好的疾病特異性，但是疾病狀態(tài)的診斷受限于成像技術(shù)可達(dá)到的靈敏度。當(dāng)造影劑靶向特異性位點(diǎn)時(shí)，它們限于腔內(nèi)皮表面上可用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)目，因此一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)僅容許單個(gè)微氣泡的結(jié)合。此外，微氣泡與內(nèi)皮表面上位點(diǎn)的相互作用受限于穿經(jīng)腔的血流所產(chǎn)生的剪切力；因此，微氣泡不能與它不“觸及”(即，與之接觸)的表面結(jié)合。因此，現(xiàn)有技術(shù)方法導(dǎo)致約10個(gè)微氣泡/微升的典型結(jié)合水平。[0009]現(xiàn)有技術(shù)的進(jìn)一步技術(shù)限制在于成像設(shè)備:對(duì)于超聲，可見(jiàn)到深度和頻率依賴(lài)性衰減，并且在高功率(high power)成像下,高峰值負(fù)壓導(dǎo)致微氣泡爆裂。此外,采用其它成像模式諸如但不限于MRI和PET時(shí)，可見(jiàn)到類(lèi)似的深度限制。
[0010]因此，在本領(lǐng)域中需要可用于靶向成像和/或治療的新的和改良的試劑。此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思涉及這樣的組合物以及其生產(chǎn)和使用方法。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1描繪此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的通用多模態(tài)靶向和治療系統(tǒng)。
[0012]圖2闡釋此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的可序貫遞送的可組合制劑。
[0013]圖3以圖形描繪擴(kuò)增(amplification)改善造影劑成像穿透度。
[0014]圖4以圖形描繪隨頻率的I mm3組織中功率耗散(power dissipation)的變化。
[0015]圖5以圖形描繪隨頻率的加熱時(shí)間的變化。
[0016]圖6A以圖形描繪單個(gè)靶向脂質(zhì)體的單階段擴(kuò)增。靶向脂質(zhì)體(I階段試劑)以黑色顯示。[0017]圖6B以圖形描繪單個(gè)靶向脂質(zhì)體的第二階段擴(kuò)增。單個(gè)靶向脂質(zhì)體以黑色顯示，九個(gè)粘著性擴(kuò)增脂質(zhì)體(II階段試劑)以灰色顯示。形成最終粘著性簇的二十八個(gè)成像脂質(zhì)體(III階段試劑)以空心圓顯示。
[0018]圖7a闡釋確立信號(hào)幅度和微氣泡結(jié)合之間關(guān)系的劑量反應(yīng)曲線。圖7b中表格總結(jié)利用BIACORE ? XlOO光學(xué)生物傳感器(BIACORE? XlOO Optical Biosensor)進(jìn)行的微氣泡多階段擴(kuò)增。
[0019]圖8-10含暗相(dark phase)共焦顯微術(shù)的顯微照片,它們闡釋多階段復(fù)合體的活體外原位組裝。圖8闡釋I階段結(jié)合(即，靶向試劑的結(jié)合)，圖9闡釋II階段結(jié)合(即，擴(kuò)增試劑的結(jié)合)，圖10闡釋III階段結(jié)合(即，成像試劑的結(jié)合)。
[0020]圖11含顯微照片，它們闡釋I階段靶向和II階段擴(kuò)增的活體外組裝。
[0021]發(fā)明構(gòu)思的詳細(xì)說(shuō)明
在經(jīng)示例性的附圖、試驗(yàn)、結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室程序來(lái)詳細(xì)地闡明本發(fā)明構(gòu)思的至少一個(gè)實(shí)施方案之前，應(yīng)理解，本發(fā)明構(gòu)思并不將其應(yīng)用限于下文中所闡述的或者附圖、試驗(yàn)和/或結(jié)果中所闡釋的構(gòu)造細(xì)節(jié)和組分安排。本發(fā)明構(gòu)思能有其它實(shí)施方案，或者能以多個(gè)不同方式來(lái)實(shí)踐或執(zhí)行。因而，本文中所用語(yǔ)言意在以最寬的可能范圍和含義給出；且實(shí)施方案意在是示例性的而非窮舉性的。同樣，應(yīng)理解，本文中所用措辭和術(shù)語(yǔ)是用于說(shuō)明目的，不應(yīng)被視為是限制性的。
[0022]除本文中另有定義外，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思方面所用的科學(xué)和技術(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)具有本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的含義。此外，除上下文另有要求外，單數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括復(fù)數(shù)對(duì)象，復(fù)數(shù)術(shù)語(yǔ)應(yīng)包括單數(shù)對(duì)象。一般，本文中所述細(xì)胞和組織培養(yǎng)、分子生物學(xué)和蛋白質(zhì)以及寡或多核苷酸化學(xué)和雜交方面所用的命名法和技術(shù)是眾所周知和本領(lǐng)域通常使用的那些。對(duì)于重組DNA、寡核苷酸合成以及組織培養(yǎng)和轉(zhuǎn)化(例如，電穿孔、脂質(zhì)轉(zhuǎn)染)，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。酶促反應(yīng)和純化技術(shù)根據(jù)制造商的說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，或如本領(lǐng)域通常實(shí)行的或如本文所述的那樣來(lái)進(jìn)行。前述技術(shù)和程序一般根據(jù)在本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)方法進(jìn)行，以及如本說(shuō)明書(shū)各處所提及和討論的各個(gè)一般和更具體參考文獻(xiàn)所述的那樣來(lái)進(jìn)行。參見(jiàn)，例如，Sambrook 等人，Molecular Cloning:A Laboratory Manual (第 2 版，Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.(1989),和Coligan等人，CurrentProtocols in Immunology (Current Protocols, Wiley Interscience (1994)),所述文獻(xiàn)通過(guò)引用并入本文。本文中所述分析化學(xué)、合成有機(jī)化學(xué)以及藥物和制藥化學(xué)方面所用的命名法以及實(shí)驗(yàn)室程序和技術(shù)是眾所周知和本領(lǐng)域通常使用的那些。對(duì)于化學(xué)合成、化學(xué)分析、藥物制備、制劑和遞送、以及患者的治療，使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)。
[0023]本說(shuō)明書(shū)中提及的所有公開(kāi)文件和專(zhuān)利申請(qǐng)反映本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)水平。所有公開(kāi)文件和專(zhuān)利申請(qǐng)通過(guò)引用并入本文，其程度就如同每一件公開(kāi)文件或?qū)＠暾?qǐng)被專(zhuān)門(mén)和逐一指出通過(guò)引用并入一樣。
[0024]借鑒于本公開(kāi)，不經(jīng)過(guò)度的試驗(yàn)即可制造和執(zhí)行所有在此公開(kāi)并要求權(quán)益的組合物和/或方法。盡管利用優(yōu)選實(shí)施方案對(duì)本發(fā)明組合物和方法進(jìn)行描述，但對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的是，在不背離本發(fā)明構(gòu)思、精神和范圍的情況下，可以對(duì)本文中所述組合物和/或方法以及方法步驟或方法步驟次序施加變化。所有此類(lèi)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的類(lèi)似置換和改進(jìn)視為處于如所附權(quán)利要求所定義的發(fā)明構(gòu)思的精神、范圍和構(gòu)思之內(nèi)。
[0025]除另有指示外，依照本公開(kāi)所使用的以下術(shù)語(yǔ)應(yīng)理解為具有以下含義:
當(dāng)和權(quán)利要求和/或說(shuō)明書(shū)中的術(shù)語(yǔ)“包含”一起使用時(shí)，措詞“一”的使用可能意指“一個(gè)”，但它也符合“一或多個(gè)”、“至少一個(gè)”和“一或多于一個(gè)”的含義。權(quán)利要求中術(shù)語(yǔ)“或”的使用是用于意指“和/或”，除非明確地指出僅指?jìng)溥x方案或者備選方案是互斥的(盡管公開(kāi)內(nèi)容支持僅指?jìng)溥x方案以及“和/或”的定義)。在本申請(qǐng)各處，術(shù)語(yǔ)“約”是用于表明，一個(gè)值包括用于測(cè)定該值的裝置、方法的固有誤差變化，或者在那些研究受試者之間存在的變化。術(shù)語(yǔ)“至少一個(gè)”的使用應(yīng)理解為包括一個(gè)，以及多于一個(gè)的任何數(shù)量，包括但不限于，2、3、4、5、10、15、20、30、40、50、100個(gè)等。術(shù)語(yǔ)“至少一個(gè)”可延伸至100或1000個(gè)或更多，這取決于其所關(guān)聯(lián)的術(shù)語(yǔ)；此外，100/1000的數(shù)量不應(yīng)理解為是限制性的，因?yàn)楦叩倪吔琰c(diǎn)也可能產(chǎn)生令人滿意的結(jié)果。
[0026]術(shù)語(yǔ)“約”是用于表明，一個(gè)值包括用于測(cè)定該值的裝置、方法的固有誤差變化，和/或在研究受試者之間存在的變化。
[0027]本說(shuō)明書(shū)和權(quán)利要求中所用的措詞“包含”、“具有”、“包括”或“含”是非遍舉的或開(kāi)放式的，并且不排除附加的未述及要素或方法步驟。
[0028]本文所用的術(shù)語(yǔ)“或它們的組合”指在該術(shù)語(yǔ)前所列項(xiàng)目的所有排列和組合。例如，“A、B、C或它們的組合”意在包括下列中的至少一種:A、B、C、AB、AC、BC或ABC，以及若在特定情況下次序很重要?jiǎng)t還包括BA、CA、CB、CBA、BCA、ACB、BAC或CAB。進(jìn)一步地，該例中還明確地包括含一或多個(gè)項(xiàng)目或術(shù)語(yǔ)重復(fù)出現(xiàn)的組合，諸如BB、AAA、MB、BBC、AAABCCCC、CBBAAAXABABB等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員會(huì)理解，典型情況下，對(duì)于任何組合中項(xiàng)目或術(shù)語(yǔ)的數(shù)目沒(méi)有限制，除非從上下文中明顯看出并非如此。
[0029]本文所用的術(shù)語(yǔ)“可組合制劑”應(yīng)理解為指根據(jù)具體程序制備并可用于一或多個(gè)特定應(yīng)用的組分混合物。在此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的某些實(shí)施方案中，可組合制劑的組分在給藥之前沒(méi)有組合在一起；相反地，組分是經(jīng)單獨(dú)提供和連續(xù)或序貫遞送，從而原位形成制劑/復(fù)合體。
[0030]本文所用的術(shù)語(yǔ)“試劑”或“劑”應(yīng)理解為指任何介質(zhì)，其表面上能夠具有一或多個(gè)用于與受試者腔中的靶和/或另一試劑相互作用的結(jié)合位點(diǎn)。在某些實(shí)施方案中，“試劑”或“劑”可選自囊泡、脂質(zhì)體、回波發(fā)生性(echogenic)脂質(zhì)體、多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體、微氣泡、微氣球(microballoons)、微球體、基質(zhì)粒子、膠束、基于聚集的構(gòu)建體、納米粒子、全氟化碳納米滴(nanodroplets)以及它們的組合。
[0031]本文所用的術(shù)語(yǔ)“造影劑”應(yīng)理解為用于在成像分析期間提高分辨率以突出器官或組織的物質(zhì)。造影劑是用于在醫(yī)學(xué)成像中增強(qiáng)機(jī)體內(nèi)結(jié)構(gòu)或流體對(duì)比度的物質(zhì)。
[0032]術(shù)語(yǔ)“靶向的造影劑”指附連有生物標(biāo)志物的造影劑，該生物標(biāo)志物使造影劑“靶向”與生物標(biāo)志物結(jié)合的靶位點(diǎn)。
[0033]本文所用的術(shù)語(yǔ)“靶”應(yīng)理解為指腔壁表面上出現(xiàn)的任何結(jié)構(gòu)部分，其中靶向試劑對(duì)之具有親合力并因此可與所述結(jié)構(gòu)部分結(jié)合?！鞍小笨梢允请摹⒍嚯?、蛋白質(zhì)、表位、抗原、受體、復(fù)合體(即，MHC-肽復(fù)合體)以及它們的組合或衍生物。[0034]依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的術(shù)語(yǔ)“結(jié)合位點(diǎn)”應(yīng)理解為指對(duì)另一物質(zhì)/結(jié)合位點(diǎn)具有結(jié)合親合力并能夠與之形成復(fù)合體、由此提供兩試劑/囊泡間親合力的任何生物分子。例如但非限制，結(jié)合位點(diǎn)可以是肽、蛋白、抗原、抗體、抗體片段、受體、配體、糖綴合物以及它們的組合或衍生物。在一個(gè)實(shí)施方案中，“結(jié)合位點(diǎn)”是互補(bǔ)對(duì)(例如但非限制，生物素-抗生物素蛋白、抗體-抗原等)的一方。材料一般應(yīng)選自不會(huì)引發(fā)變態(tài)反應(yīng)但并非測(cè)試腔內(nèi)慣常存在的組群?？梢勒沾斯_(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思利用的非靶向結(jié)合位點(diǎn)(即，被用于擴(kuò)增、成像和/或治療試劑與先前靶向試劑或試劑復(fù)合體結(jié)合的下部結(jié)構(gòu)結(jié)合位點(diǎn)(infrastructural binding sites))的示例包括但不限于:蛋白諸如但不限于肌酸酐-激酶-腦-型(CKBB)，或治療藥物諸如但不限于卡馬西平、皮質(zhì)醇、妥布霉素、茶堿、苯妥英、萬(wàn)古霉素、洋地黃毒苷、地高辛、慶大霉素、苯巴比妥和丙戊酸，連同與它們相應(yīng)的人源化抗體。
[0035]本文所用的術(shù)語(yǔ)“多肽”是通稱(chēng)，指具有多肽序列的天然蛋白、片段或類(lèi)似物。因此，天然蛋白、片段和類(lèi)似物是多肽屬下的種類(lèi)。
[0036]本文所用的術(shù)語(yǔ)“受體”應(yīng)理解為包括一或多種特定種類(lèi)的分子(B卩，配體)可與之附連的生物分子。在一個(gè)實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“受體”指在待靶向的器官/組織腔壁表面上表達(dá)并以容許與循環(huán)性靶向試劑相互作用的方式暴露的配體、任意的肽、蛋白質(zhì)、糖蛋白、多糖或脂質(zhì)；也就是說(shuō)，在所述實(shí)施方案中，“受體”充當(dāng)如上文詳述的“靶”。可是，應(yīng)理解，本領(lǐng)域已知或本領(lǐng)域普通技術(shù)人員想得到的任何受體均可充當(dāng)如上文所述的“結(jié)合位點(diǎn)”。
[0037]本文所用的應(yīng)用于一物體的術(shù)語(yǔ)“天然存在的”指物體可在自然界中找到的事實(shí)。例如，存在于可從自然界來(lái)源分離出來(lái)的有機(jī)體(包括病毒)中并且沒(méi)有在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)人或以另外方式刻意修飾的多肽或多核苷酸序列是天然存在的。
[0038]“抗體”或“抗體肽(一或多種)”指完整抗體，或?yàn)樘囟ǖ慕Y(jié)合而與完整抗體競(jìng)爭(zhēng)的其結(jié)合片段。術(shù)語(yǔ)“抗體”以最廣義使用，且具體涵蓋了單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段(例如，F(xiàn)ab、F(ab’)2和Fv)，只要它們顯現(xiàn)所希望的生物活性即可?？贵w(Ab)和免疫球蛋白(Ig)是具有同樣結(jié)構(gòu)特征的糖蛋白。盡管抗體顯現(xiàn)對(duì)特定抗原的結(jié)合特異性，免疫球蛋白既包括抗體又包括缺乏抗原特異性的其它抗體樣分子?？贵w結(jié)合片段通過(guò)重組DNA技術(shù)產(chǎn)生，或通過(guò)完整抗體的酶促或化學(xué)裂解產(chǎn)生。結(jié)合片段包括Fab、Fab’、F (ab’)2、Fv和單鏈抗體。除“雙特異性”或“雙功能性”抗體以外的抗體應(yīng)理解為其每一結(jié)合位點(diǎn)均相同。
[0039]“嵌合”抗體指由至少兩種不同來(lái)源的組分構(gòu)成的抗體。在某些實(shí)施方案中，嵌合抗體包含與另一分子融合的源自第一物種的抗體的一部分，所述另一分子例如為源自第二物種的抗體的一部分。在某些此類(lèi)實(shí)施方案中，嵌合抗體包含與源自人的抗體的一部分融合的源自非人動(dòng)物的抗體的一部分。在某些此類(lèi)實(shí)施方案中，嵌合抗體包含與源自人的抗體恒定區(qū)融合的源自非人動(dòng)物的抗體可變區(qū)的全部或一部分。
[0040]當(dāng)抗體是依照與此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思利用并向人給藥時(shí)，所述抗體可以“人源化”，以避免引發(fā)其免疫應(yīng)答。“人源化”抗體指經(jīng)修飾以致與人抗體更緊密匹配(在氨基酸序列中)的非人抗體。人源化抗體經(jīng)改造以致移除其抗原性部分且替換為人抗體的類(lèi)似部分，同時(shí)保留針對(duì)所希望表位的抗體親合力。這種改造可能僅涉及幾個(gè)氨基酸，或者可能包括抗體的部分或整個(gè)構(gòu)架區(qū)、可變區(qū)和/或互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。因此，人源化抗體是一類(lèi)嵌合抗體。使抗體人源化的眾多方法是本領(lǐng)域已知的，并公開(kāi)于US專(zhuān)利6，180，370 (于2001年I月30日授權(quán)給Queen等人);6，054, 927 (于2000年4月25日授權(quán)給fcickell);5，869，619 (于 1999 年 2 月 9 日授權(quán)給 Studnicka)；5, 861，155 (于 1999 年 I 月 19 日授 權(quán)給 Lin);5, 712，120(于 1998 年 I 月 27 日授權(quán)給 Rodriquez 等人);5，225，539 (于 1993 年 7月6日授權(quán)給Winter);和4,816, 567(于1989年3月28日授權(quán)給Cabilly等人)，它們的說(shuō)明書(shū)全部據(jù)此明確地通過(guò)引用以全文并入本文。此外，現(xiàn)有技術(shù)有很多與人源化抗體的生成或使用有關(guān)的公開(kāi)論文。這些研究中有許多都教導(dǎo)了能夠與此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思一起使用的有用流程示例，諸如但不限于，Sandborn等人，Gatroenterology, 120:1330(2001);Mihara 等人，Clin.1mmunol.98:319 (2001);Yenari 等人，Neurol.Res.23:72(2001);Morales 等人，Nucl.Med.Biol.27:199(2000);Richards 等人，Cancer Res.59:2096 (1999);Yenari 等人，Exp.Neurol.153:223 (1998);和 Shinkura 等人，AnticancerRes.18:1217 (1998)，它們?nèi)棵鞔_地通過(guò)引用以全文并入本文。此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步包括全人單克隆抗體的使用；提供全人單克隆抗體的方法在本領(lǐng)域中是眾所周知的，并描述于以下文獻(xiàn)，例如但不限于:US專(zhuān)利5，545, 807 ;5，545, 806 ;5，569, 825 ；5，625，126 ;5，633，425 ;5，661，016 ;5，916，771 ;5，939，598 ；PCT 公開(kāi) WO 94/02602 ；以及如下非專(zhuān)利參考文獻(xiàn)=Kozbor 等人，Hybridoma, 2:7 (1983)；Cole 等人，PNAS 82:859 (1985)Cote 等人，PNAS 80:2026 (1983) ；Cole 等人，(1985) ；Marks 等人，J Biol.Chem.267:16007 (1992) ;Lonberg 等人，Nature, 368:856 (1994) ；Morrison, 1994 ;Fishwild 等人,Nature Biotechnol.14:845 (1996) ；Neuberger, Nat.Biotechnol.14:826 (1996);以及 Lonberg 和 Huszar, Int Rev Tmmunol.13:65 (1995)。
[0041]可是，應(yīng)理解，本發(fā)明構(gòu)思不限于上述流程，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的產(chǎn)生人源化抗體或全人抗體的其它流程可依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思來(lái)使用。
[0042]術(shù)語(yǔ)“有效量”指在按本發(fā)明構(gòu)思方式使用時(shí)，在符合合理效益/風(fēng)險(xiǎn)比情況下足以顯現(xiàn)可測(cè)治療效果而無(wú)過(guò)度不良副作用(諸如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))的生物學(xué)活性分子或者其綴合物或衍生物的量。治療效果可例如包括但不限于:抑制不希望的組織或惡性細(xì)胞的生長(zhǎng)。對(duì)受試者的有效量將取決于受試者類(lèi)型、受試者的尺碼和健康狀態(tài)、待治療病況的性質(zhì)和嚴(yán)重程度、給藥方法、治療持續(xù)時(shí)間、并行治療(如果有的話)的性質(zhì)、所采用的特定制劑等。因此，不可能預(yù)先規(guī)定精確的有效量。但是，用于指定情形的有效量可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員基于本文所提供的信息、使用常規(guī)試驗(yàn)來(lái)確定。
[0043]當(dāng)關(guān)系到本文中所述一或多種試劑的應(yīng)用使用時(shí)，措詞“配合使用”表明，將所述試劑(一或多種)給藥以致它們?cè)谟袡C(jī)體上和/或與有機(jī)體結(jié)合的生理活性存在至少些許時(shí)間順序上的重疊。因此，所述試劑(一或多種)可序貫地給藥。在序貫給藥中，在給藥第二部分之前甚至可能存在些許實(shí)質(zhì)性延遲(例如，數(shù)分鐘或者甚至數(shù)小時(shí)或數(shù)天)，只要在給藥第二給藥試劑和/或第二給藥試劑在有機(jī)體中變得有活性時(shí)，第一給藥試劑已對(duì)有機(jī)體產(chǎn)生了些許生理效應(yīng)和/或保持與有機(jī)體的結(jié)合即可。
[0044]本文所用的術(shù)語(yǔ)“給藥”應(yīng)理解為包括本領(lǐng)域已知的所有給藥途徑，包括但不限于:口服、局部、透皮、腸胃外、皮下、鼻內(nèi)、粘膜、肌肉內(nèi)和靜脈途徑，包括局部和全身性施用在內(nèi)。此外，利用本領(lǐng)域眾所周知的制劑技術(shù)，可將給藥方法設(shè)計(jì)成能提供延遲或控制釋放。
[0045]本文所用的術(shù)語(yǔ)“腔”應(yīng)理解為指生物學(xué)管狀結(jié)構(gòu)的內(nèi)部空間。依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的腔的示例包括但不限于:血管腔、脊髓腔(spinal lumen)、淋巴管腔等。
[0046]術(shù)語(yǔ)“可藥用”指在符合合理利益/風(fēng)險(xiǎn)比情況下，適用于向人和/或動(dòng)物給藥而無(wú)過(guò)分不良副作用諸如毒性、刺激和/或變態(tài)反應(yīng)的化合物和組合物。
[0047]本文所用的“基本上純”意指目標(biāo)種是存在的占主導(dǎo)地位的種(即，按摩爾計(jì)，它比組合物中任何其它單獨(dú)的種豐度更高)，并且優(yōu)選的是，基本上純化的部分是目標(biāo)種占所存在的所有大分子種的至少約50% (按摩爾計(jì))的組合物。一般來(lái)說(shuō)，基本上純的組合物包含的目標(biāo)種占組合物中所存在的所有大分子種的超過(guò)約80%，更優(yōu)選超過(guò)約85%、90%、95%和99%。最優(yōu)選，目標(biāo)種純化至基本均質(zhì)(通過(guò)常規(guī)檢測(cè)方法不能在組合物中測(cè)出雜質(zhì)的種)，其中組合物基本上由單一大分子種組成。
[0048]術(shù)語(yǔ)“癌”或“癌性”指或描述哺乳動(dòng)物的生理狀況，其典型特征在于不受管制的細(xì)胞生長(zhǎng)。癌的示例包括但不限于:癌瘤、淋巴瘤、胚細(xì)胞瘤、肉瘤和白血病。這些癌的更具體示例包括:鱗狀細(xì)胞癌、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、胃腸癌、胰腺癌、惡性膠質(zhì)瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝細(xì)胞瘤、乳腺癌、結(jié)腸癌、結(jié)腸直腸癌、子宮內(nèi)膜癌、唾液腺癌、腎癌(kidney cancer )、腎癌(renal cancer )、前列腺癌、外陰癌、甲狀腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)和各種類(lèi)型的頭頸癌。
[0049]本文所用的術(shù)語(yǔ)“轉(zhuǎn)移”應(yīng)理解為指從原發(fā)性腫瘤至機(jī)體其它部分的癌的擴(kuò)散。轉(zhuǎn)移是序貫的多步過(guò)程，其中腫瘤細(xì)胞自原發(fā)性腫瘤脫附(detach)、遷移穿越基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)、以及侵入淋巴系統(tǒng)和/或血液系統(tǒng)。這之后是遠(yuǎn)距離位點(diǎn)上繼發(fā)性腫瘤的建立。
[0050]本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗癌試劑”指能夠抑制癌細(xì)胞功能的分子或分子復(fù)合體。該試劑可抑制增殖或者可對(duì)細(xì)胞具有細(xì)胞毒性?？墒褂酶鞣N抗癌試劑，包括抑制蛋白質(zhì)合成的抗癌試劑，以及抑制某些對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)或存活而言關(guān)鍵的基因的表達(dá)的抗癌試劑。抗癌試劑包括導(dǎo)致細(xì)胞死亡的抗癌試劑，以及抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、增殖和/或分化的抗癌試劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗癌試劑可以是對(duì)某些癌細(xì)胞類(lèi)型具有選擇性毒性而對(duì)其它正常細(xì)胞無(wú)影響或效力較低的抗癌試劑。在另一實(shí)施方案中，抗癌試劑可同等地殺滅細(xì)胞，但較快生長(zhǎng)的細(xì)胞被更快地殺滅。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，抗癌試劑是抗腫瘤劑。
[0051]本文所用的術(shù)語(yǔ)“抗腫瘤劑”指具有抑制人或動(dòng)物中腫瘤發(fā)展或進(jìn)展的功能特性的試劑，所述腫瘤特別為惡性(癌性)病變，諸如癌瘤、肉瘤、淋巴瘤或白血病。抑制轉(zhuǎn)移常常是抗腫瘤劑的特性。
[0052]本文所用的術(shù)語(yǔ)“患者”包括人和獸類(lèi)受試者。為治療目的的“哺乳動(dòng)物”指任何被歸類(lèi)為哺乳動(dòng)物的動(dòng)物，包括人、家畜和農(nóng)畜、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物和任何其它具有乳腺組織的動(dòng)物。
[0053]本文所用的術(shù)語(yǔ)“健康患者”應(yīng)理解為指不具有在將要接受治療的其他患者中所研究的疾病/病況/病癥的患者。
[0054]本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療”指癥狀嚴(yán)重程度和/或頻率的降低、癥狀和/或根本原因的消除、對(duì)癥狀和/或其根本原因出現(xiàn)的預(yù)防、以及損傷的改善或補(bǔ)救。因此，本文中所用的術(shù)語(yǔ)“治療”患者或個(gè)體的方法既包括對(duì)易感個(gè)體中病癥的預(yù)防、減少癥狀出現(xiàn)，也包括臨床有癥狀個(gè)體中病癥的治療。
[0055]“病癥”是會(huì)受益于使用此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的組合物進(jìn)行治療的任何病況。這包括慢性和急性病癥或疾病，包括令哺乳動(dòng)物易感所述病癥的那些病理學(xué)狀況在內(nèi)。
[0056]本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療癌”或“癌的治療”意指抑制癌的擴(kuò)散、降低腫瘤尺寸、使機(jī)體內(nèi)癌細(xì)胞縮小或數(shù)目減少、和/或改善或減輕與癌關(guān)聯(lián)的癥狀。如果死亡率和/或發(fā)病率降低，或者疾病負(fù)擔(dān)降低(其表現(xiàn)為機(jī)體內(nèi)惡性細(xì)胞數(shù)目減少)，則認(rèn)為治療是有療效的。
[0057]“預(yù)防癌”或“癌的預(yù)防”意指防止癌疾病狀態(tài)的出現(xiàn)或復(fù)發(fā)。因而，阻礙、抑制或妨礙轉(zhuǎn)移、腫瘤生長(zhǎng)或癌增殖的治療被視為預(yù)防性的。
[0058]本文所用的術(shù)語(yǔ)“控制癌”包括降低癌患者中癌復(fù)發(fā)幾率、延長(zhǎng)患者保持緩解的時(shí)間、減少有患癌風(fēng)險(xiǎn)的患者(例如，暴露于高量的福射或致癌材料的患者；感染了與癌出現(xiàn)關(guān)聯(lián)的病毒的患者；和具有癌遺傳易感性的患者)中的癌出現(xiàn)以及減少患前惡性(pre-mal ignant)癌或非惡性癌的患者中惡性癌的出現(xiàn)。
[0059]治療有效量或預(yù)防有效量的給藥意在提供疾病/病癥/病況(諸如但不限于癌)的治療、預(yù)防或控制方面的治療學(xué)效益。具體的治療有效量可容易地由普通醫(yī)生確定，并且可依本領(lǐng)域已知因素:患者的歷史和年齡、疾病/病癥/病況的類(lèi)型和階段、其它治療學(xué)組合物的共同給藥等而有所變化。
[0060]本文所用的術(shù)語(yǔ)“聲致穿孔”應(yīng)理解為指使用聲(典型情況下，超聲頻率)來(lái)改變細(xì)胞質(zhì)膜滲透性。該技術(shù)常用于分子生物學(xué)和非病毒基因治療中，用以容許大分子諸如DNA攝入細(xì)胞中，由此增強(qiáng)向細(xì)胞的基因或藥物遞送。聲致穿孔利用微氣泡的聲空化(即，通過(guò)高作用力在液體中形成空穴以及其緊接的內(nèi)爆)以增強(qiáng)這些大分子的遞送。此外，已證實(shí)，長(zhǎng)時(shí)間暴露于低頻(〈MHz)超聲導(dǎo)致完全細(xì)胞死亡(破裂)。
[0061]本文所用的術(shù)語(yǔ)“聲輻射力”應(yīng)理解為指由聲波與沿其路徑所置障礙的相互作用引起的物理現(xiàn)象。一般而言，對(duì)障礙施加的作用力會(huì)導(dǎo)致障礙的位移。聲輻射力被用作一種使自由流動(dòng)造影劑向內(nèi)皮移動(dòng)和由此增強(qiáng)造影劑對(duì)靶表面附著的機(jī)制。
[0062]本文所用的術(shù)語(yǔ)“回波發(fā)生性脂質(zhì)體”應(yīng)理解為指包含氣體的脂質(zhì)體；回波發(fā)生性脂質(zhì)體反射高頻聲波，因此能夠通過(guò)超聲技術(shù)成像。聲輻射力可用于使回波發(fā)生性脂質(zhì)體向內(nèi)皮移動(dòng)和由此增強(qiáng)它們對(duì)靶表面的附著。微氣泡是一類(lèi)回波發(fā)生性脂質(zhì)體，其中全氟化碳填充整個(gè)空穴。[0063]本文所用的術(shù)語(yǔ)“消融”應(yīng)理解為指使用高強(qiáng)度聚焦超聲來(lái)精準(zhǔn)靶向組織以進(jìn)行治療(即，移除或破壞組織)。超聲消融技術(shù)的使用詳細(xì)地述于Halpern(2005)。簡(jiǎn)言之，用高強(qiáng)度聚焦超聲(HIFU)消融來(lái)破壞組織的機(jī)理與過(guò)熱以及空化有關(guān)。如診斷成像中所用的低強(qiáng)度超聲能量無(wú)害地傳播穿過(guò)組織。高強(qiáng)度聚焦超聲消融將身體外的超聲源聚焦于特定靶組織。超聲能量無(wú)害地穿過(guò)在去緊密聚焦靶區(qū)域途中的上層組織。在靶組織處的快速的能量沉積速率遠(yuǎn)超過(guò)熱消散速率，導(dǎo)致快速升溫。其它熱消融技術(shù)受限于熱向鄰近組織中的耗散，而用高強(qiáng)度超聲消融(0.5~1.0秒)所致的超聲能量快速聚焦沉積產(chǎn)生局部空化和65~100°C的溫度，同時(shí)極少加熱鄰近的組織。I秒高于56°C的溫度導(dǎo)致不可逆細(xì)胞死亡，連同清晰界定區(qū)域的組織壞死。高強(qiáng)度聚焦超聲聚焦和準(zhǔn)確靶向病灶的能力(通過(guò)利用實(shí)時(shí)超聲或核磁共振成像引導(dǎo))使得任何形狀的病灶能得以精準(zhǔn)消融，而不損傷周邊組織。
[0064]現(xiàn)在轉(zhuǎn)到此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思，靶向的微氣泡是重要的和新出現(xiàn)的超聲分子成像和治療工具，其使造影劑的使用特異性增強(qiáng)。許多疾病狀態(tài)，諸如但不限于癌、炎癥和血栓形成，具有獨(dú)特的血管腔表面上蛋白的表達(dá)。與造影劑附連的生物標(biāo)志物的使用增強(qiáng)指定位點(diǎn)上造影劑的積聚，由此提高該位點(diǎn)處的有效信號(hào)；此外，靶向造影劑的使用降低造影劑的清除速率，由此增大用于成像的有用臨床窗口。但是，現(xiàn)有技術(shù)靶向造影劑的當(dāng)前狀態(tài)具有靈敏度有限的缺點(diǎn):該技術(shù)受限于可用結(jié)合位點(diǎn)的數(shù)目(即，每一結(jié)合位點(diǎn)一個(gè)靶向成像試劑)。此外，典型的粘著率較低(約10個(gè)泡/微升)，即使加了聲輻射力(其典型情況下使粘著率加倍)也如此；因此，結(jié)合受限于靶向造影劑與腔上位點(diǎn)的相互作用。
[0065]盡管靶向的超聲造影劑表現(xiàn)出良好的疾病特異性，但是疾病狀態(tài)的診斷受限于成像技術(shù)可達(dá)到的靈敏度。當(dāng)造影劑靶向特異性位點(diǎn)時(shí)，它們只限于腔內(nèi)皮表面上可用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)目，因此一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)僅容許單個(gè)微氣泡的結(jié)合。此外，微氣泡與內(nèi)皮表面上位點(diǎn)的相互作用受限于穿經(jīng)腔的血流所產(chǎn)生的剪切力；因此，微氣泡不能與它不接觸的表面結(jié)合。因此，利用微氣泡和 超聲的現(xiàn)有技術(shù)方法導(dǎo)致約10個(gè)微氣泡/微升的典型結(jié)合水平。其它成像模式存在類(lèi)似的限制，其中同樣所述方法只限于每一結(jié)合位點(diǎn)一個(gè)成像囊泡，因此成像囊泡的數(shù)目由可用結(jié)合位點(diǎn)的濃度決定。
[0066]現(xiàn)有技術(shù)的進(jìn)一步技術(shù)限制在于成像設(shè)備:對(duì)于超聲，存在深度和頻率依賴(lài)性衰減，并且在高功率成像下，高峰值負(fù)壓導(dǎo)致微氣泡爆裂。
[0067]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思通過(guò)提高來(lái)自靶位點(diǎn)的信號(hào)而克服了這些現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)和缺陷。這具體是通過(guò)顯著提高結(jié)合微氣泡(或其它介質(zhì)試劑)數(shù)目、由此顯著改善靶向成像靈敏度來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0068]此外，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的增強(qiáng)的靶向和擴(kuò)增功能使得足夠數(shù)目的微氣泡(或其它介質(zhì)試劑)能得以遞送，用于治療學(xué)超聲的更有效應(yīng)用，諸如但不限于，定向組織加熱、聲致穿孔和消融。指定組織區(qū)域中靶向微氣泡數(shù)目的增加能實(shí)現(xiàn)靶向聲能介導(dǎo)的治療。組織區(qū)域中足夠數(shù)目的氣泡會(huì)將聲穿透區(qū)域中聲能向熱的轉(zhuǎn)化提高到大于周邊組織正常吸熱的程度。微氣泡的單位超聲吸收量大于正常組織的單位超聲吸收量。但是，只有當(dāng)定域區(qū)域中存在高濃度微氣泡時(shí)，才出現(xiàn)足夠的超聲能量吸收來(lái)誘導(dǎo)過(guò)熱。然后，大的組織區(qū)域可經(jīng)聲穿透，出現(xiàn)基于靶向氣泡濃度的差溫加熱效應(yīng)。因此，通過(guò)分子水平上的靶向與定向超聲能量的組合，能夠使治療定域。
[0069]本文所用的術(shù)語(yǔ)“足夠數(shù)目的微泡”應(yīng)理解為依諸如但不限于氣泡尺寸、接受超聲波(即，超聲波暴露)頻率和強(qiáng)度以及具體施用方法之類(lèi)的因素而有所變化。例如但非限制，就成像靶向試劑而言，靶向氣泡數(shù)目的增加會(huì)提高反向散射信號(hào)、改善信噪比。指定體積內(nèi)靶向氣泡數(shù)目加倍將使接受的反向散射聲信號(hào)接近加倍。擴(kuò)增也能增強(qiáng)成像穿透度。該效果隨頻率而變。例如，在3 MHz時(shí)，靶向造影劑結(jié)合度的兩倍增長(zhǎng)將實(shí)現(xiàn)額外的I厘米聲信號(hào)穿透度(參見(jiàn)圖3)。在另一非限制性示例中，在用氣泡使聲能轉(zhuǎn)化成熱能的治療學(xué)應(yīng)用中，靶向氣泡數(shù)目須超過(guò)閾值，以克服聲能對(duì)周邊組織的自然加熱效應(yīng)。基于用約3微米的平均氣泡直徑計(jì)算氣泡和組織的加熱效應(yīng)，需要20~100個(gè)氣泡/微升來(lái)實(shí)現(xiàn)這一作用。依據(jù)上列物理因素，有可能需要更少或更多的氣泡。就靶向消融而言，靶向氣泡數(shù)目的增加會(huì)導(dǎo)致更強(qiáng)的消融效果。就靶向局部缺血而言，需要足夠數(shù)目的氣泡以在毛細(xì)管中導(dǎo)致實(shí)質(zhì)性阻斷。例如但非限制，對(duì)于10微米直徑的毛細(xì)管和利用3微米脂質(zhì)體，雙階段擴(kuò)增可足以顯著地阻斷約6~8微米直徑的紅細(xì)胞的流動(dòng)。隨著微氣泡尺寸的增大，獲得部分堵塞所需的步驟數(shù)目減少。并且，一般而言，脂質(zhì)體將具有較小的直徑以使堵塞降至最低限度。
[0070]將組織加熱幾度能夠提高藥物活性和血流量，而不誘發(fā)永久性組織損傷。更高水平的加熱能夠誘發(fā)永久性組織損傷，這可能具有治療學(xué)效益。除提高加熱之外，增加靶向氣泡數(shù)目也可提高其它治療學(xué)效應(yīng)諸如空化或氣泡潰滅(collapse)，這可用于消融組織或誘導(dǎo)聲致穿孔。聲致穿孔與增強(qiáng)的藥物和基因遞送以及治療學(xué)效益相關(guān)聯(lián)。
[0071]除超聲應(yīng)用之外，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思還改善其它成像模式(諸如但不限于，MRI和PET)，其獨(dú)特特性在于靶向試劑局限于腔。
[0072]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思提供通用的多模態(tài)靶向和治療系統(tǒng)，其通過(guò)擴(kuò)增克服了靶向材料數(shù)量的限制(參見(jiàn)圖1和2)。此公開(kāi)并要求權(quán)益的系統(tǒng)兼具成像和治療應(yīng)用。該系統(tǒng)的治療臂能實(shí)現(xiàn)向靶向位點(diǎn)遞送實(shí)質(zhì)上更多的治療(諸如但不限于，能量、藥物和/或基因)的新的應(yīng)用。具體示例包括但不限于:聲致穿孔和血腦屏障；炎癥(即，克羅恩氏病)；靶向和定向化學(xué)療法；經(jīng)熱提高的多種治療學(xué)組合物的活性；靶向和定向消融等。
[0073]如圖1和2所示，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思涉及可序貫遞送的藥學(xué)試劑的復(fù)合體，其可用于經(jīng)成像檢測(cè)腔中暴露的靶，其中復(fù)合體在腔中形成。所述復(fù)合體包含與靶結(jié)合(I階段結(jié)合)的至少一個(gè)靶向試劑(在本文中也稱(chēng)作“I階段試劑”或“I階段囊泡”)、多個(gè)擴(kuò)增試劑(在本文中也稱(chēng)作“II階段試劑”或“II階段囊泡”)以及多個(gè)成像試劑(在本文中也稱(chēng)作“III階段試劑”或“III階段囊泡”)。所述多個(gè)擴(kuò)增試劑中的每一個(gè)與至少一個(gè)靶向試劑結(jié)合(II階段結(jié)合)，且多個(gè)成像試劑中的每一個(gè)與至少一個(gè)擴(kuò)增試劑結(jié)合(III階段結(jié)合)。此外，Ι、Π和/或III階段試劑中的至少一個(gè)可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的復(fù)合體能得以檢測(cè)。[0074]1、11和/或III階段試劑可包含用于經(jīng)超聲進(jìn)行檢測(cè)和/或操作的氣體。此外，靶向、擴(kuò)增和/或成像試劑可含有能通過(guò)除超聲以外的成像模式檢測(cè)的材料。更進(jìn)一步，此外，靶向、擴(kuò)增和/或成像試劑可進(jìn)一步包含摻入/包封于其中的治療學(xué)組合物。如下文更詳細(xì)所述，在借助于I階段(靶向)試劑靶向后，治療學(xué)組合物可得以遞送、使用、釋放、活化和/或激發(fā)。所述釋放/活化/激發(fā)可能是對(duì)熱/超聲的暴露的響應(yīng)。
[0075]本文中所用的術(shù)語(yǔ)“治療學(xué)組合物”應(yīng)理解為包括任何產(chǎn)生生物效應(yīng)并由此具備改變有機(jī)體生理系統(tǒng)能力的組合物?！爸委煂W(xué)組合物”可經(jīng)其自身官能度而具有生物學(xué)活性，或者所述組合物可基于其活化或抑制具有自身生物活性的分子的能力而具有生物學(xué)活性?？梢勒沾斯_(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的治療學(xué)組合物示例包括但不限于:藥物、小分子、核酸(DNA、RNA siRNA等)、蛋白/肽、綴合物、聚合物、聚合物綴合物、糖蛋白、糖蛋白綴合物、氣體、能量、以及它們的組合或衍生物。
[0076]在某些實(shí)施方案中，提供其上具有至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)的試劑，借此每一結(jié)合位點(diǎn)是互補(bǔ)對(duì)(例如但非限制，生物素-抗生物素蛋白、抗體-抗原、受體-配體等)的一方。I階段(靶向)試劑可包含一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)和二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)，而II階段(擴(kuò)增)試劑可包含至少兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，諸如但不限于三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。擴(kuò)增試劑的所述至少兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)可相同或不同。III階段(成像)試劑可包含至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)，諸如但不限于，五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。在該示例中，靶向試劑的一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與靶形成第一結(jié)合復(fù)合體，靶向試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與擴(kuò)增試劑的三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)形成第二結(jié)合復(fù)合體，擴(kuò)增試劑的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與成像試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)形成第三結(jié)合復(fù)合體。在一備選方案中，擴(kuò)增試劑的三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相同，并與祀向試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)以及成像試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)互補(bǔ)。在另一備選方案中，祀向試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與擴(kuò)增試劑的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相同，借此祀向試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)也可與成像試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合形成第三結(jié)合復(fù)合體。
[0077]I階段(靶向)試劑包含所述靶/疾病狀態(tài)所特有的靶向配體；但是，擴(kuò)增和成像試劑(即，II和III階段試劑)可以是通用的。也就是說(shuō)，II和III階段試劑的試劑含量及其上銜接物/結(jié)合位點(diǎn)針對(duì)指定成像模式可以是相同的，且不依賴(lài)于靶/疾病狀態(tài)。II和III階段試劑可與同樣的互補(bǔ)對(duì)連接，而不依賴(lài)于所用的成像模式。此外，II和/或III階段試劑可以是多模態(tài)的，因此含與多重成像模式相關(guān)的組分(即，超聲、MR1、CR等等試劑的組合)。
[0078]在另一備選方案中，可使用多重成像試劑。在這一情況下，可提供具有針對(duì)兩個(gè)或更多個(gè)III階段試劑的結(jié)合位點(diǎn)的II階段試劑；這些結(jié)合位點(diǎn)可以是結(jié)合雙III階段試劑的單一結(jié)合位點(diǎn)，或可基于待使用的不同III階段試劑的數(shù)目提供多個(gè)不同結(jié)合位點(diǎn)。
[0079]1、11和/或III階段試劑僅僅由指定階段所要求的銜接物界定，而不依賴(lài)于它們的內(nèi)容物(content)(參見(jiàn)圖2)。換句話說(shuō),該技術(shù)類(lèi)似于包含輪轂(hub)和連接棍(peg)的結(jié)構(gòu)玩具(tinker toy)。連接棍(即,銜接物)界定出階段；輪轂?zāi)芎魏螙|西。
[0080]上文所述結(jié)合位點(diǎn)可以是對(duì)另一物質(zhì)有結(jié)合親合力并能夠與之形成復(fù)合體、由此提供兩試劑/囊泡間親合力的任何生物分子。例如但非限制，結(jié)合位點(diǎn)可以是肽、蛋白、抗原、抗體、抗體片段、受體、配體、糖綴合物以及它們的組合或衍生物。
[0081]可依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的具體靶位點(diǎn)示例包括但不限于:ICAM-1、P-選擇蛋白、MadCAM-1、VCAM-1卿，針對(duì)炎癥的靶)；α ν β 3整聯(lián)蛋白和VEGFR2(本領(lǐng)域中已知針對(duì)血管發(fā)生的靶);和GP Ilb/IIIa (本領(lǐng)域中已知針對(duì)血栓的靶)?？捎米饕患?jí)結(jié)合位點(diǎn)的示例性抗體列表可見(jiàn)以下參考文獻(xiàn):Paul Carter, Nature Reviews Cancer,Vol.1, pp.118-129 (2001年11月)；其全部?jī)?nèi)容據(jù)此明確地通過(guò)引用并入本文。
[0082]在另一實(shí)施方案中，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思涉及可序貫遞送的藥學(xué)試劑的復(fù)合體，其可用于經(jīng)成像檢測(cè)腔中暴露的靶，其中復(fù)合體在腔中形成。所述復(fù)合體包括附連有多個(gè)II階段(擴(kuò)增)試劑的至少一個(gè)I階段(靶向)試劑，其中所述至少一個(gè)I階段(靶向)試劑與腔中暴露的靶結(jié)合。所述復(fù)合體可進(jìn)一步包含多個(gè)III階段試劑，其中所述多個(gè)III階段試劑中的每一個(gè)包含暴露于其表面上的至少一個(gè)用于與II階段試劑結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)。所述III階段試劑上的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)也可能能夠與至少一個(gè)I階段(靶向)試劑結(jié)合。
[0083]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思還涉及可序貫遞送的可組合制劑。所述制劑包含:第一可給藥組合物，其包含能夠與腔中暴露的靶結(jié)合的I階段(靶向)試劑；第二可給藥組合物，其包含II階段(擴(kuò)增)試劑；和第三可給藥組合物，其包含III階段(成像)試劑。II階段試劑包含對(duì)I階段試劑具有親合力的第一結(jié)構(gòu)部分，和對(duì)III階段試劑具有親合力的第二結(jié)構(gòu)部分。Ι、Π和/或III階段試劑(一或多個(gè))可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的靶向試劑信號(hào)能得以擴(kuò)增。所述結(jié)構(gòu)部分包含前文所述的結(jié)合位點(diǎn)。
[0084]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及增強(qiáng)的受試者機(jī)體影像的生成方法。所述方法包括以下步驟:向受試者機(jī)體給藥上文所述的可序貫遞送的可組合制劑，和生成至少一部分所述機(jī)體的超聲、磁共振、X射線或射線照相影像。
[0085]在上文或下文所述的任一方法中，可序貫遞送的可組合制劑可如下給藥:首先，向所述機(jī)體給藥第一可給藥組合物，隨后向所述機(jī)體給藥第二可給藥組合物，和隨后向所述機(jī)體給藥第三可給藥組合物。在某些實(shí)施方案中，給藥第一可給藥組合物之后，讓機(jī)體醞釀(incubate) —段時(shí)間，以容許I階段(靶向)試劑與腔中暴露的靶結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的I階段試劑。然后，在給藥第二可給藥組合物之后，讓機(jī)體醞釀一段時(shí)間，以容許II階段(擴(kuò)增)試劑與I階段試劑結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的II階段試劑。此外，在給藥第三可給藥組合物之后，讓機(jī)體醞釀一段時(shí)間，以容許III階段試劑的結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的III階段試劑。該方法中也可包括第一、第二和/或第三可給藥組合物的額外給藥(一或多次)。[0086]通過(guò)使用措辭“實(shí)質(zhì)性清除”、“實(shí)質(zhì)上消除”和“實(shí)質(zhì)性洗出”，應(yīng)理解，在給藥另一試劑之前，無(wú)須從腔/血流移除一試劑的全部。相反地，這些措辭簡(jiǎn)明地表明已從腔/血流中清除/洗出足夠數(shù)目的頭一試劑，從而可見(jiàn)足夠的對(duì)比度和提供足夠的信噪比。
[0087]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及可用于使腔中的靶成像的試劑盒。所述試劑盒可包括上文所述的可序貫遞送的可組合制劑。此外，試劑盒可進(jìn)一步包括軟件模塊，其分析由檢測(cè)III階段試劑的影像遞送裝置所生成的信息。
[0088]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及由與腔中的靶結(jié)合的III階段(成像)試劑所生成的信號(hào)的檢測(cè)裝置。該裝置可包括計(jì)算系統(tǒng)，以及檢測(cè)III階段試劑的影像遞送裝置。計(jì)算系統(tǒng)包含應(yīng)用模塊和處理單元；所述應(yīng)用模塊包含軟件模塊，其分析由影像遞送裝置所生成的信息，所述處理單元配置成執(zhí)行軟件模塊。由影像遞送裝置檢測(cè)的III階段試劑與至少一個(gè)I階段(靶向)試劑以及多個(gè)II階段試劑復(fù)合，所述至少一個(gè)I階段(靶向)試劑與靶結(jié)合，所述多個(gè)II階段試劑與I階段(靶向)試劑結(jié)合。在某些實(shí)施方案中，影像遞送裝置還可充當(dāng)能量遞送裝置，其向腔中與I/II/III階段試劑復(fù)合體結(jié)合的靶遞送定向能量。在特別的實(shí)施方案中，影像/能量遞送裝置可以是超聲影像/能量遞送裝置。能量遞送裝置還可用作聲輻射力來(lái)源。
[0089]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思還涉及提高成像模式所檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度的方法。該方法包括:向受試者給藥有效量的I階段(靶向)試劑，其中I階段試劑穿越受試者系統(tǒng)并與受試者腔(即，腔壁)表面上暴露的靶結(jié)合。然后，向受試者給藥有效量的II階段(擴(kuò)增)試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶結(jié)合的I階段試劑結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合。然后，經(jīng)成像模式檢測(cè)III階段試劑所產(chǎn)生的信號(hào)。
[0090]在上文和下文所述的某些方法的實(shí)施方案中，可能希望的是，在給藥一試劑(gp，靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑)之后，所述方法包括容許未結(jié)合的試劑從腔(即，血流)中實(shí)質(zhì)性清除的步驟，然后再給藥后一試劑。
[0091]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及診斷受試者中病況/病癥的方法。在該方法中，向受試者給藥有效量的上文所述I階段(靶向)試劑；1階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，并且，I階段試劑穿越受試者系統(tǒng)并與受試者腔表面上暴露的任意靶結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的上文所述II階段(擴(kuò)增)試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的上文所述III階段(成像)試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合。然后，經(jīng)一或多種成像模式檢測(cè)由ι、π和/或III階段試劑(一或多個(gè))產(chǎn)生的任何信號(hào)，如果檢測(cè)出信號(hào)則確定受試者具有所述病況/病癥。
[0092]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及治療受試者中病況/病癥的方法。在所述方法中，向受試者給藥有效量的上文所述I階段試劑階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，并且，I階段試劑穿越受試者系統(tǒng)并與受試者腔表面上暴露的任意靶結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的上文所述II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的III階段(治療)試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合。ι、π和III階段試劑的至少其一包括可有效治療所述病況/病癥的治療試劑。一旦形成復(fù)合體，
1、11和/或III階段試劑中存在的所述治療試劑可有效治療所述病況/病癥?；蛘?，治療試劑可在與靶位點(diǎn)結(jié)合后激活，借此活化的治療試劑有效治療所述病況/病癥。
[0093]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及向靶位點(diǎn)遞送治療學(xué)組合物的方法。在所述方法中，向受試者給藥有效量的上文所述I階段試劑階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，并且，I階段試劑穿越系統(tǒng)并與受試者腔表面上暴露的任意靶結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的上文所述II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由III階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合。治療學(xué)組合物摻入/包封于1、II和III階段試劑的至少其一之內(nèi)。在一個(gè)實(shí)施方案中，一旦與靶位點(diǎn)結(jié)合，治療學(xué)組合物就遞送給了靶位點(diǎn)。或者，所述方法可進(jìn)一步包括以下步驟:激活Ι、π和/或III階段試劑，以釋放所述治療學(xué)組合物并因此將組合物遞送給靶位點(diǎn)。
[0094]治療學(xué)應(yīng)用示例包括但不限于:過(guò)熱；將組織加熱幾度(這可提高藥物活性和/或提高血流量而無(wú)永久性組織損傷)；為治療學(xué)效益，將組織加熱至誘發(fā)永久性組織損傷的較聞水平；提聞空化和/或試劑潰滅；組織消融；誘導(dǎo)聲致穿孔；提聞藥物和基因遞送等。另一治療學(xué)應(yīng)用包括誘導(dǎo)血管化組織的局部缺血/壞死，如下文進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0095]上文所述的任一成像方法可進(jìn)一步包括以下步驟:向受試者給藥有效量的治療試劑，其中所述治療試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑和III階段試劑的至少其一結(jié)合。此外，上文所述的任一成像方法可進(jìn)一步包括以下步驟:向受試者給藥有效量的第二 III階段試劑，其中所述第二 III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑和III階段試劑的至少其一結(jié)合。
[0096]上文或下文所述任一方法中所用的任一試劑可包含氣體(B卩，回波發(fā)生性脂質(zhì)體)，因此聲輻射力可通過(guò)推使一或多類(lèi)試劑(一或多個(gè))靠著腔內(nèi)表面來(lái)提高靶向效率。例如但非限制，當(dāng)I階段試劑包含氣體時(shí)，超聲暴露推使I階段試劑靠著腔壁，提高I階段試劑與靶位點(diǎn)相互作用的可能性。任選地，當(dāng)II階段試劑包含氣體時(shí)，超聲暴露推使II階段試劑靠著腔壁，提高II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑相互作用的可能性。
[0097]在上文或下文所述的任一方法中，靶位點(diǎn)可暴露于血腦屏障、卵巢、胰腺、腎、肝、它們?nèi)我粋€(gè)的癌性組織和/或它們的供給組織的至少其一的表面上。靶位點(diǎn)可以是疾病特異性的。
[0098]上文或下文所述的任一方法中，其中使用的成像模式可選自:超聲、核磁共振成像(MRI)、計(jì)算機(jī)化斷層成像(CO、雙源CT (灌注成像)、彌散張量成像(DTI)、延遲增強(qiáng)成像、X射線和熒光透視(對(duì)比熒光透視)成像、計(jì)算機(jī)化SPECT、PET或PET-CT成像以及分子成像(放射性藥物)。
[0099]盡管在本文中描述了將1、II和/或III階段試劑中所布置的氣體與超聲一起使用，但應(yīng)理解，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思還包括將1、II和/或III階段試劑中所布置的其它組成物與其它成像/治療學(xué)模式一起使用。例如但非限制，可將釓螯合物衍生物(諸如但不限于，禮-二亞乙基-三胺-五乙酸(例如參見(jiàn),Accardo等人,2009))與MRI模式一起使用，而可將放射性核素與X射線模式(即，放射療法)一起使用。
[0100]此外，任一 1、11和/或III階段試劑可以是多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體一也就是說(shuō)，所述試劑(一或多個(gè))包含氣體以致所述試劑(一或多個(gè))對(duì)聲輻射力敏感，并且還可包含如上文所述的第二成像模式 (即，MR1、CT、DT1、PET等)。因此，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思的另一實(shí)施方案包括使用包含多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體/微氣泡/囊泡的I階段(靶向)試劑。所述I階段試劑可在存在或不存在擴(kuò)增的情況下使用。
[0101]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思還涉及可序貫遞送的藥學(xué)試劑的復(fù)合體，其可用于經(jīng)成像檢測(cè)腔中暴露的靶，其中復(fù)合體在腔中形成。復(fù)合體包含至少一個(gè)如上文所述的I階段試劑和多個(gè)如上文所述的III階段(成像)試劑。多個(gè)III階段試劑中的每一個(gè)與至少一個(gè)I階段試劑結(jié)合，其中I和/或III階段試劑可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的復(fù)合體能得以檢測(cè)。
[0102]此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及靶向由成像模式可視化的信號(hào)的方法。在所述方法中，向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔表面上暴露的靶位點(diǎn)結(jié)合。隨后，向受試者給藥有效量的III階段(成像)試劑，借此III階段試劑與I階段試劑結(jié)合。然后，由成像模式檢測(cè)I和/或III階段試劑(一或多個(gè))所產(chǎn)生的信號(hào)。
[0103]在本文中所述的任一方法中，在腔中形成的復(fù)合體不實(shí)質(zhì)性阻塞腔中流體流動(dòng)(即，血流(blow flow))。這通過(guò)如下方式實(shí)現(xiàn):通過(guò)序貫添加試劑、通過(guò)限制方法中所用各個(gè)試劑的尺寸(結(jié)構(gòu)尺寸)和/或通過(guò)限制所用II階段試劑的量，從而由此形成的復(fù)合體的尺寸受到限制且因此不超出腔的尺寸。例如，可提供具有足夠小的直徑的靶向/擴(kuò)增/成像試劑，由此三個(gè)直徑的總和不超出毛細(xì)管直徑(即，< 10 μ ;Dayton，2002)。
[0104]或者，在本文中所述的任一方法中，在腔中形成的復(fù)合體可實(shí)質(zhì)性阻塞受試者腔中靶位點(diǎn)處的血流，由此對(duì)受試者的靶向部分(即，組織、器官、機(jī)體部分等)引起局部缺血。因此，此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思進(jìn)一步涉及在受試者靶位點(diǎn)處產(chǎn)生血管化組織局部缺血和壞死的方法，如上文所述。在所述方法中，如上文所述給藥1、II和III階段試劑。然后，給藥多重劑量的II和/或III階段試劑(一或多個(gè))，直至靶位點(diǎn)處的腔被實(shí)質(zhì)性阻塞。因此，對(duì)于隨時(shí)間進(jìn)行序貫添加的情況，III階段試劑還可充當(dāng)“擴(kuò)增試劑”用于阻塞腔。
[0105]在腔中形成的復(fù)合體可包括本文中所述試劑的任意組合(即，靶向和成像試劑；革巴向、擴(kuò)增和成像試劑；祀向、擴(kuò)增和治療試劑)。此外，當(dāng)在腔中形成的復(fù)合體包括靶向、擴(kuò)增和成像試劑時(shí)，可向受試者進(jìn)一步給藥治療試劑(即，包括包封在其中的化學(xué)治療或其它細(xì)胞毒性物質(zhì))以致該治療試劑與成像試劑結(jié)合并向缺血性受損組織遞送細(xì)胞毒性物質(zhì)，以提供額外的殺滅機(jī)制。任選地，可在給藥治療試劑之前從復(fù)合體上移除成像試劑，借此后續(xù)給藥的治療試劑會(huì)與擴(kuò)增試劑結(jié)合并隨后向缺血性受損組織遞送細(xì)胞毒性物質(zhì)，以提供額外的殺滅機(jī)制。
[0106]在成像后、給藥后續(xù)試劑(諸如但不限于，另一成像試劑或治療試劑)之前從復(fù)合體上移除III階段試劑的這同一技術(shù)可在上文所述或在此設(shè)想到的任一方法中使用。用這種方式，由I階段試劑和一或多個(gè)II階段試劑所形成的復(fù)合體形成基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)/支架/橋狀網(wǎng)絡(luò)，基于它可實(shí)現(xiàn)多重應(yīng)用(諸如但不限于，多重成像技術(shù)或者成像與治療學(xué)技術(shù)的組合)。任選地，基礎(chǔ)結(jié)構(gòu)還容許隨著時(shí)間推移進(jìn)行多重施用。以此方式，支架能夠根據(jù)需要來(lái)重復(fù)使用。
[0107]在另一備選方案中，可能需要的是，移除III階段試劑和II階段試劑(一或多個(gè))，僅留下I階段試劑，以形成能重復(fù)使用的支架，用于多重應(yīng)用或多重施用。
[0108]本文中所述的任一方法還可包括在流程(成像和/或治療流程)施行后降解復(fù)合體的至少一部分(或全部復(fù)合體)的步驟。降解可能涉及到使用能量、熱、化學(xué)方法(即，以獨(dú)特方式還原二硫鍵)、pH變化、添加競(jìng)爭(zhēng)試劑(Ab)等。以此方式，當(dāng)需要時(shí)可破壞靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑中的一或多個(gè)(諸如但不限于，通過(guò)超聲)；此外，當(dāng)不再需要復(fù)合體時(shí)可破壞所有試劑。例如但非限制，如果間隔物是具有由酶裂解的氨基酸序列的肽，則裂解所述間隔物，令復(fù)合體降解。酶可附連于所述介質(zhì)之一上，且可能需要輔助因子或熱進(jìn)行活化。
[0109]如下文更詳細(xì)描述，通過(guò)在囊泡構(gòu)架上提供多重(B卩，至少兩個(gè))附連/結(jié)合位點(diǎn)或點(diǎn)，制造依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的I階段(靶向)試劑。對(duì)于I階段(靶向)試劑，用于與靶結(jié)合的一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)經(jīng)銜接物附連于囊泡構(gòu)架上，而用于與II階段試劑結(jié)合的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)經(jīng)另一銜接物附連于囊泡構(gòu)架上。
[0110]通過(guò)在囊泡構(gòu)架上提供多重附連點(diǎn)(B卩，多重結(jié)合位點(diǎn))，制造依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的II階段(擴(kuò)增)試劑。多重附連點(diǎn)的使用將實(shí)現(xiàn):(1)用于多模態(tài)成像的多重附連點(diǎn)；(2)多重施用(隨著時(shí)間推移);和/或(3)多重應(yīng)用(諸如但不限于，成像和治療應(yīng)用)?？商峁┚哂腥?jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)的擴(kuò)增試劑(如上文所述)，并且其可進(jìn)一步具有額外的結(jié)合位點(diǎn)，以容許與額外的成像/治療試劑(即，除與四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相互作用的成像/治療試劑外)的相互作用。
[0111]在一個(gè)實(shí)施方案中，可通過(guò)使用銜接物使三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連。如下文更詳細(xì)描述，利用銜接物混合物來(lái)制得擴(kuò)增囊泡上的多個(gè)附連點(diǎn)。但是，應(yīng)理解，對(duì)于三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與擴(kuò)增試劑的附連來(lái)說(shuō) ，銜接物不是必需的。[0112]通過(guò)在囊泡構(gòu)架上提供至少一個(gè)附連點(diǎn)，制造依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的成像/治療試劑。所述至少一個(gè)附連點(diǎn)可經(jīng)銜接物附連于囊泡構(gòu)架上；但是，應(yīng)理解，對(duì)于五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與成像/治療試劑的附連來(lái)說(shuō)，銜接物不是必需的。
[0113]依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑的制造可從提供微氣泡、脂質(zhì)體或其它類(lèi)型囊泡作為構(gòu)架開(kāi)始，然后向其添加結(jié)合位點(diǎn)(即，銜接物/復(fù)合試劑(complexing agent))。可用于祀向/擴(kuò)增/成像/治療試劑的一般性囊泡構(gòu)架示例在本領(lǐng)域中眾所周知用于成像/治療應(yīng)用(所述現(xiàn)有技術(shù)囊泡是在不存在用于制造本發(fā)明復(fù)合體支架的靶向試劑和/或銜接物/復(fù)合試劑的情況下產(chǎn)生的)。具體示例包括但不限于以下例子。US專(zhuān)利5，123,414 (1992年6月23日授權(quán)給Unger)公開(kāi)了適合作為超聲造影劑的脂質(zhì)體，所述試劑含各種類(lèi)型的媒介，包括氣體、氣態(tài)前體和全氟化碳，其通過(guò)pH、溫度和/或壓力來(lái)激活。Unger等人(2004)公開(kāi)了具有診斷和治療應(yīng)用(包括能夠經(jīng)超聲能量空化，以用于位點(diǎn)特異性地局部遞送生物活性材料和用于治療血管血栓形成)的微氣泡，所述微氣泡含有截留于脂質(zhì)包衣內(nèi)的全氟化碳?xì)怏w；該參考文獻(xiàn)還公開(kāi)了，血腦屏障(BBB)可利用超聲可逆地開(kāi)啟，超聲還使大腦微脈管系統(tǒng)內(nèi)的微氣泡空化，以向腦遞送低和高分子量治療劑。Klibanov (2006)的綜述公開(kāi)了，通過(guò)在微氣泡表面上提供靶向配體，將微氣泡造影劑用于靶向超聲成像和超聲輔助藥物遞送應(yīng)用。Hernot和Klibanov (2008)描述了由超聲觸發(fā)的藥物和基因遞送中的微氣泡，其中微氣泡增強(qiáng)靶組織中超聲能量沉積，并充當(dāng)空化核(用于提高細(xì)胞內(nèi)藥物遞送)。Ferrante等人(2009)描述了全氟化碳填充的磷脂微氣泡造影劑，通過(guò)使聚乙二醇-生物素-鏈霉抗生物素蛋白橋與mAb MVCAM.A和/或sialyl Lewisx聚合物(PAA_sLex)偶聯(lián),所述造影劑革巴向粘著分子P-選擇蛋白和VCAM-1。Liu等人(2006)公開(kāi)了包封的超聲微氣泡以及它們?cè)谒幬镞f送或基因治療中的應(yīng)用，所述微氣泡表面附連有靶向配體。Suzuki等人(2007和2008)描述了含全氟丙烷的泡泡脂質(zhì)體(其比常規(guī)微氣泡直徑小)以及它們?cè)诨蛑委熀统暺茐募夹g(shù)中的用途。Tinkov等人(2009)公開(kāi) 了用作超聲觸發(fā)藥物載體的微氣泡的制造和藥物加載方法。Jong等人(2009)描述了用以表征超聲造影劑(UCA)的不同策略，包括聲學(xué)和光學(xué)方法在內(nèi)。SchiOeder等人(2009)描述了超聲與脂質(zhì)體的相互作用，以及利用低頻超聲(LFUS)自脂質(zhì)體釋放藥物的機(jī)械原理，包括脂質(zhì)體脂質(zhì)組成的作用和物理化學(xué)特性及脂質(zhì)體藥物釋放方面的LFUS參數(shù)，以及聲空化的用途。Huang (2008)公開(kāi)了借助于脂質(zhì)體進(jìn)行的經(jīng)超聲控制的藥物釋放和經(jīng)超聲增強(qiáng)的藥物遞送，所述脂質(zhì)體含有截留于其中的氣體和/或藥物。上述每一專(zhuān)利和公開(kāi)文件的全部?jī)?nèi)容據(jù)此明確地通過(guò)引用并入本文。
[0114]此外，可依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的可市購(gòu)超聲造影劑包括但不限
于:S0NAZ0ID?(GE Healthcare, Oslo, Norway)-參見(jiàn) Otani 等人(2009)有關(guān)向其上
附連抗體的公開(kāi)內(nèi)容；DEFINITY? (Bristol-Myers Squibb Medical Imaging, Billerica,MA);和0PTIS0N ?(GE Healthcare, Oslo, Norway)?此外，可依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的多種超聲造影劑由Targeson, Inc.(San Diego, CA)制造,包括但不限于，TARGESTAR-B?,其為一種生物素化微氣泡造影劑，用于生物素化配體的綴合。
[0115]一旦提供了囊泡構(gòu)架，通過(guò)向其上附連結(jié)合位點(diǎn)，繼續(xù)進(jìn)行所述制造方法；可通過(guò)利用銜接物，而使結(jié)合位點(diǎn)得以附連。每一銜接物包含復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)中的一個(gè)成員。在I階段試劑/11階段試劑的結(jié)合中，I階段(靶向)試劑包含互補(bǔ)對(duì)的第一成員(即，二級(jí)結(jié)合位點(diǎn))，而II階段(擴(kuò)增)試劑包含所述互補(bǔ)對(duì)的第二成員(即，三級(jí)結(jié)合位點(diǎn))。在擴(kuò)增試劑/成像(或治療)試劑的結(jié)合中，擴(kuò)增試劑包含另一互補(bǔ)對(duì)的第一成員(即，四級(jí)結(jié)合位點(diǎn))，而成像(或治療)試劑包含所述互補(bǔ)對(duì)的第二成員(即，五級(jí)結(jié)合位點(diǎn))。
[0116]依照此公開(kāi)并要求權(quán)益的發(fā)明構(gòu)思使用的銜接物在兩末端功能化。當(dāng)兩末端用同一反應(yīng)性結(jié)構(gòu)部分活化時(shí)，銜接物稱(chēng)為“同雙功能”銜接物，而如果存在的官能團(tuán)不同，則銜接物稱(chēng)為“異雙功能”銜接物。兩末端之一使銜接物附連于囊泡構(gòu)架上，而另一末端包含復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)的一個(gè)成員。當(dāng)利用同雙功能銜接物時(shí)，在銜接物兩端使用同一類(lèi)接頭，由此使銜接物連接至試劑的囊泡構(gòu)架，并與復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)的另一成員相互作用，以使靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑與另一靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑結(jié)合。同雙功能銜接物的非限制性示例是抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白(其很容易制造和/或可市購(gòu))。許多銜接物可能顯現(xiàn)多重結(jié)合位點(diǎn)。未經(jīng)消化的抗體是雙齒的；抗生物素蛋白、鏈霉抗生物素蛋白和中性抗生物素蛋白(neutravidin)各提供至多4個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。多齒分子可代替同雙功能銜接物使用。
[0117]當(dāng)利用異雙功能銜接物時(shí)，第一類(lèi)接頭用于使銜接物連接到試劑的囊泡構(gòu)架上，第二不同類(lèi)接頭用于與靶位點(diǎn)和/或復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)的另一成員相互作用，以使靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑與另一靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑結(jié)合。異雙功能銜接物的非限制性示例是抗生物素蛋白-PEG-抗體?？赏ㄟ^(guò)混合適當(dāng)比例的同和異雙功能銜接試劑，制備靶向/擴(kuò)增/成像/治療試劑，其中兩銜接試劑分享共同的接頭類(lèi)型，其中所述共同的接頭類(lèi)型是附連于基礎(chǔ)囊泡上的銜接物的互補(bǔ)對(duì)。然后，將混合物加入基礎(chǔ)囊泡中，以得到所需要的多重附連點(diǎn)。
[0118]銜接物可進(jìn)一步包含栓系物(tether)或擴(kuò)展物(extender)分子,諸如但不限于，肽或PEG。各個(gè)試劑的尺寸應(yīng)足以經(jīng)由銜接物最大限度地拴系兩試劑。拴系物/銜接物應(yīng)長(zhǎng)到足以使試劑結(jié)合達(dá)到最大限 度的程度，但不長(zhǎng)到出現(xiàn)顯著拴系物/銜接物纏結(jié)的程度。
[0119]在I階段(靶向)試劑的制造中，使用異雙功能銜接物為I階段試劑附連上一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。例如但非限制，可提供抗生物素蛋白化脂質(zhì)體/微氣泡(其很容易制造和/或可市購(gòu))，并使之與生物素-PEG-抗體相互作用，其中抗體可以是任何可市購(gòu)或以另外方式為本領(lǐng)域已知的抗體?？股锼氐鞍谆遗輼?gòu)架-生物素-PEG-的前體提供一通用前體，其可與任何結(jié)合分子一起使用以形成任何所希望的I階段試劑。例如，可提供所述前體，然后可將針對(duì)不同類(lèi)型病癥/疾病/癌的不同抗體附連其上。此外，可將多重抗體/結(jié)合分子用于一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。
[0120]然后，可使用異雙功能或同雙功能銜接物來(lái)使二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)(用于與擴(kuò)增試劑結(jié)合)附連于囊泡構(gòu)架上。例如但非限制，可使用同雙功能銜接物——生物素-PEG-生物素，其中生物素形成二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)并因此能與包含生物素化脂質(zhì)體/微氣泡的擴(kuò)增試劑相互作用，所述生物素化脂質(zhì)體/微氣泡上附連有抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白銜接物(即，抗生物素蛋白形成與生物素二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相互作用的三級(jí)結(jié)合位點(diǎn))。
[0121]在II階段(擴(kuò)增)試劑的制造中，可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法使三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連于囊泡構(gòu)架上。例如，II階段試劑可只是包含生物素化微氣泡，其中II階段試劑上的生物素包含三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)并與作為二級(jí)和五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)的抗生物素蛋白相互作用。此外，II階段試劑可包含附連于囊泡構(gòu)架上的額外的結(jié)合位點(diǎn)，其中所述額外的結(jié)合位點(diǎn)使囊泡變得多功能并因此容許多模態(tài)成像、多重施用和/或多重應(yīng)用(成像和/或治療)。[0122]在II階段試劑的另一制造方法中，可使用同雙功能或異雙功能銜接物來(lái)使三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連于囊泡構(gòu)架上，并可使用至少一個(gè)額外的異雙功能銜接物來(lái)使四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連于囊泡構(gòu)架上。此外，II階段試劑可包含額外的結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)經(jīng)由異雙功能銜接物附連于囊泡構(gòu)架上。這些額外的結(jié)合位點(diǎn)使囊泡變得多功能并因此容許多模態(tài)成像、多重施用和/或多重應(yīng)用(成像和/或治療)。例如但非限制，II階段試劑可包含生物素化脂質(zhì)體/微氣泡，所述生物素化脂質(zhì)體/微氣泡上附連有抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白同雙功能銜接物以形成三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)(其與I階段試劑的生物素二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相互作用)，II階段試劑進(jìn)一步包含異雙功能銜接物，諸如但不限于抗生物素蛋白-PEG-生物素，其中該生物素形成與III階段試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相互作用的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。此外，不與I階段試劑結(jié)合的附連于II階段試劑上的任何游離抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白銜接物可進(jìn)一步作為額外的結(jié)合位點(diǎn)用于俘獲第二成像/治療試劑。
[0123]在III階段試劑的制造中，可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法使五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連于囊泡構(gòu)架上。例如但非限制，III階段試劑可只是包含生物素化微氣泡，其中III階段試劑上的生物素(即，五級(jí)結(jié)合位點(diǎn))與附連于II階段試劑上的抗生物素蛋白(即，四級(jí)結(jié)合位點(diǎn))相互作用。
[0124]在III階段試劑的另一制造方法中，可使用同雙功能或異雙功能銜接物來(lái)使五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)附連于囊泡構(gòu)架上。例如但非限制，可使用同雙功能銜接物一抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白，其中抗生物素蛋白形成五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)并因此能與包含生物素化脂質(zhì)體/微氣泡的II階段試劑相互作用(即，生物素形成與抗生物素蛋白五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相互作用的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn))。
[0125]此外，III階段試劑可進(jìn)一步包含附連于囊泡構(gòu)架上的額外的結(jié)合位點(diǎn)。這些額外的結(jié)合位點(diǎn)可用于容許額外的試劑與之結(jié)合(即，另一成像試劑或治療試劑)。例如但非限制，第一成像試劑(超聲造影劑)可包含額外的抗熒光素抗體附連于其上的結(jié)合位點(diǎn)。該第一成像試劑可與第二成像試劑一起使用，用于MRI檢測(cè)，其中第二成像試劑在其表面上帶有熒光素?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法使這些額外的結(jié)合位點(diǎn)附連，包括但不限于，借助于異雙功能銜接物進(jìn)行附連。
實(shí)施例
[0126]下文提供實(shí)施例。但是，應(yīng)理解，本發(fā)明的應(yīng)用不局限于這些特定試驗(yàn)、結(jié)果和實(shí)驗(yàn)室方法。相反地，實(shí)施例只不過(guò)是作為多種實(shí)施方案之一，且意在是示例性而非窮舉性的。
[0127]實(shí)施例1:1階段試劑/11階段試劑/III階段試劑復(fù)合體的活體外形成。
[0128]在該實(shí)施例中，所提議的活體外試劑關(guān)鍵原材料(CRM)是熒光素化BSA和2H1 (熒光素抗體)。通過(guò)使BSA突光素化和隨后使突光素化BSA與聚苯乙烯(pH 8,碳酸氫鹽緩沖液(bicarb buffer))結(jié)合,制得聚苯乙烯結(jié)合表面。突光素化BSA充當(dāng)I階段(祀向)試劑的一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)的革巴。
[0129]制備I階段(祀向)試劑:獲得可市購(gòu)生物素化微氣泡(即，靶向試劑，TargestarB,獲自Targeson, Inc.，San Diego, CA)和2H1抗體(其與突光素化BSA結(jié)合)?？股锼氐鞍?PEG-2H1 (即，靶向試劑上的一級(jí)結(jié)合位點(diǎn))由異雙功能PEG制得，而抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白(B卩，靶向試劑上的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn))由同雙功能PEG制得。使抗生物素蛋白-PEG-2H1和抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白與生物素化微氣泡反應(yīng)，以分別形成I階段(靶向)試劑的一級(jí)和二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。
[0130]制備II階段(擴(kuò)增)試劑:在本實(shí)施例中，可市購(gòu)生物素化微氣泡充當(dāng)II階段試劑。生物素化位點(diǎn)充當(dāng)II階段試劑的三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。
[0131]制備III階段(成像)試劑:提供可市購(gòu)生物素化微氣泡，并使之與抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白反應(yīng)，以形成III階段試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)。
[0132]形成I階段(祀向)試劑/靶復(fù)合體:使I階段(靶向)試劑與聚苯乙烯結(jié)合表面反應(yīng)，靶向微氣泡上的抗生物素蛋白-PEG-2H1與聚苯乙烯結(jié)合表面上的熒光素化BSA結(jié)合。然后，洗滌聚苯乙烯結(jié)合表面以移除任何未結(jié)合的微氣泡。如有需要，在此時(shí)測(cè)量結(jié)合和超聲效果。
[0133]形成擴(kuò)增復(fù)合體:使II階段(擴(kuò)增)試劑與結(jié)合有I階段(祀向)試劑的聚苯乙烯結(jié)合表面反應(yīng)，II階段(擴(kuò)增)試劑上的生物素化位點(diǎn)(即，三級(jí)結(jié)合位點(diǎn))與I階段(靶向)試劑上的抗生物素蛋白-PEG-抗生物素蛋白(即，二級(jí)結(jié)合位點(diǎn))相互作用，由此II階段(擴(kuò)增)試劑與已與聚苯乙烯結(jié)合表面結(jié)合的I階段(靶向)試劑結(jié)合。然后，洗滌結(jié)合表面以移除任何未結(jié)合的生物素化微氣泡(即，II階段(擴(kuò)增)試劑)。如有需要，在此時(shí)測(cè)量結(jié)合和超聲效果。
[0134]形成成像復(fù)合體:使III階段試劑與結(jié)合有I/II階段試劑的聚苯乙烯結(jié)合表面反應(yīng)，III階段試劑上的抗生物素蛋白(即，五級(jí)結(jié)合位點(diǎn))與II階段(擴(kuò)增)試劑上的生物素化位點(diǎn)(即，四級(jí)結(jié)合位點(diǎn))相互作用。由此III階段試劑與II階段(擴(kuò)增)試劑結(jié)合，其中所述II階段(擴(kuò)增)試劑已與I階段(祀向)試劑結(jié)合，所述I階段(祀向)試劑已與聚苯乙烯結(jié)合表面結(jié)合。然后，洗滌結(jié)合表面以移除任何未結(jié)合的微氣泡(即，成像試劑)。
[0135]在此時(shí)測(cè)量結(jié)合和超聲效果，以證實(shí)超聲造影劑信號(hào)(CPS)的增強(qiáng)，以及驗(yàn)證活體外氣泡加熱計(jì)算結(jié)果以證明氣泡聚集未受影響。
[0136]此外，用光學(xué)顯微術(shù)研究氣泡聚集，以證實(shí)所述三個(gè)階段的結(jié)合。
[0137]實(shí)施例2:靶向/成像試劑復(fù)合體的活體內(nèi)超聲應(yīng)用
制備祀向組分:首先，抗生物素蛋白化單層脂質(zhì)體制劑根據(jù)Szoka和Papahadjopoulos(1978)所述程序制得，區(qū)別之處在于將磷脂抗生物素蛋白化。生物素-PEG3tl-抗體由獲自Thermo-Fisher的異雙功能交聯(lián)劑制得。此例中的抗體可采自以下文獻(xiàn)提供的列表=NatureReviews Cancer, Vol.1, pp.118-129 (2001 年 11 月)。生物素-PEG3tl-生物素由獲自Thermo-Fisher的同雙功能交聯(lián)劑制得。將生物素-PEG3tl-生物素和生物素-PEG3tl-抗體與抗生物素蛋白化單層脂質(zhì)體混合，以制得靶向試劑。
[0138]制備成像組分:使用可市購(gòu)生物素化微氣泡?？股锼氐鞍?PEG3tl-抗生物素蛋白由獲自Thermo-Fisher的同雙功能交聯(lián)劑制得。將生物素化微氣泡與抗生物素蛋白-PEG3tl-抗生物素蛋白混合，以得到成像組分。
[0139]在使用方法中，將靶向組分/脂質(zhì)體制劑注入血流中，讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生靶向以及循環(huán)性游離脂質(zhì)體從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。然后，給患者注射有效量的成像組分，并讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生二級(jí)靶向以及循環(huán)性游離微氣泡從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。隨后進(jìn)行靶向試劑或靶向治療活性的診斷成像。
[0140]實(shí)施例3:祀向/擴(kuò)增/成像試劑復(fù)合體的活體內(nèi)超聲應(yīng)用
制備IE向組分:首先，生物素化單層脂質(zhì)體制劑根據(jù)Szoka和Papahadjopoulos( 1978)所述程序制得。抗生物素蛋白-PEG3tl-抗體由獲自Thermo-Fisher的異雙功能交聯(lián)劑制得。此例中的抗體可采自以下文獻(xiàn)提供的列表:Nature Reviews Cancer, Vol.1, pp.118-129(2001年11月)?？股锼氐鞍?PEG3tl-抗生物素蛋白由獲自Thermo-Fisher的同雙功能交聯(lián)劑制得。將抗生物素蛋白-PEG3tl-抗生物素蛋白和抗生物素蛋白-PEG3tl-抗體與生物素化單層脂質(zhì)體混合，以制得靶向試劑。
[0141]制備擴(kuò)增組分:生物素化單層脂質(zhì)體制劑根據(jù)Szoka和Papahadjopoulos (1978)所述程序制得。
[0142]制備超聲成像組分:使用可市購(gòu)鏈霉抗生物素蛋白超聲成像試劑(Targestar SA,獲自 Targeson, Inc., San Diego, CA)。[0143]在使用方法中，將靶向組分/脂質(zhì)體制劑注入血流中，讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生靶向以及循環(huán)性游離脂質(zhì)體從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。然后，給患者注射有效量的擴(kuò)增組分，并讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生二級(jí)靶向以及循環(huán)性游離囊泡從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。然后，給患者注射有效量的成像組分，并讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生二級(jí)靶向以及循環(huán)性游離囊泡從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。隨后進(jìn)行靶向試劑或靶向治療活性的診斷成像。
[0144]實(shí)施例4:靶向/擴(kuò)增/成像試劑復(fù)合體的活體內(nèi)MRI應(yīng)用
本實(shí)施例以與實(shí)施例3類(lèi)似的方式進(jìn)行，區(qū)別在于用MR成像組分代替超聲成像組分。MR成像組分如下制得:將造影劑截留于生物素化脂質(zhì)體的內(nèi)部含水間隙內(nèi)；造影劑應(yīng)具有高分子量以增強(qiáng)信號(hào)。造影劑示例包括但不限于:大分子釓(III)螯合物諸如樹(shù)狀聚體、線性聚合物、禮富勒烯(gadofullurenes)、禮納米管(gadonanotubes)和大的蛋白(例如參見(jiàn)，Accardo 等人，2009)。
[0145]將親脂性造影劑摻入進(jìn)多層脂質(zhì)體的脂雙層中?？股锼氐鞍?PEG3tl-抗生物素蛋白由獲自Thermo-Fisher的同雙功能交聯(lián)劑制得。將生物素化脂質(zhì)體與抗生物素蛋白-PEG3tl-抗生物素蛋白混合，以得到MR成像組分。
[0146]Gd-DTPA是常見(jiàn)的MRI造影劑。典型劑量是0.17 mmol/kg體重。該分子的分子量為 0.56 kDa，直徑為 10.0 A (Higgins 等人，2006)。
[0147]0.17Χ10-3摩爾/kg X 100 kg/機(jī)體 X 6.022X IO23個(gè)分子/摩爾=1.02X IO23個(gè)分子/機(jī)體。
[0148]假定每一機(jī)體6升血，則在常規(guī)試劑劑量中，將有1.7X IO15個(gè)粒子/μ L血。血構(gòu)成指定組織區(qū)域體積的約10%(5~14%，取決于組織類(lèi)型)，因此一 μ L組織中約有1.7 X IO14個(gè)粒子。
[0149]造影劑分子的表面加載:半徑的球體表面積為4 Jir2。3 ym直徑的球體的表面積為 2.8Xl(Tn Hi2t5Gd-DTPA 分子的橫斷面積為 7.85X1(T19 m2。因此，約 36X IO6 個(gè) Gd-DTPA粒子將會(huì)擬合圍繞著(fit around)每一球體的表面。
[0150]假定I μ L靶向區(qū)域中存在100個(gè)球體，則這將會(huì)提供以全粒子堆積圍繞每一球體的3.6 X IO9個(gè)靶向的Gd-DTPA粒子。這是常規(guī)劑量的約0.002%。
[0151]但是,在University of Wisconsin的一些研究中，產(chǎn)生了每一分子能夠結(jié)合100個(gè)Gd離子的抗體(Glazer等人,2004)。這項(xiàng)工作提及,低達(dá)0.1 μΜ的抗體濃度足以用于活體內(nèi)成像。
[0152]0.1Χ10-6個(gè)分子/升 X IO-6^/μ L X 6.022X IO23個(gè)分子/摩爾=60.2X IO9抗體/μ L — 6.02X IO12 Gd 離子/μ L。
[0153]根據(jù)這項(xiàng)研究,約6Χ IO12 Gd配合物(complexes) / μ L應(yīng)取得MRI影像。這需要在所述假定100個(gè)球體全粒子堆積例基礎(chǔ)上擴(kuò)增超過(guò)1600倍。
[0154]因此，本實(shí)施例利用具有較好對(duì)比度的MRI試劑，以給靶向球體提供更多的靶向Gd-DTPA粒子。在一個(gè)實(shí)施方案中，PEG鏈提供額外的結(jié)合位點(diǎn)，這些額外的結(jié)合位點(diǎn)可大大提高與每一球體結(jié)合的Gd-DTPA粒子數(shù)目。
[0155]造影劑分子的體積加載:半徑r的球體的體積為4/3 π r3。3 μ m直徑球體的體積為 1.4X 1(T17 m3。Gd-DTPA 分子的體積為約 5.28X 1(T28 m3。因此，約 26 X IO9 個(gè) Gd-DTPA 粒子應(yīng)會(huì)擬合于每一球體體積內(nèi)。令這 些分子懸浮或以某種方式束縛以便MRI反應(yīng)達(dá)到最大限度。
[0156]按照革巴向10個(gè)球體/ μ L,將達(dá)到約260X IO9個(gè)Gd配合物(complexes) / μ L,其為MRI成像所需值(6Χ IO12個(gè)復(fù)合體/μ L)的約1/23。擴(kuò)增23倍可達(dá)到MRI檢測(cè)限。更高擴(kuò)增水平可放寬對(duì)須加載到球體上的Gd-DTPA粒子數(shù)目的要求。
[0157]提高祀向球體的體積以便能夠加載更多Gd配合物(complexes),這也會(huì)有所幫助。直徑增加10%將會(huì)導(dǎo)致Gd有效加載能力提高30%。
[0158]結(jié)論:通過(guò)使遞送至一區(qū)域的Gd配合物(complexes)數(shù)目提高到足以檢測(cè)的水平，擴(kuò)增使得靶向MRI對(duì)比成像能得以實(shí)現(xiàn)。擴(kuò)增的靶向MRI造影劑限制于血管腔。
[0159]實(shí)施例5:向機(jī)體內(nèi)定域位點(diǎn)遞送熱以治療疾病狀態(tài)/微恙/癌的方法
提供抗體包被的一組脂質(zhì)體，所述抗體祀向機(jī)體內(nèi)定域位點(diǎn)。該組脂質(zhì)體上還包被有復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)的一個(gè)成員。
[0160]提供一組微氣泡，其中該組微氣泡上包被有復(fù)合試劑互補(bǔ)對(duì)的另一成員。該組微氣泡的每一個(gè)都填充了氣體。
[0161]給患者注射有效量的所述組的脂質(zhì)體，并讓患者帶著所述脂質(zhì)體醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生靶向以及循環(huán)性游離脂質(zhì)體從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。然后，給患者注射有效量的所述組的微氣泡，并讓患者帶著所述微氣泡醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生二級(jí)靶向(即，擴(kuò)增)以及循環(huán)性游離微氣泡從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。
[0162]隨后，向患者一定域部分施加超聲，由此超聲以適當(dāng)?shù)念l率和幅度施加以致聲能被材料所吸收并轉(zhuǎn)化為熱。以此方式，所述定域組織被加熱到發(fā)生壞死而最小限度損傷周邊組織的程度。
[0163]在該方法中，對(duì)氣泡尺寸進(jìn)行選擇以使聲吸收達(dá)到最大限度而不阻斷血流。
[0164]實(shí)施例6:靶向/成像試劑復(fù)合體的活體內(nèi)治療應(yīng)用如實(shí)施例2中那樣制得靶向組分。
[0165]制備用于US和PET應(yīng)用的治療組分:使用可市購(gòu)生物素化微氣泡用于超聲應(yīng)用。使用可市購(gòu)生物素化放射性藥物用于PET應(yīng)用?？股锼氐鞍?PEG3tl-抗生物素蛋白由獲自Thermo-Fisher的同雙功能交聯(lián)劑制得。將生物素化微氣泡與抗生物素蛋白-PEG3tl-抗生物素蛋白混合，以得到治療組分。
[0166]在使用方法中，將靶向組分/脂質(zhì)體制劑注入血流中，讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生靶向以及循環(huán)性游離脂質(zhì)體從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。然后，給患者注射有效量的成像組分，并讓患者帶著所述組分醞釀足夠長(zhǎng)的一段時(shí)間(諸如但不限于，約3~10分鐘)以便發(fā)生二級(jí)靶向以及循環(huán)性游離微氣泡從血流中實(shí)質(zhì)性洗出。二級(jí)靶向游離氣泡活性可用成像模式進(jìn)行監(jiān)控。隨后進(jìn)行靶向試劑和/或祀向治療活性的診斷成像。
[0167]一些常見(jiàn)的 PET 示蹤同位素是 nC、13N、150、18F、64Cu、62Cu、1241、76Br、82Rb 和 68Ga,以及18F0 PET掃描儀的典型靈敏度容許檢測(cè)10_n~10_12 mol/L濃度。本實(shí)施例還預(yù)期具有幾毫米數(shù)量級(jí)的分辨率。
[0168]10-η 摩爾/L X 6.022 X IO23 個(gè)分子 / 摩爾 X KT6L/μ L = 6 X IO6 個(gè)分子 / μ L 假定在I μ L靶向區(qū)域中存在100個(gè)靶向球體，則每一靶向球體中需要約60，000個(gè)同
位素粒子。
[0169]由5 nm厚的磷脂酰膽堿雙層組成的100 nm (0.1 μπι)直徑單層脂質(zhì)體含
【權(quán)利要求】
1.一種可序貫遞送的藥學(xué)試劑的復(fù)合體，其可用于經(jīng)成像檢測(cè)腔中暴露的靶，其中所述復(fù)合體在腔中形成，所述復(fù)合體包含: 至少一個(gè)I階段試劑，其與靶結(jié)合； 多個(gè)II階段試劑； 多個(gè)III階段試劑； 其中所述多個(gè)II階段試劑中的每一個(gè)與至少一個(gè)I階段試劑結(jié)合，且其中所述多個(gè)III階段試劑中的每一個(gè)與至少一個(gè)II階段試劑結(jié)合，且其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少一個(gè)可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的復(fù)合體能得以檢測(cè)。
2.權(quán)利要求1的復(fù)合體，其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少一個(gè)選自囊泡、脂質(zhì)體、回波發(fā)生性脂質(zhì)體、多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體、微氣泡、微氣球、微球體、基質(zhì)粒子、膠束、基于聚集的構(gòu)建體、納米粒子、全氟化碳納米滴以及它們的組合。
3.權(quán)利要求1的復(fù)合體，其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少一個(gè)包含氣體。
4.權(quán)利要求1的復(fù)合體，其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少一個(gè)進(jìn)一步包含摻入/包封于其中的治療學(xué)組合物。
5.權(quán)利要求4的復(fù)合體，其中，在借助于I階段試劑靶向后，治療學(xué)組合物得以遞送、釋放、活化和/或激發(fā)。
6.權(quán)利要求5的復(fù)合體，其中釋放/活化/激發(fā)是對(duì)熱、超聲和化學(xué)方法中至少一種的暴露的響應(yīng)。
7.權(quán)利要求1的復(fù)合體，其中: (a)I階段試劑進(jìn)一步限定為包含一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)和二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)； (b)II階段試劑進(jìn)一步限定為包含三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)； (c)III階段試劑進(jìn)一步限定為包含五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)； (d)其中，I階段試劑的一級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與靶形成第一結(jié)合復(fù)合體，I階段試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與II階段試劑的三級(jí)結(jié)合位點(diǎn)形成第二結(jié)合復(fù)合體，II階段試劑的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與III階段試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)形成第三結(jié)合復(fù)合體。
8.權(quán)利要求7的復(fù)合體，其中下述情形中至少一種: (a)II階段試劑的三級(jí)和四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相同，并與I階段試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)以及III階段試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)互補(bǔ)；和 (b)I階段試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)與II階段試劑的四級(jí)結(jié)合位點(diǎn)相同，借此I階段試劑的二級(jí)結(jié)合位點(diǎn)也可與III階段試劑的五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)結(jié)合以形成第三結(jié)合復(fù)合體。
9.權(quán)利要求8的復(fù)合體，其中一級(jí)、二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)和五級(jí)結(jié)合位點(diǎn)各自選自肽、蛋白、抗原、抗體、抗體片段、受體、配體、糖綴合物以及它們的組合或衍生物。
10.權(quán)利要求1的復(fù)合體，其中II階段試劑與多個(gè)III階段試劑結(jié)合，且其中復(fù)合體進(jìn)一步包含至少第二 III階段試劑。
11.權(quán)利要求10的復(fù)合體，其中所述至少兩個(gè)III階段試劑是相同的。
12.權(quán)利要求10的 復(fù)合體，其中所述至少兩個(gè)III階段試劑是不同的。
13.一種可序貫遞送的藥學(xué)試劑的復(fù)合體，其可用于經(jīng)成像檢測(cè)腔中暴露的靶，其中所述復(fù)合體在腔中形成，所述復(fù)合體包含: 附連有多個(gè)II階段試劑的至少一個(gè)I階段試劑，其中所述至少一個(gè)I階段試劑與腔中暴露的靶結(jié)合。
14.權(quán)利要求13的復(fù)合體，其中III階段試劑上的至少一個(gè)結(jié)合位點(diǎn)也能夠與I階段試劑結(jié)合。
15.—種可序貫遞送的可組合制劑，該制劑包含: 第一可給藥組合物，其包含能夠與腔中暴露的靶結(jié)合的I階段試劑； 第二可給藥組合物，其包含II階段試劑； 第三可給藥組合物，其包含III階段試劑； 其中II階段試劑包含對(duì)I階段試劑具有親合力的第一結(jié)構(gòu)部分，和對(duì)III階段試劑具有親合力的第二結(jié)構(gòu)部分，且其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少其一可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的I階段試劑能得以檢測(cè)。
16.一種生成增強(qiáng)的受試者機(jī)體影像的方法，該方法包括以下步驟: 向所述機(jī)體給藥權(quán)利要求15的可序貫遞送的可組合制劑；和 生成至少一部分所述機(jī)體的超聲、磁共振、X射線或射線照相影像。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述給藥步驟進(jìn)一步限定為: 向所述機(jī)體給藥第一可給藥組合物；和隨后 向所述機(jī)體給藥第二可給藥組合物；和隨后 向所述機(jī)體給藥第三可給藥組合物。
18.權(quán)利要求17的方法，其中所述給藥步驟進(jìn)一步限定為: 向所述機(jī)體給藥第一可給藥組合物； 讓機(jī)體醞釀一段時(shí)間，以容許I階段試劑與腔中暴露的靶結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的I階段試劑； 向所述機(jī)體給藥第二可給藥組合物； 讓機(jī)體醞釀一段時(shí)間，以容許II階段試劑與I階段試劑結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的II階段試劑； 向所述機(jī)體給藥第三可給藥組合物；和 讓機(jī)體醞釀一段時(shí)間，以容許III階段試劑的結(jié)合，以及從腔中實(shí)質(zhì)性清除未結(jié)合的III階段試劑。
19.一種可用于使腔中的靶成像的試劑盒，該試劑盒包含: 第一可給藥組合物，其包含能夠與腔中暴露的靶結(jié)合的I階段試劑； 第二可給藥組合物，其包含II階段試劑； 第三可給藥組合物，其包含III階段試劑； 其中II階段試劑包含對(duì)I階段試劑具有親合力的第一結(jié)構(gòu)部分，和對(duì)III階段試劑具有親合力的第二結(jié)構(gòu)部分，且其中I階段、II階段和III階段試劑中的至少其一可通過(guò)成像模式測(cè)出，由此使得與靶結(jié)合的I階段試劑能得以檢測(cè)。
20.權(quán)利要求19的試劑盒，其進(jìn)一步包含軟件模塊，該軟件模塊分析由檢測(cè)一或多個(gè)I階段、II階段和/或III階段試劑的影像遞送裝置所生成的信息。
21.檢測(cè)與腔中的靶結(jié)合的一或多個(gè)I階段、II階段和/或III階段試劑所生成的信號(hào)的裝置，該裝置包含: 計(jì)算系統(tǒng)，其包含應(yīng)用模塊和處理單元，所述應(yīng)用模塊包含軟件模塊，該軟件模塊分析由影像遞送裝置所生成的信息，且所述處理單元配置成執(zhí)行所述軟件模塊；和 檢測(cè)一或多個(gè)I階段、II階段和/或III階段試劑的影像遞送裝置，其中III階段試劑與至少一個(gè)與靶結(jié)合的I階段試劑以及至少一個(gè)與I階段試劑結(jié)合的II階段試劑復(fù)合。
22.權(quán)利要求21的裝置，其中影像遞送裝置還充當(dāng)能量遞送裝置，其向腔中與I階段試劑/11階段試劑/III階段試劑復(fù)合體結(jié)合的靶遞送定向能量。
23.權(quán)利要求22的裝置，其中影像/能量遞送裝置是超聲影像/能量遞送裝置。
24.一種提高成像模式所檢測(cè)信號(hào)強(qiáng)度的方法，該方法包括以下步驟: 向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔壁表面上暴露的靶結(jié)合； 向受試者給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶結(jié)合的I階段試劑結(jié)合； 向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合；和 經(jīng)成像模式檢測(cè)I階段、II階段和III階段試劑中的至少其一所產(chǎn)生的信號(hào)。
25.—種診斷受試者中病況/病癥的方法，該方法包括以下步驟: 向受試者給藥有效量的I階段你 試劑，其中I階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，且其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔壁表面上暴露的任意IE結(jié)合； 向受試者給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合； 向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合；和 經(jīng)成像模式檢測(cè)由I階段、II階段和III階段試劑中的至少其一產(chǎn)生的任何信號(hào)；和 如果檢測(cè)出信號(hào)則確定受試者具有所述病況/病癥。
26.一種治療受試者中病況/病癥的方法，該方法包括以下步驟: 向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，且其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔壁表面上暴露的革巴結(jié)合; 向受試者給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合；和 向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合，且其中ι、π和III階段試劑中的至少其一包含治療學(xué)組合物。
27.—種向靶位點(diǎn)遞送治療學(xué)組合物的方法，該方法包括以下步驟: 向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，且其中I階段試劑穿越系統(tǒng)并與受試者腔壁表面上暴露的靶結(jié)合； 向受試者給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合；和 向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合，且其中所述1、II和III階段試劑中的至少其一包含摻入于其中的治療學(xué)組合物。
28.一種在受試者中誘導(dǎo)靶向位點(diǎn)處血管化組織的局部缺血和壞死的方法，該方法包括以下步驟: (a)向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑包含結(jié)合位點(diǎn)，該結(jié)合位點(diǎn)與對(duì)所述病況/病癥特異的靶結(jié)合，且其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔壁表面上暴露的任意祀結(jié)合； (b)向受試者給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑結(jié)合； (C)向受試者給藥有效量的III階段試劑，其中III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合；和 (d)重復(fù)步驟(b)和(C)的至少其一，直至靶位點(diǎn)處的腔被實(shí)質(zhì)性阻塞。
29.權(quán)利要求24~28中任一項(xiàng)的方法，其中在給藥有效量的I階段試劑的步驟中，所述I階段試劑包含氣體。
30.權(quán)利要求29的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:在給藥I階段試劑后將受試者暴露于超聲，借此，超聲暴露推使I階段試劑靠著腔壁，并提高I階段試劑與靶位點(diǎn)相互作用的可能性。
31.權(quán)利要求24~30中任一項(xiàng)的方法，其中所述II階段試劑包含氣體。
32.權(quán)利要求31的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:在給藥II階段試劑后將受試者暴露于超聲，借此，超聲暴露推使II階段試劑靠著腔壁，并提高II階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的I階段試劑相互作用的可能性。
33.權(quán)利要求24~32中任一項(xiàng)的方法，其中所述III階段試劑包含氣體。
34.權(quán)利要求33的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:在給藥III階段試劑后將受試者暴露于超聲，借此，超聲暴露推使III階段試劑靠著腔壁，并提高III階段試劑與已與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑及I階段試劑中的至少其一相互作用的可能性。
35.權(quán)利要求24~34中任一項(xiàng)的方法,其中祀位點(diǎn)暴露于血腦屏障、卵巢、胰腺、腎、肝、它們?nèi)我粋€(gè)的癌性組織和/或它們的供給組織的至少其一的表面上。
36.權(quán)利要求35的方法，其中靶位點(diǎn)是疾病特異性的。
37.權(quán)利要求24~36中任一項(xiàng)的方法，其中I階段試劑/11階段試劑/III階段試劑復(fù)合體不實(shí)質(zhì)性阻塞腔中流體流動(dòng)。
38.權(quán)利要求24~37中任一項(xiàng)的方法，其中成像模式選自:超聲、核磁共振成像(MRI)、計(jì)算機(jī)化斷層成像(CO、雙源CT (灌注成像)、彌散張量成像(DTI)、延遲增強(qiáng)成像、X射線和熒光透視(對(duì)比熒光透視)成像、計(jì)算機(jī)化SPECT、PET或PET-CT成像以及分子成像(放射性藥物)。
39.權(quán)利要求24~38中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者是人類(lèi)或獸類(lèi)受試者。
40.權(quán)利要求24~39中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:向受試者給藥有效量的第二 III階段試劑，其中所述第二 III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑和III階段試劑中的至少其一結(jié)合，且其中所述第二 III階段試劑包含成像試劑和治療試劑中的至少其一。
41.權(quán)利要求25或26的方法，其中所述病況/病癥選自卵巢癌、胰腺癌、腎癌、肝癌、炎癥(克羅恩氏病)、血管發(fā)生和血栓形成。
42.權(quán)利要求26的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:激活I(lǐng)II階段試劑以治療所述病況/病癥。
43.權(quán)利要求24~42中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:降解I階段/11階段/III階段復(fù)合體的至少一部分。
44.權(quán)利要求24~43中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟: 從復(fù)合體上移除III階段試劑，由此留下與靶位點(diǎn)附連的I階段試劑/11階段試劑支架； 向受試者給藥有效量的第二 III階段試劑，由此所述第二 III階段試劑與已經(jīng)由I階段試劑與靶位點(diǎn)結(jié)合的II階段試劑結(jié)合。
45 .權(quán)利要求24~43中任一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟: 從復(fù)合體上移除擴(kuò)增和III階段試劑，由此留下與靶位點(diǎn)附連的I階段試劑支架； 向受試者給藥有效量的第二 III階段試劑，由此所述第二 III階段試劑與I階段試劑結(jié)合 ?
46.權(quán)利要求44或45的方法，其中所述第二III階段試劑包含成像試劑和治療試劑中的至少其一。
47.權(quán)利要求46的方法，其中所述第二III階段試劑包含成像試劑，且其中所述方法進(jìn)一步包括以下步驟:經(jīng)第二成像模式檢測(cè)由第二 III階段試劑所產(chǎn)生的任何信號(hào)。
48.一種靶向由成像模式可視化的信號(hào)的方法，該方法包括以下步驟: 向受試者給藥有效量的I階段試劑，其中I階段試劑穿越受試者并與受試者腔上暴露的靶位點(diǎn)結(jié)合；和隨后 給藥有效量的II階段試劑，其中多個(gè)II階段試劑與I階段試劑結(jié)合；和 由成像模式檢測(cè)I階段和II階段試劑中的至少其一所產(chǎn)生的信號(hào)。
49.權(quán)利要求48的方法，其中在給藥有效量的I階段試劑的步驟中，所述I階段試劑包含氣體。
50.權(quán)利要求49的方法，其進(jìn)一步包括以下步驟:在給藥I階段試劑后將受試者暴露于超聲，借此，超聲暴露推使I階段試劑靠著腔壁，并提高I階段試劑與靶位點(diǎn)相互作用的可能性。
51.權(quán)利要求48~50中任一項(xiàng)的方法,其中祀位點(diǎn)暴露于卵巢、胰腺、腎、肝、它們?nèi)我粋€(gè)的癌性組織和/或它們的供給組織的至少其一的表面上。
52.權(quán)利要求51的方法，其中靶位點(diǎn)是疾病特異性的。
53.權(quán)利要求48~52中任一項(xiàng)的方法,其中成像模式選自:超聲、核磁共振成像(MRI)、計(jì)算機(jī)化斷層成像(CO、雙源CT (灌注成像)、彌散張量成像(DTI)、延遲增強(qiáng)成像、X射線和熒光透視(對(duì)比熒光透視)成像、計(jì)算機(jī)化SPECT、PET或PET-CT成像以及分子成像(放射性藥物)。
54.權(quán)利要求48~53中任一項(xiàng)的方法，其中所述受試者是人類(lèi)或獸類(lèi)受試者。
55.一種成像組合物，其在暴露于聲輻射力后具有增強(qiáng)的結(jié)合，所述成像組合物包含與靶結(jié)合的多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體，其中所述多模態(tài)回波發(fā)生性脂質(zhì)體包含氣體和第二成像模式。
56.權(quán)利要求55的成像組合物，其中第二成像模式選自:核磁共振成像(MRI)、計(jì)算機(jī)化斷層成像(CO、雙源CT (灌注成像)、彌散張量成像(DTI)、延遲增強(qiáng)成像、X射線和熒光透視(對(duì)比熒光透視)成像、計(jì)算機(jī)化SPECT、PET或PET-CT成像、分子成像(放射性藥物)以及它們的組合。
57.一種生成受試者機(jī)體影像的方法，該方法包括以下步驟: 向所述機(jī)體給藥權(quán)利要求55或56的成像組合物； 在給藥所述成像組合物后將受試者暴露于超聲，借此，超聲暴露推使成像組合物靠著腔壁，并提高I階段試劑與靶位點(diǎn)相互作用的可能性；和 利用成像組合物的第二成像模式，生成所述機(jī)體至少一部分的影像。
58.一種可用于使腔中的靶成像的試劑盒，該試劑盒包含權(quán)利要求55或56的成像組合物。
【文檔編號(hào)】A61K9/127GK103648484SQ201180055777
【公開(kāi)日】2014年3月19日 申請(qǐng)日期:2011年9月26日 優(yōu)先權(quán)日:2010年9月28日
【發(fā)明者】L.奧彭海默, I.古拉卡爾 申請(qǐng)人:美國(guó)西門(mén)子醫(yī)療解決公司