本發(fā)明涉及藥物化學領域，具體涉及燈盞乙素的糖羧基位點進行修飾的衍生物。具體涉及這些在糖羧基位點硝酸酯類no供體取代的燈盞乙素衍生物及其制備方法和在制備抗腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
：目前抗腫瘤藥物的研發(fā)正面臨著嚴峻的挑戰(zhàn)，市面上的許多抗腫瘤藥物在展現(xiàn)出較好活性的同時，副作用也越來越多，嚴重影響疾病的治療效果。因此，尋找開發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物變得尤為重要。天然產(chǎn)物是藥物發(fā)現(xiàn)的重要來源，在已上市的藥物中，很多成功的藥物都直接或間接來源于天然產(chǎn)物。在自然界中，尋找并獲得活性更好、毒性更低、性質更穩(wěn)定的抗腫瘤候選化合物變得至關重要。燈盞乙素(scutellarin)是從菊科植物短葶飛蓬erigeronbreviscapus(vant.)hand-mazz的干燥全草中提取分離得到的一種黃酮類有效成分，為一種淡黃色粉末?，F(xiàn)代的藥理學研究表明，燈盞乙素具有廣泛的藥理活性，包括擴張血管、增加血流量、抗凝血、抑制血小板聚集、抑制腫瘤細胞增殖和神經(jīng)細胞保護等活性。近年來，關于燈盞乙素在抗腫瘤方面的研究越來越深入，相關研究表明燈盞乙素對多種腫瘤細胞株都有很好的抑制作用。包括乳腺癌細胞、人白血病細胞、肝癌細胞、結腸癌細胞、人舌癌細胞等。其作用機制可能是通過抑制信號傳導與轉錄激活因子(stat3)，蛋白酶體以及激活caspase-3通路等誘導腫瘤細胞凋亡。燈盞乙素做為一種常見的黃酮類化合物，來源廣泛且在許多日常食用的植物當中均有存在，這為研發(fā)高效低毒的抗腫瘤藥物奠定了良好的基礎。一氧化氮作為生物信使或效應分子在體內(nèi)發(fā)揮重要的生理作用，且其體內(nèi)水平異常與多種疾病的發(fā)生和發(fā)展密切相關。在抗腫瘤方面，大量的研究表明，高濃度的no產(chǎn)生細胞毒性，誘導腫瘤細胞凋亡，阻止腫瘤細胞的擴散和轉移。no供體型抗腫瘤藥物一般是指no供體通過連接基團與現(xiàn)有的抗腫瘤藥物(或活性基團)結合而成的前體藥物，在體內(nèi)可以通過酶解作用，釋放no和原藥。本發(fā)明以燈盞乙素為先導化合物，利用拼合原理，選擇能夠產(chǎn)生no的硝酸酯作為no供體，將其通過連接基團連接到其分子結構的糖羧基上，設計并合成了通式為i的no供體型燈盞乙素衍生物。技術實現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的技術問題是尋找抗腫瘤活性好的硝酸酯類no供體型燈盞乙素衍生物，并進一步提供一種治療腫瘤及其它疾病或病癥的藥物組合物。為解決上述技術問題，本發(fā)明提供如下技術方案：通式i為所示硝酸酯no供體型燈盞乙素衍生物及其藥學上可接受的鹽：其中，r為取代或未取代的c1-c12烷基、取代或未取代的芐基；所述的取代基為：c1-c4烷基、c1-c4烷氧基；n為2-8的整數(shù)。進一步地，r為c1-c6烷基、取代或未取代的芐基；所述的取代基為c1-c4烷基、c1-c4烷氧基；n為2-6的整數(shù)。優(yōu)選地，r為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基或芐基；n為2-4的整數(shù)。更優(yōu)選地，r為甲基或芐基；n為2或3。本發(fā)明優(yōu)選如下化合物：本發(fā)明通式i的衍生物可用下列方法制備得到：燈盞乙素(1)在k2co3/dmf條件下與鹵代烴反應，得到中間體(2,3)，中間體2,3在koh/meoh的條件下水解得到目標化合物(4,5)。將溴代醇(6,7)在濃硫酸和發(fā)煙硝酸反應的條件下得目標化合物溴代硝酸酯(8,9)?；衔?,5的糖羧基位置與不同的溴代硝酸酯類no供體化合物8,9在dbu催化的條件下反應縮合得目標化合物10a,10b，11a,11b。具體實施方式實施例1取燈盞乙素1(300mg,0.65mmol)，溶于dmf(10ml)中，加入溴化芐(0.38ml,3mmol)和無水碳酸鉀(414mg,3mmol)，室溫攪拌反應，tcl監(jiān)測反應進程，24h后終止反應。將反應液傾入20ml冰水混合物中,乙酸乙酯萃取(30ml×3)，飽和食鹽水溶液洗滌，無水硫酸鈉干燥，回收乙酸乙酯，得到粗產(chǎn)物2，經(jīng)硅膠柱(二氯甲烷:甲醇＝20:1)分離，得黃色固體315mg，收率67.2％。esi-msm/z733.2[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.96(s,1h,5-oh),8.03(d,2h,j＝9.0hz,h-2′,6′),7.55(d,2h,ar-h),7.48(d,2h,ar-h),7.36(m,9h,ar-h),7.25(d,2h,ar-h),7.20(d,2h,j＝9.0hz,h-3′,5′),7.12(s,1h,h-8),6.95(s,1h,h-3),5.66(d,1h,h-1″),5.57(d,1h,sugarproton),5.43(d,1h,sugarproton),5.37(d,1h,sugarproton),5.24(s,2h,-ch2-),5.17(dd,2h,-ch2-),5.02(dd,2h,-ch2-),4.29(d,1h,h-5″),3.53-3.40(m,3h,h-2″,3″,4″)。實施例2參照實施例1的合成方法制備得化合物3。黃色粉末，產(chǎn)率41.9％，esi-msm/z505.1[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.94(s,1h,5-oh),8.06(d,2h,j＝9.0hz,h-2′,6′),7.15(d,2h,j＝9.0hz,h-3′,5′),7.09(s,1h,h-8),6.96(s,1h,h-3),5.61(brs,1h,h-1″),5.50(d,1h,sugarproton),5.37(d,1h,sugarproton),5.33(d,1h,sugarproton),4.21(d,1h,h-5″),3.87(s,3h,-och3),3.76(s,3h,-och3),3.66(s,3h,-och3),3.48-3.35(m,3h,h-2″,3″,4″)。實施例3取實施例1中的化合物2(1g,1.37mmol)，溶于甲醇(80ml)中，滴加甲醇鈉(2-3ml)，室溫反應24h。濃縮，酸水洗，抽濾，烘干，得黃色固體838mg，收率95.3％。esi-msm/z643.2[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.98(s,1h,5-oh),8.05(d,2h,j＝8.5hz,h-2′,6′),7.56(d,2h,ar-h),7.48(d,2h,ar-h),7.41(t,2h,ar-h),7.37(q,3h,ar-h),7.32(t,1h,ar-h),7.21(d,2h,j＝8.7hz,h-3′,5′),7.13(s,1h,h-8),6.95(s,1h,h-3),5.67(d,1h,h-1″),5.40(d,2h,sugarproton),5.22(s,2h,-ch2-),5.02(dd,2h,-ch2-),4.09(d,1h,h-5″),3.48-3.42(m,3h,h-2″,3″,4″).實施例4參照實施例3的合成方法制備得化合物5。黃色粉末，產(chǎn)率94.1％，esi-msm/z491.1[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ:12.94(s,1h,5-oh),8.06(d,2h,j＝9.0hz,h-2′,6′),7.15(d,2h,j＝9.0hz,h-3′,5′),7.09(s,1h,h-8),6.96(s,1h,h-3),5.61(brs,1h,h-1″),5.50(d,1h,sugarproton),5.37(d,1h,sugarproton),5.33(d,1h,sugarproton),4.21(d,1h,h-5″),3.87(s,3h,-och3),3.76(s,3h,-och3),3.66(s,3h,-och3),3.48-3.35(m,3h,h-2″,3″,4″)。實施例5將濃h2so4(20mmol)在冰浴下滴加到發(fā)煙硝酸(20mmol)中，攪拌10min后，滴加溴乙醇(10mmol)的二氯甲烷溶液。反應3h后，加入10mlh2o結束反應。分離有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮，得化合物8，粗品可直接用于下一步反應。將實施例3中的化合物4(321mg,0.5mmol)置于反應瓶中，加入dmf(5ml)，攪拌至化合物完全溶解，加入dbu(112μl,0.75mmol)和8(127mg,0.75mmol)室溫反應2-3h，tlc監(jiān)測反應進程，待反應結束后，將反應液倒入30ml的冰水混合物中，用30ml乙酸乙酯萃取2-3次，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥、過濾、濃縮。得黃色粗產(chǎn)物，經(jīng)硅膠柱色譜分離純化(甲醇：二氯甲烷＝50：1)，得到淺黃色粉末10a142mg，產(chǎn)率38.8％，esi-msm/z732.2[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ(ppm):12.97(s,1h,5-oh),8.05(d,2h,j＝8.9hz,h-2′,6′),7.55(d,2h,j＝7.4hz,ar-h),7.48(d,2h,j＝7.4hz,ar-h),7.42-7.31(m,6h,ar-h),7.21(d,2h,j＝8.9hz,h-3′,5′),7.12(s,1h,h-8),6.95(s,1h,h-3),5.71(d,1h,j＝5.1hz,h-1″),5.54(d,1h,j＝5.8hz,sugarproton),5.42(d,1h,j＝7.8hz,sugarproton),5.41(brs,1h,sugarproton),5.22(s,2h,-ch2-),5.02(dd,2h,j＝10.8hz,-ch2-),4.22(d,1h,j＝9.6hz,h-5″),4.14-4.09(m,2h,-ch2-),3.50-3.47(m,3h,h-2″,3″,4″),3.44(t,2h,-ch2-).實施例6參照實施例5的合成方法制備得化合物10b。黃色粉末，產(chǎn)率79.2％，esi-msm/z746.1[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ(ppm):12.97(s,1h,5-oh),8.03(d,2h,j＝8.6hz,h-2′,6′),7.56(d,2h,j＝7.3hz,ar-h),7.47(d,2h,j＝7.3hz,ar-h),7.42-7.32(m,6h,ar-h),7.20(d,2h,j＝8.6hz,h-3′,5′),7.12(s,1h,h-8),6.93(s,1h,h-3),5.71(d,1h,j＝5.4hz,h-1″),5.59(d,1h,j＝5.8hz,sugarproton),5.43(d,2h,j＝7.6hz,sugarproton),5.21(s,2h,-ch2-),5.02(dd,2h,j＝10.7hz,-ch2-),4.54(t,2h,-ch2-),4.25(d,1h,j＝9.7hz,h-5″),4.18(t,2h,-ch2-),3.51-3.47(m,3h,h-2″,3″,4″),2.02-1.98(m,2h,-ch2-).。實施例7參照實施例5的合成方法制備得化合物11a。黃色粉末，產(chǎn)率69.8％，esi-msm/z580.1[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ(ppm):12.94(s,1h,5-oh),8.06(d,2h,j＝8.9hz,h-2′,6′),7.12(d,2h,j＝8.9hz,h-3′,5′),7.08(s,1h,h-8),6.97(s,1h,h-3),5.65(d,1h,j＝5.0hz,h-1″),5.56(d,1h,j＝5.6hz,sugarproton),5.39-5.36(m,2h,sugarproton),4.75(t,2h,-ch2-),4.41(m,2h,-ch2-),4.25(d,1h,j＝9.4hz,h-5″),3.86(s,3h,-och3),3.76(s,3h,-och3),3.47-3.40(m,3h,h-2″,3″,4″)。實施例8參照實施例5的合成方法制備得化合物11b。黃色粉末，產(chǎn)率16.9％，esi-msm/z594.0[m+h]+。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ(ppm):12.93(s,1h,5-oh),8.04(d,2h,j＝8.9hz,h-2′,6′),7.13(d,2h,j＝8.9hz,h-3′,5′),7.07(s,1h,h-8),6.94(s,1h,h-3),5.62(d,1h,j＝5.1hz,h-1″),5.54(d,1h,j＝5.7hz,sugarproton),5.36-5.34(m,2h,sugarproton),4.55(t,2h,-ch2-),4.21(d,1h,j＝9.7hz,h-5″),4.17(d,2h,-ch2-),3.86(s,3h,-och3),3.77(s,3h,-och3),3.48-3.39(m,3h,h-2″,3″,4″),2.01(m,2h,-ch2-)。下面是本發(fā)明部分化合物的藥理實驗結果實驗設備與試劑儀器超凈工作臺(蘇凈集團安泰公司)恒溫培養(yǎng)箱(thermoelectroncorporation)酶標儀(bio-rad公司)倒置生物顯微鏡(重慶光學儀器廠)試劑細胞培養(yǎng)基rpmi-1640、dmem(高糖)(gibco公司)胎牛血清(杭州四季清有限公司)四甲基偶氮唑藍(mtt)(sigma公司產(chǎn)品)dmso(sigma公司)細胞株人肝癌細胞株hepg-2和bel-7402、人乳腺癌細胞株mcf-7、人前列腺癌細胞株pc-3、人結腸癌細胞株hct-116實驗方法細胞抑制活性實驗方法細胞在37℃、5％co2飽和濕度的培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。培養(yǎng)液為含10％熱滅活胎牛血清，青霉素100u/ml和鏈霉素100u/ml的rpmi1640細胞培養(yǎng)基。48h更換培養(yǎng)液，細胞貼壁后，用0.25％胰蛋白酶消化傳代。實驗用細胞均處于對數(shù)生長期，臺盼藍拒染法表明細胞活力>95％。取處于對數(shù)生長期狀態(tài)良好的細胞一瓶，加入消化液(0.125％胰蛋白酶+0.01％edta)消化，計數(shù)2～4×104cell/ml，制成細胞懸液接種于96孔板上，100μl/孔，置恒溫co2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時。換液，加入受試藥物，100μl/孔，培養(yǎng)72小時。將mtt加入96孔板中，50μl/孔，培養(yǎng)箱中孵育4小時。吸去上清液，加dmso，200μl/孔，平板搖床上震蕩10分鐘。受試物考察7個濃度(50μm，25μm，12.5μm，6.25μm，3.13μm，1.56，0.78μm)，用酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀在波長為570nm處測定每孔的吸光度，分別計算各濃度下的細胞抑制率。抑制率計算方法：藥敏孔相對od值＝藥敏孔絕對od值﹣空白對照孔絕對od值實驗結果表1實施例5-8對4種人類癌細胞株抗增殖活性的ic50值(μm)樣品mcf-7hct-116pc-3hepg-2bel-7402實施例558±467±565±452±316±1實施例630±217±118±136±219±1實施例763±257±269±474±423±2實施例875±564±372±468±218±1燈盞乙素>100>100>100>100>100當前第1頁12