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一種重組酵母菌株及其應(yīng)用的制作方法

文檔序號:12712171閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種重組酵母菌株,其特征在于,該菌株為發(fā)酵生產(chǎn)番茄紅素的酵母菌株,并且其ALD6啟動子表達(dá)強(qiáng)度被下調(diào)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組酵母菌株,其特征在于,所述ALD6啟動子表達(dá)強(qiáng)度被下調(diào)為直接敲除ALD6啟動子或采用表達(dá)強(qiáng)度低于ALD6啟動子的其他啟動子替換。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述重組酵母菌株,其特征在于,所述其他啟動子為URA3啟動子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組酵母菌株,其特征在于,包含經(jīng)酵母自身同源重組整合到其基因組上的如下基因片段:

酵母trp1位點(diǎn)上游同源序列、CYC1終止子、三孢布拉氏霉菌(Blakeslea trispora)來源的crtI、GAL10啟動子、GAL1啟動子、成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)來源的crtB、PGK1終止子、酵母trp1位點(diǎn)下游同源序列順次拼接而成的基因片段1;

酵母leu2位點(diǎn)上游同源序列、LEU2標(biāo)記、TDH2終止子、ACT1終止子、截短的HMG-CoA還原酶基因tHMGR1、GAL10啟動子、GAL1啟動子、成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)來源的crtE、GPM1終止子、酵母leu2位點(diǎn)下游同源序列順次拼接而成的基因片段2。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組酵母菌株,其特征在于,敲除gal1、gal7和gal10基因。

6.權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述重組酵母菌株在制備番茄紅素中的應(yīng)用或在生產(chǎn)以番茄紅素為中間產(chǎn)物的產(chǎn)品中的應(yīng)用。

7.一種發(fā)酵生產(chǎn)番茄紅素的方法,其特征在于,將權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述重組酵母菌株接種到種子培養(yǎng)基中活化至對數(shù)生長中期,然后轉(zhuǎn)接到發(fā)酵培養(yǎng)基中發(fā)酵生產(chǎn)番茄紅素。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述方法,其特征在于,將權(quán)利要求1-5任意一項(xiàng)所述重組酵母菌株接種于5mL種子培養(yǎng)基中,在30℃、250rpm培養(yǎng)14-16h,以初始菌體濃度OD600=0.2轉(zhuǎn)接于新鮮的25mL種子培養(yǎng)基中,于30℃、250rpm條件下培養(yǎng)至對數(shù)生長中期,以初始菌體濃度OD600=0.5分別接種于50mL發(fā)酵培養(yǎng)基中,于30℃、250rpm條件下培養(yǎng),發(fā)酵生產(chǎn)番茄紅素。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述發(fā)酵方法,其特征在于,所述種子培養(yǎng)基包括20g/L或40g/L葡萄糖、20g/L蛋白胨以及10g/L酵母浸粉。

10.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述發(fā)酵方法,其特征在于,所述發(fā)酵培養(yǎng)基包括20g/L或40g/L葡萄糖、20g/L蛋白胨、10g/L酵母浸粉以及10g/L D-半乳糖。

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