本發(fā)明涉及一種靈芝的高效藥用價(jià)值開(kāi)發(fā)的方法，具體地說(shuō)是一種富鐵靈芝菌絲體的生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
鐵元素是構(gòu)成人體的必不可少的元素之一，缺鐵會(huì)影響到人體的健康和發(fā)育，最大的影響即是缺鐵性貧血，世界衛(wèi)生組織的調(diào)查表明，大約有50％的女童、20％的成年女性、40％的孕婦會(huì)發(fā)生缺鐵性貧血。補(bǔ)鐵是通過(guò)食物或?qū)Ｓ脿I(yíng)養(yǎng)劑為人體額外補(bǔ)充必須的、適量的有機(jī)鐵化合物，從而補(bǔ)充鐵元素以達(dá)到強(qiáng)身健體、預(yù)防或輔助治療疾病目的的過(guò)程。補(bǔ)鐵是通過(guò)食物或藥物方法為人體額外補(bǔ)充必須的、適量的有機(jī)鐵化合物，從而補(bǔ)充鐵元素以達(dá)到強(qiáng)身健體、預(yù)防或輔助治療疾病目的的過(guò)程，鐵的吸收幾乎都是以有機(jī)螯合態(tài)的形式進(jìn)行，生物體是幾乎不能直接吸收無(wú)機(jī)態(tài)鐵，而靈芝具有廣泛的藥理作用，如抗腫瘤作用、免疫調(diào)節(jié)作用、鎮(zhèn)靜安神作用、強(qiáng)心及抗心肌缺血作用、調(diào)節(jié)血脂作用、平喘作用、保肝作用、抗缺氧和抗衰老作用等，如何培養(yǎng)基配方、讓靈芝在深層液體培養(yǎng)時(shí)能夠富集鐵元素，使無(wú)機(jī)態(tài)的鐵轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)鐵形成靈芝菌絲體結(jié)構(gòu)的成分，為靈芝的高效藥用價(jià)值開(kāi)發(fā)提供了一種途徑。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種讓靈芝在深層液體培養(yǎng)時(shí)能夠富集鐵元素，使無(wú)機(jī)態(tài)的鐵轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)鐵形成靈芝菌絲體結(jié)構(gòu)的成分的富鐵靈芝菌絲體的生產(chǎn)方法。
為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明的富鐵靈芝菌絲體的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：
A:芝深層發(fā)酵培養(yǎng)
a、靈芝菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度為25～26℃，
取靈芝菌種在菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氫鉀3～4g、七水硫酸鎂1.5～2g、維生素B110～20mg、瓊脂18～20g、水1000ml；
b、搖床種：保持溫度在25～26℃，在30L攪拌罐中裝入所述步驟1)中培養(yǎng)有靈芝菌種的菌種培養(yǎng)基，用水稀釋，然后置于振蕩器上，攪拌3～4天，控制攪拌速度為100～120轉(zhuǎn)/min；
c、一級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將所述步驟b中稀釋攪拌后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入300L種子罐中，培養(yǎng)2～3天；
d、二級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將所述步驟c中攪拌后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入1.5噸的種子罐中，培養(yǎng)2～3天；
e、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將所述步驟d中培養(yǎng)后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入7噸的發(fā)酵罐中，并加入發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有無(wú)機(jī)硫酸亞鐵；
B、將7噸發(fā)酵罐中的靈芝發(fā)酵原液升溫至45～55℃，加入20000u/g的酸性纖維素酶，加入量為發(fā)酵罐實(shí)際裝量的0.0001～0.0004％，攪拌酶解3～4小時(shí)，得到靈芝酶解液；
C、將上述靈芝酶解液降至40～45℃，并加入質(zhì)量濃度為10％的NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH至7.0～9.0，加入發(fā)酵罐實(shí)際裝量的0.006～0.012％的復(fù)合蛋白酶，攪拌酶解3～5小時(shí)，升溫至85～95℃，滅酶活10～30分鐘；
D、板框壓濾：將所述步驟C酶解靈芝混合液取出，用50～60kg的壓力壓濾，除去固體物，得到靈芝酶解原液；
E、經(jīng)過(guò)板框壓濾后形成靈芝菌絲體，然后對(duì)靈芝菌絲體真空干澡并粉碎得到富鐵靈芝菌絲體粉。
按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、無(wú)機(jī)硫酸亞鐵0.01～0.02％，磷酸二氫鉀0.01～0.02％、硫酸銨0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量為水；
所述得復(fù)合蛋白酶的質(zhì)量組成為：
10萬(wàn)u/g的中性蛋白酶 35％
20萬(wàn)u/g的堿性蛋白酶 35％
10萬(wàn)u/g胰蛋白酶 10％
10萬(wàn)u/g的木瓜蛋白酶 15％
10萬(wàn)u/g的糖肽酶 5％
所述步驟A中e工序中，待達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)。
所述步驟A中e工序中，待達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：菌絲濕重達(dá)到15～20％。
所述步驟A中e工序中，待達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：發(fā)酵原液的pH值為3.0～3.5。
本發(fā)明的有益效果在于：
靈芝具有很強(qiáng)的鐵離子生物富集作用，通過(guò)靈芝深層發(fā)酵技術(shù)在液體培養(yǎng)基中加入0.02％的無(wú)機(jī)硫酸亞鐵靈芝富集鐵的效果最佳，能最大效率的把無(wú)機(jī)鐵轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)鐵，通過(guò)服用富鐵靈芝達(dá)到機(jī)體補(bǔ)鐵效果，靈芝對(duì)鐵的生物富集作用，把無(wú)機(jī)態(tài)的鐵離子富集形成生物有機(jī)鐵，實(shí)行了一種行之有效的人體補(bǔ)鐵途徑，通過(guò)合理設(shè)計(jì)培養(yǎng)基配方、讓靈芝在深層液體培養(yǎng)時(shí)能夠富集鐵元素，使無(wú)機(jī)態(tài)的鐵轉(zhuǎn)化為有機(jī)態(tài)鐵形成靈芝菌絲體結(jié)構(gòu)的成分，這樣生產(chǎn)出來(lái)的富鐵靈芝菌絲體既具有靈芝廣泛的藥理作用又同時(shí)具有鐵元素的生物機(jī)能等藥理作用。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明的富鐵靈芝菌絲體的生產(chǎn)方法作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
本發(fā)明的富鐵靈芝菌絲體的生產(chǎn)方法，包括以下步驟：
A:芝深層發(fā)酵培養(yǎng)
a、靈芝菌種培養(yǎng)：培養(yǎng)溫度為25～26℃，
取靈芝菌種在菌種培養(yǎng)基中培養(yǎng)20～30天，所述菌種培養(yǎng)基的配方組成為：馬鈴薯200～250g、葡萄糖20～25g、磷酸二氫鉀3～4g、七水硫酸鎂1.5～2g、維生素B110～20mg、瓊脂18～20g、水1000ml；
b、搖床種：保持溫度在25～26℃，在30L攪拌罐中裝入所述步驟1)中培養(yǎng)有靈芝菌種的菌種培養(yǎng)基，用水稀釋，然后置于振蕩器上，攪拌3～4天，控制攪拌速度為100～120轉(zhuǎn)/min；
c、一級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將所述步驟b中稀釋攪拌后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入300L種子罐中，培養(yǎng)2～3天；
d、二級(jí)放大：保持溫度在25～26℃，將所述步驟c中攪拌后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入1.5噸的種子罐中，培養(yǎng)2～3天；
e、發(fā)酵培養(yǎng)：保持溫度在25～26℃，將所述步驟d中培養(yǎng)后的培養(yǎng)基負(fù)壓吸入7噸的發(fā)酵罐中，并加入發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵，所述發(fā)酵培養(yǎng)基含有無(wú)機(jī)硫酸亞鐵；
按質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述發(fā)酵培養(yǎng)基的配方組成為：玉米粉1～3％、蔗糖2～4％、無(wú)機(jī)硫酸亞鐵0.01～0.02％，磷酸二氫鉀0.01～0.02％、硫酸銨0.2～0.3％、酵母粉0.2～0.4％、豆油0.05～0.1％、余量為水；
待達(dá)到以下標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，發(fā)酵結(jié)束：
待靈芝菌絲上無(wú)明顯芽頭和鎖狀聯(lián)合現(xiàn)象，且菌絲變細(xì)，菌絲原生質(zhì)凝集，菌絲有自溶現(xiàn)象發(fā)生時(shí)。
發(fā)酵結(jié)束：菌絲濕重達(dá)到15～20％。
發(fā)酵原液的pH值為3.0～3.5。
B、將7噸發(fā)酵罐中的靈芝發(fā)酵原液升溫至45～55℃，加入20000u/g的酸性纖維素酶，加入量為發(fā)酵罐實(shí)際裝量的0.0001～0.0004％，攪拌酶解3～4小時(shí)，得到靈芝酶解液；
C、將上述靈芝酶解液降至40～45℃，并加入質(zhì)量濃度為10％的NaOH溶液，調(diào)節(jié)pH至7.0～9.0，加入發(fā)酵罐實(shí)際裝量的0.006～0.012％的復(fù)合蛋白酶，攪拌酶解3～5小時(shí)，升溫至85～95℃，滅酶活10～30分鐘；
所述步驟C中復(fù)合蛋白酶的質(zhì)量組成為：
10萬(wàn)u/g的中性蛋白酶 35％
20萬(wàn)u/g的堿性蛋白酶 35％
10萬(wàn)u/g胰蛋白酶 10％
10萬(wàn)u/g的木瓜蛋白酶 15％
10萬(wàn)u/g的糖肽酶5％
D、板框壓濾：將所述步驟C酶解靈芝混合液取出，用50～60kg的壓力壓濾，除去固體物，得到靈芝酶解原液；
E、經(jīng)過(guò)板框壓濾后形成靈芝菌絲體，然后對(duì)靈芝菌絲體真空干澡并粉碎得到富鐵靈芝菌絲體粉。