技術(shù)特征：

1.人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于步驟如下：

(一)細(xì)胞分離

(1)羊膜取自足月剖宮產(chǎn)健康產(chǎn)婦，采集后6～12h處理；

(2)將直徑為6cm×6cm的羊膜用0.9％氯化鈉溶液清洗，剪碎至約1mm×1mm×1mm，經(jīng)0.1％膠原酶和0.125％的胰酶37℃消化30～60min，用α-MEM培養(yǎng)基稀釋至40ml；

(3)將上述液體先后用100目及200目濾網(wǎng)過濾，去未消化的組織；

(4)過濾后的含細(xì)胞的液體置于50ml離心管中，配平后放置在低溫離心機(jī)內(nèi)，以離心力300Xg，溫度4±2℃，離心8分鐘；

(5)停機(jī)后輕輕取出離心管置于試管架上，離心管內(nèi)容物分為二部分，上層為膠原酶、胰酶和α-MEM培養(yǎng)基，下層為組織碎塊與細(xì)胞混合物；

(6)將上層膠原酶、胰酶和α-MEM培養(yǎng)基吸出；

(7)將所分離的人羊膜單個(gè)核細(xì)胞用α-MEM培養(yǎng)基稀釋后2000r/min離心10min洗二次；

(二)細(xì)胞培養(yǎng)

將分離的人羊膜單個(gè)核細(xì)胞按1×10⁶個(gè)細(xì)胞/cm²接種于75cm²塑料培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)于37℃，5％CO₂培養(yǎng)箱，培養(yǎng)液為人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基；24小時(shí)后換液，棄非貼壁細(xì)胞，以后每2～3天換液；待人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞生長(zhǎng)到70～80％融合，用0.25％胰酶消化，按0.8×10⁴～1.0×10⁴個(gè)細(xì)胞/cm²傳代；每2～3天用人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基中傳代一次，使細(xì)胞濃度維持在5×10⁵～10×10⁵個(gè)細(xì)胞/Ml；每次傳代培養(yǎng)的條件均為37℃，5％CO₂；傳5代得到人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于：所述人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基由α-MEM培養(yǎng)基、人血漿和人血白蛋白組成。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于：所述人血漿在人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基中的濃度是10％，人血白蛋白在該人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基中的濃度是1％。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法，其特征在于：所述人血漿是人AB血漿。

5.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任何一項(xiàng)所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。

6.根據(jù)權(quán)利要求4中所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法培養(yǎng)得到的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于：所述人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)如下三種細(xì)胞膜分子：人白細(xì)胞分化抗原CD73、人白細(xì)胞分化抗原CD90和人白細(xì)胞分化抗原CD105；不表達(dá)人白細(xì)胞分化抗原CD45和人白細(xì)胞抗原HLA-DR。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞，其特征在于：所述人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞表達(dá)如下三種細(xì)胞膜分子：人白細(xì)胞分化抗原CD73、人白細(xì)胞分化抗原CD90和人白細(xì)胞分化抗原CD105；不表達(dá)人白細(xì)胞分化抗原CD45和人白細(xì)胞抗原HLA-DR。

9.人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基，其特征在于：由α-MEM培養(yǎng)基、人血漿和人血白蛋白組成。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基，其特征在于：所述人血漿在所述人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基中的濃度是10％，人血白蛋白在該人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞專用培養(yǎng)基中的濃度是1％。