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一種基于鎂試劑I的LAMP可視化檢測方法與流程

文檔序號:12056580閱讀:來源:國知局

技術(shù)特征:

1.一種基于鎂試劑I的LAMP可視化檢測方法,其特征在于,包括:

A.提取檢測目標(biāo)基因組DNA作為模板;

B.制備基于鎂試劑I的LAMP可視化檢測反應(yīng)體系,所述反應(yīng)體系包括:Bst DNA聚合酶緩沖液、Bst DNA聚合酶、甜菜堿、鎂離子、dNTP Mix、LAMP引物以及DNA模板;

C.對B步驟獲取的反應(yīng)體系進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后加入鎂試劑I溶液,根據(jù)試管顏色變化,獲取檢測結(jié)果。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述鎂試劑I溶液是由0.4-0.6mol/L的NaOH配制而成。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中鎂試劑I溶液的濃度為0.1-0.4mmol/L。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中鎂離子的濃度為3.0-10.0mmol/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中Bst DNA聚合酶用量為每25μL體系中含6-8U。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中甜菜堿濃度為8-12mmol/L。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中dNTP Mix濃度為1.2-1.6mmol/L。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中每25μL體系中含DNA模板1-2μL。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,所述反應(yīng)體系中LAMP引物包含外引物(F3和B3)、內(nèi)引物(FIP和BIP)、環(huán)引物(LF和LB),各引物濃度和比例如下:外引物(F3和B3)的濃度為0.1-0.3μM/L,內(nèi)引物(FIP和BIP)的濃度為1.2-1.8μM/L,環(huán)引物(LF和LB)的濃度為0.2-0.6μM/L;外引物(F3和B3)、內(nèi)引物(FIP和BIP)、環(huán)引物(LF和LB)的摩爾比為:1∶8∶2。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法,其特征在于,擴(kuò)增條件為在61-65℃下反應(yīng)15-60分鐘,并在80℃反應(yīng)2-3分鐘。根據(jù)顏色變化判斷結(jié)果;其中,黃色表示陰性,紫紅色表示陽性。

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