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農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的制作方法

文檔序號(hào):12412154閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

技術(shù)特征:

1.農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟包括:

(1)耐鹽椒樣薄荷莖段預(yù)培養(yǎng);

(2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的外源基因轉(zhuǎn)化;

(3)共培養(yǎng);

(4)叢生芽再生與抗生素篩選;

(5)生根誘導(dǎo)和陽(yáng)性植株檢測(cè)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟(1)所用耐鹽椒樣薄荷莖段為含腋芽莖段,并用無(wú)菌刀片在腋芽處輕輕劃幾刀,使其具有損傷易于轉(zhuǎn)化和叢生芽分化,然后將莖段放入預(yù)培養(yǎng)的培養(yǎng)基中黑暗條件下預(yù)培養(yǎng)3天。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,預(yù)培養(yǎng)所用培養(yǎng)基為:MS+3.0mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂,pH5.8。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟(2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的外源基因轉(zhuǎn)化的方法是:將預(yù)培養(yǎng)的耐鹽椒樣薄荷莖段置于用轉(zhuǎn)化液重懸的農(nóng)桿菌菌液中,菌液調(diào)整OD600為0.6-0.8,抽真空10-15min,然后黑暗條件下30℃,200r/min震蕩培養(yǎng)30min。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,所述轉(zhuǎn)化液為:0.2MS+0.5g/L 2-(N-嗎啡啉)乙磺酸+30mg/L乙酰丁香酮+1%葡萄糖+2%蔗糖,pH 5.4。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟(3)的方法為:抽真空轉(zhuǎn)化的耐鹽椒樣薄荷莖段置于共培養(yǎng)培養(yǎng)基上,25±3℃暗培養(yǎng)3-4d。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,共培養(yǎng)培養(yǎng)基為:MS+30mg/L乙酰丁香酮+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂,pH 5.8。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟(4)叢生芽再生與抗生素篩選的方法為:共培養(yǎng)的耐鹽椒樣薄荷莖段用無(wú)菌水清洗后,轉(zhuǎn)至添加頭孢和篩選標(biāo)記抗生素的叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽再生。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,叢生芽再生和篩選和培養(yǎng)基為:MS+3mg/L 6-芐氨基腺嘌呤+0.2mg/L萘乙酸+200mg/L頭孢+抗生素+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂,pH 5.8。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的耐鹽椒樣薄荷莖段轉(zhuǎn)化系統(tǒng),其特征在于,步驟(5)所述生根誘導(dǎo)和陽(yáng)性植株檢測(cè)中,生根誘導(dǎo)培養(yǎng)基為:1/2MS+0.2mg/L萘乙酸+10g/L蔗糖+7g/L瓊脂,pH 5.8,陽(yáng)性植株檢測(cè)為利用基因組DNA進(jìn)行PCR檢測(cè)。

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