本發(fā)明涉及藥物與化工領(lǐng)域，更具體地，涉及一種天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

環(huán)核苷酸磷酸二酯酶(Cyclic nucleotide phosphodiesterases,PDEs)是一類重要的超級(jí)酶家族，通過對(duì)環(huán)磷酸腺苷(Cyclic Adenosine monophosphate,Camp)和cGMP的水解，有效控制細(xì)胞內(nèi)的cAMP和環(huán)磷酸鳥苷(cyclic guanosine monophosphate,cGMP)濃度，從而調(diào)節(jié)體內(nèi)第二信使所傳導(dǎo)的生化作用。PDEs在哺乳動(dòng)物組織中分布廣泛，其多樣性致使不同的PDE酶在細(xì)胞和亞細(xì)胞水平有著特定的分布，可選擇性調(diào)節(jié)多種細(xì)胞功能，是良好的藥物設(shè)計(jì)與治療靶點(diǎn)。

磷酸二酯酶IV(PDE4)作為特異性催化水解cAMP的PDE家族酶，在人體內(nèi)主要分布于炎癥細(xì)胞內(nèi)。在炎癥反應(yīng)中，cAMP對(duì)細(xì)胞因子的釋放等生理過程起著關(guān)鍵的負(fù)調(diào)節(jié)作用，因此通過抑制PDE4提高細(xì)胞內(nèi)cAMP濃度將有助于減輕炎癥反應(yīng)對(duì)機(jī)體的傷害。目前，PDE4抑制劑已被開發(fā)成抗炎的藥物，如羅氟司特(Roflumilast)等，臨床上主要用于治療肺部的炎癥，尤其是針對(duì)于哮喘和慢性阻塞性肺病的治療上。但服用此類藥物會(huì)引起腹瀉、惡心等不良反應(yīng)，因此如何克服這些PDE4抑制劑存在的不良反應(yīng)，研究新型的特異性抑制劑就成為研究的熱點(diǎn)之一。天然產(chǎn)物是尋找具有新型PDE4抑制劑的重要來源之一，對(duì)于開發(fā)新一代療效強(qiáng)、副作用小的PDE4抑制劑具有重要的意義。

前期我們從中藥墊狀卷柏(Selaginella pulvinata)中獲得6個(gè)具有顯著PDE4抑制活性的9,9-二苯基-1-苯乙炔-9H-芴新骨架分子，其IC₅₀值在0.011-0.26μM之間，強(qiáng)于陽性對(duì)照藥rolipram(IC₅₀＝0.54μM)。一類新骨架活性天然化合物的發(fā)現(xiàn)，可能意味著一個(gè)新的治療藥物的出現(xiàn)。因此，本發(fā)明在前期研究基礎(chǔ)上，首次對(duì)9,9-二苯基-1-苯乙炔-9H-芴新骨架分子進(jìn)行了全合成，獲得的一系列衍生物具有顯著的PDE4抑制作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是為了提供一種新的具有抗炎活性的天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供上述天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物作為制備抗炎藥物中的應(yīng)用。

本發(fā)明提供了一種天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物的制備方法，所述天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物的結(jié)構(gòu)式如式(I)或式(II)所示，

其中，R₁為烷基、醛基、羧基、醇基、羥基、?；驓洌籖₂為氫或羥基；R₃為烷氧基、?；蛄u基；R₄為鹵素、芳乙炔基、苯基或取代苯基、芳乙烯基；R₅為氫、羥基、苯基或取代苯基；R₆為氫、苯基或取代苯基；取代基選自烷氧基、?；蛄u基；

所述制備方法具體包括如下步驟：

S1.式(III)所示的溴苯甲酸類化合物與碘乙酸反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式如式(IV)所示的化合物；

S2.將步驟S1所得如結(jié)構(gòu)式(IV)所示的化合物依次與碘甲烷、苯硼酸類化合物反應(yīng)得到結(jié)構(gòu)式如式(V)所示的化合物；其中，X為溴或氫；

S3.將步驟S2得到的結(jié)構(gòu)式如式(V)所示的化合物與甲磺酸進(jìn)行反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式如式(VI)所示的化合物；其中，X為溴或氫；

S4.當(dāng)X為溴時(shí)，將結(jié)構(gòu)式如式(VI)所示的化合物與芳乙炔類化合物反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式如式(VII)所示的化合物；

S5.將步驟S4得到的結(jié)構(gòu)式如式(VII)所示的化合物與格氏試劑溴化鎂類化合物進(jìn)行反應(yīng)后，得到結(jié)構(gòu)式如式(VIII)所示的化合物；

S6.將步驟S5得到的結(jié)構(gòu)式如式(VIII)所示的化合物與苯甲醚類化合物進(jìn)行反應(yīng)后，得到結(jié)構(gòu)式如式(I)所示的化合物；

S7.將步驟S6得到的結(jié)構(gòu)式如式(I)所示的化合物經(jīng)過脫烷基、溴代?；磻?yīng)后，再與磷酸二氫鈉和亞氯酸鈉反應(yīng)，最后與碳酸銀反應(yīng)，得到結(jié)構(gòu)式如式(II)所示的化合物。

優(yōu)選地，R₁為氫、羧基、醛基、羥基、羥甲基、C_1～5烷基、二甲氧基甲烷基、乙?；?、甲氧基或乙氧基；R₂為氫或羥基；R₃為甲氧基、羥基、乙酰基；R₄為鹵素、對(duì)甲氧基苯乙炔基、對(duì)羥基苯乙炔基、對(duì)乙酰基苯乙炔基、4-羥基苯基、(Z)-1-溴-2-(對(duì)羥基苯基)乙烯基、；R₅為氫、羥基、4-羥基苯基、對(duì)甲氧基苯基或?qū)σ阴；交籖₆為氫、4-羥基苯基、對(duì)甲氧基苯基或?qū)σ阴；交?/p>

優(yōu)選地，S1步驟中反應(yīng)溫度為80～120℃，反應(yīng)時(shí)間為20～30h。

優(yōu)選地，S3步驟中反應(yīng)溫度為60～70℃，反應(yīng)時(shí)間為5～7h。

本發(fā)明首次通過人工合成得到上述衍生物，相比較于從植物中進(jìn)行提取，更加快捷高效。

本發(fā)明還提供一種天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物，所述天然產(chǎn)物

selaginpulvilin的衍生物的結(jié)構(gòu)式如式(I)或式(II)所示，

其中，R₁為烷基、醛基、羧基、醇基、羥基、?；驓?；R₂為氫或羥基；R₃為烷氧基、?；蛄u基；R₄為鹵素、芳乙炔基、苯基或取代苯基、芳乙烯基；R₅為氫、羥基、苯基或取代苯基；R₆為氫、苯基或取代苯基；取代基選自烷氧基、?；蛄u基。

優(yōu)選地，R₁為氫、羧基、醛基、羥基、羥甲基、C_1～5烷基、二甲氧基甲烷基、乙?；⒓籽趸蛞已趸?；R₂為氫或羥基；R₃為甲氧基、羥基、乙?；?；R₄為鹵素、對(duì)甲氧基苯乙炔基、對(duì)羥基苯乙炔基、對(duì)乙?；揭胰不?、4-羥基苯基、(Z)-1-溴-2-(對(duì)羥基苯基)乙烯基、；R₅為氫、羥基、4-羥基苯基、對(duì)甲氧基苯基或?qū)σ阴；交?；R₆為氫、4-羥基苯基、對(duì)甲氧基苯基或?qū)σ阴；交?/p>

更優(yōu)選地，當(dāng)R₂為氫時(shí)，R₁不同時(shí)為氫、甲基、醛基或羥甲基；

當(dāng)R₆為4-羥基苯基時(shí)，R₁不同時(shí)為甲基或羥甲基。

本發(fā)明提供的更具體的selaginpulvilin衍生物如圖1所示：

更具體地，提供一種天然產(chǎn)物selaginpulvilin衍生物的應(yīng)用。本發(fā)明提供的天然產(chǎn)物selaginpulvilin衍生物是一類PDE4型抑制劑，對(duì)于開發(fā)新一代療效強(qiáng)、副作用小的PDE4抑制劑具有重要的意義。

為了更好地理解本發(fā)明，以下對(duì)本發(fā)明方案結(jié)合反應(yīng)式作進(jìn)一步的闡釋，所列的反應(yīng)式僅為理論推導(dǎo)所得，其不能作為本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。以HC-1-HC-6的合成為例，本發(fā)明的具體合成過程，如下所示：

具體步驟如下：

2-溴-3-甲基-苯甲酸(化合物1)溶解在N,N-二甲基甲酰胺(DMF)中，加入等量的碘、二醋酸碘苯，催化量的醋酸鈀，氮?dú)獗Ｗo(hù)下100℃攪拌24h，萃取后過柱純化得到化合物2，產(chǎn)率86％?；衔?溶解在丙酮中，加入過量的碘甲烷和碳酸鉀，60℃度加熱回流3h，冷卻到室溫后減壓濃縮，加入等量的4-甲氧基苯硼酸、過量的碳酸鉀、催化量的四(三苯基膦)鈀，DMF和水為溶劑，氮?dú)獗Ｗo(hù)下100℃攪拌過夜得到化合物3，產(chǎn)率67％?；衔?在甲磺酸中回流6h，萃取得到化合物4，產(chǎn)率92％?；衔?，1.2當(dāng)量4-甲氧基苯乙炔，和催化量的四(三苯基膦)鈀、三苯基膦、碘化亞銅，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入DMF和Et₃N，120℃攪拌過夜，冷卻至室溫后，乙酸乙酯萃取并過柱純化得到化合物5，產(chǎn)率85％?；衔?溶于無水四氫呋喃(THF),置于冰浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入4-甲氧基苯基溴化鎂，逐漸恢復(fù)到室溫后攪拌過夜，萃取后過柱純化得到化合物6，產(chǎn)率88％。化合物6溶于二氯甲烷(DCM),加入過量的苯甲醚和等量的甲磺酸，室溫下反應(yīng)1h，萃取后得到化合物HC-11，產(chǎn)率63％?；衔颒C-11溶于無水DCM，置于冰浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下逐滴加入過量的BBr₃，逐漸恢復(fù)到室溫后再攪拌2h，萃取后過柱純化得到HC-3，產(chǎn)率65％。

HC-3溶于吡啶中，加入過量醋酸酐，室溫下攪拌過夜，萃取后得到化合物HC-12,產(chǎn)率68％。HC-12溶于無水CCl₄中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入過量的NBS,AIBN，80℃回流12h，過濾，濾液加壓濃縮后加入過量的氫氧化鉀，1,4-二氧六環(huán)/水(1：1)為溶劑，室溫下反應(yīng)1h，得到HC-1(59％)和HC-2(30％)。HC-2溶于二甲基亞砜(DMSO),加入過量的亞氯酸鈉和磷酸二氫鈉，室溫下攪拌過夜，萃取后得到HC-6，產(chǎn)率81％。HC-6在濃鹽酸中回流，得到HC-4(61％)。HC-6與催化量的碳酸銀溶于DMSO中，120℃反應(yīng)過夜，萃取后得到HC-5(85％)。

與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下的有益效果：

本發(fā)明提供的化合物對(duì)PDE4具有顯著的抑制作用，在制備新型的抗炎藥物方面具有良好的應(yīng)用前景。本發(fā)明所公開的天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物的制備方法，為首次全合成，與已有的從植物中提取該類化合物相比，更加快捷高效。

附圖說明

圖1為本發(fā)明提供的天然產(chǎn)物selaginpulvilin的衍生物結(jié)構(gòu)式圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例和附圖對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但具體實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明作任何限定。

實(shí)施例1：

2-溴-3-甲基苯甲酸(21.3mmol)，醋酸鈀(0.24g,1.06mmol),二醋酸碘苯(6.86g,21.3mmol)和碘(5.42g,21.3mmol)置于250mL圓底燒瓶中。加入DMF(50mL)溶解，100℃反應(yīng)24-36h。冷卻至室溫后加入500mL乙酸乙酯，用0.5N鹽酸洗滌三次出去DMF。有機(jī)層減壓濃縮，過柱純化(石油醚/二氯甲烷)得到化合物2。

實(shí)施例2：

將化合物2(20.0mmol)溶于丙酮(50.0mL)，在室溫下先后加入K₂CO₃(5.52g,40.0mmol)和MeI(1.9mL,30.0mmol)，回流3h。反應(yīng)完成后加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取三次。合并有機(jī)層并減壓濃縮，得到酯化產(chǎn)物。

上述酯化產(chǎn)物(15.4mmol),4-甲氧基苯硼酸(2.34g,15.4mmol),Pd(PPh₃)₄(0.89g,0.77mmo),和K₂CO₃(6.37g,46.1mmol)置于雙頸瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入DMF(50mL)和H₂O(8mL)。100℃下攪拌過夜，冷卻至室溫后加入飽和氯化銨水溶液，用乙酸乙酯萃取三次。合并有機(jī)層，減壓濃縮后過柱純化(石油醚/二氯甲烷)得到化合物3。

實(shí)施例3：

將化合物3(13.3mmol)溶于MeSO₃H(10mL)。65℃下攪拌過夜，反應(yīng)完成后加入水(200mL)淬滅，用乙酸乙酯萃取三次。合并有機(jī)層，減壓濃縮得到化合物4。

實(shí)施例4：

將化合物4(3.85mmol),4-甲氧基苯乙炔(0.55mL,4.24mmol),Pd(PPh₃)₄(220mg,0.19mmol),CuI(37mg,0.19mmol),PPh₃(102mg,0.39mmol),DMF(5mL),Et₃N(5mL)置于雙頸瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下120℃回流14-24h，反應(yīng)完成后冷卻至室溫，加入水稀釋，用乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，減壓濃縮后正相硅膠柱純化(石油醚/二氯甲烷)，得到化合物5。

實(shí)施例5：

將化合物5(6.75mmol)氮?dú)獗Ｗo(hù)下溶于無水THF(10mL)中，在冰浴下逐滴加入4-甲氧基苯基溴化鎂(1.0M,13.5mL,13.5mmol)，滴加完后繼續(xù)在冰浴中攪拌6-8h，直到反應(yīng)完全(通過TLC檢測)。加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，減壓濃縮后正相硅膠柱純化(石油醚/二氯甲烷)，得到化合物HC-21。

HC-21：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.46(d,J＝8.1Hz,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,1H),7.35(d,J＝8.7Hz,2H),7.21(d,J＝7.8Hz,1H),7.15(d,J＝8.6Hz,2H),6.83(dd,J＝8.1,2.2Hz,1H),6.82-6.78(m,5H),3.77(s,3H),3.72(s,6H),2.45(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ160.2,159.8,158.7,151.9,150.6,138.8,138.4,135.6,132.9,131.2,130.2,126.6,120.8,119.4,118.7,115.0,114.8,114.0,113.6,110.0,99.5,83.8,55.5,55.4,55.3,20.4；ESIMS m/z 463.2[M+H]⁺.

實(shí)施例6：

將化合物HC-21(5.52mmol)和苯甲醚(0.72mL,6.62mmol)溶于DCM(10mL)中，攪拌下加入MeSO₃H(0.36mL,5.52mmol),室溫下反應(yīng)1-2h，反應(yīng)完全后加入水淬滅，分離出有機(jī)層后，水相用DCM萃取三次，合并有機(jī)層，減壓濃縮后正相硅膠柱純化(石油醚/二氯甲烷)，得到HC-11，其表征數(shù)據(jù)如下。

HC-11:¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.58(d,J＝8.3Hz,1H),7.53(d,J＝7.8Hz,1H),7.24(d,J＝8.9Hz,4H),7.21(d,J＝7.8Hz,1H).6.97(d,J＝8.8Hz,2H),6.85(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.81(d,J＝2.2Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,2H),6.71(d,J＝8.9Hz,4H),3.79(s,3H),3.72(s,3H),3.71(s,6H),2.46(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ160.0,159.6,158.3,155.6,152.3,139.0,138.4,135.1,132.6,132.4,130.4,128.9,121.1,120.3,118.8,116.0,114.0,113.3,113.1,111.3,100.6,86.5,65.1,55.6,55.4,55.3,21.1.

實(shí)施例7：

由化合物HC-11(3.08mmol)氮?dú)獗Ｗo(hù)下溶于無水CH₂Cl₂(10mL),冰浴下逐滴加入BBr₃(1.0M,14.8mL,14.8mmol),攪拌1-4h，逐漸恢復(fù)至室溫。反應(yīng)完全后在冰浴下加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，減壓濃縮后正相硅膠柱純化(石油醚/乙酸乙酯)，得到HC-3。參照HC-3的相似合成，得到HC-4、HC-8、HC-9、HC-10。

HC-3:黃色油狀物；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.55(dd,J＝8.2,1.4Hz,1H),7.54(dd,J＝7.6,1.3Hz,1H),7.21(d,J＝7.6Hz,1H),7.10(d,J＝7.1Hz,4H),6.86(d,J＝7.0Hz,2H),6.75(d,J＝8.2Hz,1H),6.72–6.65(m,3H),6.58(d,J＝7.1Hz,4H),2.43(s,3H).¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ159.0,158.7,157.3,156.8,153.6,140.0,139.1,135.5,133.6,132.5,131.4,129.5,122.3,121.2,119.3,116.4,115.8,115.5,115.1,113.4,102.1,86.8,66.1,21.0；ESIMS m/z 497.2[M+H]⁺.

HC-4:¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.65(d,J＝7.5Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.28(t,J＝7.5Hz,1H),7.21(d,J＝7.5Hz,1H),7.10(d,J＝8.7Hz,4H),6.88(d,J＝8.6Hz,2H),6.78(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),6.72(d,J＝2.0Hz,1H),6.69(d,J＝8.6Hz,2H),6.60(d,J＝8.7Hz,4H)；ESIMS m/z 483.2[M+H]⁺.

HC-8:黃色油狀物；UV(CH₃OH)λ_max(logε)209.0(7.25),272.0(6.92),317.5(6.97),359.5(6.88)nm；IR(KBr)ν_max 3366,2209,1674,1608,1568,1510,1221cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.54(d,J＝8.0Hz,1H),7.68(d,J＝8.0Hz,1H),7.62(d,J＝8.0Hz,1H),6.78(dd,J＝8.0,2.0Hz,1H),6.71(d,J＝2.0Hz,1H),6.87(d,J＝8.4Hz,2H),6.70(d,J＝8.4Hz,2H),7.10(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H),5.69(s,3H),3.40(s,6H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ159.6,159.4,157.9,157.0,153.6,142.9,138.2,135.0,133.7,131.7,131.4,126.5,121.9,121.7,119.1,116.6,115.8,115.2,115.0,113.4,104.7,102.8,85.2,66.2,55.1；HRESIMS m/z579.1807[M+Na]⁺(calcd for C₃₆H₂₈O₆Na⁺,579.1778).

HC-9:黃色油狀物；UV(CH₃OH)λ_max(logε)206.5(7.63),288.5(7.44),297.5(7.44)nm；IR(KBr)ν_max 3316,1696,1608,1511,1469,1232cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.07(d,J＝8.3Hz,1H),6.75(d,J＝8.3Hz,1H),7.95(d,J＝8.2Hz,1H),6.74(dd,J＝8.2,2.3Hz,1H),6.69(d,J＝2.3Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.66(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ113.4,132.3,115.6,155.4,128.8,132.1,125.5,115.1,157.9,113.1,156.5,66.4,154.3,88.5,94.7,133.4,116.4,159.0,115.9,131.4,115.1,156.8,135.6；HRESIMS m/z 497.1406[M-H]^-(calcd for C₃₃H₂₁O₅^-,497.1394).

HC-10:黃色油狀物；UV(CH₃OH)λ_max(logε)208.0(7.71),287.5(7.47),301(7.47)nm；IR(KBr)ν_max 3325,2209,1697,1608,1590,1511,1453,1228cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ6.87(d,J＝8.2Hz,1H),7.50(d,J＝8.2Hz,1H),7.47(d,J＝8.2Hz,1H),6.73(dd,J＝8.2,2.4Hz,1H),6.68(d,J＝2.4Hz,1H),6.90(d,J＝8.2Hz,2H),6.69(d,J＝8.2Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ110.6,157.9,115.1,120.4,134.2,132.7,120.4,115.4,157.8,113.4,156.7,66.1,154.9,83.8,101.9,133.7,116.3,158.9,115.8,131.4,115.1,156.8,135.5；HRESIMS m/z 497.1413[M-H]^-(calcd for C₃₃H₂₁O₅^-,497.1394).

實(shí)施例8：HC-12的合成

將實(shí)施例7中合成的HC-3(1.48g,3.0mmol)溶于吡啶(15mL)，加入醋酸酐(2.4mL,24.0mmol)。在室溫下攪拌12h,待反應(yīng)完全后加入水(10mL)淬滅。用CH₂Cl₂萃取三次，有機(jī)相合并后依次用水、5％HCl和飽和氯化鈉溶液洗滌，Na₂SO₄干燥。減壓濃縮有機(jī)相，正相硅膠柱純化(石油醚/二氯甲烷＝2:1)，得到白色粉末HC-12，產(chǎn)率68％。

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.71(d,J＝8.2Hz,1H),7.64(d,J＝7.6Hz,1H),7.30(d,J＝8.7Hz,4H),7.29(d,J＝7.6Hz,1H),7.12(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.04–7.01(m,5H),6.91(d,J＝8.7Hz,4H),2.48(s,3H),2.30(s,3H),2.25(s,6H),2.25(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ169.5,169.5,169.4,153.9,151.9,150.6,149.5,140.6,139.5,137.8,137.1,132.5,130.2,129.5,122.0,121.4,120.9,120.9,120.9,120.2,120.0,119.1,100.5,87.1,65.5,21.3,21.1.

實(shí)施例9：HC-1，HC-2的合成

將實(shí)施例8中合成的HC-12(1.35g,2.0mmol),NBS(0.39g,2.2mmol),AIBN(0.03g,0.2mmol)置于雙頸瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下加入無水CCl₄(10mL)?；旌弦涸?0℃回流12h。反應(yīng)完全，冷卻至室溫后加入CH₂Cl₂(100mL)稀釋，依次用水、5％HCl和飽和氯化鈉溶液洗滌，Na₂SO₄干燥。減壓濃縮有機(jī)相，得到的溴化物未純化，直接用于下步反應(yīng)。

上述制備的溴化物和KOH(0.56g,10mmol)溶于1,4-dioxane/H₂O(2:1,15mL)，40℃下攪拌1h.反應(yīng)完全后加入乙酸乙酯稀釋，依次用水和飽和氯化鈉溶液洗滌，Na₂SO₄干燥。減壓濃縮有機(jī)相，正相硅膠柱純化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到HC-1(0.60g,產(chǎn)率59％)，HC-2(0.31g,產(chǎn)率30％).

HC-1:淡黃色油狀物,¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.67(d,J＝7.8Hz,1H),7.60(d,J＝8.2Hz,1H),7.49(d,J＝7.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.6Hz,4H),6.89(d,J＝8.3Hz,2H),6.78(d,J＝8.2Hz,1H),6.72(s,1H),6.71(d,J＝8.3Hz,2H),6.60(d,J＝8.6Hz,4H),4.80(s,2H)；ESIMS m/z 513.2[M+H]⁺.

HC-2:黃色油狀物,¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ10.45(s,1H),7.87(d,J＝8.0Hz,1H),7.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,1H),7.15(d,J＝8.7Hz,4H),6.89(d,J＝8.5Hz,2H),6.82(dd,J＝8.3,2.1Hz,1H),6.77(d,J＝2.1Hz,1H),6.72(d,J＝8.5Hz,2H),6.64(d,J＝8.7Hz,4H)；ESIMS m/z 511.2[M+H]⁺.

實(shí)施例10：HC-6的合成

將實(shí)施例9中合成的HC-2(74mg,0.15mmol)和NaH₂PO₄(59mg,0.38mmol)溶于DMSO(1mL)和H₂O(0.1mL)，在冰浴下緩慢加入NaClO₂(41mg,0.45mmol)的水溶液(0.1mL)。室溫下攪拌12h，反應(yīng)完全后加入飽和碳酸鈉水溶液淬滅，乙酸乙酯萃取。用0.5N HCl調(diào)節(jié)水相pH＝3，用乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并有機(jī)層，用水洗滌，Na₂SO₄干燥，減壓濃縮得到HC-6(63mg,產(chǎn)率81％)。

UV(CH₃OH)λ_max(logε)207.0(7.78),301.0(7.52)nm；IR(KBr)ν_max 3278,2925,2213,1697,1607,1511,1232cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.84(d,J＝7.9Hz,1H),7.69(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,1H),6.80(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.72(d,J＝2.2Hz,1H),6.83(d,J＝8.7Hz,2H),6.67(d,J＝8.7Hz,2H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.59(d,J＝8.8Hz,4H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ122.0,133.9,130.6,118.7,145.3,131.2,122.4,116.0,159.9,113.3,158.7,66.4,154.3,86.8,103.0,133.9,116.2,159.1,115.8,131.4,115.2,157.0,134.5,170.2；HRESIMS m/z 525.1346[M-H]^-(calcd for C₃₄H₂₁O₆^-,525.1344).

實(shí)施例11：HC-4的合成

方法一：以2-溴苯甲酸為原料，依次按照實(shí)施例1～7的方法，可得到HC-4。數(shù)據(jù)見實(shí)施例7。

方法二：將實(shí)施例10中合成的HC-6(38mg,0.07mmol)溶于DMSO(1mL),逐滴加入濃鹽酸(0.03mL)。反應(yīng)液在100℃攪拌過夜。冷卻至室溫后加入水淬滅，乙酸乙酯萃取三次。有機(jī)相合并后用飽和氯化鈉溶液洗滌，Na₂SO₄干燥。減壓濃縮有機(jī)相，正相硅膠柱純化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1)，得到HC-4(20mg,產(chǎn)率61％)。

實(shí)施例12：HC-5的合成

將實(shí)施例10中合成的HC-6(21mg,0.04mmol)和Ag₂CO₃(1mg,0.004mmol)溶于DMSO(1mL)中，120℃下攪拌過夜，反應(yīng)完全，待冷卻至室溫后加入飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅。乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌，Na₂SO₄干燥。減壓濃縮有機(jī)相，得到HC-5(18mg,產(chǎn)率85％)。

UV(CH₃OH)λ_max(logε)208.0(6.94),225.0(6.83),320.0(6.88)nm；IR(KBr)ν_max3333,1694,1609,1577,1511,1230cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ8.27(d,J＝8.2Hz,1H),7.86(d,J＝8.2Hz,1H),7.73(d,J＝8.3Hz,1H),6.83(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.87(d,J＝2.2Hz,1H),6.77(brs,1H),7.41(d,J＝8.8Hz,2H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),7.12(d,J＝8.8Hz,4H),6.70(d,J＝8.8Hz,4H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ136.1,118.4,131.2,119.8,149.1,131.1,123.2,116.2,160.7,113.2,160.2,65.4,146.5,98.6,154.4,127.7,116.8,160.7,124.6,131.0,116.0,157.5,134.2,164.9；HRESIMS m/z 549.1306[M+Na]⁺(calcd for C₃₄H₂₂O₆Na⁺,549.1309).

實(shí)施例13：HC-7的合成

以2-溴-3-甲基-5-甲氧基苯甲酸為原料，按照實(shí)施例1～7的方法，可得到HC-7。

黃色油狀物；UV(CH₃OH)λ_max(logε)207.5(7.92),300.0(7.71)nm；IR(KBr)ν_max3241,2211,1607,1510,1225,1174cm^-1；¹H(400MHz,CD₃OD)δ6.94(s,1H),7.88(d,J＝8.2Hz,1H),6.77(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.61(d,J＝2.1Hz,1H),6.76(d,J＝8.7Hz,2H),6.60(d,J＝8.7Hz,2H),7.06(d,J＝8.6Hz,4H),6.52(d,J＝8.6Hz,4H),4.69(s,2H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ111.3,143.5,114.4,154.2,127.9,131.9,125.2,115.1,157.8,113.1,156.8,66.4,155.8,85.6,100.1,133.3,116.5,159.4,115.6,131.4,115.1,156.8,135.5,63.5；HRESIMS m/z 551.1457[M+Na]⁺(calcd for C₃₄H₂₄O₆Na⁺,551.1465).

實(shí)施例14：HC-13的合成

化合物HC-1(51mg,0.10mmol)溶于丙酮(1.0mL)，在室溫下先后加入K₂CO₃(84mg,0.60mmol)和MeI(36μL,0.60mmol)，室溫下攪拌過夜，加入水(10mL)淬滅，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)。合并有機(jī)層并減壓濃縮，正相硅膠柱純化(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得到無色油狀物HC-13(46mg,產(chǎn)率81％)。

HC-13：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.65(d,J＝7.8Hz,1H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(d,J＝8.9Hz,4H),6.99(d,J＝8.8Hz,2H),6.89(dd,J＝8.3,2.3Hz,1H),6.85(d,J＝2.2Hz,1H),6.81(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(d,J＝8.9Hz,4H),4.86(s,2H),3.80(s,3H),3.75(s,3H),3.73(s,6H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ160.4,159.9,158.3,155.8,152.5,141.2,140.4,134.8,132.7,131.9,130.3,127.3,120.8,119.5,119.2,115.2,114.1,113.5,113.2,111.1,101.1,84.9,65.1,64.5,55.6,55.5,55.3；ESIMS m/z 569.2[M+H]⁺.

實(shí)施例15：HC-14的合成

化合物HC-1(52mg,0.10mmol)溶于丙酮(1.0mL)，在室溫下先后加入K₂CO₃(42mg,0.30mmol)和MeI(12μL,0.20mmol)，室溫下攪拌3h，加入水(10mL)淬滅，用乙酸乙酯萃取(5mL×3)。合并有機(jī)層并減壓濃縮，正相硅膠柱純化(石油醚:乙酸乙酯＝4:1)得到淡黃色油狀物HC-14(11mg,產(chǎn)率20％)。

HC-14：UV(CH₃OH)λ_max(logε)206.5(7.69),288.0(7.49),399.5(7.49)nm；IR(KBr)ν_max 3387,2203,1605,1511,1248,833cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.73(d,J＝7.8Hz,1H),7.52(d,J＝7.8Hz,1H),7.69(d,J＝8.4Hz,1H),7.10(d,J＝8.9Hz,4H),6.97(d,J＝8.9Hz,2H),6.91(dd,J＝8.4,2.3Hz,1H),6.84(d,J＝8.9Hz,2H),6.80(d,J＝2.3Hz,1H),6.58(d,J＝8.9Hz,4H),4.81(s,2H),3.79(s,3H),3.72(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ161.7,161.3,157.4,157.0,154.0,142.3,141.3,135.0,133.6,133.6,131.4,127.6,121.6,120.6,119.9,116.7,115.3,115.0,114.5,112.0,102.1,85.9,66.3,63.6,55.9；55.8；HRESIMS m/z 539.1859[M-H]^-(calcd for C₃₆H₂₇O₅^-,539.1864).

實(shí)施例16：HC-15的合成

由實(shí)施例6得到的HC-11(1.70g,3.08mmol)氮?dú)獗Ｗo(hù)下溶于無水CH₂Cl₂(10mL),冰浴下逐滴加入BBr₃(1.0M,18.5mL,18.5mmol),攪拌1-4h，逐漸恢復(fù)至室溫。反應(yīng)完全后在冰浴下加入水淬滅，用乙酸乙酯萃取三次，合并有機(jī)層，減壓濃縮后正相硅膠柱純化(石油醚/乙酸乙酯＝2:1～1:1)，得到HC-15(0.75g,產(chǎn)率50％)。

HC-15：黃色油狀物,¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.70(d,J＝7.7Hz,1H),7.54(d,J＝8.2Hz,1H),7.34(d,J＝7.9Hz,1H),6.99(d,J＝8.8Hz,2H),6.95(d,J＝8.7Hz,2H),6.69(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),6.59(d,J＝8.8Hz,2H),6.51(d,J＝2.2Hz,1H),6.46(s,1H),6.25(d,J＝8.7Hz,2H),6.15(d,J＝8.8Hz,2H),6.09(d,J＝8.7Hz,2H),2.20(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ159.1,158.5,157.9,156.9,156.6,149.1,141.8,138.0,137.3,135.8,135.6,133.4,132.6,131.4,131.2,130.9,130.4,128.7,121.1,120.7,115.6,115.3,114.1,112.9,66.6,19.4；ESIMS m/z 575.1and 577.1[M-H]^-.

實(shí)施例17：HC-16的合成

以2-溴-5-甲基苯甲酸為原料，依次按照實(shí)施例2、3、5、6、7的方法可得到HC-16。

HC-16：IR(KBr)ν_max 3325,1651,1610,1591,1509,1466,1230cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.48(d,J＝8.2Hz,1H),7.45(d,J＝7.6Hz,1H),7.06–7.00(m,2H),6.94(d,J＝8.8Hz,4H),6.75–6.70(m,2H),6.60(d,J＝8.8Hz,4H),2.23(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ158.0,156.9,155.4,153.2,138.9,138.8,136.8,133.2,130.3,128.9,127.5,121.4,119.7,115.7,115.4,114.1,65.1,21.7；ESIMS m/z381.1[M+H]⁺.

實(shí)施例18：HC-17的合成

以2-溴-3-甲基苯甲酸為原料，依次按照實(shí)施例1、2、3、5、6、7的方法可得到HC-17。

HC-17：IR(KBr)ν_max 3251,1611,1509,1451,1251cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.57(d,J＝7.5Hz,1H),7.52(d,J＝8.1Hz,1H),7.25(d,J＝7.5Hz,1H),7.09(d,J＝8.4Hz,4H),6.72(d,J＝8.1Hz,1H),6.66(s,1H),6.63(d,J＝8.4Hz,4H),2.33(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ159.0,158.3,156.9,151.0,142.9,137.3,133.4,131.7,131.6,131.2,125.4,121.4,118.8,115.7,115.2,113.1,67.3,23.5；ESIMS m/z 459.1and 461.1[M+H]⁺.

實(shí)施例19：HC-18、HC-19的合成

以2-溴-3-甲基苯甲酸為原料，依次按照實(shí)施例1、2、3、5、6的方法可得到HC-17a，再按照實(shí)施例9的方法可得到HC-18a、HC-19a。

HC-18a:¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.34(s,1H),7.96(d,J＝7.9Hz,1H),7.73(d,J＝7.9Hz,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,1H),7.25(d,J＝8.8Hz,4H),6.89(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.80(d,overlap,1H),6.78(d,J＝8.8Hz,4H),3.77(s,6H),3.74(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ192.1,161.8,158.6,158.3,150.0,149.2,132.1,132.0,130.5,130.0,126.9,122.2,118.6,114.3,113.3,110.8,66.2,55.6,55.3；ESIMS m/z515.1and 517.1[M+H]⁺.

HC-19a:¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.67(d,J＝7.7Hz,1H),7.62(d,J＝8.4Hz,1H),7.49(d,J＝7.7Hz,1H),7.29(d,J＝8.8Hz,4H),6.88(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.84(d,J＝2.2Hz,1H),6.79(d,J＝8.8Hz,4H),4.70(s,2H),3.75(s,6H),3.73(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ160.5,158.3,156.6,149.5,142.8,138.5,132.8,131.1,130.6,128.8,122.3,120.8,118.4,113.5,113.1,110.9,66.1,65.4,55.5,55.2；ESIMS m/z517.1and 519.1[M+H]⁺.

HC-18a、HC-19a分別按照實(shí)施例7的方法可得到HC-18、HC-19。

HC-18:白色固體；IR(KBr)ν_max 3409,1667,1610,1586,1510,1434,1239cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ10.29(s,1H),7.90(d,J＝7.9Hz,1H),7.81(d,J＝7.9Hz,1H),7.69(d,J＝8.3Hz,1H),7.11(d,J＝8.8Hz,4H),6.80(dd,J＝8.3,2.2Hz,1H),6.71(d,J＝2.2Hz,1H),6.66(d,J＝8.8Hz,4H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ193.2,161.1,160.3,157.3,151.5,151.1,133.0,132.4,131.6,131.3,130.0,123.4,119.3,116.6,115.5,113.1,67.3；ESIMS m/z 473.0and 475.0[M+H]⁺.

HC-19:白色固體；IR(KBr)ν_max 3286,1610,1593,1510,1435,1351,1238cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.57(d,J＝8.2Hz,1H),7.42(d,J＝7.7Hz,1H),7.09(d,J＝8.7Hz,4H),6.75(dd,J＝8.2,2.1Hz,1H),6.68(d,J＝2.1Hz,2H),6.63(d,J＝8.7Hz,4H),4.47(s,2H),3.39(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ159.4,158.6,157.0,151.0,144.8,136.6,133.2,131.7,131.2,130.4,124.0,121.8,118.9,115.9,115.3,113.1,75.5,67.3,58.6；ESIMS m/z 489.1and 491.1[M+H]⁺.

實(shí)施例20：HC-22的合成

以2-溴-3-甲基苯甲酸為原料，依次按照實(shí)施例1、2、3、5的方法可得到HC-22a.

HC-22a(36mg,0.09mmol)溶于無水CH₂Cl₂(1.0mL)，在冰浴下依次加入三乙基硅烷(28μL,0.18mmol)和BF₃·Et₂O(22μL,0.18mmol)。0℃下攪拌1h，加入飽和碳酸鈉水溶液(1mL)淬滅。分離有機(jī)層，水層用CH₂Cl₂萃取兩次。合并有機(jī)層，用飽和食鹽水洗滌，Na₂SO₄干燥，減壓濃縮后用正相硅膠柱純化(石油醚:二氯甲烷＝5:1)得到HC-22b(23mg,產(chǎn)率66％).IR(KBr)ν_max 2957,2835,1607,1584,1508,1487,1244cm^-1；¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.59(d,J＝8.4Hz,1H),7.53(d,J＝7.6Hz,1H),7.25(d,J＝7.6Hz,1H),6.97(d,J＝8.6Hz,2H),6.87(dd,J＝8.4,2.2Hz,1H),6.78(d,J＝8.6Hz,2H),6.77(d,J＝2.2Hz,1H),4.98(s,1H),3.77(s,3H),3.76(s,3H),2.40(s,3H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ159.9,158.5,150.5,146.8,141.5,136.0,132.8,132.5,130.2,129.5,123.7,120.8,117.7,114.1,113.6,110.8,55.9,55.6,55.3,22.9；ESIMS m/z 395.1and 397.1[M+H]⁺.

HC-22b(20mg,0.05mmol)按照實(shí)施例7的方法反應(yīng)，得到HC-22(14mg,產(chǎn)率76％).IR(KBr)ν_max 3357,1611,1510,1483,1451,1242cm^-1；¹H NMR(400MHz,CD₃OD)δ7.54(d,overlap,2H),7.25(d,J＝7.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.4Hz,2H),6.75(dd,J＝8.2,2.2Hz,1H),6.64(d,J＝8.5Hz,2H),6.64(d,J＝2.2Hz,1H)C,4.87(s,1H),2.36(s,2H)；¹³C NMR(100MHz,CD₃OD)δ158.7,157.0,152.1,147.9,143.2,136.4,132.8,132.7,131.1,130.3,124.2,121.7,118.4,116.2,115.6,113.0,56.9,22.7；ESIMS m/z 367.0and 369.0[M+H]⁺.

實(shí)施例21：Selaginpulvilin衍生物抗炎活性(對(duì)PDE4酶的抑制作用)

待測分子與含有重組PDE4D2蛋白(詳細(xì)制備方法可參考已發(fā)表且含有制備該重組蛋白的文獻(xiàn)：Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2012年，22卷，頁碼：3261–3264)，20mM Tris-HCl,pH 7.5,2mM二硫蘇糖醇(dithiothreitol),10mM MgCl₂以及20,000–30,000cpm的³H-cAMP在室溫下孵育15分鐘，然后分別用0.2M ZnSO₄and Ba(OH)₂中止反應(yīng)，然后利用PerkinElmer 2910計(jì)數(shù)儀測量上清液中未反應(yīng)的³H-cGMP，每個(gè)分子至少測量三次，對(duì)PDE4D2蛋白活性抑制的IC₅₀值通過濃度測試及非線性回歸，計(jì)算獲得。

本發(fā)明化合物對(duì)PDE4的抑制活性測試數(shù)據(jù)如表1(IC₅₀值為抑制率達(dá)到50％時(shí)的抑制劑濃度)。

表1.化合物HC-1-HC-30對(duì)PDE4酶的抑制作用(IC₅₀,μM)

^α陽性對(duì)照