本發(fā)明涉及植物細胞培養(yǎng)技術(shù)，進一步涉及植物細胞的營養(yǎng)條件設(shè)計，具體涉及一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基。

背景技術(shù)：

植物細胞培養(yǎng)技術(shù)是以離體植物細胞或原生質(zhì)體為對象，以細胞量擴增和目標代謝產(chǎn)物累積為目的的培養(yǎng)工藝。對于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細胞培養(yǎng)而言，其主要工藝環(huán)節(jié)不僅在于細胞量的擴增，同時，目標代謝產(chǎn)物的誘導(dǎo)合成對培養(yǎng)效益更為重要。在植物細胞的培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)條件和營養(yǎng)條件是影響產(chǎn)量的最重要因素，其中培養(yǎng)條件是指溫度、溶氧、光照、pH等環(huán)境條件的控制，而營養(yǎng)條件主要指植物細胞的培養(yǎng)基。由于在封閉培養(yǎng)環(huán)境中培養(yǎng)基是植物細胞的唯一營養(yǎng)來源，因此培養(yǎng)基的成分對植物細胞的生長水平、代謝產(chǎn)物類別具有極其重要的影響，尤其對于以獲得特定代謝產(chǎn)物為目的的細胞培養(yǎng)而言，培養(yǎng)基往往是影響培養(yǎng)效率的關(guān)鍵因素。

長春花細胞的次生代謝產(chǎn)物中含有一百多種吲哚生物堿，20世紀50年代以來，人們發(fā)現(xiàn)長春花的多種次生代謝產(chǎn)物對急性白血病、惡性淋巴腫瘤、絨毛膜上皮癌、乳腺癌、卵巢癌、睪丸癌、淋巴肉癌、惡性黑色素癌都有很好的療效。其中長春堿和長春新堿是目前應(yīng)用最廣泛的天然植物抗腫瘤藥物，可用于治療何杰金氏病、惡性淋巴腫瘤、急性白血病、絨毛上皮細胞癌等疾病，其硫酸鹽已廣泛應(yīng)用于臨床。長春質(zhì)堿不僅具有抗菌止血、利尿、降血糖等作用，而且它還是抗癌藥物長春堿、長春新堿等的合成前體，因此長春花具有很高的藥用開發(fā)價值。目前，細胞培養(yǎng)技術(shù)被認為是生產(chǎn)長春花藥用成分最有效的途徑，但細胞培養(yǎng)中有效成分含量很低，為了更有效的生產(chǎn)長春花生物堿，如何提高長春花藥用成分的產(chǎn)量已成為近年來國內(nèi)外研究的熱點。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明旨在針對現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，以解決現(xiàn)有技術(shù)中長春花細胞離體培養(yǎng)時細胞生長緩慢的技術(shù)問題。

本發(fā)明要解決的另一技術(shù)問題是現(xiàn)有技術(shù)中長春花細胞離體培養(yǎng)時長春質(zhì)堿產(chǎn)率較低。

為實現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的玳玳花壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的燈盞細辛壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的丁香羅勒壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基還含有1g/L的獨定子壓榨汁。

作為優(yōu)選，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花壓榨汁1g/L，燈盞細辛壓榨汁1g/L，丁香羅勒壓榨汁1g/L，獨定子壓榨汁1g/L。

在以上技術(shù)方案中，所述MS培養(yǎng)基可以依據(jù)本領(lǐng)域的一般技術(shù)常識進行配制，當然也可以采用以下具體配方的MS培養(yǎng)基：NH₄NO₃ 1650mg/L，KNO₃ 1900mg/L，CaCl₂·2H₂O 440mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L，KI 0.83mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L，CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L，F(xiàn)eSO₄·7H₂O 27.8mg/L，Na₂-EDTA·2H₂O 37.3mg/L，肌醇100mg/L，煙酸0.5mg/L，維生素B6 0.5mg/L，維生素B1 0.1mg/L，甘氨酸2mg/L，水余量。

在以上技術(shù)方案中，玳玳花、燈盞細辛、丁香羅勒、獨定子分別指其新鮮全草。本發(fā)明中所述的壓榨汁，是指利用物理方法獲取的各原料的新鮮汁液，包括但不限于壓榨、粉碎離心等常規(guī)方法。

本發(fā)明提供了一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明嘗試通過添加植物提取的方式以提升培養(yǎng)效果，具體來看，以物理壓榨的方式獲取玳玳花、燈盞細辛、丁香羅勒、獨定子等新鮮中草藥中的液體成分，直接加入至上述配方的培養(yǎng)基中，取得了良好的培養(yǎng)效果，細胞生長速度和終密度得到顯著提升，同時長春質(zhì)堿的分泌量也明顯增長。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)改進實現(xiàn)了良好的技術(shù)效果，同時其成本較低、易于實現(xiàn)，因此具有良好的推廣前景。

具體實施方式

以下將對本發(fā)明的具體實施方式進行詳細描述。為了避免過多不必要的細節(jié)，在以下實施例中對屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進行詳細描述。除有定義外，以下實施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。

實施例1

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L。

實施例2

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花壓榨汁1g/L。

實施例3

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，燈盞細辛壓榨汁1g/L。

實施例4

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，丁香羅勒壓榨汁1g/L。

實施例5

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，獨定子壓榨汁1g/L。

實施例6

一種誘導(dǎo)長春花細胞分泌長春質(zhì)堿的合成培養(yǎng)基，其特征在于該培養(yǎng)基含有MS培養(yǎng)基的成分，同時還含有植物激素2.4-D 2mg/L，植物激素KT 1mg/L，色氨酸50mg/L，輔酶A 3mg/L，萘普生8.4mg/L、阿司匹林0.3mg/L、布洛芬5.0mg/L，玳玳花壓榨汁1g/L，燈盞細辛壓榨汁1g/L，丁香羅勒壓榨汁1g/L，獨定子壓榨汁1g/L。

實施例7

本實施例用于評價以上實施例1～6所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時對長春花細胞長春質(zhì)堿產(chǎn)量的影響，實驗結(jié)果如表1所示。

表1不同培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基時對長春花細胞長春質(zhì)堿產(chǎn)量的影響

由此可見，利用本發(fā)明所提供的培養(yǎng)基作為合成培養(yǎng)基培養(yǎng)長春花細胞時，對其長春質(zhì)堿產(chǎn)量具有確切的促進作用。

以上對本發(fā)明的實施例進行了詳細說明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。